乳腺癌組織中Shh基因表達(dá)變化及其與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

陳晶，趙璐，宋牧，孫國(guó)輝，木拉提·庫(kù)爾班（新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，烏魯木齊830000）

乳腺癌組織中Shh基因表達(dá)變化及其與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

陳晶，趙璐，宋牧，孫國(guó)輝，木拉提·庫(kù)爾班
（新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，烏魯木齊830000）

目的 觀察乳腺癌組織中Shh基因表達(dá)變化并探討其與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系。方法 留取152例經(jīng)手術(shù)治療的乳腺癌患者腫瘤及癌旁組織，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)乳腺癌及癌旁組織標(biāo)本中Shh基因表達(dá)，患者隨訪截止日期為2015年2月28日，以乳腺癌組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量的中位值2.47為界值，將患者分為高表達(dá)組89例和低表達(dá)組63例，采用Kaplan-Meier生存分析法分析患者術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間。結(jié)果 乳腺癌、癌旁組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為2.48±0.43、1.25±0.29，兩者比較，P＜0.05；乳腺癌組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量與年齡和人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)有關(guān)（P均＜0.05），年齡越小、人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)陽(yáng)性，Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量越高；非復(fù)發(fā)組、復(fù)發(fā)組乳腺癌組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.98±0.42、2.87±0.47，兩組比較，P＜0.05；高表達(dá)組、低表達(dá)組術(shù)后復(fù)發(fā)率分別為23.6%、12.7%，兩組比較，P＜0.05；Kaplan-Meier生存分析顯示，高表達(dá)組、低表達(dá)組患者中位無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間分別為29、59個(gè)月，兩組比較，P＜0.05。結(jié)論 Shh在乳腺癌組織中呈高表達(dá)，且與術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)，Shh高表達(dá)可顯著縮短患者術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間。

乳腺腫瘤；Shh基因；復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，隨著診療技術(shù)的發(fā)展，患者預(yù)后已得到較大改善，術(shù)后5年生存率顯著提高［1］，然而，目前乳腺癌發(fā)生機(jī)制尚未完全清楚，且對(duì)于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及三陰性乳腺癌治療效果有效［2］。Shh信號(hào)通路作為干細(xì)胞自我更新的重要調(diào)控通路，在干細(xì)胞增殖、分化及胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用［3］。研究［4］表明，Shh信號(hào)通路異常表達(dá)與多種惡性腫瘤發(fā)生、進(jìn)展有關(guān)，Shh基因作為Shh信號(hào)通路主要參與者，與該信號(hào)通路激活關(guān)系密切。2005年2月～2006年2月，我們采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)乳腺癌及癌旁組織標(biāo)本中Shh基因表達(dá)，探討其與乳腺癌復(fù)發(fā)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2005年2月～2006年2月于我院經(jīng)手術(shù)治療的乳腺癌患者152例，患者均經(jīng)術(shù)后病理學(xué)檢查確診，手術(shù)切除乳腺癌及癌旁（距離癌組織≥5 cm）組織標(biāo)本152例份均保存于液氮中。年齡27～74（53.2±9.8）歲，患者隨訪截止日期2015年2月28日，中位隨訪時(shí)間73（4～112）個(gè)月，隨訪信息主要通過(guò)病歷登記及電話(huà)獲得?；颊吲R床病理特征資料及預(yù)后信息均齊全，其中29例患者在隨訪期間出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，作為復(fù)發(fā)組，123例患者未出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，作為非復(fù)發(fā)組。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 乳腺癌及癌旁組織標(biāo)本中Shh基因表達(dá)檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法。取乳腺癌或癌旁組織，研磨后，細(xì)胞裂解液裂解后，用TRIzol提取試劑盒提取總RNA，應(yīng)用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)樣品，取A260/A280＞1.80樣品繼續(xù)進(jìn)行檢測(cè)。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄為第一模板鏈cDNA，以cDNA為模板用PCR試劑盒進(jìn)行PCR，Shh及其內(nèi)參引物序列分別為：Shh引物：上游：5′-ACCGAGGGCTGGGACGAAGA-3′，下游：5′-ATTTGGCCGCCACCGAGTT-3′，β-actin引物：上游：5′-CATCCTGGGTCTGGACCTGG-3′，下游：5′-ATTTGGGGTGCACGATGGAGGG-3′。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3 min，94℃變性60 s，56℃30 s，74℃30 s，連續(xù)進(jìn)行402循環(huán)。每個(gè)樣本均設(shè)3個(gè)復(fù)孔。以β-actin為內(nèi)參，按照2-ΔΔCt法獲得Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，采用Kaplan-Meier生存分析法對(duì)患者術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間進(jìn)行分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Shh基因在乳腺癌和癌旁組織中表達(dá)比較乳腺癌及癌旁組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為2.48±0.43、1.25±0.29，兩者比較，P＜0.05（t= 31.312）。

