添加DHA的食用油對(duì)SD大鼠肝抗氧化活性的研究

付 杰，林源鋒，柳 夢(mèng)，田 華，陳 濤，何東平，*（.武漢輕工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，湖北武漢43003；.中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所，湖北武漢43007）

添加DHA的食用油對(duì)SD大鼠肝抗氧化活性的研究

付 杰1，林源鋒1，柳 夢(mèng)1，田 華1，陳 濤2，何東平1，*
（1.武漢輕工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，湖北武漢430023；2.中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所，湖北武漢430071）

為了研究添加DHA的食用油對(duì)肝抗氧化活性的影響，本文選取96只初斷乳SD雄性大鼠（80±10）g，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為8組，陰性對(duì)照組（大豆油和花生油等比例混合）、陽(yáng)性對(duì)照組（DHA藻油），以250、500、750 mg DHA分別調(diào)配入60 g大豆油、花生油中，作為DHA低、中、高劑量調(diào)配油的處理組。對(duì)各處理組按1 mL混合油/100 g體重·d喂養(yǎng)分別達(dá)到4周和8周時(shí)，對(duì)SD大鼠肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和乙酰膽堿酯酶（AChE）活性進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明：DHA中劑量組大鼠肝組織SOD活性極顯著高于陰性對(duì)照組（p＜0.01），MDA含量極顯著低于陰性對(duì)照組（p＜0.01），AChE活性無(wú)顯著性差異（p＞0.05）；DHA高劑量組肝組織SOD活性顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組（p＜0.05），MDA含量顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組（p＜0.05），AChE無(wú)顯著性差異（p＞0.05）；其余各組AChE、SOD活性及MDA含量均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。適量補(bǔ)充DHA，有增強(qiáng)大鼠機(jī)體抗氧化的能力，然而一旦DHA攝入過量，反而會(huì)對(duì)機(jī)體抗氧化能力產(chǎn)生消極作用。

DHA藻油食用油，肝抗氧化活性，超氧化物歧化酶，丙二醛，乙酰膽堿酯酶

目前在許多國(guó)家，傳統(tǒng)的魚油DHA添加劑已經(jīng)不再流行，逐漸被來(lái)源于微藻油的DHA藻油所取代。DHA藻油成為了唯一得到美國(guó)食品與藥物管理局（FDA）認(rèn)可的兒童DHA補(bǔ)充劑來(lái)源，在國(guó)際食品、藥品及保健品市場(chǎng)上的應(yīng)用前景廣泛，已成供不應(yīng)求之勢(shì)［1-3］。面對(duì)我國(guó)居民DHA攝入長(zhǎng)期不足的統(tǒng)一健康需求，急需一種方便、有效的新途徑，來(lái)提高我國(guó)居民的每日DHA攝入量，這對(duì)我國(guó)居民的身體健康是至關(guān)重要的。DHA藻油在食品中顯示出了良好的開發(fā)應(yīng)用前景，其粉劑已被廣泛應(yīng)用于保健品和食品行業(yè)，一些添加DHA的乳制品、飲料等已在市場(chǎng)上出現(xiàn)，特別是孕婦、嬰幼兒配方奶粉等類似食品受到極大關(guān)注［4］。食用油在我國(guó)居民日常生活中占有重要地位，在膳食烹調(diào)過程中必不可少，將DHA藻油添加入擁有大眾化特點(diǎn)的食用油中，方便、快捷，更可以有效解決消費(fèi)者的每日膳食DHA攝入不足的問題［5-6］。

傳統(tǒng)的植物油脂對(duì)肌體肝抗氧化性有著非常重要的作用，陳雪君等［7］研究添加植物油對(duì)湖羊肝臟的影響，結(jié)果表明添加植物油的樣品對(duì)湖羊血清和肝臟的抗氧化系統(tǒng)有促進(jìn)作用。DHA多不飽和脂肪酸，有著眾多的藥理作用，尤麗菊等［8］在DHA的藥理作用中提到，DHA含量增加，AA含量降低，丙二醛生成減少，超氧化物歧化酶（SOD）的活性增加。提示DHA對(duì)過氧化-抗氧化平衡具有重要影響。本文將DHA添加到植物油中，探討其對(duì)SD大鼠肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和乙酰膽堿酯酶（AChE）的影響，以研究添加DHA食用油的抗氧化能力，以期為添加DHA食用油產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

