急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者治療前后外周血單核細(xì)胞NLRP3炎性體mRNA表達(dá)及血清IL-6水平的研究

丁煥發(fā)，韋涌濤，劉淑娟，徐曉辰，蘭立強(qiáng)，王尚云.青島市第八人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，山東青島　6600；.青島市第八人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東青島 6600

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者治療前后外周血單核細(xì)胞NLRP3炎性體mRNA表達(dá)及血清IL-6水平的研究

丁煥發(fā)1，韋涌濤2，劉淑娟1，徐曉辰1，蘭立強(qiáng)1，王尚云2
1.青島市第八人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，山東青島266100；2.青島市第八人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東青島 266100

目的檢測(cè)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎（acute gouty arthritis,AGA）患者治療前后外周血單核細(xì)胞（peripheral blood monocytes,PBMCs）中NLRP3炎性體［NLRP3、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（ASC）、半胱天冬酶-1（caspase-1）］mRNA表達(dá)水平及血清白介素（IL）-6水平的變化，探討該炎性體及IL-6在AGA發(fā)病中可能的作用機(jī)制。方法 根據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)（ACR）1997年制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選取來(lái)自該院2014年8月—2016年2月的門診AGA患者100例（觀察組，T），同時(shí)隨機(jī)選取相同時(shí)間段青島本地居民健康查體者100名 （對(duì)照組，C）。用RT-PCR法檢測(cè)對(duì)照組和觀察組治療前（D0）及應(yīng)用藥物治療后第3天（D3）、第7天（D7）、第14（D14）天NLRP3炎性體mRNA表達(dá)水平，同時(shí)用ELISA法測(cè)定相應(yīng)IL-6水平。結(jié)果 與對(duì)照組（0.130±0.070）相比，NLRP3 mRNA表達(dá)水平在D0（0.077±0.039）、D3（0.086±0.046）及D7（0.103±0.054）均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與對(duì)照組（0.011±0.006）相比，觀察組各階段ASC mRNA表達(dá)水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中D0（0.028±0.016）、D3（0.030±0.020）及D7（0.017±0.012）vs C（P＜0.01）、D14（0.013±0.007）vs C（P＜0.05）；與對(duì)照組（0.119±0.061）相比，caspase-1 mRNA表達(dá)水平在D0（0.047±0.030）及D3 （0.052±0.030）顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。觀察組血清IL-6水平（pg/ml）與對(duì)照組（10.21±3.62）相比在各階段均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中D0（48.87±19.25）、D3（49.84±21.14）、D7（43.81±18.30）vs C（P＜0.01），D14 （11.40±4.55）vs C（P＜0.05）。結(jié)論NLRP3炎性體及IL-6在AGA患者治療過(guò)程中水平異常，提示它們?cè)贏GA發(fā)病中參與了炎癥反應(yīng)過(guò)程，在炎癥機(jī)制中可能發(fā)揮了重要作用。

凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白；半胱天冬酶-1；NLRP3；炎性體；痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎

［Abstract］Objective To study the expression level of NLRP3（NLR family,pyrin domain containing 3）inflammasome（NL-RP3,ASC,caspase-1）mRNA in peripheral blood monocytes（PBMCs）and serum level of interleukin-6（IL-6）of patients with acute gouty arthritis（AGA）in the course of it,and the roles of them in pathogenesis in AGA.Methods According to the standards of American College of Rheumatology（ACR）in 1997,100 outpatients who had acute gouty arthritis（AGA）were selected as test group（T）.All patients came from Department of Endocrinology of Qingdao Eighth People's Hospital from August 2014 to February 2016.At the same time,100 healthy subjects were selected as control group（C）who were local residents of Qingdao came from Health Examination Center of our hospital.NLRP3 inflammasome mRNA was measured using reverse transcription-polymerase chain reaction（RT-PCR）in PBMCs.The expression of NLRP3 inflammasome mRNA in PBMCs was compared between T and C.T consisted of four stages of disease process Θ：pretherapy（D0）,3rd day after medications（D3）,7th day after medications（D7）and 14th day after medications（D14）.IL-6was measured accordingly using Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）in the two groups.Results The expression of NLRP3 mRNA in D0 （0.077±0.039）,D3（0.086±0.046）and D7（0.103±0.054）reduced significantly when compared to C（0.130±0.070）（P＜0.01）. The expression of ASC mRNA in AGA increased significantly when compared to healthy controls.D0（0.028±0.016）,D3 （0.030±0.020）and D7（0.017±0.012）vs C（0.011±0.006）（P＜0.01）,D14（0.013±0.007）vs C（P＜0.05）.The expression of caspase-1 mRNA in D0（0.047±0.030）and D3（0.052±0.030）reduced significantly when compared to C（0.119±0.061）（P＜0.01）. Serum level of IL-6（pg/ml）in D0（48.87±19.25）,D3（49.84±21.14）and D7（43.81±18.30）increased significantly when compared to C（10.21±3.62）（P＜0.01）,and there was a significant increase in D14（11.40±4.55）vs C（P＜0.05）.Conclusion Dysregulated expression of the NLRP3 inflammasome and IL-6 level are involved in the inflammatory response and play key roles in the pathogenesis of the process of AGA.

