無(wú)菌豬生長(zhǎng)、血液以及臟器相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

孫靜，杜蕾，丁玉春，曹浩然，吳夢(mèng)，林保忠，張世華，劉作華*，葛良鵬*

(1.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶　402460； 2.農(nóng)業(yè)部養(yǎng)豬科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶　402460；3.養(yǎng)豬科學(xué)重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶　402460； 4. 西南大學(xué)榮昌校區(qū)，重慶 榮昌　402460)

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無(wú)菌豬生長(zhǎng)、血液以及臟器相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

孫靜1，2，3，杜蕾4，丁玉春1，2，3，曹浩然1，2，3，吳夢(mèng)1，2，3，林保忠1，2，3，張世華1，劉作華1，2，3*，葛良鵬1，2，3*

(1.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶402460； 2.農(nóng)業(yè)部養(yǎng)豬科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶402460；3.養(yǎng)豬科學(xué)重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶402460； 4. 西南大學(xué)榮昌校區(qū)，重慶 榮昌402460)

目的建立無(wú)菌太湖豬多項(xiàng)生理數(shù)據(jù)背景資料。方法對(duì)4頭25d無(wú)菌豬和4頭同窩普通級(jí)群體，雌雄比3∶1，測(cè)定并比較血液常規(guī)、生化、免疫球蛋白和主要臟器發(fā)育指標(biāo)。運(yùn)用異速生長(zhǎng)建模，對(duì)主要臟器重量相對(duì)體重的異速生長(zhǎng)進(jìn)行了分析。結(jié)果(1)無(wú)菌豬與普通級(jí)豬的12項(xiàng)血常規(guī)和8項(xiàng)血生化指標(biāo)差異有顯著性(P < 0.05)；(2)無(wú)菌豬與普通級(jí)豬的平均體重、血清中IgM表達(dá)量差異達(dá)到顯著性水平(P < 0.05)，且無(wú)菌豬缺少腸系膜淋巴結(jié)；(3)無(wú)菌豬的心臟、脾和胃與體重呈負(fù)異速生長(zhǎng)(異速生長(zhǎng)指數(shù)b<1)，腸道與體重的異速生長(zhǎng)指數(shù)為1.78，為正異速生長(zhǎng)；而普通級(jí)豬的心臟、胃和腸道與體重呈負(fù)異速生長(zhǎng)(b<1)，腎與體重的異速生長(zhǎng)指數(shù)最大，為1.20，呈正異速生長(zhǎng)。結(jié)論微生物學(xué)等級(jí)差異影響了豬體重、血液及臟器、免疫系統(tǒng)的發(fā)育。

無(wú)菌豬；血液參數(shù)；臟器發(fā)育；異速生長(zhǎng)分析

無(wú)菌動(dòng)物(germ-free，GF)是以剖腹術(shù)獲得、飼養(yǎng)在隔離器內(nèi)，利用現(xiàn)代檢查技術(shù)未能檢出微生物的動(dòng)物。由于多數(shù)嚙齒類模型在復(fù)制大型動(dòng)物的疾病的臨床表現(xiàn)可靠性低[1]，大型無(wú)菌動(dòng)物(豬)被認(rèn)為是研究人類的胃腸道、免疫以及大腦發(fā)育等影響因素的首選非靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型[2-4]。目前，無(wú)菌豬已用于腸出血性大腸桿菌感染[5]、艱難梭菌感染[6]等研究；或與菌群移植技術(shù)結(jié)合，用于研究腸道菌群與環(huán)境間關(guān)系的研究[7]。此外，無(wú)菌豬模型也被用于評(píng)估輪狀病毒疫苗免疫原性和保護(hù)效果[8]。