DHA藻油 DHA含量≥45%，由嘉必優(yōu)生物工程（武漢）有限公司提供；大豆油、花生油 由益海嘉里金龍魚提供；清潔級(jí)初斷乳SD雄性大鼠 體重約為（80±10）g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，在武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行；乙酰膽堿酯酶（AChE）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒 購(gòu)自南京建成生物工程研究所；其他試劑 均為分析純。

EnSpire多標(biāo)記微孔板檢測(cè)儀（酶標(biāo)儀） 鉑金埃爾默儀器（上海）有限公司；S10手提式高速分散器、LEICA ULTRACUT R超薄切片機(jī) 上海京工實(shí)業(yè)有限公司；SK-1漩渦混勻器、臺(tái)式高速離心機(jī)TGL-16鄭州南北儀器設(shè)備有限公司；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋 常州市萬(wàn)豐儀器制造有限公司；Agilent 7890A氣相色譜儀 安捷倫科技（中國(guó)）有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 取96只初斷乳SD雄性大鼠（80±10）g，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為8組，每組12只。陰性對(duì)照組（大豆油和花生油等比例混合）、陽(yáng)性對(duì)照組（DHA藻油）、以250、500、750 mg DHA分別調(diào)配入60 g大豆油、花生油中，作為DHA低、中、高劑量調(diào)配油的處理組。每天上午對(duì)所有實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)行灌胃給藥，灌胃劑量均為1 mL混合油/100 g體重·d，其他時(shí)間自由飲水。

在灌胃至4周和8周時(shí)，利用隨機(jī)數(shù)字表法從每組中隨機(jī)選擇8只SD大鼠，對(duì)SD大鼠腦組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和乙酰膽堿酯酶（AChE）活性進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 DHA藻油的脂肪酸成分分析 色譜柱：Agilent SP-2560（100 m×25 μm，0.2 μm）；升溫程序：100℃保持4 min，以3℃/min升溫至230℃，保持20 min，載氣（N2）流速25 mL/min，壓力2.4 kPa，進(jìn)樣量1 μL；分流比15∶1。

1.2.3 動(dòng)物肝組織采集及處理 將大鼠置于冰盤上迅速解剖肝臟，取大鼠肝臟將其放入2.5%戊二醛固定液中做預(yù)固定處理，再用鋨酸做后固定，用乙醇進(jìn)行逐級(jí)脫水處理，接著用丙酮進(jìn)行置換處理，最后用環(huán)氧樹脂與丙酮做置換處理［9-10］。將置換處理完成的樣品在恒溫56℃干燥箱內(nèi)放置72 h，進(jìn)行聚合處理。

1.2.4 AChE、SOD、MDA的測(cè)定 用預(yù)冷的生理鹽水沖洗處理過的肝組織后，按質(zhì)量比1∶9加入生理鹽水，制成10%的肝組織勻漿，3500 r/min離心10 min，取上清，按照試劑盒方法進(jìn)行操作，測(cè)定肝組織AChE活性、SOD活性、MDA含量［11-12］。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用單因素方差t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，以p＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 DHA藻油的脂肪酸成分分析

DHA藻油的脂肪酸成分分析結(jié)果見表1。

表1 DHA藻油脂肪酸組成Table1 Composition and content of DHA algae oil fatty acid

由表1可知DHA藻油的DHA（二十二碳六烯酸）成分占45.39%，將其按1∶60配比調(diào)配到大豆油、花生油中，因?yàn)榇蠖褂秃突ㄉ蛢煞N植物油脂肪酸組成含量有著不同差異，因而分別添加起到組間對(duì)照作用，將它們充分混合均勻，采取分級(jí)添加、混合調(diào)配的方法所得新產(chǎn)品的穩(wěn)定性、安全性與功能性都較好。

2.2 生化指標(biāo)的檢測(cè)

2.2.1 大鼠喂養(yǎng)4周時(shí)肝組織SOD活性、MDA值、Ache活性的變化 喂養(yǎng)4周的SD大鼠的肝組織勻漿經(jīng)離心取上清液，按照SOD、MDA、AChe試劑盒的方法說(shuō)明操作，測(cè)出肝組織中SOD活性、MDA值、Ache活性相比于對(duì)照組的變化情況如表2所示。

由表2可知，當(dāng)大鼠喂養(yǎng)4周時(shí)，大鼠肝組織SOD活性、MDA值、AChe活性相比于兩個(gè)對(duì)照組并沒有顯著的差異（p＞0.05），可能與給藥時(shí)間較短有關(guān)，給藥時(shí)間較短，大鼠肝組織還沒有消化吸收DHA，并形成生理常態(tài)，可能會(huì)縮短了大鼠的逃避潛伏期，但隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，DHA的作用隨時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)。

