生熟五味子在補益方中補腎作用比較

高慧，張爽，高雁，佟鑫

（遼寧中醫(yī)藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600）

論著

生熟五味子在補益方中補腎作用比較

高慧，張爽，高雁，佟鑫

（遼寧中醫(yī)藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600）

目的比較五子衍宗丸、六味丸中分別用生熟五味子對腎陽虛、腎陰虛小鼠作用的差異，從復方層面上為五味子“生熟異用”的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法采用腺嘌呤灌胃制成小鼠腎陽虛模型，以小鼠血清皮質(zhì)醇（Cor）、睪酮（T）和肌酐（Cr）含量以及精囊腺、睪丸的臟器指數(shù)為評價指標，比較五味子、酒五味子在復方中補腎陽作用。采用氫化可的松致小鼠腎陰虛模型，以血清中環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）、乙酰膽堿（Ach）和肌酐（Cr）含量以及小鼠腎臟、肝臟和脾臟的臟器指數(shù)為評價指標，比較五味子、酒五味子在復方中補腎陰作用。結(jié)果含有生五味子、酒五味子的五子衍宗丸、六味丸分別對腎陽虛、腎陰虛小鼠有一定的治療作用，可改善小鼠的激素水平，增加臟器指數(shù)。含酒五味子的五子衍宗丸、六味丸作用較好。結(jié)論五味子“入補藥熟用”的傳統(tǒng)理論具有一定的科學性，臨床用于治療腎虛時應(yīng)首選酒五味子。

五味子；炮制；五子衍宗丸；六味丸；腎陽虛；腎陰虛

五味子為臨床常用中藥，具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心的功效。用于久嗽虛喘、夢遺滑精、遺尿尿頻、久瀉不止、自汗盜汗、津傷口渴、內(nèi)熱消渴、心悸失眠［1］。五味子常用炮制品種有醋五味子、酒五味子，傳統(tǒng)理論認為五味子“入補藥熟用，入嗽藥生用”［2］。本課題組從補腎陽、補腎陰兩方面對五味子生熟飲片進行了“生熟異用”研究［3-4］，證明了五味子“入補藥熟用”的傳統(tǒng)理論，并建議臨床應(yīng)用于治療腎虛時應(yīng)首選酒五味子。因飲片的“生熟異用”歸根結(jié)底是從其臨床應(yīng)用角度來說的，復方是中藥臨床應(yīng)用的主要形式，所以本研究將五味子納入復方，選擇五子衍宗丸、六味丸，將原方中的酒五味子換成生五味子，與原方進行補腎作用比較，從復方層面上探討五味子“生熟異用”的炮制原理，為臨床合理應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1　材料與方法

1.1藥品與試劑

五味子購自遼寧丹東大梨樹五味子GAP基地，由遼寧中醫(yī)藥大學藥用植物教研室王冰教授鑒定為北五味子。

酒五味子：取凈五味子加黃酒拌勻，悶潤1 h，蒸制4 h，50℃干燥至恒重。五味子∶黃酒=100∶20。

熟地黃、山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓、枸杞子、炒菟絲子、覆盆子、鹽車前子均購自大連開發(fā)區(qū)保健大藥房。

腺嘌呤（日本Sigma公司，批號A8330），氫化可的松注射液（哈藥集團制藥總廠，批號H20023069），附桂地黃丸（北京同仁堂藥業(yè)，批號1016341），六味地黃丸（北京同仁堂藥業(yè)，批號：201209033）。皮質(zhì)醇（Cor），肌酐（Cr），睪酮（T）試劑盒，環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）、乙酰膽堿（ACh）試劑盒（上?？婆d商貿(mào)有限公司 批號20120402B）。

1.2實驗動物

KM小鼠，體重18～22 g，由大連醫(yī)科大學實驗動物中心提供，動物合格證號為 ［SCXK（遼）2008-0002］。普通飼料，定時定量喂食，自由飲水。

1.3主要儀器

離心機（上海安亭科技公司），分析天平（上海天平儀器廠生產(chǎn)），酶標儀（上海賽默飛世爾儀器有限公司）。

1.4方法

1.4.1五子衍宗丸（含生五味子或酒五味子）水提物的制備取枸杞子40 g，炒菟絲子40 g，覆盆子20 g，生五味子（酒五味子）5 g，鹽車前子10 g，加8倍量水浸泡30min，煎煮3次，1 h/次，合并煎煮液，濃縮，即得（含生藥量1.2 g/ml）。