臨床前安全性評(píng)價(jià)研究結(jié)果的準(zhǔn)確和可靠性，是保證新型藥物、疫苗、益生類產(chǎn)品安全、有效、可控性開發(fā)的基本條件之一。但實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系、個(gè)體差異、遺傳背景以及實(shí)驗(yàn)室評(píng)估方法等存在差異，為此，建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生理指標(biāo)數(shù)據(jù)背景資料必不可少。如詹純列等[9]針對(duì)SPF小型豬開展了血液學(xué)和尿常規(guī)等指標(biāo)的測(cè)定。類似地，開展無(wú)菌豬血液常規(guī)、血液生化、主要臟器生長(zhǎng)發(fā)育等指標(biāo)數(shù)據(jù)資料的收集與分析，能為以無(wú)菌豬為基礎(chǔ)的研究與臨床應(yīng)用提供客觀的科學(xué)依據(jù)。本研究對(duì)同日齡的無(wú)菌級(jí)豬(GF)和普通級(jí)豬(CV)的生長(zhǎng)、血液學(xué)及血液生化指標(biāo)、血液免疫球蛋白、臟器發(fā)育等多項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，為GF豬的使用提供基礎(chǔ)參考。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)?zāi)肛i(子宮剖腹術(shù))：選用健康后備太湖母豬(編號(hào)346)，配種太湖公豬編號(hào)375(體重 > 200kg)，購(gòu)自榮昌縣樹德養(yǎng)豬場(chǎng)(種畜禽生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)許可證(渝榮)23150004)，地址為重慶市榮昌縣昌州街道石河村二組。配種時(shí)間2015年8月6日，預(yù)產(chǎn)期為2015年11月28日。剖腹產(chǎn)手術(shù)時(shí)間：2015年11月23日上午11時(shí)起。無(wú)菌條件下，選出4頭體重相似的無(wú)菌仔豬進(jìn)入隔離器內(nèi)飼喂，直至25日齡。其余15頭仔豬剪耳號(hào)后，由普通級(jí)母豬(編號(hào)379)代哺至25日齡。

無(wú)菌級(jí)仔豬(GF組)：共 4頭，3母1公，由重慶市畜牧科學(xué)院無(wú)菌豬培育平臺(tái)提供。普通級(jí)仔豬(CV組)：25日齡時(shí)，選擇4頭體重相似個(gè)體(3母1公)，由重慶市畜牧科學(xué)院石河實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基地提供。由本實(shí)驗(yàn)室和重慶市榮永總醫(yī)院按照GB-14926.4-2001標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)動(dòng)物糞便和生活環(huán)境標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果符合無(wú)菌要求。

1.1.2飼養(yǎng)

動(dòng)物飼養(yǎng)在隔離系統(tǒng)中【SYXK(渝)2011-0001】，潔凈度為100級(jí)[10]，室溫22℃～28℃，濕度40%～70%，光照12h/d，動(dòng)物自由采食和飲水。配方奶粉由60Co-γ線源輻照滅菌、飲用酸化水經(jīng)高溫高壓滅菌處理(pH=2～3)。同窩4頭普通級(jí)仔豬飼養(yǎng)在普通級(jí)動(dòng)物房，日常飼養(yǎng)管理遵循豬場(chǎng)內(nèi)制度施行。

1.2方法

1.2.1樣品采集

采樣前12h，動(dòng)物禁食不禁水，前腔靜脈采血?？鼓齽┦褂们闆r為：血常規(guī)測(cè)定(EDTA-K2抗凝管)、血生化指標(biāo)測(cè)定(肝素鈉抗凝管)、血中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM(無(wú)抗凝劑)。其中，血常規(guī)和血生化測(cè)定由重慶市永榮總醫(yī)院當(dāng)天完成測(cè)定(BC-6900全自動(dòng)五分類血細(xì)胞分析儀，深圳邁瑞；AU-680全自動(dòng)生化分析儀，貝克曼公司)，按照該醫(yī)院血液檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢測(cè)。

