• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    灰樹花抗氧化活性多酚的提取純化及其鑒定

    2016-09-16 06:35:08呂旭聰賈瑞博周文斌
    中國釀造 2016年3期
    關鍵詞:樹花大孔極性

    呂旭聰,賈瑞博,李 燕,周文斌,劉 斌

    (1.國家菌草工程技術研究中心,福建 福州350002;2.福建農(nóng)林大學 食品科學學院,福建 福州 350002;3.陽光國際集團科技發(fā)展有限公司,福建 泉州 362000)

    灰樹花抗氧化活性多酚的提取純化及其鑒定

    呂旭聰1,2,3,賈瑞博1,2,李燕1,2,周文斌1,2,劉斌1,2

    (1.國家菌草工程技術研究中心,福建 福州350002;2.福建農(nóng)林大學 食品科學學院,福建 福州 350002;3.陽光國際集團科技發(fā)展有限公司,福建 泉州 362000)

    以抗氧化活性為指標,通過單因素試驗和正交試驗對灰樹花多酚提取工藝進行優(yōu)化,確定最佳提取條件為提取時間2.5 h,提取溫度70℃,料液比1∶50(g∶mL)。提取的多酚經(jīng)大孔樹脂NKA-Ⅱ動態(tài)吸附和解吸得到3個不同多酚組分,分別為體積分數(shù)為20%、40%及60%乙醇洗脫物。以DPPH自由基清除率、羥基自由基清除率以及總還原力為指標測定不同組分的抗氧化活性,結(jié)果表明,體積分數(shù)為40%乙醇洗脫物的抗氧化作用最強。采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對體積分數(shù)為40%乙醇洗脫物多酚組分進行分離鑒定,通過對應的質(zhì)譜結(jié)果分析可推測其中的多酚組分包括2-羥基丁二酸、香豆酸、3-羥基白藜蘆醇、白藜蘆醇、二羥基苯乙酸、咖啡酸和4-羥基苯甲酸等物質(zhì)。

    灰樹花;多酚;大孔樹脂;抗氧化;高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

    灰樹花(Grifola frondosa)屬擔子菌亞門層菌綱非褶菌目多孔菌科樹花菌屬真菌[1],作為一種珍貴的食、藥兼用蕈菌,灰樹花的多種營養(yǎng)素和生理功效成分居各種食用菌之首,素有“食用菌王子”和“華北人參”之美譽。相關研究表明,灰樹花具有增強免疫力、抑制腫瘤、抗病毒、抗氧化防衰老、穩(wěn)定血壓、降血糖血脂、改善脂肪代謝及緩解肝炎癥狀、增強記憶力等多種醫(yī)療保健功效[2-10]。然而,目前對灰樹花功效成分的研究主要集中在多糖、蛋白質(zhì)或肽類、糖蛋白或蛋白聚糖、脂類等[11],對多酚類物質(zhì)及其活性研究相對較少。

    人體內(nèi)的氧化損傷與動脈粥樣硬化、心血管疾病、糖尿病、腫瘤等多種疾病的發(fā)生密切相關[12]。近年來,食用菌的抗氧化作用開始受到關注,從食用菌中開發(fā)天然、高效,具有醫(yī)療保健功能的抗氧化食品或藥品具有很高的開發(fā)價值和廣闊的應用市場,己成為當今一個重要的研究方向[13]。多酚具有抗衰老、抗輻射、清除體自由基等功能,對心腦血管疾病的防治具有良好功效。研究表明,多酚是食用菌中起抗氧化作用的主要活性成分[14],陳向東等[15]從灰樹花菌絲體中分離得到粉末狀物質(zhì),應用光譜技術和化學鑒別試驗證明其主要為多酚類物質(zhì),并采用紅細胞氧化溶血和丙二醛(malondialdehyde)試驗證實了灰樹花多酚粗提物具有較強的抗氧化作用。但關于灰樹花多酚的提取純化工藝目前尚少見相關的研究報道,因此,本研究以總還原力為評價指標,首先通過單因素和正交試驗對灰樹花子實體具有抗氧化活性的多酚成分提取工藝進行優(yōu)化,經(jīng)大孔樹脂NKA-Ⅱ動態(tài)吸附和解吸附制備不同的多酚組分,并對其抗氧化活性進行研究,并對抗氧化活性最強的多酚組分進行鑒定。本研究目的在于分離制備具有較強抗氧化活性的灰樹花多酚組分,為灰樹花多酚的進一步開發(fā)利用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1材料與試劑

    無水乙醇、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鐵、三氯乙酸、福林酚、無水碳酸鈉、硫酸亞鐵、30%過氧化氫、濃鹽酸、水楊酸、氯化亞鐵、鐵氰化鉀,HPD-600大孔樹脂(極性)、NKA-9(極性)、X-5(非極性)、NKA-Ⅱ(極性)、AB-8(弱極性)、HP-20(非極性)、D101(非極性)、S-8(極性)、聚酰胺以及HZ-801(非極性):國藥集團化學試劑有限公司;沒食子酸標準品、三羥甲基氨基甲烷、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼:美國Sigma公司;甲醇、甲酸、乙酸、乙腈均為色譜純:國藥集團化學試劑有限公司;0.22 μm水相濾膜、0.22 μm有機相濾膜、一次性針管:北京索萊寶科技有限公司;灰樹花干品:購自慶元縣禾帝農(nóng)產(chǎn)品專業(yè)合作社,粉碎,過80目篩備用。

