黃瓜靶斑病菌致病性鑒定及藥劑篩選

徐麗慧，高士剛，曾 蓉，戴富明（上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境保護研究所，上海市設(shè)施園藝重點實驗室，上?！?01403）

黃瓜靶斑病菌致病性鑒定及藥劑篩選

徐麗慧，高士剛，曾 蓉，戴富明*
（上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境保護研究所，上海市設(shè)施園藝重點實驗室，上海201403）

采用噴霧接種的方法，對來自上海、山東、遼寧和廣東等地黃瓜上分離的9個靶斑病菌（Corynespora cassiicola）菌株在黃瓜不同品種上的致病性進行了鑒定；并通過測定菌絲生長速率和田間試驗，對常用殺菌劑進行了活性與防效的評價。結(jié)果表明：來源于不同地區(qū)的菌株對黃瓜的致病力存在差異，但未發(fā)現(xiàn)致病力的分化。10個主栽黃瓜品種對黃瓜靶斑病的抗性差異明顯，其中‘碧玉’抗性最強，而‘春五’‘申青一號’的抗性較差。室內(nèi)活性及室外藥效試驗結(jié)果表明，430g/L戊唑醇懸浮劑、45%咪鮮胺乳油對黃瓜靶斑病有較好的防治效果。

黃瓜靶斑病；多主棒孢菌；致病性；藥劑防治

黃瓜靶斑病（Cucumber target leafspot）又稱黃瓜棒孢葉斑病、褐斑病，由多主棒孢菌［Corynespora cassiicola（Berk&Kert）Wei］引起，是近年來黃瓜生產(chǎn)上的重要病害之一。該病田間葉片發(fā)病率一般為10%—25%，嚴(yán)重時高達(dá)60%—70%，甚至100%［1-2］。多主棒孢菌侵染破壞力強，極易變異［3］。高葦?shù)龋?］報道多主棒孢菌寄主來源與致病力分化之間具有顯著的相關(guān)性，認(rèn)為多主棒孢菌的種內(nèi)菌株間存在寄主?；缘默F(xiàn)象，并且，相同寄主和相同地理來源的病原菌群體中致病力也存在顯著差異。然而，不同地域相同寄主來源的病原菌對同一寄主不同品種是否存在致病力分化即生理小種的分化尚未明確。品種抗性利用是病害綜合防控的主要措施之一［5］，國內(nèi)也有黃瓜對靶斑病抗性的鑒定報道，但多數(shù)采用苗期鑒定，且選用的是津研類型和華南類型的黃瓜品種，缺少荷蘭型黃瓜品種［6-8］。目前，關(guān)于黃瓜靶斑病防治藥劑的研究以室內(nèi)離體活性篩選居多［9］，田間防效試驗偏少，據(jù)報道百菌清［10］、氟菌·肟菌酯［11］等殺菌劑在田間對黃瓜靶斑病有效。

本研究對來源于不同地區(qū)的黃瓜多主棒孢菌在黃瓜上致病力以及不同類型的主栽黃瓜品種的田間抗性進行鑒定，同時對黃瓜靶斑病防治藥劑進行室內(nèi)篩選與田間防效評價，以期為黃瓜靶斑病的田間防治與抗病育種提供技術(shù)支持。

1　材料與方法

1.1供試黃瓜品種

‘申青一號’（上海富農(nóng)種業(yè)有限公司）、‘南雜二號’（上海興綠蔬菜種苗研究所）、‘滬雜六號’（上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院設(shè)施園藝研究所）、‘春秋王’（上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院設(shè)施園藝研究所）、‘春五’（天津市東麗區(qū)環(huán)農(nóng)潤豐種業(yè)有限公司）、‘碧玉’（上海富農(nóng)種業(yè)有限公司）、‘新四號’（寧陽縣陽光種子有限公司）、‘抗熱先鋒’（天津市宏程芹菜研究所）、‘九龍四零一’（青島膠州市九龍種苗繁育場）和‘新津研四號’（天津市中天種業(yè)有限公司）。

1.2供試菌株

多主棒孢菌HGPD、HGJS、HGSJ、HGFX菌株分別從上海市浦東新區(qū)、金山區(qū)、松江區(qū)、奉賢區(qū)采集的黃瓜靶斑病病葉上分離；HGSG菌株由濰坊科技學(xué)院劉永光老師提供；HGSD1、HGSD2菌株由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所李長松老師提供；HGLN菌株由沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院劉志恒老師提供；HGGD菌株由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所藍(lán)國兵老師提供。

