冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ深層發(fā)酵條件的優(yōu)化

盛嘉俊，陳曉光，葉克難*

（中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東廣州510275）

冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ深層發(fā)酵條件的優(yōu)化

盛嘉俊，陳曉光，葉克難*

（中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東廣州510275）

以菌絲體干質(zhì)量為評價指標(biāo)，對冬蟲夏草菌（Cordyceps sinensis）CS.SYSU-Ⅱ在5 L發(fā)酵罐中的發(fā)酵條件進行優(yōu)化。在單因素試驗基礎(chǔ)上，選取攪拌轉(zhuǎn)速、通氣量和裝料系數(shù)，采用3因素3水平的正交設(shè)計試驗，得出最佳發(fā)酵條件并驗證，最后擴大至20 L發(fā)酵罐。結(jié)果表明，冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ在5 L發(fā)酵罐中培養(yǎng)6 d的最佳發(fā)酵條件為攪拌轉(zhuǎn)速220 r/m in、通氣量2.0 vvm和裝料系數(shù)60%，在此條件下進行驗證試驗，菌絲體干質(zhì)量能達到（19.85±0.52）g/L。擴大至20 L發(fā)酵罐，可得菌絲體干質(zhì)量為（16.78±0.06）g/L，發(fā)酵結(jié)果能達到5 L發(fā)酵罐的85%。通過比較搖床與5 L發(fā)酵罐的生長曲線，發(fā)現(xiàn)pH值能反映菌絲體干質(zhì)量的變化趨勢，可將pH值的變化規(guī)律作為發(fā)酵結(jié)束的判斷依據(jù)。

冬蟲夏草菌；深層發(fā)酵；菌絲體；發(fā)酵條件；優(yōu)化

冬蟲夏草是由冬蟲夏草菌（Cordyceps sinensis（Berk.）Sacc.）侵染蝙蝠蛾科（Hepialidae）幼蟲而形成的僵蟲與子座的結(jié)合體，分布在我國西藏、青海、云南、四川等海拔3 000～5 000 m的高寒地帶中。冬蟲夏草具有多種藥理功效，如抗腫瘤［1］、抗氧化［2］、降血糖［3］、調(diào)節(jié)免疫［4］等?！吨袊幍洹罚?010年版）對其的描述是“補腎益肺，止血化痰。用于腎虛精虧，陽痿遺精，腰膝酸痛，久咳虛喘，勞嗽咯血”［5］。因此國內(nèi)外對其需求量不斷增加，但受生長環(huán)境的制約，天然蟲草產(chǎn)量有限，加之過度采挖，導(dǎo)致其產(chǎn)量逐年下降，遠遠低于市場需求。1948年HUMFELD H等［6］首次利用液體發(fā)酵技術(shù)成功獲得蘑菇菌絲體后，在藥食用真菌人工培育方面，液體深層培養(yǎng)技術(shù)憑借原料來源廣泛、生長快速、生產(chǎn)周期短、工業(yè)化生產(chǎn)和產(chǎn)生的活性物質(zhì)多等優(yōu)勢，逐漸得到了廣泛的應(yīng)用［7］。在冬蟲夏草的人工培育中，利用其無性型的發(fā)酵產(chǎn)物來代替天然冬蟲夏草的研究已經(jīng)取得了較為理想的結(jié)果，且深層發(fā)酵獲得的菌絲體與野生冬蟲夏草有相似的化學(xué)成分［8］。

吳彩琴等［9］以菌絲體干質(zhì)量和多糖含量為評價指標(biāo)，在1 L的錐形瓶中得出了冬蟲夏草菌的培養(yǎng)最適條件；王祖華等［10］通過搖床培養(yǎng)獲得了冬蟲夏草菌最適培養(yǎng)基配方；趙潤等［11］以菌絲體生物量為衡量指標(biāo)，獲得了冬蟲夏草菌液體最適培養(yǎng)基配方。大部分僅僅采用搖瓶培養(yǎng)，只是獲得了搖床最佳培養(yǎng)工藝和培養(yǎng)基配方，不足以開展更大規(guī)模的生產(chǎn)，故有必要對冬蟲夏草菌在發(fā)酵罐的培養(yǎng)條件進一步優(yōu)化。