表2 不同調(diào)配油組培養(yǎng)4周肝組織中SOD活性、MDA值、Ache活性的變化Table2 The SOD activity，MDA content and AChE of the liver tissues in different groups feeding for 4 weeks

2.2.2 大鼠喂養(yǎng)8周后肝組織的SOD活性變化 對(duì)大鼠肝組織SOD活性的測(cè)定，因?yàn)闄C(jī)體內(nèi)氧自由基過多會(huì)對(duì)其運(yùn)動(dòng)能力造成不良影響［13］，SOD對(duì)于清除生物體內(nèi)的自由基具有重要作用，因此對(duì)SOD活性進(jìn)行測(cè)定。肝組織中SOD活性變化情況如表3所示。

表3 不同調(diào)配油組培養(yǎng)8周肝組織中SOD活性的變化Table3 The SOD activity of the liver tissues in different groups feeding for 8 weeks

由表3可知，當(dāng)?shù)蛣┝课桂B(yǎng)8周時(shí)，大鼠肝組織SOD活性相比于陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組并沒有顯著的差異，可能與劑量較低有關(guān)，還沒有達(dá)到藥效作用。中劑量DHA調(diào)配大豆油組SOD活性極顯著高于陰性對(duì)照組（p＜0.01），中劑量DHA調(diào)配花生油組極顯著高于陰性對(duì)照組（p＜0.01），顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組（p＜0.05）。這表明DHA中劑量調(diào)配植物油能夠提高大鼠肝組織SOD活性，適量補(bǔ)充DHA有增強(qiáng)大鼠機(jī)體抗氧化的能力。然而，高劑量DHA調(diào)配大豆油組和花生油組大鼠SOD活性明顯低于陰性對(duì)照組，顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組（p＜0.05）。這表明DHA攝入過量，對(duì)機(jī)體抗氧化能力及代謝會(huì)有一定程度的消極作用。因?yàn)镈HA屬于多碳不飽和脂肪酸，其性狀不太穩(wěn)定，容易在調(diào)制及灌胃中被氧化，如果劑量過高在人體內(nèi)不能充分吸收，氧化后的脂肪酸在機(jī)體會(huì)阻止機(jī)體正常運(yùn)行，因此可能影響到抗氧化能力及免疫調(diào)控力。

2.2.3 大鼠喂養(yǎng)8周后肝組織MDA含量的變化 MDA的含量常常能反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，測(cè)定肝組織中MDA含量的變化情況如表4所示。

表4 不同調(diào)配油組培養(yǎng)8周肝組織中MDA活性的變化Table4 The MDA activity of the liver tissues in different groups feeding for 8 weeks

由表4可知，低劑量喂養(yǎng)8周時(shí)，大鼠肝組織MDA含量相比于陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組并沒有顯著的差異。中劑量DHA調(diào)配大豆油組顯著（p＜0.05）低于陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組，中劑量DHA配花生油組極顯著（p＜0.01）低于陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組。這表明添加中劑量的DHA有助于防止機(jī)體過氧化程度。然而高劑量DHA調(diào)配大豆油組顯著（p＜0.05）高于陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組，高劑量DHA調(diào)配花生油組顯著（p＜0.05）高于陽(yáng)性對(duì)照組，這表明高劑量的DHA會(huì)加快機(jī)體過氧化程度。這是因?yàn)樯矬w內(nèi)氧化反應(yīng)產(chǎn)生的重要代謝產(chǎn)物之一就是MDA，其含量與生物體內(nèi)過氧化的程度呈正相關(guān)，細(xì)胞受到損害的程度可由MDA含量間接表現(xiàn)出來(lái)，因此可將其作為定量指標(biāo)，用來(lái)反映機(jī)體細(xì)胞受到氧自由基攻擊的強(qiáng)度。DHA添加劑量較高時(shí)，容易在調(diào)制及灌胃中被氧化，機(jī)體對(duì)多碳不飽和脂肪酸的利用是有一定限度的，DHA過多在機(jī)體積累，沒有利用的部分容易在機(jī)體內(nèi)被酶解氧化，因而促進(jìn)機(jī)體過氧化及降低免疫調(diào)控力。總的來(lái)說(shuō)，就是機(jī)體清除氧自由基的能力由SOD的活性體現(xiàn)，機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度由MDA的含量體現(xiàn)。

2.2.4 大鼠喂養(yǎng)8周時(shí)肝組織AChE活性的變化 大鼠肝組織AChE活性的變化情況如表5所示。

表5 不同調(diào)配油組培養(yǎng)8周肝組織中AChE活性的變化Table5 The AChE activity of the liver tissues in different groups feeding for 8 weeks