    1.2儀器與設備

    HH-3A數(shù)顯三用水浴鍋:金壇市精達儀器制造廠;SC-3612低俗離心機:科大創(chuàng)新股份有限公司;EO2140電子分析天平:賽多利斯科學儀器北京有限公司;R201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海申生科技有限公司;DHG-9240A電熱恒溫干燥箱:上海一恒科技有限公司;TYPEFDU-1000冷凍干燥機:東京理化器械株式會社;TU-1810紫外可見分光光度計:普析通用有限公司;LC-20AT高效液相色譜儀:日本島津公司;LCQ Deca XP Plus液相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀:美國安捷倫公司。

    1.3試驗方法

    1.3.1多酚組分提取單因素試驗

    精確稱取灰樹花粉末1.00 g,分別用不同體積分數(shù)(0、20%、40%、60%、80%、100%)乙醇,在不同提取溫度(40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃),不同提取時間(30 min、60 min、90 min、120 min、150 min)及不同料液比(1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60(g∶mL))條件下處理,將抽濾后所得樣液進行定容,取樣液0.5 mL,補水至1 mL,測定總還原力,考察提取溶劑、提取溫度、提取時間、料液比對抗氧化多酚物質(zhì)提取的影響。

    1.3.2多酚組分提取條件優(yōu)化正交試驗

    在單因素提取試驗的基礎上,選擇提取溫度(A)、提取時間(B)、料液比(C)進行3因素3水平正交試驗設計。以總還原力為評價指標,對灰樹花抗氧化多酚的提取工藝條件進行優(yōu)化。正交試驗因素與水平見表1。

    表1 提取條件優(yōu)化正交試驗因素與水平Table 1 Factors and levels of orthogonal experiments for extraction conditions optimization

    1.3.3灰樹花多酚類物質(zhì)的含量測定及分離純化

    (1)沒食子酸標準曲線的繪制[16]

    吸取0、10.0 mg/L、20.0 mg/L、30.0 mg/L、40.0 mg/L、50.0 mg/L的沒食子酸標準使用液各1.0 mL,分別加5.0 mL水,1.0 mL福林-酚試劑和3.0 mL碳酸鈉溶液,混勻,沒食子酸標準溶液質(zhì)量濃度分別為0、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L、4.0 m/L、5.0 mg/L,顯色,放置2 h,以蒸餾水管為空白,在765 nm波長處測定標準溶液的吸光度值,以沒食子酸質(zhì)量濃度(x)為橫坐標,吸光度值(y)為縱坐標,繪制標準曲線。得到回歸方程為y=0.014 9x+0.005 0,相關系數(shù)R2=0.999 3,標準曲線的擬合度良好,可以用于灰樹花多酚含量的測定。

    (2)大孔樹脂的優(yōu)選

    分別精確稱取預處理好的大孔樹脂HPD-600(極性)、NKA-9(極性)、X-5(非極性)、NKA-Ⅱ(極性)、AB-8(弱極性)、HP-20(非極性)、D101(非極性)、S-8(極性)、HZ-801(非極性)和聚酰胺各5 g,加入樣液100 mL,振蕩吸附12 h,測定多酚的含量,從而確定各型號大孔樹脂的吸附率和解吸率。以優(yōu)選的大孔樹脂為填料柱層析,用體積分數(shù)為20%、40%、60%和80%的乙醇以1.0 mL/min的流速進行洗脫,每個濃度洗脫2個柱體積,收集不同的洗脫液洗脫樣品。

    1.3.4多酚組分的抗氧化活性測定

    (1)羥基自由基(·OH)清除能力[17]

    取不同濃度待測樣品溶液1 mL,加入9 mmol/L FeSO41 mL、9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液1 mL,最后加8.8 mmol/L H2O21 mL啟動反應,在37℃水浴下反應30 min,在波長510 nm下測定各濃度溶液的吸光度值。由于H2O2與Fe2+混合會產(chǎn)生·OH,而水楊酸會捕捉·OH并產(chǎn)生有色物質(zhì),由于樣品本身存在吸光度值,則以9 mmol/L FeSO41 mL、9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液1 mL各自加入不同濃度的樣品溶液1 mL以及蒸餾水1 mL作為樣品的對照吸收值(即蒸餾水代替8.8 mmol/L H2O2)。按下式計算·OH清除率:

    (2)DPPH·清除能力的測定[18]

    取2.0 mL不同濃度待測樣品溶液,加入0.2 mmol/L DPPH·乙醇溶液2.0 mL,混合均勻后避光放置30 min,在波長517 nm處測定其吸光度值。以2.0 mL體積分數(shù)為95%乙醇代替樣品為空白對照;以2.0 mL樣品與2.0 mL體積分數(shù)為95%乙醇混合液為樣品對照,以消除樣品本身顏色的影響。DPPH·清除率的計算公式如下:

    (3)總還原力測定[19]

    在試管中分別加入0.2 mol/L pH 6.6的磷酸緩沖液2.5 mL和不同濃度的待測樣品溶液1 mL,加入2.5 mL 1%鐵氰化鉀溶液,混合均勻后于50℃水浴中反應20 min。取出后迅速冷卻并加入2.5 mL 10%三氯乙酸終止反應,3 500 r/min離心10 min。取上清液2.5 mL,加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL 0.1%三氯化鐵溶液,混勻后靜置10 min,在700 nm波長處測定各溶液的吸光度值A700nm。以吸光度值反映總還原力,吸光度值越大說明還原能力越強。還原力的計算公式如下:

