梅毒螺旋體RPR試驗(yàn)前帶現(xiàn)象檢測(cè)分析

魏虹娟，唐冬松，李　宇，孫麗梅，劉　意，馮　霞

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院，北京 100069)

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梅毒螺旋體RPR試驗(yàn)前帶現(xiàn)象檢測(cè)分析

魏虹娟，唐冬松，李宇，孫麗梅，劉意，馮霞△

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院，北京 100069)

目的通過(guò)探討梅素螺旋體快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)前帶現(xiàn)象發(fā)生的規(guī)律，為減少假陰性提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法2015年3月1日至12月31日收集性病實(shí)驗(yàn)室檢出RPR前帶現(xiàn)象的血清標(biāo)本48例，進(jìn)行RPR、不同批次試劑RPR、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)及熒光梅毒螺旋體抗體吸附試驗(yàn)(FTA-ABS)，分析各實(shí)驗(yàn)間相關(guān)性及RPR前帶現(xiàn)象凝集反應(yīng)規(guī)律。 結(jié)果48例前帶現(xiàn)象標(biāo)本TPPA及FTA-ABS IgG抗體試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，RPR試驗(yàn)原倍稀釋時(shí)無(wú)顆粒凝集或凝集顆粒較小，且稀釋反應(yīng)前3～4孔(1∶8～1∶16)反應(yīng)弱，凝集顆粒大小幾乎無(wú)變化，從第4～5孔(1∶16～1∶32)起凝集反應(yīng)不斷增強(qiáng)，經(jīng)稀釋后滴度為1∶1 024～1∶65 536；臨床表現(xiàn)不典型。結(jié)論RPR前帶現(xiàn)象可通過(guò)與梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)、結(jié)合凝集反應(yīng)特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)，并通過(guò)增加稀釋倍數(shù)避免漏檢。

梅毒螺旋體；快速梅毒血清反應(yīng)素試驗(yàn)；前帶現(xiàn)象；熒光梅毒螺旋體抗體吸附實(shí)驗(yàn)

梅毒是由蒼白螺旋體引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。近年來(lái)，我國(guó)梅毒流行形勢(shì)日益嚴(yán)峻[1-2]，其報(bào)告病例數(shù)已躍居我國(guó)甲乙類傳染病報(bào)告中的第3位[3]。因其與艾滋病有著相似的傳播途徑及細(xì)胞免疫損害[4]，梅毒的控制工作已被納入艾滋病防治管理機(jī)制中。目前，梅毒血清學(xué)結(jié)果仍是梅毒診斷中的重要指標(biāo)之一，其準(zhǔn)確性至關(guān)重要。但前帶現(xiàn)象的存在容易造成實(shí)驗(yàn)室漏檢，從而影響臨床診治活動(dòng)。前帶現(xiàn)象是在抗原抗體的反應(yīng)體系中，因抗體過(guò)剩所形成的抗原抗體反應(yīng)受抑制的現(xiàn)象，是抗原抗體反應(yīng)特有的現(xiàn)象。據(jù)報(bào)道，快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)前帶現(xiàn)象發(fā)生率0.5%～1.0%[5-6]。如何從眾多的臨床標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)前帶現(xiàn)象是防止其漏檢的關(guān)鍵。本研究針對(duì)這一問(wèn)題，對(duì)所在性病門(mén)診出現(xiàn)的前帶現(xiàn)象標(biāo)本進(jìn)行分析，希望能從實(shí)驗(yàn)室角度發(fā)現(xiàn)前帶現(xiàn)象凝集反應(yīng)的規(guī)律，提出減少前帶現(xiàn)象漏檢的建議，為正確檢出前帶反應(yīng)提供依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2015年3月1日至12月31日本院性病實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的RPR前帶現(xiàn)象標(biāo)本48例，其中，男43例、女5例，年齡19～64歲。所有標(biāo)本及時(shí)分離血清，-80 ℃凍存?zhèn)溆闷渲校蚧颊呔哂械湫团R床表現(xiàn)，臨床醫(yī)生要求復(fù)查發(fā)現(xiàn)7例；與同時(shí)檢測(cè)的其他梅毒血清學(xué)指標(biāo)陽(yáng)性結(jié)果不符或與歷史檢測(cè)記錄不符發(fā)現(xiàn)26例，實(shí)驗(yàn)室人員經(jīng)驗(yàn)性發(fā)現(xiàn)15例。所有病例均排除結(jié)締組織病、腫瘤、慢性肝病及腎病等系統(tǒng)性疾病。