本研究采用單因素試驗和正交設(shè)計試驗優(yōu)化冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ在5 L發(fā)酵罐的發(fā)酵條件，以獲取最大量的菌絲體干質(zhì)量，實現(xiàn)從搖床至5 L發(fā)酵罐的擴大培養(yǎng)，最后擴大培養(yǎng)至20 L發(fā)酵罐，以期為冬蟲夏草菌深層發(fā)酵的工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用提供必要的依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

1.1.1菌株

冬蟲夏草菌（Cordyceps sinensis）CS.SYSU-Ⅱ：中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院真菌生物技術(shù)實驗室提供。

1.1.2主要試劑

葡萄糖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、硫酸：廣州化學(xué)試劑廠；細菌學(xué)蛋白胨：廣東環(huán)凱生物科技有限公司；鹽酸硫胺：上海源聚生物科技有限公司；3，5-二硝基水楊酸：國藥集團化學(xué)試劑有限公司；甲醛：廣東光華科技股份有限公司；氫氧化鈉：廣東汕頭市西隴化工廠。所有試劑均為分析純。

1.1.3培養(yǎng)基

斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200.0 g/L，葡萄糖20.0 g/L，KH2PO43.0 g/L，MgSO4·7H2O 1.5 g/L，瓊脂20.0 g/L，pH值自然。

種子培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200.0 g/L，葡萄糖20.0 g/L，KH2PO43.0 g/L，MgSO4·7H2O 1.5 g/L，pH值自然。

發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖40.84 g/L，蛋白胨21.55 g/L，KH2PO43.00 g/L，MgSO4·7H2O 1.50 g/L，VB10.08 g/L，初始pH值6.5。

1.2儀器與設(shè)備

ZHWY-211B恒溫培養(yǎng)振蕩器：上海智誠分析儀器制造有限公司；LXJ-ⅡC低速大容量離心機：上海安亭科學(xué)儀器廠；ES-150精密鼓風(fēng)干燥箱：施都凱儀器設(shè)備（上海）有限公司；HHS電熱恒溫水浴鍋：上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；754紫外可見分光光度計：上海光譜儀器有限公司；5 L全自動發(fā)酵罐：德國賽多利斯集團；20 L發(fā)酵罐：上海高機生物工程有限公司。

1.3方法

1.3.1菌種活化

將冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ菌種接種于斜面培養(yǎng)基上，于25℃培養(yǎng)5～6 d后，置于4℃冰箱內(nèi)保存，每隔3個月轉(zhuǎn)種一次。

1.3.2液體種子培養(yǎng)

利用接種環(huán)取8環(huán)斜面菌種，接入裝液量為100 m L/500m L液體培養(yǎng)基中，于24℃、140 r/m in培養(yǎng)3 d。

1.3.3搖床培養(yǎng)［12］

裝液量100 m L/500 m L，接種量3%，培養(yǎng)溫度24℃，搖床轉(zhuǎn)速140 r/m in。

1.3.45 L發(fā)酵罐培養(yǎng)

裝料系數(shù)60%，接種量3%，培養(yǎng)溫度24℃，通氣量1.0 vvm，攪拌轉(zhuǎn)速140 r/min，消泡劑0.1%，裝配有pH和溶氧（dissolved oxygen，DO）電極。

1.3.55 L發(fā)酵罐發(fā)酵條件優(yōu)化前生長曲線

利用1.3.4中的培養(yǎng)條件繪制出5 L發(fā)酵罐優(yōu)化前的生長曲線，確定統(tǒng)一的培養(yǎng)時間以保證單因素試驗和正交設(shè)計試驗時各個試驗因素水平間的培養(yǎng)時間是一致的。

1.3.65 L發(fā)酵罐發(fā)酵條件的單因素試驗

以菌絲體干質(zhì)量為評價指標(biāo)，選取攪拌轉(zhuǎn)速、通氣量和裝料系數(shù)3個因素，各試驗因素水平分別為攪拌轉(zhuǎn)速（A）：100 r/m in、140 r/min、180 r/min、220 r/min、260 r/min；通氣量（B）：0.4vvm、0.8vvm、1.2vvm、1.6vvm、2.0vvm；裝料系數(shù)（C）：50%、60%、70%、80%。每個試驗因素水平平行試驗兩次。