    1.3.5多酚組分的HPLC-MS分析

    高效液相色譜條件:Agilent ZORBAX SB-Aq色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);檢測器二極管陣列檢測器(diode array detector,DAD);甲醇(A)和0.1%甲酸溶液(B)作為HPLC流動相,洗脫程序為0~30 min:A(5%)+B(95%)→A(60%)+B(40%);30~35 min:A(60%)+B(40%)→A(5%)+B(95%);35~45 min:A(5%)+B(95%)。流速1.0 mL/min;檢測波長為280 nm;柱溫維持在30℃;進樣量為10 μL。

    質(zhì)譜條件:電噴霧離子源(electronic spay ion,ESI),電壓為3.0 kV,孔電壓20 V,離子源溫度130℃,解離溫度350℃,結(jié)合光譜在負離子模式進行質(zhì)譜分析,質(zhì)譜分析范圍50~600 m/z。

    鑒定方法:一級質(zhì)譜確定的準分子離子通過歐洲Phenol-Explorer多酚數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站http://phenol-explorer.eu/進行鑒定,推測可能的多酚組分,即:通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)法得出各個色譜峰的分子質(zhì)量,然后通過質(zhì)譜得到的分子質(zhì)量在多酚數(shù)據(jù)庫中搜索相應的多酚種類。然后利用二級質(zhì)譜碎片離子確定灰樹花活性多酚組分的多酚類物質(zhì)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1單因素試驗結(jié)果

    2.1.1不同提取溶劑對多酚總還原力的影響的影響

    在提取溫度80℃、提取時間2 h、料液比1∶40(g∶mL)的條件下,探究不同提取溶劑對灰樹花多酚總還原力的影響,結(jié)果如圖1所示。

    由圖1可知,灰樹花提取液的總還原力隨著乙醇體積分數(shù)的升高呈現(xiàn)顯著下降趨勢。隨著乙醇體積分數(shù)的升高,溶劑的極性逐漸減弱,這表明極性較強的組分表現(xiàn)出強的抗氧化活性。本研究主要針對抗氧化活性強多酚類物質(zhì)進行研究,所以選擇水(乙醇體積分數(shù)0)作為提取溶劑。

    圖1 不同乙醇體積分數(shù)對多酚的總還原力的影響Fig.1 Effect of different ethanol concentration on total reducing power of polyphenols

    2.1.2不同提取溫度對多酚提取的影響

    在以水為提取溶劑、提取時間2 h、料液比1∶40(g∶mL)的條件下,探究不同提取溫度對多酚總還原力的影響結(jié)果見圖2。

    由圖2可知,提取溫度升高,能夠促進灰樹花抗氧化多酚類物質(zhì)的溶出,當提取溫度>80℃,其總還原力降低,可能是由于其多酚組分熱不穩(wěn)定性,溫度過高會導致其活性成分破壞,導致還原力減弱。因此,選擇最佳提取溫度為80℃。

    2.1.3不同料液比對多酚提取的影響

    在以水為提取溶劑、提取時間2h、提取溫度80℃的條件下,探究不同料液比對多酚總還原力的影響結(jié)果見圖3。

    由圖3可知,隨著料液比增加,多酚類物質(zhì)能夠被更好的浸漬出來,總還原力增加,當料液比為1∶40(g∶mL)時,總還原力達到最大,料液比>1∶40(g∶mL)之后,對多酚組分的總還原力影響較小。因此,選擇最佳提取料液比為1∶40(g∶mL)。

    圖3 不同料液比對多酚總還原力的影響Fig.3 Effect of different material-liquid ratio ontotal reducing power of polyphenols

    2.1.4不同提取時間對多酚提取的影響

    在以水為提取溶劑、提取溫度80℃、料液比1∶40(g∶mL)的條件下,探究不同提取時間對多酚總還原力的影響結(jié)果見圖4。

    圖4 不同提取時間對灰樹花多酚總還原力的影響Fig.4 Effect of different extraction time on total reducing power of polyphenols

    由圖4可知,隨著提取時間的增加,灰樹花多酚提取率增大,總還原力也隨之增大,呈正效應關系;當提取時間為120 min時,總還原力最大,為0.69;當提取時間>120 min后,所測得的灰樹花總還原力無顯著提升。因此,選擇最佳提取時間為120 min。

    2.2提取條件優(yōu)化正交試驗結(jié)果

    表2 提取條件優(yōu)化正交試驗結(jié)果與分析Table 2 Results and analysis of orthogonal experiments for extraction conditions optimization

    由表2可知,提取溫度、提取時間和料液比3個因素對提取物的總還原力均有一定的影響,其影響程度為B>C>A,其中,提取時間是影響多酚提取的最關鍵因素,提取溫度的影響最小。極差分析還顯示最佳提取條件組合為A1B3C3,即抗氧化多酚提取的最佳工藝為提取時間2.5 h,提取溫度70℃,料液比1∶50(g∶mL)。此最佳條件下,提取物總還原力為0.89。

    2.3多酚的分離純化結(jié)果

    2.3.1多酚大孔吸附樹脂優(yōu)選

    不同大孔樹脂對灰樹花多酚的吸附率及解吸率結(jié)果見圖5。由圖5可知,非極性大孔樹脂HP-20、X-5、D101,弱極性AB-8,以及極性大孔樹脂S-8、NKA-Ⅱ、NKA-9、HPD-600對灰樹花多酚的吸附率均較高,其中NKA-Ⅱ的解吸率相對較高,達69.7%,故本試驗選用了NKA-Ⅱ型大孔樹脂作為多酚的柱層析填料。NKA-Ⅱ型大孔樹脂為紅棕色不透明球狀顆粒,比表面積為160~200 m2/g。相關研究報道了核桃餅粕、紅皮云杉球果、粒毛盤菌的抗氧化多酚物質(zhì)分別采用了HDP-100、D101和X-5等非極性樹脂進行分離純化[20-22],與本研究灰樹花多酚的純化所采用的NKA-Ⅱ型大孔樹脂極性不一樣,這可能是由于灰樹花抗氧化多酚與此類抗氧化多酚類物質(zhì)的種類不一樣。

