結(jié)腸癌組織中Mcl-1蛋白的表達變化及意義

趙靜，呂小梅，楊玉華，劉焱，劉宏遠（石家莊市第一醫(yī)院，石家莊050011）

結(jié)腸癌組織中Mcl-1蛋白的表達變化及意義

趙靜，呂小梅，楊玉華，劉焱，劉宏遠
（石家莊市第一醫(yī)院，石家莊050011）

目的 觀察Mcl-1在結(jié)腸癌組織及癌旁正常組織中的表達變化，并探討其意義。方法 選取80例結(jié)腸癌組織標(biāo)本及癌旁（距離癌組織邊緣10 cm以上）正常結(jié)腸組織標(biāo)本45例，應(yīng)用免疫組化法檢測Mcl-1蛋白表達，分析Mcl-1蛋白表達與結(jié)腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 Mcl-1蛋白在結(jié)腸癌組織及正常結(jié)腸黏膜組織中陽性表達率分別為77.5%、22.22%，兩者比較，P＜0.05。結(jié)腸癌組織中Mcl-1表達與腫瘤分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與性別、年齡及腫瘤大小無關(guān)（P均＞0.05）。結(jié)論 Mcl-1蛋白在結(jié)腸癌組織中呈高表達，檢測Mcl-1蛋白表達有助于結(jié)腸癌預(yù)后判斷。

結(jié)腸腫瘤；Mcl-1蛋白；免疫組化法

結(jié)腸癌是我國常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率較高［1］，受遺傳因素和環(huán)境因素等多種因素的影響?，F(xiàn)有治療方法包括腫瘤切除術(shù)、藥物的化療等均未徹底阻止結(jié)腸癌的自然進展過程。腫瘤的基因治療是目前研究熱點。Mcl-1是新近發(fā)現(xiàn)的凋亡調(diào)控基因［2～4］，是bcl-2家族的成員之一。Mcl-1過表達可引起在人類造血系統(tǒng)的腫瘤及多種實體瘤，Mcl-1蛋白表達下調(diào)可促進腫瘤細胞的凋亡，提示Mcl-1是人類多種腫瘤的潛在治療靶點。2015年1～4月，我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測大腸癌及其癌旁組織中抗凋亡基因Mcl-1蛋白的表達情況，探討Mcl-1在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集石家莊市第一醫(yī)院2011～2013年間手術(shù)切除的結(jié)腸癌組織標(biāo)本80例，癌旁（距離癌組織邊緣10 cm以上）正常結(jié)腸組織標(biāo)本45例作為對照。結(jié)腸癌患者中男49例、女31例。年齡35～85歲，中位數(shù)年齡60歲。所選取病例術(shù)前均未進行放化療。結(jié)腸癌的臨床病理分期對照國際抗癌聯(lián)盟腫瘤TNM分期標(biāo)準(zhǔn)完成，其中Ⅰ期4例，Ⅱ期18例，Ⅲ期32例，Ⅳ期26例。組織學(xué)分級為高分化腺癌15例，中分化腺癌27例，低分化腺癌38例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例，有轉(zhuǎn)移40例。腫瘤直徑＞5 cm者34例，≤5 cm者46例。