1.3供試藥劑

毒力測定藥劑：97%戊唑醇原藥（上海生農(nóng)生化制品有限公司），98%咪鮮胺原藥（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司），98%啶酰菌胺原藥（上海悅聯(lián)化工有限公司），97%肟菌酯原藥（江蘇南通泰禾化工有限公司），95%苯醚甲環(huán)唑原藥（上海生農(nóng)生化制品有限公司），98%嘧菌酯原藥（京博農(nóng)化科技股份有限公司），98%多菌靈原藥（江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司），98%腐霉利原藥（江西禾益化工股份有限公司），96%異菌脲原藥（上海悅聯(lián)化工有限公司）。

田間試驗藥劑：430g/L戊唑醇懸浮劑（拜耳作物科學(xué)公司），45%咪鮮胺乳油（北京中農(nóng)研創(chuàng)高科技有限公司），50%啶酰菌胺水分散粒劑（巴斯夫歐洲公司），10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（瑞士先正達(dá)作物保護有限公司），50%多菌靈可濕性粉劑（上海悅聯(lián)化工有限公司）。

1.4藥劑室內(nèi)篩選

1.4.1藥劑初篩

將9種殺菌劑分別配制成終質(zhì)量濃度分別為1μg/mL和50μg/mL的PDA含藥培養(yǎng)基平板，每個濃度處理設(shè)置5個重復(fù)。將活化后的黃瓜靶斑病菌強致病力菌株HGFX的菌餅接種至含藥培養(yǎng)基平板中央，28℃、黑暗條件下培養(yǎng)7d后測量菌落直徑。

1.4.2EC50測定

初篩后活性高的殺菌劑進行EC50的測定。根據(jù)初篩試驗中殺菌劑的活性高低，將候選的殺菌劑分別制成不同系列終濃度的PDA含藥培養(yǎng)基平板，活化后菌株HGFX的菌餅接種至藥皿中央，28℃、黑暗條件下培養(yǎng)7d后測量菌落直徑。

1.5病菌田間接種

將黃瓜靶斑病菌株轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基上，28℃、黑暗條件下培養(yǎng)20d后，培養(yǎng)物用無菌水配成分生孢子含量為106個/mL的孢子懸浮液，全株性噴霧接種后溝灌補水，閉棚保濕1d后恢復(fù)正常管理。

1.6抗病性鑒定

在2013年秋季，10個黃瓜品種按照隨機區(qū)組排列進行移栽定植，每個品種4次重復(fù)。在開花結(jié)瓜期，按照1.5節(jié)方法進行病菌（菌株HGFX）的人工接種，接種后10d調(diào)查靶斑病的病情指數(shù)。

1.7致病力評價

選擇靶斑病抗性強（‘碧玉’）和抗性弱（‘申青一號’）的2個黃瓜品種進行9個黃瓜靶斑病菌的致病力差異測定。不同菌株接種處理隨機區(qū)組排列，4次重復(fù)。在開花結(jié)瓜期，按照1.5節(jié)方法進行病菌的人工接種，接種10d后進行靶斑病的病情指數(shù)調(diào)查。

1.8藥劑田間防治黃瓜靶斑病的效果評價

根據(jù)殺菌劑室內(nèi)毒力的測定，選擇活性較高的5種殺菌劑在保護地大棚栽培黃瓜‘申青一號’上進行靶斑病田間防效試驗。試驗設(shè)置430g/L戊唑醇懸浮劑1 000倍液、45%咪鮮胺乳油2 000倍液、50%啶酰菌胺水分散粒劑1 000倍液、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1 000倍液和50%多菌靈可濕性粉劑1000倍液5個藥劑處理和1個不施藥空白對照。試驗處理隨機區(qū)組排列，4次重復(fù)。在黃瓜開花結(jié)瓜期，靶斑病未發(fā)生之前進行第一次藥劑全株性噴霧預(yù)防，藥后第2天按照1.5節(jié)方法進行病原菌人工接種，7d后進行第二次藥劑預(yù)防，第二次施藥后10d進行靶斑病病情調(diào)查。

1.9病情和防效調(diào)查

1.9.1病害調(diào)查

每小區(qū)隨機調(diào)查4點，每點2株，共8株，每株調(diào)查全部葉片，以每片葉上的病斑面積占整個葉面積的百分率來分級。試驗依據(jù)GB/T17980.112—2004第112部分：殺菌劑防治瓜類炭疽病藥效試驗中的分級標(biāo)準(zhǔn)，擬定黃瓜靶斑病嚴(yán)重度分級標(biāo)準(zhǔn)。分級標(biāo)準(zhǔn)為，0級：無病斑；1級：病斑面積占整個葉面積的5%以下；3級：病斑面積占6%—10%；5級：病斑面積占11%—25%；7級：病斑面積占26%—50%；9級：病斑面積達(dá)50%以上。

1.9.2防效計算

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對病情指數(shù)鑒定結(jié)果及防治效果進行方差分析，多重比較采用Duncan’s新復(fù)極差檢驗（LSR test）。