    圖5 大孔樹脂篩選結(jié)果Fig.5 Screening results of macroporous resin

    2.3.2NKA-Ⅱ型大孔樹脂柱層析結(jié)果

    圖6 不同洗脫組分的多酚含量Fig.6 The polyphenol content of different elution components

    由圖6可知,灰樹花多酚的極性較強,大部分在體積分數(shù)為20%乙醇洗脫時被洗脫下來。所測定體積分數(shù)為20%乙醇洗脫,體積分數(shù)為40%乙醇洗脫和體積分數(shù)為60%乙醇洗脫得到的多酚質(zhì)量濃度分別為3.05 μg/mL,0.65 μg/mL和0.11 μg/mL。

    2.4多酚組分的抗氧化活性研究

    將大孔樹脂純化得到了體積分數(shù)為20%乙醇、40%乙醇及60%乙醇洗脫液。分別測定了這三個組分的羥基自由基清除率、DPPH自由基清除率和總還原力,其結(jié)果見圖7,半抑制濃度結(jié)果見表3。

    圖7 不同洗脫多酚組分的DPPH自由基(a)、羥基自由基(b)清除率及總還原力(c)Fig.7 The scavenging rate of DPPH free radical(a),hydroxyl free radical(b)and total reducing power(c)of different elution polyphenols components

    由圖7可知,不同質(zhì)量濃度的樣品DPPH清除力見圖7a,各樣品均具有一定的DPPH清除力,在一定的濃度范圍內(nèi),顯一定的量效關系,其中40%乙醇洗脫物的DPPH清除力優(yōu)于60%的乙醇洗脫液。由圖7b可知,各樣品均具有一定的羥自由基清除力,低質(zhì)量濃度的樣品羥自由基清除力甚至優(yōu)于抗壞血酸。由圖7c可知,40%的乙醇洗脫液總還原力優(yōu)于當前公認的抗氧化劑(抗壞血酸)。

    表3 抗氧化半抑制濃度Table 3 The half inhibitory concentration of antioxidant

    半抑制濃度越小,表明其抗氧化效果越好。由表3可知,抗壞血酸的總還原力半抑制濃度為93.57 μg/mL,體積分數(shù)為20%、40%和60%乙醇解吸液的總還原力半抑制濃度分別為86.07μg/mL、45.19μg/mL和69.12μg/mL,DPPH自由基清除率半抑制濃度分別為12.41 μg/mL、11.80 μg/mL、16.71 μg/mL,羥基自由基清除率半抑制濃度分別為111.68 μg/mL、112.67 μg/mL、113.52 μg/mL。結(jié)果表明,3個組分都具有一定的抗氧化活性,其中體積分數(shù)為40%乙醇洗脫組分具有較強的抗氧化活性,其還原力甚至優(yōu)于當前公認的抗氧化劑抗壞血酸。

    2.5灰樹花多酚液質(zhì)聯(lián)用分析結(jié)果

    對體積分數(shù)為40%乙醇洗脫物的灰樹花多酚組分進行鑒定,HPLC-MS/MS圖結(jié)果見圖8,各組分鑒定結(jié)果見表4。

    圖8 灰樹花活性多酚組分HPLC-MS/MS圖譜Fig.8 The HPLC-MS/MS spectrogram ofGrifola frondosa polyphenol components

    經(jīng)一級質(zhì)譜測得的分子離子(m/z)通過歐洲Phenol-Explorer數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站http://phenol-explorer.eu/進行初步鑒定,推測可能的多酚種類;然后利用二級質(zhì)譜碎片離子確定灰樹花活性多酚組分。由表4可知,體積分數(shù)為40%乙醇洗脫的灰樹花多酚組分包括2-羥基丁二酸(marlic acid)、香豆酸(coumaric acid)、3-羥基白藜蘆醇(piceatannol)白藜蘆醇(resveratrol)、二羥基苯乙酸(3,4-dihydroxyphenylacetic acid)、咖啡酸(caffeic acid)和4-羥基苯甲酸(4-hy-droxy-ben-zoic acid)等。圖8中某些色譜峰由于沒有找到相應的質(zhì)譜數(shù)據(jù)參考值,還需要進行多級質(zhì)譜解析才能進一步確定;這些色譜峰也有可能是新的組分,需要進一步采用核磁共振波譜才能夠準確地進行結(jié)構(gòu)解析和鑒定。

    表4 40%乙醇洗脫的灰樹花多酚組分HPLC-MS/MS鑒定結(jié)果Table 4 HPLC-MS/MS analysis was conducted to identify the composition of the 40%EE

    3 結(jié)論

    采用單因素及正交試驗對多酚提取條件進行優(yōu)化,確定最佳提取條件為提取時間2.5 h,提取溫度70℃,料液比1∶50(g∶mL),此最佳條件下總還原力為0.89。

    選擇NKA-Ⅱ型大孔樹脂,然后采用大孔樹脂動態(tài)吸附和解吸附得到了灰樹花3個不同的多酚組分,分別為體積分數(shù)為20%、40%和60%乙醇洗脫物。

    針對灰樹花多酚洗脫組分測定了DPPH自由基清除率、羥基自由基清除率以及總還原力,結(jié)果得到3個組分都具有一定的抗氧化活性,體積分數(shù)為40%乙醇洗脫物的抗氧化活性最強。