［Key words］Apoptosis-associated speck-like protein；Caspase-1；NLRP3；Inflamm–asome；Arthritis gouty

目前急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎 （acute gouty arthritis,AGA）患病率隨人們年齡的增長(zhǎng)有逐漸增高的趨勢(shì)，且常伴有多種慢性病，發(fā)病高峰年齡為40歲左右，臨床上以男性患者多見，女性約占5%，且多為絕經(jīng)期后婦女。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)在AGA啟動(dòng)、進(jìn)展及緩解中均發(fā)揮了關(guān)鍵作用，其中IL-1β是單鈉尿酸鹽（Monosodium urate，MSU）晶體誘導(dǎo)炎癥的關(guān)鍵因子，NLRP3炎性體通過(guò)促進(jìn)IL-1β的生成在AGA發(fā)作中發(fā)揮不可替代的作用［1］。同時(shí)多種促炎性細(xì)胞因子參與了AGA的發(fā)病過(guò)程，IL-6就是其中非常重要的一個(gè)。當(dāng)AGA發(fā)生時(shí)，血清與關(guān)節(jié)液中IL-6水平升高。該研究根據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)（ACR）1997年制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選取來(lái)自該院2014年8月—2016年2月的門診AGA患者100例進(jìn)行研究，探討NLRP3炎性體及IL-6在AGA發(fā)病中可能的作用機(jī)制，以發(fā)現(xiàn)該炎性體及細(xì)胞因子在AGA病程發(fā)展各個(gè)階段表達(dá)水平的變化及意義，指導(dǎo)AGA的早期防治及優(yōu)化治療方案。

1　資料與方法

1.1一般資料

觀察組（T）：隨機(jī)選取符合以下診斷標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)的患者100例（男95例，女5例），年齡（47.25±10.99）歲，全部來(lái)自該院的門診患者。⑴急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)用美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)（ACR）1997年制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)。⑵入選和剔除標(biāo)準(zhǔn)：①符合ACR診斷標(biāo)準(zhǔn)的急性原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；②排除心血管、腎臟、血液疾病、腫瘤疾病引起的繼發(fā)性痛風(fēng)；③排除合并感染性疾病患者；④排除自身免疫性疾病及全身系統(tǒng)疾病患者；⑤年齡18～75歲之間；⑥一般情況良好；⑦未服用降尿酸藥物治療者。對(duì)照組（C）：隨機(jī)選取青島本地居民健康查體者100名 （男95名，女5名），年齡 （46.15± 11.80）歲，排除高尿酸血癥患者。高尿酸血癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)：是指正常嘌呤飲食狀態(tài)下，非同日2次空腹血清尿酸水平 （37℃）男性＞420 μmol/L，絕經(jīng)前女性＞360 μmol/L，絕經(jīng)后女性的診斷標(biāo)準(zhǔn)同男性。兩組人群性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。該研究得到青島市第八人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均知情同意。