1.3.75 L發(fā)酵罐發(fā)酵條件的正交設(shè)計試驗

在單因素試驗的基礎(chǔ)上結(jié)合正交設(shè)計原理［13］，以菌絲體干質(zhì)量為評價指標(biāo)，對攪拌轉(zhuǎn)速、通氣量和裝料系數(shù)進行正交設(shè)計以確定5 L發(fā)酵罐培養(yǎng)最佳發(fā)酵條件。正交試驗因素與水平見表1。

表1　發(fā)酵條件優(yōu)化正交試驗因素與水平Tab le 1 Factors and levels of orthogonal tests for fermentation conditions optim ization

1.3.820 L發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)［14-15］

由于冬蟲夏草菌是一種絲狀真菌，進行發(fā)酵時細胞受攪拌剪切的影響較明顯，而決定攪拌剪切強度的關(guān)鍵是攪拌葉尖線速度，若僅僅考慮體積傳遞氧系數(shù)或單位體積攪拌功率相等卻不考慮剪切力的影響，可能會導(dǎo)致擴大培養(yǎng)失敗，因此以攪拌葉尖線速度相等為基準，進行從5 L至20 L的發(fā)酵擴大培養(yǎng)。其他培養(yǎng)條件保持不變。攪拌葉尖線速度計算公式如下：

式中：γ為攪拌葉尖線速度，m/min；Di：攪拌葉輪直徑，m；N為攪拌轉(zhuǎn)速，r/m in。

5 L發(fā)酵罐的攪拌葉輪直徑為62 mm，20 L發(fā)酵罐的攪拌葉輪直徑為79 mm。

1.3.9分析檢測

菌絲體干質(zhì)量測定：取一定量發(fā)酵液以3 000 r/min離心15 m in，收集沉淀后用蒸餾水重復(fù)洗滌3次，最后60℃烘干至恒質(zhì)量，所得即為菌絲體干質(zhì)量；總糖、還原糖含量測定：總糖含量測定采用苯酚-硫酸法［16］，還原糖含量測定采用3，5-二硝基水楊酸法（3，5-dinitrosalicylic acid，DNS）［17］；氨基酸態(tài)氮測定：甲醛滴定法［18］；pH值測定：發(fā)酵罐培養(yǎng)在線測定，搖床培養(yǎng)用pH計測定；溶氧值測定：發(fā)酵罐培養(yǎng)在線測定。

2　結(jié)果與分析

2.15 L發(fā)酵罐培養(yǎng)工藝優(yōu)化前生長曲線

以裝料系數(shù)60%，接種量3%，培養(yǎng)溫度24℃，通氣量1.0 vvm，攪拌轉(zhuǎn)速140 r/min，消泡劑0.1%為發(fā)酵條件在5 L發(fā)酵罐進行發(fā)酵，并按1.3.9進行分析檢測，繪制出5 L發(fā)酵罐優(yōu)化前的生長曲線，通過對生長曲線分析確定適宜培養(yǎng)時間，結(jié)果見圖1。

圖1　5 L發(fā)酵罐優(yōu)化前生長曲線Fig.1 G row th curves of mycelia culture in 5 L ferm enter before optimization

由圖1可知，隨著培養(yǎng)時間的延長，pH、總糖含量和還原糖含量都呈現(xiàn)下降趨勢；溶氧在培養(yǎng)1 d后就降至15%以下，且在之后的培養(yǎng)中都維持在低水平；氨基酸態(tài)氮在培養(yǎng)過程中的趨勢為先降低再上升，在7 d后回升幅度顯著，可能是菌絲生長變得緩慢，對氨基酸態(tài)氮的利用減少；菌絲體干質(zhì)量在一定范圍的培養(yǎng)時間內(nèi)與時間呈正相關(guān)，但在8 d后增幅趨于緩慢。培養(yǎng)時間太短，則菌絲體干質(zhì)量低；太長，則菌絲體出現(xiàn)老化，因而都不利于后續(xù)試驗開展。綜合考慮，5 L罐發(fā)酵時的培養(yǎng)時間確定為6 d。

