無現(xiàn)場病理醫(yī)師情況下SurePath液基細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)在肺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值

宋美君，吳宏成，姜靜波，潘登

·論 著·

無現(xiàn)場病理醫(yī)師情況下SurePath液基細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)在肺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值

宋美君，吳宏成，姜靜波，潘登

目的 探討無現(xiàn)場病理醫(yī)師情況下SurePath液基細(xì)胞學(xué)檢測（LCT）在肺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 收集148例肺癌患者，經(jīng)支氣管鏡針吸活檢、肺穿刺、支氣管毛刷及胸腔積液等標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行LCT檢測和直接涂片檢測，比較其涂片質(zhì)量及對肺癌診斷的陽性率。結(jié)果 LCT檢測的標(biāo)本切片質(zhì)量高；LCT診斷肺癌的敏感度為67.6%，直接涂片法診斷肺癌的敏感度為45.9%，LCT的敏感度高于直接涂片法（P＜0.01）；LCT診斷陽性率67.6%（100/148），直接涂片法陽性率45.9%（68/148），兩種方法診斷肺癌的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；兩種方法對肺穿刺、支氣管毛刷、經(jīng)支氣管針吸活檢及胸腔積液的診斷陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。結(jié)論 LCT檢測技術(shù)能明顯提高肺癌診斷的陽性率，在無現(xiàn)場病理醫(yī)生情況下LCT檢測可推廣應(yīng)用于臨床。

肺癌；Sure Path液基細(xì)胞學(xué)；直接涂片法；現(xiàn)場病理醫(yī)師

[Modern Practical Medicine,2016,28(1):10-12,59]

肺癌是嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤，肺癌病死率在惡性腫瘤中無論男女均居第一位，且發(fā)病率在大多數(shù)國家仍在呈現(xiàn)上升趨勢。在發(fā)達(dá)國家，多數(shù)醫(yī)院在進(jìn)行肺穿刺、支氣管毛刷、經(jīng)支氣管針吸活檢甚至胸腔積液等操作時(shí)都有現(xiàn)場病理醫(yī)師直接對標(biāo)本進(jìn)行快速涂片分析，所取標(biāo)本的合格性并快速給予一個初步的診斷，直接涂片的診斷陽性率能達(dá)到90%以上，這在減少患者痛苦、避免多次重復(fù)操作、節(jié)約醫(yī)療資源、提高診斷率方面體現(xiàn)出很大的優(yōu)勢[1]。而在我國醫(yī)療資源緊缺，病理醫(yī)師數(shù)量嚴(yán)重不足，就目前而言不可能達(dá)到現(xiàn)場病理醫(yī)師，且傳統(tǒng)直接涂片陽性率僅有5.2%～16.8%的情況下[2]，提出新的病理技術(shù)并探討其在肺癌診斷上的優(yōu)越性相當(dāng)重要。而SurePath液基細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)（LCT）是第三代細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)，是目前國際領(lǐng)先的脫落細(xì)胞檢查技術(shù)，與傳統(tǒng)直接涂片檢查比較，診斷的陽性率明顯提高，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于宮頸癌的診斷，但目前在肺穿刺、支氣管毛刷、經(jīng)支氣管針吸活檢、胸腔積液等細(xì)胞學(xué)檢查方面的應(yīng)用仍然不多。本文將LCT應(yīng)用于肺穿刺、支氣管毛刷、經(jīng)支氣管針吸活檢及胸腔積液等細(xì)胞學(xué)檢查，并與傳統(tǒng)直接涂片方法比較，以探討其對于肺癌的診斷價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2012年8月在寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院住院明確肺癌的148例患者，收集肺穿刺、支氣管毛刷、經(jīng)支氣管針吸活檢、胸腔積液等標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行LCT和直接涂片。148例患者中男97例，女51例；年齡30～89歲，平均（62.1±11.09）歲；肺癌患者均經(jīng)組織病理明確，包括支氣管鏡活檢明確61例，經(jīng)皮肺穿刺活檢明確41例，細(xì)胞蠟塊明確46例。用于LCT和直接涂片比較的標(biāo)本分布為：肺穿刺45例，支氣管毛刷130例，經(jīng)支氣管針吸活檢30例，胸腔積液68例。