2.2 Shh mRNA表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 乳腺癌組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量與臨床分期、T分期、N分期、雌激素受體表達(dá)和孕激素受體表達(dá)無(wú)關(guān)（P均＞0.05），而與年齡和人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)有關(guān)（P均＜0.05），年齡越小、人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)陽(yáng)性，Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量越高。見(jiàn)表1。

表1 Shh mRNA表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系（±s）

表1 Shh mRNA表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系（±s）

臨床病理特征nShh mRNA相對(duì)表達(dá)量t/FP年齡（歲）≥60422.09±0.28 36～59962.75±0.3417.3940.000 ≤35143.34±0.46臨床分期Ⅰ期692.46±0.39Ⅱ期602.48±0.451.1720.153Ⅲ期232.49±0.47 T分期pT1792.45±0.41 pT2562.46±0.391.0950.274 pT3152.49±0.46 pT422.51±0.47 N分期pN0782.44±0.38 pN1572.47±0.420.8620.627 pN2132.49±0.47 pN342.48±0.45雌激素受體表達(dá)陽(yáng)性892.47±0.420.6720.835陰性632.49±0.48孕激素受體表達(dá)陽(yáng)性782.46±0.410.9530.575陰性742.50±0.47人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)陽(yáng)性473.04±0.4911.8720.000陰性1051.96±0.35

2.3 Shh mRNA在乳腺癌組織中表達(dá)與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系 非復(fù)發(fā)組、復(fù)發(fā)組乳腺癌組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.98±0.42、2.87±0.47，兩組比較，P＜0.05（t=19.351）。

2.4 Shh在乳腺癌組織中表達(dá)對(duì)患者術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間的影響 以乳腺癌組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量的中位值2.47為界值，將152例患者分為高表達(dá)組89例和低表達(dá)組63例，高表達(dá)組患者術(shù)后復(fù)發(fā)率為23.6%，低表達(dá)組患者術(shù)后復(fù)發(fā)率為12.7%，Kaplan-Meier生存分析顯示，高表達(dá)組患者中位無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間為29（4～95）個(gè)月，低表達(dá)組患者中位無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間為59（5～112）個(gè)月，log rank檢驗(yàn)顯示，兩組患者無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.893，P=0.01），見(jiàn)圖1。

圖1 Shh在乳腺癌組織中表達(dá)對(duì)患者術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間的影響

3 討論

乳腺癌是對(duì)女性健康威脅較大的惡性腫瘤，腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移是造成患者預(yù)后不良的重要原因［5］，目前乳腺癌細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的具體作用機(jī)制尚未完全清楚。Shh信號(hào)通路包括分泌型信號(hào)糖蛋白Shh和2個(gè)跨膜蛋白受體組成的復(fù)合體，以及下游Gli效應(yīng)蛋白［6］，一般情況下，Shh不存在時(shí)，該通路處于抑制狀態(tài)，當(dāng)Shh存在時(shí)，會(huì)導(dǎo)致該信號(hào)通路激活，引發(fā)Gli蛋白大量表達(dá)而調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化過(guò)程，當(dāng)Shh信號(hào)通路出現(xiàn)異常激活時(shí)，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖異常而引發(fā)腫瘤發(fā)生［7］。有研究［8］指出，Shh蛋白在胃癌組織中呈高表達(dá)，且與腫瘤浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究顯示，乳腺癌組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量遠(yuǎn)高于癌旁組織中，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明Shh基因在乳腺癌組織中呈異常高表達(dá)，可能與腫瘤發(fā)生有關(guān)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量與臨床分期、T分期、N分期、雌激素受體表達(dá)和孕激素受體表達(dá)無(wú)關(guān)，而與年齡和人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)有關(guān)，年齡越小、人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)陽(yáng)性，Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量越高，而年齡小、人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體過(guò)表達(dá)則往往預(yù)示患者預(yù)后不良［9，10］，提示Shh在乳腺癌組織中表達(dá)可能與患者預(yù)后有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，非復(fù)發(fā)組乳腺癌組織中Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量遠(yuǎn)低于復(fù)發(fā)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明Shh在乳腺癌組織中表達(dá)與乳腺癌患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)關(guān)系密切。為進(jìn)一步分析Shh在乳腺癌組織中表達(dá)與患者術(shù)后復(fù)發(fā)之間的關(guān)系，以Shh mRNA相對(duì)表達(dá)量的中位值2.47為界值，將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)祖，結(jié)果顯示，高表達(dá)組患者術(shù)后復(fù)發(fā)率高于低表達(dá)組，Kaplan-Meier生存分析顯示，高表達(dá)組患者中位無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間遠(yuǎn)低于低表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明Shh在乳腺癌組織中高表達(dá)加速了患者術(shù)后復(fù)發(fā)，顯著縮短了患者無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間，不利于患者預(yù)后，提示Shh可作為乳腺癌患者早期復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)指標(biāo)［11］。

綜上所述，Shh在乳腺癌組織中呈高表達(dá)，且與患者術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)，Shh高表達(dá)可顯著縮短患者術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間，Shh可能對(duì)乳腺癌患者預(yù)后評(píng)估有參考意義。

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孫國(guó)輝（E-mail：694826581@qq.com）

2015-12-05）