免疫球蛋白測(cè)定：Elx50微孔板全自動(dòng)洗板機(jī)(BioTek)、Epoch微孔板分光光度計(jì)(BioTek)；測(cè)定使用試劑盒為IgA(Pig)ELISAkit(KA2038)、IgM(Pig)ELISAKit(KA2039)、IgG(Pig)ELISAkit(KA2016)，Abnova公司。

1.2.2測(cè)定指標(biāo)

血常規(guī)指標(biāo)：白細(xì)胞總數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞百分比(Neu%)、淋巴細(xì)胞百分比(LYM%)、單核細(xì)胞百分比(MON%)、嗜酸性粒細(xì)胞百分比(Eos%)、嗜堿性粒細(xì)胞(BAS%)、中性粒細(xì)胞數(shù)目(NEU)、淋巴細(xì)胞數(shù)目(LYM)、單核細(xì)胞數(shù)目(MON)、嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)、嗜堿性粒細(xì)胞(BAS)、紅細(xì)胞數(shù)目(RBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-C)、紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差(RDW-S)、血小板(PLT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、血小板容積(PCT)。

血生化指標(biāo)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶(GGT)、堿性磷酸酶(ALP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST/ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、白球比(A/G)、總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、間接膽紅素(IDBIL)、膽堿酯酶(CHE)、尿素(BUN)、肌酐(CREA)、尿酸(UA)、總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、全程C反應(yīng)蛋白(CRP)、葡萄糖(GLU)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)。

1.2.3豬臟器測(cè)定

放血處死后立即解剖，分離心、肝、脾、肺、腎、胃、腸道、淋巴結(jié)等臟器稱濕重，并計(jì)算其臟器指數(shù)。器官指數(shù)(g/kg)=各器官濕重/仔豬體重 × 100%。

異速生長(zhǎng)方程：Y=aXb，其中X為體重，Y為各器官重量，a表示異速生長(zhǎng)常數(shù)，b表示異速生長(zhǎng)指數(shù)；X與Y之間的關(guān)系主要取決于b值的大小[11, 12]。

1.3數(shù)據(jù)整理與分析

Excel統(tǒng)計(jì)分析各指標(biāo)的測(cè)定值，計(jì)算每個(gè)表型性狀的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。T檢驗(yàn)進(jìn)行GF豬與CV豬各性狀的差異顯著性分析。

異速生長(zhǎng)模型以冪函數(shù)方程(Y=aXb)計(jì)算，并以相關(guān)指數(shù)R2最大及殘差平方和最小最小作為曲線擬合標(biāo)準(zhǔn)，并求出器官重與體重的拐點(diǎn)。

Excel對(duì)豬IgA、IgM和IgG標(biāo)準(zhǔn)品擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算IgA、IgM和IgG的濃度；T檢驗(yàn)比較在GF豬與CV豬血清中濃度差異。

2　結(jié)果

2.1GF豬與CV豬的血液學(xué)檢查結(jié)果

2.1.1血常規(guī)測(cè)定結(jié)果

比較發(fā)現(xiàn)，GF豬多項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)與CV豬差異有顯著性(見表1)。其中，在WBC、MON與MON%、EOS與EOS%、BAS與BAS%、HGB、HCT、RBC、PCT、PLT這12項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)上，GF豬低于CV豬(P<0.05)。血液中僅LYM、MCV、MCH、MCHC、RDW-S、RDW-C指標(biāo)上，GF豬與CV豬差異無(wú)顯著性(P>0.05)。和豬血常規(guī)參考值相比，GF豬血液的HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC都低于豬的參考值范圍；PLT指標(biāo)上，GF豬與與CV豬差異達(dá)到顯著水平(P=0.04)，且高于豬參考值。無(wú)論腸道內(nèi)是否存在微生物，25日齡太湖豬在MON、MON%、PDW指標(biāo)上都明顯高于2～6月齡太湖豬。

表1　25日齡GF豬與CV豬的血常規(guī)指標(biāo)比較

注：/表示在醫(yī)院檢查報(bào)告單上未顯示該參考值。*表示為2～6月齡太湖豬(性別不限)的血常規(guī)測(cè)定值，引用至《太湖豬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化的初步研究——太湖豬血液生理指標(biāo)測(cè)定與分析》[13]。

Note. /representsnoreferencevalueshownintheMedicalExaminationReportbytheHospital.*Thehematologicalparametersof2-to6-month-oldpigs,whichwerecitedfromthejournalarticlePreliminary research on experimental animalization of Taihu pig-Detection and analysis of blood physiological parameters in Taihu pig[13].