    通過體積分數(shù)為40%乙醇洗脫的灰樹花多酚組分進行鑒定,結(jié)果表明,40%乙醇洗脫物中的多酚組分主要是2-羥基丁二酸(marlic acid)、香豆酸(coumaric acid)、3-羥基白藜蘆醇(piceatannol)白藜蘆醇(resveratrol)、二羥基苯乙酸(3,4-dihydroxyphenylacetic acid)、咖啡酸(caffeic acid)和4-羥基苯甲酸(4-hydroxy-benzoic acid)等。此外,還有一些多酚組分沒有找到相應的參考值,還需進行多級質(zhì)譜解析鑒定,也有可能是一些新的多酚組分,需要進一步采用核磁共振波譜才能進行結(jié)構(gòu)解析和鑒定。

    [1]邊杉,葉波平,奚濤,等.灰樹花多糖的研究進展[J].藥物生物技術,2004(1):60-64.

    [2]李麗.食用菌的營養(yǎng)成分和活性研究進展[J].食品研究與開發(fā),2015(12):139-142.

    [3]KLAUS A,KOZARSKI M,VUNDUK J,et al.Biological potential of extracts of the wild edible Basidiomycete mushroomGrifola frondosa[J]. Food Res Int,2015,67(67):272-283.

    [4]GU C Q,LI J W,CHAO F H.Inhibition of hepatitis B virus by D-fraction fromGrifola frondosa:synergistic effect of combination with interferon-alpha in HepG 2 2.2.15[J].Antivir Res,2006,72(2):162-165.

    [5]ITO K,MASUDA Y,YAMASAKI Y,et al.Maitake beta-glucan enhances granulopoiesis and mobilization of granulocytes by increasing G-CSF production and modulating CXCR4/SDF-1 expression[J].Int Immunopharm,2009,9(10):1189-1196.

    [6]KONNO S.Synergistic potentiation of D-fraction with vitamin C as possible alternative approach for cancer therapy[J].Int J Gen Med,2009(2):91-108.

    [7]LEI H,MA X,WU W.Anti-diabetic effect of anα-glucan from fruit body of maitake(Grifola frondosa)on KK-Ay mice[J].J Pharm Pharmacol,2007,59(4):575-582.

    [8]SMITH H,DOYLE S,MURPHY R.Filamentous fungi as a source of natural antioxidants[J].Food Chem,2015,185(10):389-397.

    [9]CHOI D Y,LEE Y J,JIN T H,et al.Antioxidant properties of natural polyphenols and their therapeutic potentials for Alzheimer's disease[J]. Brain Res Bull,2012,87(2-3):144-153.

    [10]HERVERT-HERNáNDEZ D,GARC A O P,ROSADO J L,et al.The contribution of fruits and vegetables to dietary intake of polyphenols and antioxidant capacity in a Mexican rural diet:Importance of fruit and vegetable variety[J].Food Res Int,2011,44(5):1182-1189.

    [11]郭予斌,李洽勝,吳昭暉,等.灰樹花化學成分和藥理作用的研究進展[J].藥物評價研究,2011(4):283-288.

    [12]MARGAILL I,PLOTKINE M,LEROUET D.Antioxidant strategies in the treatment of stroke[J].Free Radical Bio Med,2005,39(4):429-443.

    [13]侯軍,劉方,李樂,等.真菌來源的抗氧化活性物質(zhì)研究進展[J].食品科學,2008,29(9):648-653.

    [14]吳錦文.食用菌的醫(yī)療保健作用及其發(fā)展趨勢[J].生物學通報,1999(9):18-19.

    [15]陳向東,劉曉雯,吳梧桐.灰樹花多酚的提取和活性研究[J].食品與生物技術學報,2005(4):26-30.

    [16]龐偉.蘋果多酚的分離純化及抗氧化性研究[D].西安:西北大學碩士論文,2007.

    [17]邵佳,郁建平,胡美忠.草珊瑚水溶性粗多糖提取及抗氧化性能研究[J].食品科學,2007,28(11):283-286.

    [18]SHIMADA K,F(xiàn)UJIKAWA K,YAHARA K,et al.Antioxidative properties of xanthan on the autoxidation of soybean oil in cycloextrin emulsion[J].J Agr Food Chem,1992,40(6):945-948.

    [19]OYAIZU M.Studies on products of browning reaction-antioxidative activities of products of browning reaction prepared from glucosamine[J]. Jap J Nutr,1986,44(6):307-316.

    [20]梁杏,張旭,陳朝銀,等.核桃餅粕多酚純化工藝及其抗氧化活性的研究[J].中國釀造,2015,34(4):55-61.

    [21]鄧心蕊,王振宇,劉冉,等.紅皮云杉球果乙醇提取物的抗氧化功能研究[J].北京林業(yè)大學學報,2014(2):94-101.

    [22]曹煥英,孫丹宇,楊柳,等.粒毛盤菌DP5胞外多酚的提取及抗氧化活性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2015(17):12-14.

    [23]DORA M,CHIARA C,GIORGIO M,et al.Identification of phenolic constituents inCichorium endiviavar.crispum and var.latifolium salads by high-performance liquid chromatography with diode array detection and electrospray ioniziation tandem mass spectrometry[J].J Agr Food Chem,2012,60(49):12142-12150.