2　結(jié)果與分析

2.1藥劑室內(nèi)毒力測定

在1μg/mL質(zhì)量濃度下，9種供試殺菌劑中，戊唑醇、咪鮮胺、啶酰菌胺、苯醚甲環(huán)唑表現(xiàn)出27.7%—61.5%的抑菌率，其他5種殺菌劑對菌絲生長的抑制率在12.3%以下；在50μg/mL質(zhì)量濃度下，戊唑醇、咪鮮胺、啶酰菌胺、苯醚甲環(huán)唑、多菌靈和腐霉利對菌絲生長的抑制率超過50%（供試殺菌劑間具有顯著性差異P＜0.05，n=4）（圖1）。

圖1　9種殺菌劑對黃瓜靶斑病菌的抑菌活性測定Fig.1　Inhibitory activity of 9 fungicides against Corynespora cassiicola

綜合分析2個濃度下抑菌效果，選擇戊唑醇、咪鮮胺、啶酰菌胺、苯醚甲環(huán)唑和多菌靈進行EC50的測定。咪鮮胺的抑菌活性最強，其EC50為0.07μg/mL；戊唑醇的抑菌活性最弱，其EC50為14.93μg/mL（表1）。

2.2黃瓜品種對黃瓜靶斑病的抗病性評價

用黃瓜靶斑病菌強致病力菌株HGFX接種10個不同黃瓜品種后7d，靶斑病的病情指數(shù)見圖2。不同黃瓜品種之間對靶斑病抗性的差異顯著，其中‘申青一號’‘春五’‘新四號’‘抗熱先鋒’‘新津研四號’抗性較差，病情指數(shù)均超過了40；‘南雜二號’‘滬雜六號’‘春秋王’‘九龍四零一’抗性居中，病情指數(shù)在15—35；‘碧玉’抗性最強，病情指數(shù)僅為8.16。

表　1 5種殺菌劑抑制黃瓜靶斑病菌菌絲生長的EC50測定Table 1　EC50of 5 fungicides against mycelialgrowth of Corynespora cassiicola

圖2　黃瓜不同品種對黃瓜靶斑病的抗性鑒定Fig.2　Resistance ofdifferent cucumber varieties to cucumber target leafspot

2.3黃瓜上多主棒孢菌菌株的致病力測定

通過大棚內(nèi)成株期黃瓜的人工接種，測定了來自遼寧沈陽、山東壽光、廣東廣州以及上海浦東、奉賢、金山、松江等地黃瓜上分離的9個多主棒孢菌菌株在‘碧玉’（抗病較強）和‘申青一號’（抗性較差）的致病力（田間效果如圖3所示）。9個菌株對‘申青一號’黃瓜品種的致病力都很強，而對‘碧玉’黃瓜品種的致病力都很弱，在同一品種上雖然有致病性差異，但差異不顯著（圖4），說明不同來源的株系間不存在致病性分化。

圖3　黃瓜多主棒孢菌菌株在不同黃瓜品種上的田間癥狀Fig.3　Symptoms on leaves ofdifferent cucumber varieties caused by artificial inoculation of Corynespora cassiicola

2.4黃瓜靶斑病防治的田間藥效試驗評價

5種藥劑對黃瓜靶斑病的田間防治效果在57.69%—74.11%，其中430g/L戊唑醇懸浮劑1 000倍液防治效果最好（74.11%），其次是45%咪鮮胺乳油2 000倍液（70.55%），再次為10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1 000倍液（61.92%），50%多菌靈可濕性粉劑1 000倍液防效為59.18%，50%啶酰菌胺水分散粒劑1 000倍液防盜為57.69%，不同藥劑之間的防效差異不顯著。

圖4　黃瓜上多主棒孢菌菌株在黃瓜抗病品種（‘碧玉’）、感病品種（‘申青一號’）上的致病力測定Fig.4　Pathogenicity of the Corynespora cassiicola isolates on resistant（‘Biyu’）andsusceptible（‘Shenqing No.1’）varieties of cucumber

3　結(jié)論與討論

多主棒孢菌可以危害黃瓜、番茄、茄子、橡膠等，寄主廣泛［1，12-13］。不同寄主來源的多主棒孢菌在不同種或?qū)俚募闹髦参镩g存在著明顯的致病力分化［4，14］。不同地域同一寄主來源的病原菌對同一寄主不同品種是否存在致病力分化即生理小種的分化目前尚無報道。本研究中黃瓜品種‘碧玉’對來自不同地域的多主棒孢菌均表現(xiàn)出很強的抗性，而‘申青一號’的抗性較差，表明多主棒孢菌在黃瓜上沒有出現(xiàn)生理小種的分化，而黃瓜對黃瓜靶斑病的抗性可能屬于水平抗性，因本試驗菌株數(shù)量偏少，需要更大范圍源自黃瓜的靶斑病菌作進一步佐證。