1.2治療方案

AGA發(fā)病時(shí)的一線鎮(zhèn)痛藥物包括非甾體類消炎藥（NSAIDs）、COX-2抑制劑、秋水仙堿或類固醇藥物［2］，首選秋水仙堿及NSAIDs［3］，通過(guò)降低患者血清及關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-α、環(huán)氧化酶-2等的水平發(fā)揮作［4］。觀察組治療方案：在低嘌呤飲食、足量飲水前提下，給予：①鎮(zhèn)痛：為主要治療措施。秋水仙堿片 （國(guó)藥準(zhǔn)字：H53021369；批號(hào)：140109；有效期：36個(gè)月），服藥療程14 d：前3 d0.5 mg/次，3次/d，餐后服；然后0.5 mg/次，2次/d，餐后服，連續(xù)用藥7 d；后4 d0.5 mg/次，1次/晚，睡前服。依托考昔片［5-8］（安康信，Merck Sharp&Dohme Corp；進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)：注冊(cè)證號(hào)H20130299；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字J20130133；批號(hào)：Y1981，服藥療程 10 d：前 3 d120 mg/次，1次/d，餐后服；3 d后60 mg/次，1次/d，餐后服，連續(xù)用藥7 d。②堿化尿液：抑制尿酸在腎臟形成晶體，促進(jìn)尿酸腎臟排泄。尿pH值維持在6.2～6.8。給予口服枸櫞酸鉀鈉顆粒（逍適檸，國(guó)藥準(zhǔn)字H20103086；產(chǎn)品批號(hào)：20150501）2.5 g/次，4次/d（三餐后及睡前）。治療過(guò)程中若出現(xiàn)肝、腎功能異常及胃腸道反應(yīng)則予以排除。

1.3觀測(cè)指標(biāo)

①測(cè)定兩組的一般生理指標(biāo)：年齡 （Age）、身高（BH）、體重（BW）、收縮壓/舒張壓（SBP/DBP）、腰圍（WC）、臀圍（HC）。計(jì)算腰臀比（WHR）及體質(zhì)量指數(shù)（BMI）。BMI=體重（kg）/身高（m）2。

②測(cè)定兩組的空腹血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、尿酸（UA）、空腹血糖（FPG）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）。測(cè)定兩組全血白細(xì)胞總數(shù)（WBC）、中性粒細(xì)胞數(shù)（NEUT）、中性粒細(xì)胞百分比（NEUT%）。

③測(cè)定觀察組治療前 （第0天，D0）及治療后第3天（D3）、第7天（D7）、第14天（D14）PBMCs中NLRP3 mRNA、ASC mRNA及caspase-1 mRNA。測(cè)定相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的空腹血清IL-6水平。同時(shí)測(cè)定對(duì)照組上述指標(biāo)，與觀察組治療前指標(biāo)進(jìn)行比較研究。

1.4主要檢測(cè)方法

所有入選者由專人進(jìn)行一般生理指標(biāo)測(cè)量并記錄。實(shí)驗(yàn)中血清ALT、AST、UA、FPG、TG、TC、LDL-C、HDL-C、CRP、Cr、BUN的檢測(cè)用全自動(dòng)生化分析儀，IL-6的檢測(cè)采用ELISA試劑盒。PBMCs中NLRP3、ASC 及caspase-1 mRNA采用RT-PCR檢測(cè)。血分析采用SYSMEX XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)。

1.5統(tǒng)計(jì)方法

采用IBM SPSS 19.0軟件包對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，觀察組與對(duì)照組NLRP3炎性體mRNA比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，一般生理指標(biāo)、血生化指標(biāo)及全血分析白細(xì)胞數(shù)等用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料用（±s）表示。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1一般臨床資料及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較

觀察組與對(duì)照組比較，兩組性別、Age、AST差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與對(duì)照組相比，觀察組BH、BW、BMI、SBP、DBP、WC、HC、WHR、FPG、UA、ALT、Cr、BUN、TG、TC、LDL-C、C-RP、WBC、NEUT、NEUT%均明顯升高，HDL-C降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05～0.01）（表1）。

2.2兩組NLRP3 mRNA表達(dá)水平比較

觀察組NLRP3 mRNA表達(dá)水平D0、D3及D7vs C顯著升高降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），D14 vs C差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；觀察組各階段ASC mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中D0、D3及D7 vs C（P＜0.01）、D14 vs C（P＜0.05）；觀察組caspase-1 mRNA表達(dá)水平，D0及D3 vs C顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），D7及D14 vs C差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）。