    Purification and identification of polyphenols with antioxidant activity fromGrifola frondosa

    LV Xucong1,2,3,JIA Ruibo1,2,LI Yan1,2,ZHOU Wenbin1,2,LIU Bin1,2
    (1.National Engineering Technology Research Center of JUNCAO,F(xiàn)uzhou 350002,China;2.College of Food Science,F(xiàn)ujian Agriculture and Forestry University,F(xiàn)uzhou 350002,China;3.Sunshine International Group Technology Development Co.,Ltd.,Quanzhou 362000,China)

    Using antioxidant activity as the index,the extraction processes of polyphenols inGrifola frondosawere optimized by single factor and orthogonal experiments.The optimum extraction conditions were determined as followed:extraction time 2.5 h,temperature 70℃and solid-liquid ratio 1∶50(g∶ml).The extracted polyphenols were dynamic adsorbed and desorbed dynamically by macroporous resin NKA-Ⅱ,three different polyphenols components(20%,40%and 60%ethanol elution(EE))were obtained.Using DPPH free radical scavenging rate,hydroxyl free radical scavenging rate and the total reducing power as indexes,the antioxidant activity of the different components were determined.The results showed that the antioxidant activity of 40%EE was the strongest.40%EE polyphenols component was isolated and identified by HPLC-MS/MS.Mass spectrometry analysis results showed that 2-hydroxy succinic acid,cumaric acid,3-hydroxy resveratrol,dihydroxyphenylacetic acid,caffeic acid and 4-hydroxybenzoic acid were the main components in the 40%EE.

    Grifola frondosa;polyphenols;macroporous resin;antioxidant activity;HPLC-MS/MS

    TS255.1

    0254-5071(2016)03-0074-06

    10.11882/j.issn.0254-5071.2016.03.017

    2015-12-20

    中國博士后科學基金項目(2015M570549);福建省教育廳科技計劃項目A類課題(JA14107)