2.25 L發(fā)酵罐培養(yǎng)工藝的單因素試驗結(jié)果與分析

2.2.1不同攪拌轉(zhuǎn)速對菌絲體干質(zhì)量的影響

固定通氣量1.2 vvm和裝料系數(shù)60%，攪拌轉(zhuǎn)速分別為100 r/min、140 r/min、180 r/min、220 r/min、260 r/min，在溫度24℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)6 d。從第3天開始取樣，觀察菌絲體干質(zhì)量在培養(yǎng)過程中的變化，結(jié)果見圖2。

圖2　不同攪拌轉(zhuǎn)速對菌絲體干質(zhì)量的影響Fig.2 Effect of different stirring speed on dry mass o f mycelia

由圖2可知，隨著培養(yǎng)時間的增加，不同攪拌轉(zhuǎn)速條件下的菌絲體干質(zhì)量也隨之增加。當(dāng)攪拌轉(zhuǎn)速在100～220 r/m in內(nèi)，菌絲體干質(zhì)量隨著攪拌轉(zhuǎn)速的增加而增加，其中攪拌轉(zhuǎn)速為220 r/min時，在3～6d的培養(yǎng)時間內(nèi)，菌絲體干質(zhì)量幾乎都是最高的，第6天的菌絲體干質(zhì)量為17.967 g/L；但攪拌轉(zhuǎn)速為180 r/m in，菌絲體干質(zhì)量隨著培養(yǎng)時間的延長，增幅較其他攪拌轉(zhuǎn)速大，第6天的菌絲體干質(zhì)量也達到了18.133 g/L。當(dāng)攪拌轉(zhuǎn)速提高至260 r/min時，從各個培養(yǎng)時間上可以看出，菌絲體干質(zhì)量有所下降，可能是因為高攪拌轉(zhuǎn)速條件下，剪切力較大，且絲狀真菌對剪切力較敏感，導(dǎo)致菌絲被打斷，造成了細胞損傷，不利于菌絲的生長。綜上所述，選擇攪拌轉(zhuǎn)速140 r/m in、180 r/m in、220 r/m in進行正交試驗。

2.2.2不同通氣量對菌絲體干質(zhì)量的影響

固定攪拌轉(zhuǎn)速140 r/m in和裝料系數(shù)60%，通氣量分別為0.4 vvm、0.8 vvm、1.2 vvm、1.6 vvm、2.0 vvm，在溫度24℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)6 d。從第3天開始取樣，觀察菌絲體干質(zhì)量在培養(yǎng)過程中的變化，結(jié)果見圖3。

圖3　不同通氣量對菌絲體干質(zhì)量的影響Fig.3 Effect of different aeration rate on dry mass of mycelia

由圖3可知，提高通氣量，菌絲體干質(zhì)量也相應(yīng)增加。當(dāng)通氣量為0.4 vvm、0.8 vvm、1.2 vvm、1.6 vvm、2.0 vvm時，培養(yǎng)6 d，最大菌絲體干質(zhì)量分別為7.950 g/L、9.600 g/L、12.717 g/L、13.617 g/L、14.150 g/L，說明較高的通氣量更有利于菌絲的生長。因此選擇通氣量1.2 vvm、1.6 vvm、2.0 vvm進行正交試驗。

2.2.3不同裝料系數(shù)對菌絲體干質(zhì)量的影響

固定攪拌轉(zhuǎn)速140 r/m in和通氣量1.2 vvm，裝料系數(shù)分別為50%、60%、70%、80%，在溫度24℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)6d。從第3天開始取樣，觀察菌絲體干質(zhì)量在培養(yǎng)過程中的變化，結(jié)果見圖4。