1.2 方法 患者獲取同一種標(biāo)本時(shí)均由同一個醫(yī)師操作。獲取標(biāo)本后在玻片上涂片2～3張固定后送檢，再將穿刺針頭或毛刷頭置入有50mlCytoRich紅色固定液（BD公司）的錐形管中，震蕩5～10次，送細(xì)胞病理室處理。胸腔積液用于直接涂片的標(biāo)本注入一次性收集瓶，每次收集量不小于100 ml，2 h內(nèi)送病理科處理后直接涂片，胸腔積液用于液基檢測的標(biāo)本處理方式與其他標(biāo)本一致，即置入有50 ml CytoRich紅色固定液（BD公司）的錐形管中，震蕩5 ～10次，送細(xì)胞病理室處理。

LCT檢測采用離心沉降技術(shù)2 300r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，倒掉上清液并震蕩，如果看不到或只看到小的細(xì)胞塊，加入10 ml緩沖液，震蕩后全部轉(zhuǎn)移到12 ml離心管內(nèi)，如果看到較大或很大的細(xì)胞塊，將部分標(biāo)本轉(zhuǎn)移到12ml離心管內(nèi)，并加入10ml水，放入離心機(jī)，2 300 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，倒掉上清液并振蕩。將離心管放入Prep Stain TM全自動液基細(xì)胞制片機(jī)（BD公司）中自動制片、染色（HE染色法）。所有涂片均有同一個病理醫(yī)師最后審核。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩種方法的病理切片質(zhì)量，統(tǒng)計(jì)比較兩種方法的診斷陽性率，并比較LCT分類診斷和病理組織學(xué)診斷的符合率。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用2檢驗(yàn)。＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法制片效果比較 LCT涂片均勻薄層，細(xì)胞結(jié)構(gòu)及背景清晰，污染少，染色質(zhì)量高，核質(zhì)分明，便于觀察；細(xì)胞團(tuán)保留其自然形態(tài)，三維結(jié)構(gòu)可見，便于推斷其組織類型。直接涂片厚薄不均且腫瘤細(xì)胞常存在于黏液、較厚的炎性細(xì)胞等污穢背景中，或細(xì)胞由于受外力擠壓變形，或由于固定不當(dāng)造成細(xì)胞退變，影響染色造成難以觀察和判定。

2.2 兩種方法敏感度及陽性率比較 LCT診斷肺癌的敏感度為67.6%，直接涂片法診斷肺癌的敏感度為45.9%，LCT的敏感度高于直接涂片法（＜0.01）。LCT診斷陽性率67.6%（100/148），直接涂片法陽性率45.9%（68/148），兩種方法診斷肺癌的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=34.2，＜0.01）。兩種方法對肺穿刺、支氣管毛刷、經(jīng)支氣管針吸活檢及胸腔積液的診斷陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜0.05）。見表1。直接涂片有13例發(fā)現(xiàn)可疑癌細(xì)胞，其中12例均經(jīng)液基細(xì)胞學(xué)檢測證實(shí)癌細(xì)胞的存在，另一例液基細(xì)胞學(xué)檢測仍提示發(fā)現(xiàn)可疑癌細(xì)胞，最終經(jīng)細(xì)胞蠟塊明確診斷；另有5例直接涂片陰性，液基細(xì)胞學(xué)檢測提示發(fā)現(xiàn)可疑癌細(xì)胞，最終經(jīng)細(xì)胞蠟塊明確診斷。