1.4.2六味丸（含生五味子或酒五味子）水提物的制備取熟地4.5 g，五味子（酒五味子）2.2 g、山藥2.2 g，澤瀉、牡丹皮、茯苓1.7 g，加8倍量的水浸泡30min，煎煮3次，1 h/次，合并煎煮液，濃縮，即得（合含生藥量0.24 g/ml）。

1.4.3六味地黃丸、附桂地黃丸藥液制備分別取六味地黃丸、附桂地黃丸，加純凈水制成0.18 g/ml、67.5mg/m l濃度混懸液。

1.5生熟五味子在五子衍宗丸中補腎陽作用比較

1.5.1分組與給藥將50只KM雄性小鼠隨機分為5組，即：空白對照組、模型對照組、陽性對照組、五子衍宗丸（生五味子）組及五子衍宗丸（酒五味子組）組，每組10只。除空白對照組灌胃生理鹽水外，其他組均灌胃腺嘌呤（7.5mg/m l）造模，陽性藥組與給藥組灌胃相應(yīng)藥液，所有灌胃劑量均為0.02m l/g。平均3 d稱重，記錄觀察精神行為狀況，連續(xù)20 d。

1.5.2取材末次給藥后禁食不禁水，24 h后采取摘眼球法取血約1ml，放入EP管中，離心機10 000 r/min離心5min，取血清于EP管中，-20℃保存?zhèn)溆?。分離精囊腺、睪丸，將精囊腺、睪丸用生理鹽水洗凈，濾紙拍干，于分析天平稱重。

1.5.3指標測量皮質(zhì)醇（Cor）、肌酐（Cr）、睪酮（T）嚴格按照試劑盒說明書提供方法，經(jīng)過稀釋，加樣，溫育，洗滌，顯色后于450 nm處測定吸光度，計算濃度水平。

臟器指數(shù)測量：臟器分析天平稱重，按照“臟器指數(shù)=臟器重量/體重×1 000”進行計算。

1.6生熟五味子在六味丸中補腎陰作用比較

1.6.1分組與給藥將50只KM小鼠（雌雄各半）隨機分為5組，即空白對照組、模型對照組、陽性對照（六味地黃丸）組、六味丸生五味子組及六味丸酒五味子組，每組10只。

除空白對照組與模型對照組灌胃生理鹽水外，其他各組灌胃相應(yīng)藥液，灌胃劑量均為0.02m l/g，連續(xù)11 d，第7天開始除空白對照組外其他各組在灌胃同時腹腔注射氫化可的松注射液制造腎陰虛模型，0.2m l/只，連續(xù)4 d。每3 d稱重，并記錄觀察精神行為狀況。

1.6.2取材末次給藥后禁食不禁水，24h后采取摘眼球法取血約1m l，放入EP管中，離心機10 000 r/min離心5min，取血清于EP管中，-20℃保存?zhèn)溆?。分離肝、脾、兩側(cè)腎臟，用生理鹽水洗凈，濾紙拍干。

1.6.3指標測量環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）、肌酐（Cr）及乙酰膽堿（ACh）試劑盒嚴格按照試劑盒說明書提供方法，經(jīng)過稀釋，加樣，溫育，洗滌，顯色后于450 nm處測定吸光度，計算濃度水平。

臟器指數(shù)測量：臟器分析天平稱重，按照“臟器指數(shù)=臟器重量/體重×1 000”進行計算。

1.7統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料用均數(shù)±標準差（）描述，多組間的比較采用單因素方差分析，采用均數(shù)間的兩兩比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1生熟五味子在五子衍宗丸中補腎陽作用比較

2.1.1對血清Cor、T、Cr含量的影響與模型對照組比較，各給藥組的Cor、T水平有不同程度升高，Cr水平降低。含有酒五味子的方劑優(yōu)于含有生五味子的方劑，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.1.2對睪丸、精囊腺臟器指數(shù)的影響結(jié)果表明，模型對照組的睪丸、精囊腺的臟器指數(shù)顯著降低，各給藥組臟器指數(shù)較模型組有明顯改善，含有生五味子的方劑與含有酒五味子的方劑睪丸臟器指數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表1　生五味子與酒五味子對血清皮質(zhì)醇、睪酮、肌酐含量的影響 （n=10，）