乙酰膽堿酯酶是在肝臟中生成，然后分泌到血液中的酶，這種酶可將膽堿酯水解成膽堿和有機(jī)酸，由于肝臟是合成這種酶的唯一器官，肝臟受損時(shí)，肝細(xì)胞合成功能下降，血清膽堿酯酶降低。肝細(xì)胞炎癥程度越重，膽堿酯酶活力下降越明顯，肝臟功能恢復(fù)后，膽堿酯酶就會(huì)恢復(fù)正常［14］。由表5可知，添加DHA的食用油對(duì)大鼠肝組織AChE含量都沒有明顯的影響，表明添加DHA對(duì)正常大鼠的肝組織產(chǎn)生乙酰膽堿酯酶沒有太大促進(jìn)作用，只是與機(jī)體抗氧化能力相關(guān)。

3 結(jié)論與討論

反映過氧化程度的最常用的一對(duì)指標(biāo)是超氧化歧化酶（SOD）與丙二醛（MDA），常常被用來(lái)配合使用［15］。通常認(rèn)為當(dāng)給予動(dòng)物日糧氧化應(yīng)激，如飼喂含PUFA較高的日糧時(shí)，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體抗氧化性能的改變，“補(bǔ)償性”地誘導(dǎo)動(dòng)物內(nèi)源抗氧化酶活性增加［16-17］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明添加DHA的食用油對(duì)大鼠肝組織抗氧化性有明顯的提高，對(duì)機(jī)體過氧化也有一定的抑制作用。當(dāng)喂養(yǎng)8周時(shí)，DHA中劑量調(diào)配植物油能顯著提高大鼠肝組織SOD活性，顯著降低MDA含量，說(shuō)明能夠提高大鼠肝組織抗氧化活性并抑制過氧化。然而添加高劑量DHA時(shí)，對(duì)改善大鼠肝組織抗氧化活性及抑制過氧化的能力變?nèi)酢?/p>

所以，在食用油中添加適當(dāng)?shù)腄HA，有利于增強(qiáng)大鼠肝抗氧化的能力以及抑制肝組織的過氧化程度。但DHA攝入過量，在機(jī)體氧化沉積，反而會(huì)對(duì)機(jī)體抗氧化能力產(chǎn)生消極作用。對(duì)于DHA調(diào)配食用油產(chǎn)品的穩(wěn)定性，和如何解決DHA極易氧化的問題，還需要下階段深入的研究。

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Research of the edible oil contained DHA affecting the antioxidant activity of SD rats livers

FU Jie1，LIN Yuan-feng1，LIU Meng1，TIAN Hua1，CHEN Tao1，HE Dong-ping1，*
（1.College of Food Science and Engineering，Wuhan Polytechnic University，Wuhan 430023，China；2.Wuhan Institute of Virus，Chinese Academy of Sciences，Wuhan 430071，China）

To study the effect of edible oil contained DHA on the antioxidant activity of liver，this paper selected 96 early weaning SD male rats（80±10）g，which were divided into 8 groups based on the random number.Table the negative control group（mixing ratio of soybean and peanut oil），positive control group（DHA algae oil），250，500，750 mg DHA were seperately added to 60 g soybean oil，peanut oil，with low，medium，high dose DHA were treatment group.According to the dosage of 1 mL oil per 100 g weight a day and after feeding for 4 weeks and 8 weeks respectively，the SOD activity，MDA content and AChE in the liver tissues of SD rats were detected.The results showed that the SOD activity of liver tissue in middle dosage of DHA group was significantly higher than that in negative control group，the MDA content was significantly lower than that in positive control group and the AChE had no significant difference.The SOD activity in high dose of DHA group was significantly lower and the MDA content was significantly higher than that in negative control group，positive control group，and the AChE also had no significant difference.While the other groups had no significant difference in AChE，SOD activity and MDA content.Appropriate supplement of DHA could enhance the rat body's antioxidant capacity，but the excessive DHA will bring a negative effect.

DHA algae oil；the antioxidant activity of livers；SOD；MDA；AChE

TS201.1

A

1002-0306（2016）06-0356-04

10.13386/j.issn1002-0306.2016.06.063

2015－10－22

付杰（1991-），男，碩士研究生，研究方向：微生物油脂，E-mail：2683802254@qq.com。

何東平（1957-），男，博士，教授，研究方向：糧食、油脂及植物蛋白，E-mail：hedp123456@163.com。

國(guó)家糧食局糧食公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（201313012-03）。