表1 不同標(biāo)本間LCT和直接涂片法檢測結(jié)果比較

3 討論

由于腫瘤周圍結(jié)構(gòu)復(fù)雜，有細(xì)胞學(xué)專家在現(xiàn)場幫助，可以在操作過程中及時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞取材量的不足或缺乏代表性，這樣術(shù)者可以重復(fù)操作以提高成功率。Klapman等[1]進(jìn)行了大樣本的回顧性研究EUS-FNA的結(jié)果來自于兩個中心，中心1有現(xiàn)場病理醫(yī)師，回顧了108例患者；中心2沒有現(xiàn)場病理醫(yī)師，回顧了87例患者。對重復(fù)操作的次數(shù)、穿刺次數(shù)、部位、用藥、性別及年齡分別進(jìn)行比較。中心1對惡性疾病的陽性或陰性的診斷率稍高一些，較少有不充足的取樣，認(rèn)為現(xiàn)場病理醫(yī)師是必要的[1]。然而，目前我國醫(yī)療資源緊缺，病理醫(yī)師數(shù)量嚴(yán)重不足不可能開展現(xiàn)場病理醫(yī)師參與，不斷發(fā)展起來的液基細(xì)胞檢查技術(shù)，改善了細(xì)胞學(xué)制片質(zhì)量，再用EUSTNB及其他輔助檢查如免疫組化和分子病理學(xué)等這些都將有助于陽性率的提高[4]。

液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)在1996年于美國FDA批準(zhǔn)用于改進(jìn)傳統(tǒng)的手工巴氏涂片，目前應(yīng)用于臨床的有兩種：膜式液基薄層細(xì)胞技術(shù)（TCT）和離心沉淀式液基薄層細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)（AutoCyte Prep），后者在2001年更名為SurePath，即LCT，目前已經(jīng)逐步進(jìn)入中國。LCT的突出優(yōu)點(diǎn)是標(biāo)本的利用率高，符合不丟棄任何所取材料的原則。且 LCT制片與常規(guī)涂片相比還具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）固定及時(shí)，對刷檢所獲得的標(biāo)本能及時(shí)注入液基保存液中保存?zhèn)溆?，?xì)胞不易變形；（2）能最大限度地收集到癌細(xì)胞成分；（3）標(biāo)本中的紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞及粘液等各種污穢物能有效地被過濾清除，涂片背景較清晰；（4）涂片范圍小，細(xì)胞分布均勻，鏡檢省時(shí)、省力、快捷；（5）LCT可以重復(fù)制片，為后續(xù)特染、免疫酶標(biāo)、細(xì)胞塊技術(shù)及基因檢測的應(yīng)用提供了可能；（6）LCT具有自動涂片、染色的特點(diǎn)，減少人工操作和接觸標(biāo)本的機(jī)會避免了感染機(jī)會，提高診斷細(xì)胞病理學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化、自動化。本研究發(fā)現(xiàn)LCT涂片均勻薄層，細(xì)胞結(jié)構(gòu)及背景清晰，污染少，染色質(zhì)量高，核質(zhì)分明，便于觀察細(xì)胞團(tuán)保留其自然形態(tài)，三維結(jié)構(gòu)可見，便于推斷其組織類型。直接涂片厚薄不均且腫瘤細(xì)胞常存在于粘液、較厚的炎性細(xì)胞等污穢背景中，或細(xì)胞由于受外力擠壓變形，或由于固定不當(dāng)造成細(xì)胞退變，影響染色造成難以觀察和判定。所以 LCT制片質(zhì)量明顯比直接涂片質(zhì)量高。