表1　生五味子與酒五味子對血清皮質(zhì)醇、睪酮、肌酐含量的影響 （n=10，）

注：?與模型對照組比較，P＜0.05

組別T Cor Cr五子衍宗丸（酒五味子）　270.65±22.18?　339.36±17.16?　95.05±8.96?五子衍宗丸（生五味子）　216.42±11.73?　305.70±23.65?　122.43±17.81?模型對照組　153.78±14.36　285.76±14.99　191.44±6.34空白對照組　275.96±10.33?　361.25±14.13?　87.06±7.28?陽性對照組　269.99±20.67?　341.42±17.73?　94.21±10.49?

表2　生五味子與酒五味子對睪丸、精囊腺臟器指數(shù)的影響 （n=10，）

表2　生五味子與酒五味子對睪丸、精囊腺臟器指數(shù)的影響 （n=10，）

注：?與模型對照組比較，P＜0.05

組別精囊腺五子衍宗丸（酒五味子）　0.890±0.170?　0.377±0.056?五子衍宗丸（生五味子）　0.867±0.094?　0.310±0.067?模型對照組　0.751±0.404　0.213±0.040空白對照組　0.993±0.111?　0.590+0.058?陽性對照組　0.893±0.079?　0.399±0.094?睪丸

2.2生熟五味子在六味丸中補腎陰作用比較

2.2.1對cAMP、cGMP及比值的影響模型對照組cAMP較空白對照組升高明顯，cGMP變化不明顯，cAMP/cGMP升高明顯，含有酒五味子的六味丸對cAMP/cGMP及其比值的影響明顯優(yōu)于含生五味子的六味丸。見表3。

2.2.2對ACh、Cr水平的影響模型對照組較空白對照組ACh降低，Cr升高，差異明顯，含有不同炮制品的六味丸組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表4。

2.2.3對臟器指數(shù)的影響空白對照組與給藥組較模型組臟器指數(shù)高，含有酒五味子六味丸對脾臟影響較大，較含有生品組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表5。

表3　含有不同炮制品六味丸對腎陰虛小鼠激素水平的影響 （n=10，）

表3　含有不同炮制品六味丸對腎陰虛小鼠激素水平的影響 （n=10，）

注：與模型對照組比較，1）P＜0.01；2）P＜0.05

組別cAMP/cGMP六味丸（酒五味子）　55.66±9.781）　2.096±0.162）　30.32±3.841）六味丸（生五味子）　60.19±9.981）　1.769±0.11　32.71±6.631）空白對照組　45.71±6.261）　1.786±0.15　25.16±1.711）模型對照組　75.11±3.42　1.486±0.13　51.05±6.57陽性對照組　55.02±11.732）　2.124±1.20　27.19±6.51）cAMP cGMP

表4　含有不同炮制品六味丸對腎陰虛小鼠激素水平的影響 （n=10，）

表4　含有不同炮制品六味丸對腎陰虛小鼠激素水平的影響 （n=10，）

注：?與模型對照組比較，P＜0.01

組別Cr六味丸（酒五味子）　23.21±1.89?　14.87±0.92?六味丸（生五味子）　23.20±0.75?　15.68±1.63?空白對照組　23.98±1.25?　13.17±0.70?模型對照組　18.49±2.29　18.82±0.69?陽性對照組　23.23±2.56?　14.71±0.79?ACh

表5　含有不同炮制品六味丸對腎陰虛小鼠臟器指數(shù)的影響 （n=10，）

表5　含有不同炮制品六味丸對腎陰虛小鼠臟器指數(shù)的影響 （n=10，）

注：與模型對照組比較，1）P＜0.01；2）P＜0.05

組別脾臟六味丸（酒五味子）　11.18±0.99　46.36±2.881）　3.222±0.351）六味丸（生五味子）　11.44±0.622）　45.99±2.652）　1.496±0.39空白對照組　12.36±1.141）　60.06±3.831）　3.756±0.621）模型對照組　9.490±4.55　42.05±2.99　1.326±0.28陽性對照組　12.28±1.751）　49.84±4.051）　1.874±0.462）腎臟肝臟