1.2試劑RPR試劑盒來(lái)源上海科華生物工程有限公司，批號(hào)20150302，有效期20160322；比對(duì)試劑批號(hào)20150602，有效期20160601。熒光梅毒螺旋體抗體吸附試驗(yàn)(FTA-ABS)試劑來(lái)自德國(guó)歐蒙公司，批號(hào)F150507DH，有效期20161106。梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)試劑來(lái)源于日本富士瑞必歐株式會(huì)社，批號(hào)VN50212，有效期20160205。

1.3方法RPR試驗(yàn)通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)的牛心肌脂抗原檢測(cè)血液中是否存在非特異性抗梅毒螺旋體抗體反應(yīng)素；FTA-ABS及TPPA試驗(yàn)均測(cè)定人血清或血漿中特異性梅毒螺旋體抗體，前者利用間接熒光抗體法，后者為間接凝集法。所有試驗(yàn)均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。其中，RPR試驗(yàn)用生理鹽水稀釋1∶2、1∶4、1∶8、1∶16……1∶256,做半定量試驗(yàn)(滴度)，記錄其最高稀釋倍數(shù)，且觀察各稀釋度時(shí)凝集反應(yīng)的顆粒變化，比較不同RPR批次試劑之間結(jié)果差異、RPR結(jié)果與TPPA及與FTA-ABS間的一致性。

2　結(jié)　　果

2.1臨床表現(xiàn)42例為Ⅱ期梅毒螺旋體感染，其中16例有明顯臨床表現(xiàn)，以皮疹、淋巴結(jié)腫大及發(fā)熱等癥狀為主，其余患者臨床表現(xiàn)不明顯；6例為Ⅰ期梅毒，有硬下疳和(或)皮疹表現(xiàn)。

2.2特異性梅毒螺旋體抗體檢測(cè)48例患者TPPA、FTA-ABS IgG抗體試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，F(xiàn)TA-ABS IgM抗體陽(yáng)性21例，占43.75%(21/48),其中14例急性期感染者FTA-ABS IgM抗體均為陽(yáng)性。

2.3RPR試驗(yàn)結(jié)果原倍稀釋時(shí)無(wú)顆粒凝集或凝集顆粒較小，經(jīng)稀釋后最終滴度為1∶1 024～1∶65 536，且稀釋反應(yīng)前3～4孔(1∶8～1∶16)反應(yīng)弱，凝集顆粒大小幾乎無(wú)變化。從第4～5孔(1∶16～1∶32)起凝集反應(yīng)不斷增強(qiáng)，凝集顆粒增大、成塊，隨后凝集顆粒由大逐漸減小。標(biāo)本滴度越高，原倍稀釋時(shí)越可能出現(xiàn)無(wú)凝集現(xiàn)象，前帶現(xiàn)象反應(yīng)見(jiàn)圖1A。

注：A批號(hào)20150302,有效期20160322;B批號(hào)20150602,有效期20160601。

2.4不同批次RPR試劑檢測(cè)結(jié)果不同批次RPR試劑進(jìn)行檢測(cè)，兩個(gè)批次試劑檢測(cè)均存在前帶現(xiàn)象，不同標(biāo)本出現(xiàn)1個(gè)滴度的差異，但結(jié)果無(wú)明顯區(qū)別，不同批次試劑比對(duì)反應(yīng)見(jiàn)圖1A、B。

3　討　　論

目前國(guó)內(nèi)非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)主要有RPR和甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)兩種，均為半定量試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)技術(shù)及質(zhì)量控制容易掌握，但隨著梅毒螺旋體感染率的不斷增加，前帶現(xiàn)象在工作中出現(xiàn)頻次增加[7]，梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷漏檢的風(fēng)險(xiǎn)增加。國(guó)外少見(jiàn)梅毒螺旋體前帶現(xiàn)象的報(bào)道，可能跟國(guó)外梅毒螺旋體感染率較低有關(guān)[8]。國(guó)內(nèi)有關(guān)于梅毒螺旋體ELISA、TRUSR 以及RPR的前帶現(xiàn)象報(bào)道[5-7,9-10]。由于國(guó)內(nèi)非特異性抗體檢測(cè)主要采用RPR試驗(yàn)，類似的報(bào)道較多。在林榕[7]對(duì)RPR前帶現(xiàn)象的回顧性分析中，全部研究對(duì)象均為Ⅱ期梅毒患者，并且出現(xiàn)前帶現(xiàn)象的患者均具有典型的臨床表現(xiàn)。但在本研究中，前帶現(xiàn)象除主要在Ⅱ期梅毒患者(42/48)中發(fā)現(xiàn)外，還有部分早期感染的患者，且具有典型的硬下疳表現(xiàn)。多數(shù)患者以不典型皮疹和發(fā)熱為主，部分患者臨床表現(xiàn)不明顯。兩個(gè)研究出現(xiàn)不同的觀察結(jié)果，有待更多此類研究加以驗(yàn)證。