裝料系數(shù)是影響溶氧的一個重要因素。由圖4可知，當(dāng)培養(yǎng)時間延長時，菌絲體干質(zhì)量也隨之增加。相比裝料系數(shù)50%，60%、70%和80%獲得的菌絲體干質(zhì)量更多，可能是因為裝料系數(shù)低導(dǎo)致液體培養(yǎng)基中的溶氧不高。在培養(yǎng)6 d后，裝料系數(shù)60%、70%、80%分別能得到菌絲體干質(zhì)量10.967 g/L、11.217 g/L、10.967 g/L，差異不大，可能原因是三者體積相差太小。綜合考慮選擇裝料系數(shù)60%、70%和80%進行正交試驗。

圖4　不同裝料系數(shù)對菌絲體干質(zhì)量的影響Fig．4 Effects o f different volume charge coefficient on dry mass of mycelia

2.35 L發(fā)酵罐發(fā)酵條件的正交試驗結(jié)果與分析

在單因素試驗基礎(chǔ)上，以菌絲體干質(zhì)量為評價指標(biāo)，以攪拌轉(zhuǎn)速、通氣量和裝料系數(shù)為評價因素進行正交試驗，結(jié)果與分析見表2，方差分析見表3。

表2　發(fā)酵條件優(yōu)化正交試驗結(jié)果與分析Table 2 Results and analysis of orthogonal tests for fermentation conditions op timization

由表2可知，在冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ的5 L發(fā)酵罐培養(yǎng)中，影響菌絲體干質(zhì)量的3個因素的大小次序為A＞B＞C，即在試驗確定的因素中，攪拌轉(zhuǎn)速的影響最大，通氣量次之，裝料系數(shù)的影響最小。通過直觀分析，得出冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ在5 L發(fā)酵罐中的最優(yōu)發(fā)酵條件組合為A3B3C1，即攪拌轉(zhuǎn)速220 r/m in，通氣量2.0 vvm，裝料系數(shù)60%。在此最佳發(fā)酵條件下進行驗證試驗，得到的菌絲體干質(zhì)量為（19.850±0.519）g/L。

表3　影響菌絲體干質(zhì)量正交試驗結(jié)果各因素顯著性分析Table 3 Significant analysis of various factors of orthogonal tests results on dry mass of m ycelia

由表3可知，攪拌轉(zhuǎn)速的F值大于F0.01，差異極顯著（P＜0.01），說明攪拌轉(zhuǎn)速對冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ在5 L發(fā)酵罐中的生長有極顯著的影響；通氣量的F值大于F0.05水平，差異顯著（P＜0.05），說明通氣量對冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ在5 L發(fā)酵罐中的生長有顯著的影響，而裝料系數(shù)的F值小于F0.05水平，差異不顯著（P＞0.05），說明裝料系數(shù)對冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ在5 L發(fā)酵罐中的生長無明顯的影響。

2.4搖床培養(yǎng)與5 L發(fā)酵罐生長曲線比較

搖床培養(yǎng)條件：裝液量100 m L/500 m L，接種量3%，培養(yǎng)溫度24℃，搖床轉(zhuǎn)速140 r/min；5 L發(fā)酵罐培養(yǎng)條件：攪拌轉(zhuǎn)速220 r/m in，通氣量2.0 vvm，裝料系數(shù)60%，接種量3%，培養(yǎng)溫度24℃。各參數(shù)按1.3.9進行分析檢測，繪制出搖床與5 L發(fā)酵罐培養(yǎng)的生長曲線，結(jié)果見圖5。

圖5　搖床（A）及5 L發(fā)酵罐（B）培養(yǎng)的生長曲線Fig．5 Grow th curves of m ycelia culture in shaker（A）and 5 L fermenter（B）

由圖5可知，搖床培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)的pH隨著培養(yǎng)時間的增加，趨勢都是先降低再回升。pH出現(xiàn)下降的原因可能是培養(yǎng)基中的NH4+被利用后產(chǎn)生了H+，也可能是產(chǎn)生了有機酸。當(dāng)pH回升后，菌絲體干質(zhì)量的增幅減慢，說明菌體生長開始從對數(shù)期轉(zhuǎn)向穩(wěn)定期；兩者的菌絲體干質(zhì)量都隨著培養(yǎng)時間的延長，呈現(xiàn)不斷增加的趨勢，在pH回升的第一天，搖床培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)的菌絲體干質(zhì)量都達到最大，分別為（23.633±0.256）g/L和（21.583±0.351）g/L，表明菌絲體干質(zhì)量變化并不是完全同步于pH，而是遲于pH的改變，因此pH值的變化規(guī)律可作為冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ培養(yǎng)結(jié)束的判斷依據(jù)，與杜巍等［19-20］報道的一致；在總糖含量和還原糖含量變化方面，搖床培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)都隨培養(yǎng)時間的延長呈現(xiàn)下降趨勢，并在培養(yǎng)后期趨于穩(wěn)定；搖床培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)中的氨基酸態(tài)氮含量的變化都是先下降再上升，在培養(yǎng)中期含量低，后期出現(xiàn)回升。由此可以說明從搖床放大至5 L發(fā)酵罐的優(yōu)化條件是正確的。