表1　兩組一般資料及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)水平（±s）

表1　兩組一般資料及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)水平（±s）

注：觀察組與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05。

分組　Age（Year）　BH （cm）UA （μmol/L）觀察組對(duì)照組BW （kg）BMI （kg/m2）SBP （mmHg）DBP （mmHg）WC （cm）?。╟m）　WHR　FPG （mmol/L）HC t P 47.25±10.99 46.15±11.80 0.682 0.496 171.97±5.61 162.82±6.34 10.808 0.000 79.76±11.01 65.08±9.71 10.002 0.000 26.97±3.54 24.48±2.87 5.472 0.000 138.96±14.90 132.61±16.74 2.834 0.005 88.24±11.22 83.65±8.95 3.198 0.002 96.77±8.29 87.10±8.90 7.953 0.000 104.74±6.56 101.11±7.65 3.601 0.000 0.92±0.05 0.86±0.05 8.561 0.000 6.48±1.49 5.99±0.98 2.76 0.006 432.21±127.56 275.93±69.47 10.760 0.000

續(xù)表1

表2　兩組NLRP3炎性體mRNA表達(dá)水平（±s）

表2　兩組NLRP3炎性體mRNA表達(dá)水平（±s）

注：觀察組與對(duì)照組相比（T vs C）以P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

分組　ASCmRNA　csapase-1mRNA　NLRP3mRNA T t P D0 D3 D7 D14 9.723 8.953 4.164 2.003 0.028±0.016 0.030±0.020 0.017±0.012 0.013±0.007 0.011±0.006 0.047±0.030 0.052±0.030 0.113±0.057 0.124±0.066 0.119±0.061 0.077±0.039 0.086±0.046 0.103±0.054 0.123±0.078 0.130±0.070 10.704 9.998 0.798 0.461 6.658 5.335 3.126 0.647 0.000 0.000 0.000 0.047 0.000 0.000 0.426 0.646 0.000 0.000 0.002 0.518 C

2.3兩組IL-6水平比較

觀察組各階段血清IL-6水平與對(duì)照組相比顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中D0、D3、D7 vs C（P＜0.01），D14 vs C（P＜0.05）。（表3）。

表3　兩組IL-6水平比較（±s）

表3　兩組IL-6水平比較（±s）

注：觀察組與對(duì)照組相比（T vs C）以P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

分組IL-6（pg/ml）t P T D0 D3 D7 D14 19.735 18.480 18.012 2.045 0.000 0.000 0.000 0.042 C 48.87±19.25 49.84±21.14 43.81±18.30 11.40±4.55 10.21±3.62

3　討論

痛風(fēng)（Gout）是因嘌呤代謝障礙和/或尿酸排泄減少、血UA持續(xù)升高而導(dǎo)致MSU晶體析出并沉積于組織或器官引起的一組臨床癥候群，屬于代謝性風(fēng)濕病。報(bào)道顯示，國(guó)內(nèi)痛風(fēng)的患病率目前在1%～3%，2009年山東沿海地區(qū)當(dāng)?shù)鼐用裢达L(fēng)患病率為1.96%，2007-2008年美國(guó)痛風(fēng)患病率上升至3.9%。AGA可發(fā)生于任何年齡，發(fā)病高峰年齡為40歲左右，且常伴有糖尿病、肥胖、心腦血管病、腎臟病等，患病率隨年齡的增長(zhǎng)有逐漸增高的趨勢(shì)。該研究中，與對(duì)照組相比，觀察組BH、BW、BMI、SBP、DBP、WC、HC、WHR、FPG、UA、ALT、Cr、BUN、TG、TC、LDL-C、HDL-C均明顯升高（P＜0.01）亦支持上述觀點(diǎn)。AGA臨床上以男性患者多見，女性約占5%，且多為絕經(jīng)期后婦女。AGA發(fā)作時(shí)疼痛劇烈，患者異常痛苦，嚴(yán)重影響日常工作和生活。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)在AGA啟動(dòng)、進(jìn)展及緩解中均發(fā)揮了關(guān)鍵作用，發(fā)作涉及IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α等多種炎癥因子，其中IL-1β是MSU晶體誘導(dǎo)炎癥的關(guān)鍵因子，大量的IL-6及其他因子釋放到循環(huán)中，刺激機(jī)體的全身急性時(shí)相反應(yīng)，致AGA患者發(fā)熱、全身不適，及WBC升高。NLRP3炎性體，即Nod樣受體蛋白3（Nodlike receptor protein 3，NLRP3）炎性體是位于細(xì)胞內(nèi)的一種蛋白質(zhì)復(fù)合體，主要功能為活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）以間接調(diào)控IL-lβ、IL-18［9］、和IL-33等的成熟和分泌，具有調(diào)控機(jī)體炎癥反應(yīng)的功能。NLRP3炎性體是由核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體 （nucleotide-binding oligomerization domain-like re-ceptors,NLRs）家族成員NLRP3（NLR family，pyrin domain containing 3）、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD，ASC）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（cysteine-requiring aspartate protease-1，caspase-1）組成的復(fù)合體，是內(nèi)源性或外源性危險(xiǎn)信號(hào)的胞質(zhì)內(nèi)感受器，是活化caspase-1的分子平臺(tái)，調(diào)控IL-lβ和白介素18（IL-18）等促炎細(xì)胞因子的成熟和分泌。IL-lβ是一個(gè)經(jīng)典的促炎性細(xì)胞因子，活化的IL-lβ與靶細(xì)胞上的IL-1受體結(jié)合，激活I(lǐng)L-1信號(hào)通路和髓樣分化因子 （myeloid differentiation factor，MyD88）依賴的NF-κB通路，促進(jìn)IL-1等促炎因子轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)。研究證實(shí)，IL-lβ是促進(jìn)多種代謝性疾病發(fā)生發(fā)展的重要炎癥因子，阻斷其生物學(xué)效應(yīng)能有效緩解代謝性疾病的進(jìn)展。NLRP3是模式識(shí)別胞內(nèi)受體Nod樣受體蛋白家族的成員，廣泛表達(dá)于樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，具有識(shí)別病原體的功能。ASC是NLRP3炎性體的雙重銜接蛋白，能夠以某種橋梁的形式將NLRP3和caspase-1前體連接起來(lái)，最終形成具有酶活性的異二聚體caspase-1。caspase-1作為炎性體的效應(yīng)蛋白，能夠?qū)o(wú)活性的IL-18和IL-1β前體剪切為成熟的IL-18和IL-1β，促進(jìn)其成熟分泌。