2.1.2豬血液生化指標(biāo)測(cè)定

在測(cè)定的25項(xiàng)血生化指標(biāo)中，CV豬血清中ALT、GGT、ALP含量高于CV豬血清內(nèi)含量(P<0.05)；而TP、ALB、GLO、BUN、UA、CHOL、TG、HDL這8項(xiàng)指標(biāo)在GF豬血清內(nèi)含量低于CV豬，差異有顯著性(P<0.05，見表2)。

2.1.3豬血清免疫球蛋白測(cè)定

血清中IgA、IgG、IgM測(cè)定結(jié)果(見表3)顯示，GF豬血清中IgA和IgG表達(dá)量分別為(399.48±71.59)ng和(1406.60±146.78)ng，高于CV豬的表達(dá)量(P<0.05)；CV豬血清中IgM表達(dá)量則高于GF豬，為(142.52±13.55)ng(P<0.05)。

表2　25日齡GF豬與CV豬各血液生化指標(biāo)的比較

表3　ELISA檢測(cè)無(wú)菌豬血清中IgA、IgG和IgM的含量

注：*ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果顯示IgA和IgG表達(dá)量在無(wú)菌豬和普通級(jí)豬兩組間差異分別達(dá)到顯著性水平(P<0.05)，而無(wú)菌豬血清中IgM表達(dá)量低于普通級(jí)豬，且差異達(dá)到顯著性水平(P<0.05)。

Note.*TheresultofELISAantigendetectionshowedthattheexpressionofIgAandIgGintheserumbetweenGFgroupandCVgrouphadasignificantdifference(P<0.05),whiletheexpressionofIgMintheserumbetweenGFpigletswassignificantlylowerthanthatinCVpiglets’serum(P<0.05).

2.2豬臟器指標(biāo)測(cè)定

主要臟器稱重結(jié)果顯示，GF豬平均活體重為(2.61±0.42)kg，CV豬平均活體重為(4.82±0.69)kg，兩組間活體重差異達(dá)到極顯著(P<0.01)。GF豬平均體長(zhǎng)為(34.50±3.53)cm、胸圍為(32.25±3.01)cm，低于CV豬平均體長(zhǎng)(45.50±3.00cm，P<0.01)和胸圍(38.25±1.50)cm，且差異達(dá)顯著水平(P<0.05)。

各項(xiàng)臟器濕重中，GF豬與CV豬差異存在顯著性(P<0.05)，尤其體現(xiàn)在心肺、胃、腸道濕重上。比較臟器指數(shù)發(fā)現(xiàn)，GF豬心肺指數(shù)、肝指數(shù)、脾指數(shù)以及胃指數(shù)與CV豬差異無(wú)顯著性(P > 0.05)。GF豬與CV豬的腎指數(shù)差異達(dá)到顯著性水平(P<0.05)，而腸指數(shù)差異達(dá)到極顯著水平(P=0.02)。

表4　GF豬與CV豬各個(gè)臟器指標(biāo)的測(cè)定

注：腸道包括十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸和直腸的總重量。/ 表示對(duì)應(yīng)的項(xiàng)目不存在擬合公式。

Note.Gutrepresentsthetotalwetweightofduodenum,jejunum,ileumandcolon. /Noallometricequationforthecorrespondingindex.