    呂旭聰(1984-),男,助理研究員,博士,研究方向為食品生物技術。

    猜你喜歡
    樹花大孔極性
    感恩生活,給生命一樹花開——讀《花田半畝》有感
    井岡教育(2022年2期)2022-10-14 03:11:40
    送你一樹花
    大孔ZIF-67及其超薄衍生物的光催化CO2還原研究
    陶瓷學報(2020年6期)2021-01-26 00:38:14
    跟蹤導練(四)
    陌上花開文學社:播撒文學之種,靜待一樹花開
    學生天地(2019年36期)2019-08-25 08:59:44
    大孔鏜刀的設計
    表用無極性RS485應用技術探討
    一種新型的雙極性脈沖電流源
    電源技術(2015年5期)2015-08-22 11:18:28
    灰樹花中鋅的存在形態(tài)分析
    大孔吸附樹脂富集酯型兒茶素
    食品科學(2013年6期)2013-03-11 18:20:12
    久久精品国产综合久久久| 午夜福利18| 制服人妻中文乱码| av片东京热男人的天堂| 亚洲男人天堂网一区| 悠悠久久av| 欧美日韩精品网址| 级片在线观看| xxxwww97欧美| 老司机午夜福利在线观看视频| 大型av网站在线播放| 久久久久久久午夜电影| 亚洲中文av在线| 在线永久观看黄色视频| 亚洲美女黄片视频| 久久香蕉精品热| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产精品国产高清国产av| 国产区一区二久久| 性欧美人与动物交配| 国产日本99.免费观看| 一进一出抽搐动态| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| av福利片在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美大码av| 午夜福利在线观看吧| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产精品影院久久| 亚洲熟女毛片儿| 观看免费一级毛片| 亚洲成人久久爱视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 两个人的视频大全免费| 搞女人的毛片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 两人在一起打扑克的视频| 欧美日韩一级在线毛片| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久精品人妻少妇| 不卡av一区二区三区| 国产成人欧美在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 国产一区二区三区视频了| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲国产精品成人综合色| 国产男靠女视频免费网站| 国产精品久久久久久久电影 | 18禁国产床啪视频网站| 日韩免费av在线播放| 97碰自拍视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 99久久精品热视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| av超薄肉色丝袜交足视频| 婷婷丁香在线五月| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产av一区二区精品久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 制服人妻中文乱码| 亚洲电影在线观看av| 久久精品国产清高在天天线| 午夜精品在线福利| 欧美一级毛片孕妇| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 午夜福利免费观看在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 俺也久久电影网| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 18禁观看日本| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲男人天堂网一区| 丝袜美腿诱惑在线| 三级毛片av免费| 看片在线看免费视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲九九香蕉| √禁漫天堂资源中文www| 白带黄色成豆腐渣| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| bbb黄色大片| 成人精品一区二区免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产精品久久视频播放| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美又色又爽又黄视频| 国产高清有码在线观看视频 | 久久精品人妻少妇| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品久久蜜臀av无| 欧美激情久久久久久爽电影| 深夜精品福利| 无人区码免费观看不卡| 国产精品亚洲美女久久久| 国产在线观看jvid| 国产成人影院久久av| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 午夜两性在线视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产成人欧美在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产精品一及| 亚洲人与动物交配视频| 在线观看舔阴道视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 久久天堂一区二区三区四区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 看黄色毛片网站| 最好的美女福利视频网| 一级片免费观看大全| 久久久久精品国产欧美久久久| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲美女视频黄频| 九九热线精品视视频播放| 亚洲国产精品成人综合色| av中文乱码字幕在线| 国产精品野战在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲在线自拍视频| 中文资源天堂在线| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久精品影院6| 免费人成视频x8x8入口观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜福利免费观看在线| 国产激情久久老熟女| 小说图片视频综合网站| 九九热线精品视视频播放| 国产69精品久久久久777片 | 国产精品久久久av美女十八| 久久久久九九精品影院| 怎么达到女性高潮| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 大型av网站在线播放| 国产高清videossex| 国产精品99久久99久久久不卡| 黄片小视频在线播放| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久精品成人免费网站| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产三级在线视频| 免费看十八禁软件| 麻豆一二三区av精品| 男女午夜视频在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| www.www免费av| 日韩大尺度精品在线看网址| 日韩成人在线观看一区二区三区| 在线观看午夜福利视频| 国产熟女xx| 99re在线观看精品视频| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲色图av天堂| 亚洲,欧美精品.| 操出白浆在线播放| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品久久久久久精品电影| 后天国语完整版免费观看| 看片在线看免费视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日本 欧美在线| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美+亚洲+日韩+国产| 男女之事视频高清在线观看| 91老司机精品| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 麻豆av在线久日| 怎么达到女性高潮| avwww免费| 久久九九热精品免费| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 制服人妻中文乱码| 亚洲自拍偷在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 好男人在线观看高清免费视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 美女黄网站色视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 99精品久久久久人妻精品| 国内精品久久久久精免费| 亚洲电影在线观看av| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产片内射在线| 欧美不卡视频在线免费观看 | 黄色视频,在线免费观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲在线自拍视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩欧美免费精品| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 午夜a级毛片| a在线观看视频网站| 黄色a级毛片大全视频| 国产精品免费视频内射| 日韩欧美精品v在线| 99国产精品一区二区蜜桃av| 精品无人区乱码1区二区| 一级毛片精品| 欧美一区二区精品小视频在线| 天堂动漫精品| 高清毛片免费观看视频网站| 天堂影院成人在线观看| av免费在线观看网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 制服诱惑二区| netflix在线观看网站| 日韩欧美精品v在线| 男女之事视频高清在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 成人永久免费在线观看视频| av中文乱码字幕在线| av视频在线观看入口| 高清在线国产一区| 黄色成人免费大全| 草草在线视频免费看| 十八禁人妻一区二区| 免费在线观看日本一区| 欧美三级亚洲精品| 香蕉av资源在线| 91国产中文字幕| 亚洲国产欧美网| av在线播放免费不卡| 午夜免费激情av| 日日爽夜夜爽网站| 在线视频色国产色| 啪啪无遮挡十八禁网站| 精品久久久久久久久久免费视频| 男人舔奶头视频| 久久中文字幕一级| 亚洲精品国产一区二区精华液| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲激情在线av| 俺也久久电影网| 国产成人av激情在线播放| 国产精品免费视频内射| 欧美黑人精品巨大| 1024视频免费在线观看| 伦理电影免费视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜成年电影在线免费观看| 午夜日韩欧美国产| 国产亚洲av高清不卡| 一区福利在线观看| 69av精品久久久久久| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美日韩瑟瑟在线播放| av欧美777| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国内精品久久久久久久电影| 麻豆一二三区av精品| 精品人妻1区二区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美极品一区二区三区四区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久9热在线精品视频| 中文字幕高清在线视频| 久久久久久九九精品二区国产 | 好男人在线观看高清免费视频| 国产亚洲精品av在线| 日韩欧美三级三区| 欧美国产日韩亚洲一区| 搡老岳熟女国产| 99久久国产精品久久久| 国产一区二区三区视频了| av超薄肉色丝袜交足视频| 一本综合久久免费| 成在线人永久免费视频| 丁香六月欧美| www.999成人在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲真实伦在线观看| 