目前研究認(rèn)為，NLRP3炎性體是MSU導(dǎo)致痛風(fēng)的核心機(jī)制［10］。Martinon等［11］研究顯示，NLRP3介導(dǎo)MSU誘導(dǎo)痛風(fēng)發(fā)生發(fā)展，其機(jī)制可能與MSU誘導(dǎo)K+外流有關(guān)，還可能與線粒體來(lái)源的活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）釋放有關(guān)，溶酶體破裂也可能是MSU激活NLRP3炎性小體的機(jī)制之一。該研究結(jié)果顯示，AGA發(fā)病時(shí)及治療后第3天，ASCmRNA表達(dá)水平 （0.028±0.016、0.030± 0.020）均顯著高于對(duì)照組（0.011±0.006）（P＜0.01）；NLRP3 mRNA表達(dá)水平（0.077±0.039、0.086±0.046）及caspase-1 mRNA表達(dá)水平（0.047±0.030、0.052±0.030）均顯著低于對(duì)照組（0.130±0.070、0.119±0.061）（P＜0.01），說(shuō)明在炎癥早期，NLRP3炎性體參與了疾病過(guò)程。治療后第7天，患者NLRP3 mRNA表達(dá)水平（0.103±0.054）仍低于對(duì)照組（P＜0.01），ASC mRNA表達(dá)水平（0.017±0.012）仍高于對(duì)照組 （P＜0.01），caspase-1 mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示在炎癥持續(xù)存在期間，NLRP3炎性體持續(xù)參與炎癥過(guò)程，隨病程進(jìn)行，炎癥消退過(guò)程中，抑制炎癥的調(diào)控因素可能逐漸出現(xiàn)。治療第14天ASC mRNA表達(dá)水平（0.013±0.007）仍高于對(duì)照組 （P＜0.05），較前已明顯降低，NLRP3 mRNA及caspase-1 mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果顯示AGA炎癥消退，趨于正常，ASC表達(dá)可能存在其他途徑及意義。該研究顯示，在AGA病程中ASC mRNA表達(dá)水平始終高于對(duì)照組，與國(guó)內(nèi)相關(guān)研究結(jié)果一致［12］。NLRP3 mRNA及caspase-1 mRNA表達(dá)水平在第一周均低于對(duì)照組，到第二周時(shí)與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NLRP3炎性體表達(dá)水平在病程中的此種變化，可能與藥物干預(yù)及多種調(diào)節(jié)因子共同作用有關(guān)。國(guó)內(nèi)相關(guān)研究［13］亦顯示，NLRP3 mRNA在AGA患者中表達(dá)水平低于健康對(duì)照組，ASC mRNA及caspase-1 mRNA表達(dá)水平在AGA組高于健康對(duì)照組，研究者認(rèn)為NLRP3 mRNA表達(dá)在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者炎癥過(guò)程中可能發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用，ASC mRNA及caspase-1 mRNA表達(dá)在此過(guò)程中主要發(fā)揮協(xié)同作用。這與該研究部分結(jié)果相一致，因?yàn)闊o(wú)具體治療方案，無(wú)法判斷其他因素的影響。