2.520 L發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)

經(jīng)計算，20 L發(fā)酵罐的攪拌轉(zhuǎn)速為173 r/m in。通氣量2.0 vvm，裝料系數(shù)60%，培養(yǎng)6 d，可得菌絲體干質(zhì)量為（16.783±0.058）g/L，發(fā)酵結(jié)果能達到5L發(fā)酵罐的85%，表明發(fā)酵過程較成功。

3　結(jié)論

通過對攪拌轉(zhuǎn)速、通氣量和裝料系數(shù)進行單因素試驗和正交設(shè)計試驗，發(fā)現(xiàn)攪拌轉(zhuǎn)速對冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ的影響最大，通氣量次之，裝料系數(shù)的影響最小，并得出了冬蟲夏草菌CS.SYSU-Ⅱ在5 L發(fā)酵罐中培養(yǎng)6 d的最適發(fā)酵條件為攪拌轉(zhuǎn)速220 r/m in，通氣量2.0 vvm，裝料系數(shù)60%，在此條件下進行驗證試驗，能得到菌絲體干質(zhì)量（19.850±0.519）g/L。在20 L發(fā)酵罐上進行擴大培養(yǎng)，可得菌絲體干質(zhì)量（16.783±0.058）g/L，發(fā)酵結(jié)果能達到5 L發(fā)酵罐的85%。比較搖床培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)的生長曲線，pH都隨著培養(yǎng)時間的延長，先降低再回升，且pH值能反映菌絲體干質(zhì)量的變化趨勢，因而pH值的變化規(guī)律可以作為培養(yǎng)結(jié)束的判斷依據(jù)。

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Optimization of submerged fermentation conditions of Cordyceps sinensis CS.SYSU-Ⅱ

SHENG Jiajun，CHEN Xiaoguang，YE Kenan*
（College of Life Science，Sun Yat-sen University，Guangzhou 510275，China）

Using the dry mass of m ycelia as evaluation index，the fermentation conditions of Cordyceps sinensis CS.SYSU-Ⅱin 5 L fermenter were optim ized.Based on single factor experiments，stirring speed，aeration rate and volume charge coefficient were selected.The optimum fermentation conditions were determined by 3 factors and 3 levels orthogonal experiments，then verified，and finally extended to 20 L fermenter.The results showed that the optimum conditions of C.sinensis CS.SYSU-Ⅱin 5 L fermenter fermented for 6 d were stirring speed 220 r/m in，aeration rate 2.0 vvm and volume charge coefficient 60%.Under the conditions，the dry mass of m ycelia could reach（19.85±0.52）g/L.The dry mass of mycelia in 20 L fermenter was（16.78±0.06）g/L，which could reach 85%of that in 5 L fermenter.Through the com parison grow th curve of shaker and 5 L fermenter，it was found that pH value could reflect the change trend of mycelia dry mass，so the change rule of pH value could be used as a judgment data for end of the fermentation.

Cordyceps sinensis；submerged fermentation；mycelia；fermentation conditions；optim ization

Q815

0254-5071（2016）05-0070-05

10．11882/j．issn．0254-5071．2016．05．015

2016-02-25

中山大學(xué)產(chǎn)學(xué)研項目（33000-7101338）

盛嘉?。?990-），男，碩士研究生，研究方向為應(yīng)用生物技術(shù)。

葉克難（1964-），男，副教授，博士，研究方向為應(yīng)用生物技術(shù)。