最近在线观看免费完整版| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 母亲3免费完整高清在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 哪里可以看免费的av片| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产高清激情床上av| e午夜精品久久久久久久| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日韩高清综合在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 宅男免费午夜| 婷婷丁香在线五月| 五月伊人婷婷丁香| x7x7x7水蜜桃| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 两性夫妻黄色片| 婷婷精品国产亚洲av| 午夜福利免费观看在线| 人妻久久中文字幕网| 成人一区二区视频在线观看| 人妻久久中文字幕网| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲男人天堂网一区| 免费在线观看黄色视频的| 中文资源天堂在线| 99热只有精品国产| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产精品 国内视频| 九色国产91popny在线| 好男人电影高清在线观看| 日本a在线网址| 中文字幕最新亚洲高清| 麻豆久久精品国产亚洲av| 天堂√8在线中文| 免费在线观看亚洲国产| 激情在线观看视频在线高清| 99热只有精品国产| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产av不卡久久| 狂野欧美激情性xxxx| 小说图片视频综合网站| 久久精品综合一区二区三区| www国产在线视频色| 国产精品久久久久久久电影 | 一区二区三区国产精品乱码| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲av成人精品一区久久| 美女免费视频网站| 日韩欧美免费精品| 成人三级黄色视频| 亚洲国产欧美人成| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 香蕉久久夜色| 国产不卡一卡二| 男人的好看免费观看在线视频 | 神马国产精品三级电影在线观看 | 黑人操中国人逼视频| 美女免费视频网站| 禁无遮挡网站| 国产亚洲精品一区二区www| 国产欧美日韩一区二区三| 制服诱惑二区| 身体一侧抽搐| av福利片在线| 精品电影一区二区在线| 午夜激情福利司机影院| 亚洲精品在线观看二区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| av中文乱码字幕在线| 久久这里只有精品19| 身体一侧抽搐| 一个人免费在线观看电影 | 成年人黄色毛片网站| a级毛片在线看网站| 99国产精品99久久久久| 两个人免费观看高清视频| 国产真实乱freesex| 国产亚洲精品av在线| 他把我摸到了高潮在线观看| 99久久国产精品久久久| 国语自产精品视频在线第100页| 国内揄拍国产精品人妻在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品不卡国产一区二区三区| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲一区高清亚洲精品| av免费在线观看网站| 国产av不卡久久| 婷婷丁香在线五月| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 18禁美女被吸乳视频| 男女那种视频在线观看| 搡老岳熟女国产| 久久这里只有精品19| 中文亚洲av片在线观看爽| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美乱色亚洲激情| 日本免费a在线| 搞女人的毛片| 亚洲黑人精品在线| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久精品成人免费网站| 妹子高潮喷水视频| 一级作爱视频免费观看| 亚洲精品在线观看二区| 久久草成人影院| 欧美在线黄色| 黄色丝袜av网址大全| 在线永久观看黄色视频| 99热这里只有是精品50| 亚洲国产欧美人成| 国产午夜精品论理片| 日本免费a在线| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲精品久久国产高清桃花| 身体一侧抽搐| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 久久久久亚洲av毛片大全| 两人在一起打扑克的视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 婷婷六月久久综合丁香| 久久久久久久久免费视频了| 国产一区二区在线av高清观看| 看黄色毛片网站| 叶爱在线成人免费视频播放| 免费高清视频大片| 国产精品电影一区二区三区| 黄色视频,在线免费观看| 一本大道久久a久久精品| 黄频高清免费视频| 国产精品免费视频内射| tocl精华| 国产精品影院久久| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 变态另类丝袜制服| 香蕉久久夜色| 一级片免费观看大全| 午夜两性在线视频| 日本一区二区免费在线视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产激情久久老熟女| 香蕉av资源在线| 国内精品久久久久精免费| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 岛国在线免费视频观看| 国产视频一区二区在线看| tocl精华| 亚洲真实伦在线观看| 91麻豆av在线| 欧美午夜高清在线| 国产av麻豆久久久久久久| 淫秽高清视频在线观看| 色老头精品视频在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产69精品久久久久777片 | 在线免费观看的www视频| 看免费av毛片| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲一区中文字幕在线| 午夜免费激情av| 老熟妇仑乱视频hdxx| 两人在一起打扑克的视频| 国产不卡一卡二| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲成av人片在线播放无| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 精品乱码久久久久久99久播| 在线播放国产精品三级| 两个人免费观看高清视频| √禁漫天堂资源中文www| 国产av一区二区精品久久| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲激情在线av| 黑人欧美特级aaaaaa片| 黄片小视频在线播放| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 88av欧美| 两个人看的免费小视频| 亚洲男人天堂网一区| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产精品一区二区三区四区久久| 老司机福利观看| 亚洲专区中文字幕在线| 午夜福利在线观看吧| 在线观看舔阴道视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久久久久大精品| 91老司机精品| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品 国内视频| 婷婷亚洲欧美| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲av片天天在线观看| 国产一区二区激情短视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 三级毛片av免费| 国产三级中文精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 久久 成人 亚洲| 国产三级黄色录像| 国产1区2区3区精品| 精品久久久久久久毛片微露脸| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产成人影院久久av| 97碰自拍视频| 日韩欧美在线二视频| 九色成人免费人妻av| 日韩国内少妇激情av| 男插女下体视频免费在线播放| 波多野结衣高清无吗| 美女扒开内裤让男人捅视频| 长腿黑丝高跟| 欧美精品啪啪一区二区三区| tocl精华| 美女免费视频网站| 国内精品久久久久精免费| 我要搜黄色片| 动漫黄色视频在线观看| 欧美3d第一页| 宅男免费午夜| 久久久久免费精品人妻一区二区| 99riav亚洲国产免费| 欧美又色又爽又黄视频| 国产成人啪精品午夜网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 757午夜福利合集在线观看| 毛片女人毛片| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品一区二区免费欧美| 日韩欧美免费精品| 妹子高潮喷水视频| 狂野欧美激情性xxxx| 88av欧美| 日本熟妇午夜| 久久香蕉激情| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 一级毛片精品| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产三级中文精品| 精品久久久久久久久久久久久| 淫秽高清视频在线观看| 在线a可以看的网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产一区在线观看成人免费| 精品国产乱子伦一区二区三区| 日本a在线网址| 人妻夜夜爽99麻豆av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 哪里可以看免费的av片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 波多野结衣巨乳人妻| 色精品久久人妻99蜜桃| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 午夜久久久久精精品| 亚洲人成77777在线视频| 精品不卡国产一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 国产精品,欧美在线| 韩国av一区二区三区四区| 桃红色精品国产亚洲av| 少妇人妻一区二区三区视频| 一级毛片女人18水好多| 岛国在线免费视频观看| 日韩免费av在线播放| 日本在线视频免费播放| 成在线人永久免费视频| 动漫黄色视频在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美精品亚洲一区二区| aaaaa片日本免费| 亚洲,欧美精品.| 99国产精品一区二区三区| 真人一进一出gif抽搐免费| av在线播放免费不卡| 真人做人爱边吃奶动态| 日韩大码丰满熟妇| 悠悠久久av| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲一区高清亚洲精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品久久久久久精品电影| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产激情欧美一区二区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久 成人 亚洲| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲五月天丁香| 亚洲精品在线美女| 午夜激情福利司机影院| 精华霜和精华液先用哪个| 久久伊人香网站| АⅤ资源中文在线天堂| 99久久99久久久精品蜜桃| 黄频高清免费视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 一级作爱视频免费观看| 国产三级在线视频| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产av麻豆久久久久久久| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 91麻豆精品激情在线观看国产| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产精品精品国产色婷婷| 国产黄片美女视频| 青草久久国产| 亚洲精品在线观看二区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 十八禁网站免费在线| 国产亚洲精品一区二区www| 日本 欧美在线|