快速制作LIAISON化學發(fā)光孕酮測定標準曲線的方法

陳怡娟,郭　渝,王婉蝶,黃靖軒

(成都雙楠醫(yī)院檢驗科　610041)

?

快速制作LIAISON化學發(fā)光孕酮測定標準曲線的方法

陳怡娟,郭渝,王婉蝶,黃靖軒

(成都雙楠醫(yī)院檢驗科610041)

目的通過每日定標快速手工制作標準曲線的方法，使孕酮測定結果的準確性得到保證。方法根據(jù)LIAISON化學發(fā)光計算原理和孕酮的標準曲線，借用Excel軟件的對數(shù)回歸方程快速計算孕酮實際的標準曲線，對該試驗進行校準。結果通過該方法計算得出的濃度值符合臨床診斷。結論該方法簡便、快速、準確，得到臨床科室的認可，值得在基層醫(yī)院推廣應用。

孕酮；標準曲線；化學發(fā)光；數(shù)學模型

意大利LIAISON全自動化學發(fā)光分析儀測定孕酮的方法為競爭法，標準品為外定標，按試劑說明書要求每盒100人份試劑均需要外定標。在實際操作過程中，雖然嚴格按照試劑說明書的要求外定標與廠家設定的主反應曲線比對后定標通過，但隨試劑開封后時間延長實際測得的孕酮值不穩(wěn)定，與臨床診斷有偏差。為此，作者根據(jù)LIAISON全自動化學發(fā)光分析儀的使用說明書和孕酮試劑說明書利用Excel軟件，每次測定均進行外部定標并繪制測定的標準曲線，極大提高了該實驗的穩(wěn)定性和準確性?，F(xiàn)將此方法的詳細過程介紹如下：

1　材料與方法

1.1儀器與試劑意大利LIAISON化學發(fā)光分析儀、孕酮試劑盒、孕酮外部定標品(2 ng/mL，20 ng/mL)。

1.2方法

1.2.1按照LIAISON使用說明書進行實驗前的準備工作，即沖洗管路和進行光路檢測。要求光路檢測后的值符合要求才能進行試驗。即：空白孔相對光單位在120～320，變異系數(shù)在8%以內(nèi)；左右針的相對光單位在20 000～180 000，變異系數(shù)在2.5%以內(nèi)，且左右針的相對光單位差值在8 000之內(nèi)。

1.2.2將定標品復溫編號為8000(2 ng/mL定標品)、8001(20 ng/mL定標品)，放置在“A”標本架上并放入儀器樣品倉中進行檢測，8000號相對光單位：136538，8001號相對光單位：44381。

1.2.3繪制標準曲線

1.2.3.1輸入試驗數(shù)據(jù)啟動Excel電子表格，建立一個名為“孕酮”的文件，將工作表重命名為當天日期。用表2的試驗結果，在A1：D1單元格分別輸入編號、濃度、RLU、待測血清濃度。A2：C2單元格輸入8000號的編號、濃度、RLU，A3：C3單元格輸入8001號的編號、濃度、RLU。

1.2.3.2繪制標準曲線用鼠標點擊Excel電子表格軟件“插入”菜單→圖表→標準類型→XY散點圖→散點圖，在圖形方框中點右鍵“選擇數(shù)據(jù)”→添加→“X軸系列值”選擇C2：C3單元格的數(shù)據(jù)→“Y軸系列值”選擇B2：B3單元格的數(shù)據(jù)→確定。根據(jù)數(shù)據(jù)進行回歸分析，計算回歸方程，繪制出標準曲線：先點擊圖上標準值點，然后按右鍵，點擊“添加趨勢線”。添加對數(shù)回歸方程，點擊趨勢線(即標準曲線)，然后按右鍵，選“趨勢線格式”，在彈出的對話框中，選擇“選項”，在“顯示公式”和“顯示R平方值”前打勾，再點“確定”，回歸方程式和相關系數(shù)即在標準曲線上顯示出來。

2　結　　果

2.1孕酮檢測的標準曲線通過上述步驟，計算機已繪制出“孕酮測定的標準曲線”，見圖1。從圖中的回歸方程式可以看出，r2=1，說明趨勢線可靠，可作為標準曲線用于其他未知濃度的測定。

圖1　　孕酮檢測的標準曲線

2.2待測血清的濃度檢測在D4單元格輸入通過回歸方程式所得的函數(shù)“=-16.0*ln(C4) + 191.3”，選中D4單元格在D列向下拖動，擴展序列。在A列和C列分別鍵入待測血清的序列號和RLU值，即可得到待測血清的濃度，再將D列設置成“數(shù)值”、小數(shù)點后保留一位，見圖2。

圖2　　待測血清濃度的計算

3　討　　論

血清孕酮在先兆流產(chǎn)的診斷、預后預測及治療效果評定中有著重要的地位，是臨床常用指標[1-2]。妊娠早期血清孕酮主要來源于妊娠黃體的分泌，妊娠8～10 周后胎盤取代卵巢黃體成為血清孕酮的主要分泌來源，且各孕齡的孕酮水平基本保持平穩(wěn)[3-4]。一定水平的孕酮對妊娠的維持有重要作用，孕酮水平不足是導致先兆流產(chǎn)或難免流產(chǎn)的重要原因。因此，保證孕酮濃度測定的準確性是非常重要的。

意大利LIAISON化學分析儀采用化學發(fā)光方法來測定孕酮，隨化學發(fā)光試劑開封后時間的延長及環(huán)境變化等因素影響對測定的結果誤差較大。使用本文所述的方法，通過每批次定標，計算對數(shù)回歸方程繪制標準曲線，避免了環(huán)境因素造成的儀器檢測過程中的誤差，與說明書要求的每盒試劑定標一次相比，提高了孕酮檢測的準確性，得到臨床科室的認可。該方法簡便、快速、可靠，值得在基層醫(yī)院推廣應用。

[1]朱英哲，徐澤媚，楊曉葵.妊娠早期婦女血清性激素水平及與先兆流產(chǎn)的關系[J].中國實驗診斷學，2011，15(10)：1677-1679.

[2]Kirby JM，Cho KJ，Midia M.Image-guided Intervention in management of complications of portal hypertension：more than TIPS for success[J].Radiographics，2013，33(5)：1473-1496.

[3]楊亞濱，張艷梅，索磊.血清孕酮、HCG 聯(lián)合檢測在早期先兆流產(chǎn)中的臨床意義[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2013，21(1)：52，76.

[4]M?kikallio K，Tekay A，Jouppila P.Effects of bleeding onuteroplacental，umbilicoplacental and yolk-sac in hemodynamics early pregnancy [J].Ultrasound Obstet Gynecol，2001，18(4)：352-356.

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.061

B

1673-4130(2016)16-2344-02

2016-03-18

2016-06-09)