目前，關(guān)于黃瓜抗靶斑病性鑒定研究報道較少，王惠哲等［6］和藍(lán)國兵等［7］評價了當(dāng)?shù)刂饕S瓜栽培品種的抗性，篩選出了高抗品種，但是僅為采用1—2個當(dāng)?shù)鼐甑娜斯そ臃N獲得的結(jié)果，這些品種在我國其他疫區(qū)是否也表現(xiàn)為高抗還不能確定。本研究通過田間黃瓜成株期抗性鑒定，也認(rèn)為不同黃瓜品種之間對黃瓜靶斑病抗性存在顯著差異，高抗品種對來自當(dāng)?shù)厣虾５貐^(qū)和遼寧、山東、廣東等地的黃瓜靶斑病菌均表現(xiàn)出高抗。曾蓉等［15］首次在黃瓜有刺品種上發(fā)現(xiàn)黃瓜靶斑病，近幾年的田間觀察表明水果型（光皮）黃瓜品種抗性明顯強于長果型（有刺）黃瓜品種，但抗病機制仍不清楚。據(jù)王惠哲等［16］報道，黃瓜種質(zhì)資源中蘊涵著潛在的改良黃瓜褐斑病抗性基因，因此采用抗病品種是目前防治黃瓜靶斑病最切實可行且有效的技術(shù)措施。

本研究表明戊唑醇、咪鮮胺等對黃瓜靶斑病具有較好的防治效果，紀(jì)明山等［17］室內(nèi)測定也表明黃瓜棒孢葉斑病菌對咪鮮胺敏感。除了靶斑病之外，戊唑醇和咪鮮胺分別對黃瓜白粉病和炭疽病具有良好的防治作用，因此具有較好的兼治作用。藥劑的兼治作用是在制定病害綜合防控策略時必須考慮的重要因素之一，也是減少田間化學(xué)農(nóng)藥的投入、提高農(nóng)產(chǎn)品安全性的重要措施之一。另外，據(jù)國外報道，黃瓜靶斑病菌對苯菌靈、甲基硫菌靈、乙霉威、嘧菌酯、啶酰菌胺等殺菌劑出現(xiàn)抗性［18-21］，造成藥效降低或喪失，本研究中啶酰菌胺相比其他殺菌劑的田間防效較差，可能產(chǎn)生了一定的抗藥性。因而，需定時對當(dāng)?shù)氐狞S瓜靶斑病菌株進行抗性檢測，以期做出準(zhǔn)確的防治措施。

本研究結(jié)果在黃瓜抗靶斑病性鑒定、抗性種質(zhì)資源創(chuàng)新、黃瓜靶斑病綜合防治等方面具有重要的應(yīng)用價值。

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（責(zé)任編輯：閆其濤）

Pathogenicity identification and fungicidescreening of Corynespora cassiicola in cucumber

XU Li-hui，GAOshi-gang，ZENG Rong，DAI Fu-ming*
（Institute of Eco-environmental Protection，Shanghai Academy of Agriculturalsciences；Shanghai Key Laboratory of Protected Horticultural Technology，Shanghai 201403，China）

The pathogenicity identification of 9strains of Corynespora cassiicola isolated from cucumber inshanghai，Shandong，Liaoning andguangdong were carried out usingspray inoculation method ingreenhouse.The activity and control effect of commonly used fungicides were evaluated by measuring thegrowth rate of mycelium and field test.The resultsshowed that the pathogenicity of the isolates from thesame host indifferent regions hadsignificantdifferences，however，the pathogenicitydifferentiation of races todifferent varieties were not found among thestrains.The resistance of 10 leading varieties to cucumber target leafspotshowedsignificantdifferences.The variety‘Biyu’showed highest resistance，while‘Chunwu’and‘Shenqing No.1’showed rather low resistance.Thedisease could be effectively controlled by 430g/L TebuconazolesC or 45%Prochloraz EC in bioassay and field trial.

Cucumber target leafspot；Corynespora cassiicola；Pathogenicity；Chemical control

S436.421

A

1000-3924（2016）04-116-06

2015-08-10

上海市科技興農(nóng)重點攻關(guān)項目［滬農(nóng)科攻字（2012）第2-10號］；上海市科技興農(nóng)重大項目［滬農(nóng)科重字（2010）第4-1號］；上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院科學(xué)技術(shù)發(fā)展基金項目［農(nóng)科發(fā)2013（11）］

徐麗慧（1982—），女，博士，助理研究員，主要從事植物病理學(xué)研究

，Tel：021-52210082，E-mail：fumingdai@163.com