目前LCT技術(shù)仍主要應(yīng)用于婦科宮頸刮片，鮮有應(yīng)用到其他領(lǐng)域。少量文獻(xiàn)報(bào)道 LCT在肺癌中比直接涂片有更高的診斷率[2,4-5]。本研究中，將該技術(shù)應(yīng)用于肺穿刺、支氣管毛刷、經(jīng)支氣管針吸活檢及胸腔積液等標(biāo)本的檢測，經(jīng)過兩者對照，發(fā)現(xiàn)LCT診斷肺癌的敏感度高于直接涂片法。LCT和直接涂片法在診斷肺癌的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。另外，各組標(biāo)本LCT及直接涂片的陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜0.05），尤其是在支氣管毛刷和經(jīng)支氣管針吸活檢標(biāo)本中，兩組差異明顯，但經(jīng)支氣管針吸活檢標(biāo)本量少，有待于進(jìn)一步臨床驗(yàn)證。而從筆者經(jīng)驗(yàn)判斷，將LCT技術(shù)應(yīng)用于肺穿刺領(lǐng)域，能盡可能多的收集針尖上的細(xì)胞，對診斷有幫助；而LCT技術(shù)應(yīng)用于胸腔積液有更大的優(yōu)勢存在，因?yàn)樾厍环e液普通法收集及操作過程中，如果放置時(shí)間過長容易導(dǎo)致細(xì)胞溶解，而極大的減少了直接涂片的陽性率。而用于LCT檢測的錐形管（BD公司）中含有50mlCytoRich紅色固定液，在胸腔積液注入之后能更好的固定其中的細(xì)胞成分，從而提高診斷陽性率。缺點(diǎn)是該錐形管體積較小，最多只能注入50～70 ml的胸腔積液，一定程度上限制了有效細(xì)胞的數(shù)量；另一方面，可以多瓶采集，但價(jià)格相對昂貴。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)直接涂片有13例發(fā)現(xiàn)可疑癌細(xì)胞，其中12例均經(jīng)液基細(xì)胞學(xué)檢測證實(shí)癌細(xì)胞的存在，另一例液基細(xì)胞學(xué)檢測仍提示可疑癌細(xì)胞，最終經(jīng)細(xì)胞蠟塊明確診斷。另有5例直接涂片陰性，液基細(xì)胞學(xué)檢測提示發(fā)現(xiàn)可疑癌細(xì)胞，最終經(jīng)細(xì)胞蠟塊明確診斷。本結(jié)果提示液基細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果敏感性高于直接涂片，而直接涂片如果提示可疑癌細(xì)胞時(shí)，液基細(xì)胞證實(shí)癌細(xì)胞存在的概率較大。另外，在病理組織最終證實(shí)方面，細(xì)胞蠟塊起著關(guān)鍵性作用。

總之，在無現(xiàn)場病理醫(yī)生情況下，液基細(xì)胞學(xué)檢查在肺癌各標(biāo)本的檢測中較傳統(tǒng)普通涂片能較大提高肺癌的診斷率，且絲毫沒有額外增加患者的痛苦，雖然其價(jià)格相對較貴，但是有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值，適合推廣。

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Application value of the Sure Path liquid-based cytology test for the diagnosis of lung cancer without on-site pathologist

Wu Hongcheng,Email:doctorwu1967@126.com

Objective To explore the application value of the SurePath liquid-based cytology test(LCT)for the diagnosis of lung cancer without on-site pathologist.Methods Specimens from 148 patients diagnosed with lung cancer via TBNA,lung puncture,bronchial brushing and pleural effusion were gathered to be tested both by Sure Path liquid-based cytology test and conventional smear(CS),and the diagnostic sensitivity for diagnosing lung cancer and the quality of them were compared.Results LCT slides showed better quality than conventional smear slides.The LCT had a significantly higher diagnostic sensitivity for lung cancer 67.6%)than that of CS(45.9%,＜0.01).Diagnosis positive rates of these two methods had statistical significance in lung puncture,bronchial brush,trans bronchial needle aspiration biopsy and pleural effusion respectively(＜0.05).Conclusions LCT in cytological screening has more diagnostic value of lung cancer, it is a easily performed technique that can be widely applied,especially under the circumstance of without on site pathologist.

Lung neoplasm；Cancer；Sure Path liquid-based cytology test;Conventional smear; On-site pathologist

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.01.004

R734.2

A

1671-0800(2016)01-0010-03

2015-10-10（本文編輯：陳志翔）

315040寧波，寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院（宋美君、吳宏成、姜靜波）；寧波市臨床病理診斷中心（潘登）

吳宏成，Email：doctorwu1967@126.com

Song Meijun,Wu Hong cheng,Jiang Jingbo,PanDeng.(Ningbo Medical Treatment Center Lihuili Hospital)