注：A：普通級(jí)(CV)豬腸內(nèi)腸系膜淋巴結(jié)明顯存在；B：無(wú)菌級(jí)(GF)豬缺乏腸系膜淋巴結(jié)。圖1　不同微生物學(xué)等級(jí)影響豬腸內(nèi)腸系膜淋巴結(jié)的存在Note. A: Mesenteric lymph nodes are present in a gut of CV pig; B: No mesenteric lymph node is observed in a GF pig.Fig.1　Different microbiological background affected the presence of mesenteric lymph nodes in the gut of Taihu piglets

從表4中分析可知GF豬的內(nèi)臟器官的早熟性順序是：脾 > 胃 > 心肺 >肝 > 腎 > 腸道。若以異速生長(zhǎng)系數(shù)b值為準(zhǔn)，則無(wú)菌豬的心肺、脾和胃屬早熟的器官，肝屬中熟器官，而腎和腸道則屬晚熟的器官。而CV豬內(nèi)臟器官的早熟性順序?yàn)椋盒姆?> 腸道 > 胃 > 脾> 肝 > 腎。同樣地，CV豬的心肺、胃和腸道為早熟的器官，肝和脾則為中熟的器官，腎為晚熟的器官。另外，微生物學(xué)質(zhì)量等級(jí)影響了豬腸系膜淋巴結(jié)的存在。25日齡無(wú)菌豬腸道內(nèi)缺少腸系膜淋巴結(jié)，而CV豬腸道內(nèi)腸系膜淋巴結(jié)明顯存在(見圖1)。

3　討論

3.1無(wú)菌狀態(tài)對(duì)仔豬血液指標(biāo)的影響

大型無(wú)菌動(dòng)物模型與糞便移植技術(shù)共同推動(dòng)菌群與人和動(dòng)物疾病的研究。因此，獲得無(wú)菌豬、建立其血液學(xué)參考指標(biāo)是本單位無(wú)菌豬培育平臺(tái)現(xiàn)階段研究重點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液學(xué)參數(shù)能反映機(jī)體各組織、器官的功能狀態(tài)。一旦機(jī)體既能出現(xiàn)問(wèn)題，亦會(huì)在血液上反映出來(lái)。血常規(guī)作為疾病診斷的必要檢測(cè)手段之一。表1數(shù)據(jù)顯示，GF豬血液中多項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)都顯著低于同窩、同日齡CV豬；僅在LYM、MCV、MCH、MCHC、RDW-SY指標(biāo)上未出現(xiàn)明顯差異。

值得注意，GF豬和CV豬血液中多項(xiàng)指標(biāo)都未在豬和人的參考值范圍內(nèi)。這除了與醫(yī)院的檢測(cè)儀器、試劑和檢測(cè)方法有關(guān)外，也與豬品種等因素有關(guān)，也提示我們僅靠現(xiàn)有的豬血液參考值并不能有效地反映GF豬組織、器官的功能狀態(tài)。因此，在GF豬的培育過(guò)程中，及時(shí)完整地收集每批次動(dòng)物血常規(guī)和血生化指標(biāo)，建立GF豬血液學(xué)參數(shù)是基礎(chǔ)而重要工作之一。

血液生化指標(biāo)是動(dòng)物機(jī)體代謝過(guò)程的內(nèi)在反映，可作為檢測(cè)機(jī)體健康、生產(chǎn)性能以及適應(yīng)性的重要參考依據(jù)。表2數(shù)據(jù)可知，25日齡GF豬血清中ALT、GGT和ALP含量高于CV豬血清，差異達(dá)到顯著性水平(P<0.05)，而在TP、ALB、GLO、BUN、UA、CHOL、TG、HDL這8項(xiàng)指標(biāo)上與CV豬存在顯著性差異。研究指出，尿素是氨基酸代謝的最終產(chǎn)物，血清中尿素含量主要受蛋白質(zhì)攝入量和肝分解代謝能力的影響[14]。GF豬血清尿素含量顯著低于同日齡CV豬以及斷奶階段CV豬[15, 16]，這說(shuō)明GF豬對(duì)蛋白質(zhì)的代謝能力低于CV豬，且可能受年齡的影響小。血清中GLO指標(biāo)反映了機(jī)體抗病力，降低則易受腸道病原微生物的侵襲。GF豬血清中GLO顯著低于CV豬，這表明無(wú)菌狀態(tài)下仔豬的自身防御能力低。這與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GF豬腸系膜淋巴結(jié)缺失的結(jié)果(見圖1)相吻合。