AGA的前炎癥介質(zhì)來(lái)源于常駐的滑膜細(xì)胞和遷移的單核巨噬細(xì)胞，而NEUT的侵入和活化是最重要的環(huán)節(jié)。發(fā)病時(shí)關(guān)節(jié)滑液和滑膜中出現(xiàn)的大量NEUT甚至可與急性化膿性關(guān)節(jié)炎時(shí)相當(dāng)［14］。該研究中，發(fā)病時(shí)的WBC、NEUT、NEUT%及CRP［15］均顯著高于對(duì)照組，提示AGA發(fā)病時(shí)WBC及NEUT在炎癥初期就參與了反應(yīng)。IL-6是AGA的重要炎癥因子，發(fā)病時(shí)關(guān)節(jié)液及血清中IL-6水平明顯升高［16-17］。國(guó)內(nèi)黨萬(wàn)太等研究顯示，AGA組患者血清IL-6表達(dá)水平（76.2±29.6pg/mL）顯著高于健康對(duì)照組（35.0±27.0）pg/mL（P＜0.01），認(rèn)為其可以間接提示NLRP3炎性體的活化在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎各種致炎因子成熟和釋放過(guò)程中的重要性。該研究中，觀察組各階段血清IL-6水平（pg/mL）與對(duì)照組相比顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中 D0（48.87±19.25）、D3（49.84± 21.14）、D7（43.81±18.30）vs C（10.21±3.62）（P＜0.01），D14（11.40±4.55）vs C（P＜0.05），表明IL-6在AGA炎癥過(guò)程中發(fā)揮重要作用，且在發(fā)病高峰時(shí)濃度最高，隨炎癥緩解水平逐漸降低。與國(guó)內(nèi)研究顯示AGA致炎性因子IL-6表達(dá)顯著升高相一致［11］。IL-6主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，單核/巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肥大細(xì)胞等亦可產(chǎn)生。IL-1可刺激單核/巨噬細(xì)胞等合成IL-6。IL-6有多種生物活性，參與多種疾病的炎癥反應(yīng)，可抑制炎癥反應(yīng)的許多方面，如減少中性粒細(xì)胞，單核/巨噬細(xì)胞在脂多糖誘導(dǎo)下的IL-1、TNF的合成；增加IL-1Ra合成；促進(jìn)IL-1β及TNF受體釋放；減少IL-8等炎癥趨化因子的表達(dá)。在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者滑液中發(fā)現(xiàn)IL-6水平升高。有報(bào)道稱，當(dāng)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎等病情活動(dòng)或關(guān)節(jié)破壞嚴(yán)重時(shí)，血清與關(guān)節(jié)液中IL-6水平升高。有學(xué)者將IL-6作為判斷痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎等疾病活動(dòng)性和嚴(yán)重程度的指標(biāo)。

總之，該研究結(jié)果表明，NLRP3炎性體及IL-6在AGA患者發(fā)病及治療過(guò)程中水平異常，提示它們?cè)贏GA發(fā)病中參與了炎癥反應(yīng)過(guò)程，在炎癥機(jī)制中可能發(fā)揮了重要作用。結(jié)果亦提示，NLRP3炎性體及IL-6在炎癥過(guò)程存在與多種炎性因子的共同作用，相互影響，亦存在相關(guān)負(fù)向調(diào)節(jié)，它們?cè)谘装Y發(fā)生、進(jìn)展及緩解中的負(fù)面作用亦可能存在，需要在今后的研究中進(jìn)一步探討。

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R4

A

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青島市衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2014-WJZD103）。

丁煥發(fā)（1970.12-），男，山東青島人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：高尿酸血癥與痛風(fēng)，糖尿病，肥胖與脂代謝。

2016-05-15）