3　討論

復方是中藥臨床應(yīng)用的主要形式，方劑是中醫(yī)臨床用藥的一大特點，中藥通過配伍組方可起到增效、減毒、緩和藥性或產(chǎn)生新藥效等作用，所以將中藥炮制納入復方進行研究很有意義［5］。

五子衍宗丸為唐代著名的補益類方劑，因其配伍中的五種中藥材名字均有一個“子”字，故名五子，用于補腎陽，改善精液質(zhì)量，治療不育癥，被譽為“古今種子第一方”。五子衍宗丸為臨床常用方劑，對腎陽虛有很好的療效，將原方中的酒五味子換成生五味子后，藥理作用較原方略有降低，含有生五味子的五子衍宗丸對小鼠激素水平、臟器指數(shù)的積極影響都沒有含有酒五味子的五子衍宗丸明顯，說明傳統(tǒng)方劑配伍的合理性。

六味丸收載于部頒標準，實驗結(jié)果表明，含有不同五味子炮制品的六味丸對腎陰虛小鼠都有一定的治療作用，含有酒五味子的六味丸對激素水平的影響作用優(yōu)于含有生五味子的六味丸，就臟器指數(shù)而言，組間差別不大，各方劑之間藥理作用差異不明顯。

研究表明，生熟五味子納入復方后補腎作用與生熟飲片的補腎作用結(jié)果一致，即酒味子優(yōu)于生五味子，驗證了傳統(tǒng)理論“入補藥熟用”具有一定的科學性，建議臨床用于治療腎虛時應(yīng)選擇酒五味子。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.中國醫(yī)藥科技出版社，一部，北京，2010:61-62.

［2］張浩.仁術(shù)便覽［M］.海南國際新聞出版社，?？?，1995:320.

［3］高慧，佟鑫，裴啟洋，等.五味子“生熟異用”之補腎陽作用［J］.中草藥，2014，45（13）:1889-1893.

［4］高慧，佟鑫，裴啟洋，等.五味子“生熟異用”之補腎陰作用［J］.中成藥，2014，36（12）:2471-2474.

［5］蔡寶昌，龔千鋒.中藥炮制專論［M］.人民衛(wèi)生出版社，北京，2009: 13.

（張蕾編輯）

Com parison of tonifying kidney effect between raw and processed Schisandra chinensis in tonic prescriptions

HuiGao，Shuang Zhang，Yan Gao，Xin Tong
（Pharmacy College，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian，Liaoning 116600，China）

Objective To provide scientific proof for the research of"the processed Schisandra chinensis fruits is different from the raw ones"through comparing the difference of tonifying kidney between wuziyanzong pills or liuwei pills（contains raw Schisandra chinensis）and wuziyanzong pills or liuwei pills（contains processed Schisandra chinensis）.M ethods Kidney-yang deficiency ratmodels induced by adenine were used，and the effects of raw and different processed shizandra berry in prescriptions on kidney-yang deficiency rats were compared with the content of serum cortisol，testosterone，creatinine，and the viscera index of sem inal vesicle，testicle.Kidney-yin deficiency ratmodels induced by Hydrocortisone were used，and the effects of raw and different processed shizandra berry in prescriptions on kidney-yin deficiency rats were compared with the content of serum cyclic adenosinemonophosphate，Cyclic guanosinemonophosphate，acetylcholine，creatinine and the viscera index of kidneygangz，liver，and spleen.Results TheWuziyanzong pills and Liuwei pills（contains raw Schisandra chinensis or processed Schisandra chinensis）had certain therapeutic effects on kidney-yang deficiency rats and kidney-yin deficiency rats，such as meliorating the hormonal condition and raising the viscera index.In terms of therapeutic effects，the prescriptions contained processed Schisandra chinensis were better.Conclusions The traditional theory of"the processed Schisandra Chinensis Fruits as a tonic"is scientific.The wine steaming shizandra berry is preferred in kidney deficiency treatment.

schisandra chinensis；processed；wuziyanzong pill；liuwei pill；kidney-yang deficiency；kidney-yin

R-332

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.12.005

1005-8982（2016）12-0021-04

2015-11-23