3.2無(wú)菌狀態(tài)對(duì)豬血液中免疫球蛋白表達(dá)量影響

新生仔豬血清與初乳中都含有低數(shù)量的免疫球蛋白，代表了它們建立在抵抗自身抗原的多特異性和反應(yīng)性基礎(chǔ)上的未免疫抗體組庫(kù)[20]。Markowska-Daniel等[21]檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，10日齡仔豬血清中IgA、IgM和IgG濃度已達(dá)到毫克級(jí)別，且可能與提高仔豬自身免疫有關(guān)。本次試驗(yàn)中，25日齡GF豬和CV豬血清中，三種免疫球蛋白的含量均在納克級(jí)別，僅IgG濃度達(dá)到了微克級(jí)別。這說(shuō)明血清內(nèi)免疫球蛋白濃度與豬品種有關(guān)。而GF豬血清內(nèi)IgA和IgG濃度高于CV豬(P<0.05)，IgM量低于CV豬血清，差異達(dá)到顯著性水平(P<0.05)。杜凌等[22]測(cè)定出1段嬰兒配方奶粉中IgG含量為45.90mg/100g奶粉。而本試驗(yàn)整個(gè)無(wú)菌豬培育過(guò)程都采用嬰兒奶粉(0-6月齡)作為保證動(dòng)物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ)，這很可能是GF豬血清中相對(duì)高含量免疫球蛋白的原因之一。

而腸道菌群會(huì)刺激保護(hù)性免疫應(yīng)答反應(yīng)，以確保宿主-微生物互利共生。因此腸道共生菌群的存在使得黏膜免疫動(dòng)態(tài)研究成為難題。IgA是哺乳類動(dòng)物黏膜表面分泌的主要抗體，尤其在腸道內(nèi)。Hapfelmeier等[23]利用無(wú)菌小鼠發(fā)現(xiàn)了高特異性抗共生IgA反應(yīng)，而菌群定植小鼠則快速消除了這一反應(yīng)。這可能也是解釋本實(shí)驗(yàn)中GF豬血清中較高表達(dá)量免疫球蛋白存在的原因之一。

3.3無(wú)菌狀態(tài)對(duì)豬器官發(fā)育的影響

動(dòng)物的臟器重量和臟器指數(shù)可一定程度體現(xiàn)其功能的強(qiáng)弱。同日齡的GF豬無(wú)論在體長(zhǎng)、胸圍還是體重等生長(zhǎng)指標(biāo)上，都顯著低于CV豬。而這一情況同樣反映在了各臟器的發(fā)育上，尤其表現(xiàn)在心肺、胃和腸道的發(fā)育。研究認(rèn)為內(nèi)臟器官的發(fā)育早晚直接影響其他部位的生長(zhǎng)發(fā)育快慢。一般，體重相近動(dòng)物，心臟大小和重量與運(yùn)動(dòng)量有關(guān)。異速生長(zhǎng)系數(shù)b顯示，GF豬的內(nèi)臟器官中腸道是晚熟的器官，而在CV豬上則為早熟的器官；脾在GF豬上表現(xiàn)為早熟的器官而在CV豬上為中熟的器官。研究指出細(xì)菌對(duì)動(dòng)物的免疫器官發(fā)育具有刺激調(diào)節(jié)作用[24]。由此可見，微生物學(xué)等級(jí)差異影響了豬內(nèi)臟器官發(fā)育的早熟性順序，尤其是與免疫有關(guān)的臟器。