本研究中48例標(biāo)本經(jīng)不同批次試劑驗(yàn)證，均出現(xiàn)低稀釋度反應(yīng)抑制的現(xiàn)象，提示本研究中前帶現(xiàn)象與試劑批次無(wú)關(guān)，是由非梅毒螺旋體抗體過(guò)量造成。所有病例TPPA及FBS-ABS IgG試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，IgM抗體結(jié)果陽(yáng)性占43.75%，且急性期梅毒患者FBS-ABS IgM抗體均為陽(yáng)性。此結(jié)果與其他報(bào)道相符[4,9]。

與正常凝集反應(yīng)比對(duì)后發(fā)現(xiàn)：前帶現(xiàn)象原倍稀釋時(shí)無(wú)顆粒凝集或凝集顆粒較小，經(jīng)稀釋后前3～4孔(1∶8～1∶16)反應(yīng)較弱或凝集顆粒細(xì)小，且大小幾乎變化，從第4～5孔(1∶16～1∶32)起凝集反應(yīng)不斷增強(qiáng)，出現(xiàn)凝集顆粒增大、成塊現(xiàn)象，隨后出現(xiàn)正常的凝集顆粒由大逐漸減小的過(guò)程。標(biāo)本滴度越高，原倍稀釋時(shí)越可能出現(xiàn)無(wú)凝集現(xiàn)象。

梅毒螺旋體對(duì)治療反應(yīng)性較好，一般在接受規(guī)范足量治療后，大部分患者可在6個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)血清學(xué)變化，RPR滴度顯著降低或轉(zhuǎn)陰。但因?yàn)槊范韭菪w感染患者的不確定性，發(fā)生復(fù)發(fā)或再感染的情況較常見(jiàn)。若此時(shí)出現(xiàn)RPR前帶現(xiàn)象可能會(huì)被漏檢。實(shí)驗(yàn)室梅毒螺旋體檢測(cè)需將特異性抗體檢測(cè)與非特異性抗體檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用，可減少前帶現(xiàn)象漏檢。當(dāng)出現(xiàn)TPPA抗體陽(yáng)性，而RPR不反應(yīng)的情況，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行高倍稀釋，每孔都無(wú)凝集反應(yīng)時(shí)才能報(bào)告陰性[9]。這種方法在綜合性醫(yī)院或梅毒螺旋體陽(yáng)性率較低的實(shí)驗(yàn)室可行，但對(duì)于性病門(mén)診等梅毒螺旋體陽(yáng)性率高的實(shí)驗(yàn)室，因稀釋工作量大，可操作性較差。此時(shí)，綜合考慮FBS-ABS IgM抗體、歷史檢測(cè)結(jié)果以及凝集反應(yīng)規(guī)律是減少前帶現(xiàn)象漏診的重要途徑。FBS-ABS IgM陽(yáng)性，RPR不反應(yīng)或反應(yīng)弱，應(yīng)高度懷疑前帶現(xiàn)象，可將血清稀釋至1∶16,每孔都無(wú)凝集反應(yīng)時(shí)報(bào)告陰性。但當(dāng)TPPA等特異性抗體陽(yáng)性，F(xiàn)BS-ABS IgM陰性， RPR不反應(yīng)或呈較弱反應(yīng)時(shí)，應(yīng)仔細(xì)觀察RPR顆粒反應(yīng)特點(diǎn)，若低稀釋度(1∶1～1∶16/1∶32)，不出現(xiàn)凝集顆粒逐漸減小，而是凝集顆粒大小幾乎無(wú)變化或顆粒增大現(xiàn)象時(shí)，應(yīng)高度懷疑前帶現(xiàn)象，需至少稀釋至第6孔(1∶64)，均無(wú)凝集現(xiàn)象，可排除前帶現(xiàn)象。

另外，可通過(guò)在室間質(zhì)評(píng)中增加前帶現(xiàn)象的考核品，以提高實(shí)驗(yàn)室工作人員對(duì)前帶現(xiàn)象的認(rèn)識(shí)和實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.047

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1673-4130(2016)16-2320-02

2016-02-06

2016-05-11)