無(wú)菌豬在菌群與疾病、營(yíng)養(yǎng)、代謝等關(guān)系研究均有廣泛的應(yīng)用前景。因此，在國(guó)內(nèi)建立以GF豬資源開發(fā)及技術(shù)服務(wù)為導(dǎo)向的無(wú)菌豬工程中心是整個(gè)課題組共同的目標(biāo)。本次研究測(cè)定表明了在生長(zhǎng)、血液以及內(nèi)臟器官等多個(gè)發(fā)育指標(biāo)上，GF豬與CV豬都存在顯著差異。

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Measurement of body weight, blood parameters and mainorgancoefficientsofgerm-freepiglets

SUNJing1，2，3,DULei4,DINGYu-chun1，2，3,CAOHao-ran1，2，3,WUMeng1，2，3,LINBao-zhong1，2，3,ZHANGShi-hua1,LIUZuo-hua1，2，3*，GELiang-peng1，2，3*

(1.ChongqingAcademyofAnimalScience, 2.KeyLaboratoryofPigIndustryScienceofAgricultureMinistry,3.ChongqingKeyLaboratoryofPigIndustryScience,RongchangChongqing402460,China;4.DepartmentofAnimalNutritionandFeedScience,SouthwestUniversityRongchangCampus,RongchangChongqing402460)

ObjectiveToestablishthebackgroundinformationofphysiologicalparametersforgerm-free(GF)Taihupiglets.MethodsInthisstudyweselected25daysoldGFTaihupigletsand4conventional(CV)littermates,themaleandfemaleratiowas1∶3,tomeasurethenormalclinicalvaluesofhematologyandserumbiochemistry,immunoglobulinconcentrationandmainorgancoefficients.TheanalysisofrelativegrowthsofmainorganweighttobodyweightwasconductedintheTaihuGFandCVpigsbyallometricscalingmodel.Results(1)Twelvehematologicalparametersand8bloodbiochemicalparametersintheGFpigletsweresignificantlylowerthanthoseinCVpigs(P<0.05). (2)Theaveragebodyweight,IgMconcentrationofGFpigsandCVpigshadsignificantdifference(P<0.05),andnomesentericlymphnodeswerefoundintheGFpigs. (3)ThegutweighthadthelargestallometricassociationwithbodyweightintheGFpigs,whilespleenweighthasthelargestallometricassociationwithbodyweightintheCVpigs.BoththeweightofheartandstomachinCVandGFpigshadanegativeallometricassociationwithbodyweight(allometriccoefficientb<1),respectively.ConclusionsDifferentmicrobecontrolgradesaffectthebodyweight,hematologyandserumbiochemistry,expressionofimmunoglobulinanddevelopmentofmainorgansinlaboratorypigs.

Germ-freepig；Hematologicalparameters;Organcoefficient;Allometricanalysis

GELiang-peng,E-mail:geliangpeng1982@163.com；LIUZuo-hua,Email:liuzuohua66@163.com

國(guó)家“863”計(jì)劃(2014AA021602)；重慶市國(guó)際合作項(xiàng)目(CSTC2013gjhz80002)；重慶市基礎(chǔ)與前沿研究(cstc2013jcyjC80001)；重慶市農(nóng)發(fā)資金(12402)資助項(xiàng)目；無(wú)菌動(dòng)物應(yīng)用示范平臺(tái)(cstc2015pt-kjyfsf0024)。

孫靜(1985-)，女，博士，腸道微生物，研究方向：無(wú)菌動(dòng)物的培育與應(yīng)用。E-mail：sunjing85026@163.com

葛良鵬(1982-)，男，研究員，研究方向：動(dòng)物資源創(chuàng)新開發(fā)利用。E-mail:geliangpeng1982@163.com；劉作華，男，研究員，研究方向：地方豬資源保護(hù)與開發(fā)利用。

研究報(bào)告

Q95-33

A

1005-4847(2016)04-0388-07

10.3969/j.issn.1005-4847.2016.04.010

2016-01-28