1.2 Mcl-1蛋白檢測方法 取結(jié)腸癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化SP法檢測Mcl-1蛋白表達。Mcl-1蛋白染色以細胞質(zhì)或細胞核中出現(xiàn)淡黃色至棕黃色顆粒為陽性，根據(jù)陽性細胞染色強度及陽性百分率分別計分，染色強度：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞百分率：每張切片隨機觀察5個視野，數(shù)500個細胞中陽性細胞所占比例，陽性細胞數(shù)＜10%計0分，10%～30%計1分，31%～60%計2分，陽性細胞≥60%為3分，兩項評分相加為綜合評分，綜合評分＞2分計為陽性，≤2分計為陰性。免疫組化結(jié)果由2位病理科醫(yī)師獨立閱片判定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。率的比較采用卡方檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Mcl-1蛋白在結(jié)腸癌組織及癌旁正常組織中的表達比較 Mcl-1蛋白在結(jié)腸癌組織和癌旁正常結(jié)腸黏膜組織中均有表達（圖1），其中80例份結(jié)腸癌組織標(biāo)本中有62例份Mcl-1蛋白陽性表達（陽性率為77.5%），45例份癌旁正常組織中有10例份Mcl-1蛋白陽性表達（陽性為22.22%），Mcl-1蛋白在結(jié)腸癌組織和癌旁正常黏膜組織中的陽性表達率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 Mcl-1蛋白表達與結(jié)腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 Mcl-1蛋白表達與結(jié)腸癌患者的性別、年齡、腫瘤大小均無明顯相關(guān)性（P均＞0.05），但與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P均＜0.05），見表1。

圖1 Mcl-1蛋白在結(jié)腸癌組織及癌旁正常結(jié)腸黏膜組織中的表達

表1 Mcl-1蛋白表達與結(jié)腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

Mcl-1是Bcl-2家族成員的抗凋亡蛋白，其在用佛波酯誘導(dǎo)人髓系白血病細胞系ML-1沿單核/巨噬細胞途徑分化過程中，作為早期誘導(dǎo)基因被首次發(fā)現(xiàn)的，Mcl-1基因定位于人染色體1q21，含有3個外顯子和2個內(nèi)顯子，其在細胞分化、凋亡中起重要作用，并在腫瘤疾病及其癌前病變中有重疊或重排現(xiàn)象［5］。Mcl-1主要功能是維持線粒體膜穩(wěn)定，抑制細胞色素C的釋放，從而促進細胞的生存，阻止細胞凋亡，其具有在包括細胞毒制劑作用等各種誘導(dǎo)細胞凋亡的條件下，延長造血細胞的生存能力，同時亦是腫瘤細胞生存的關(guān)鍵因子。利用Mcl-1 ASO可引起表達Mcl-1腫瘤細胞的凋亡，表明Mcl-1過表達可促進惡性腫瘤細胞生存。研究表明，Mcl-1蛋白表達的調(diào)控可發(fā)生在多水平上，包括轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后水平及翻譯、翻譯后水平的調(diào)節(jié)。不同的腫瘤細胞Mcl-1基因表達的調(diào)節(jié)及相關(guān)信號途徑亦不同。主要包括核內(nèi)信號途徑JAK/STAT通路、MAPK通路和胞質(zhì)內(nèi)信號傳遞通路PI-3K信號途徑。阻斷信號途徑可致細胞凋亡并能減低Mcl-1表達，提示Mcl-1可作為臨床抗腫瘤治療新的靶點［6］。

Mcl-1在許多腫瘤組織如白血病、宮頸癌、肝癌中都存在過度表達現(xiàn)象，提示，Mcl-1與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)［7］。此外，Mcl-1與多發(fā)性骨髓瘤的復(fù)發(fā)、慢性淋巴細胞白血病和結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的耐藥有關(guān)。Fleischer等［8］研究表明，肝癌組織中Mcl-1表達過量，采用PI-3K/AKT抑制劑LY294002可迅速下調(diào)肝癌細胞內(nèi)Mcl-1水平，并增加肝癌細胞對化療藥物的敏感性，提示Mcl-1與肝癌的發(fā)生和耐藥有關(guān)，并可能是肝癌基因治療的一個靶點。在正常宮頸組織向?qū)m頸癌演變過程中Mcl-1表達水平逐漸增加，此實驗結(jié)果提示Mcl-1的抗凋亡及促生長作用。Mcl-1表達水平與宮頸癌的分化負相關(guān)，這說明Mcl-1的表達檢測可為宮頸癌的預(yù)后提供參考。Saxena等［9］使用Western blotting法檢測51例初治慢性淋巴細胞性白血病（CLL）患者和16例對照者，分析了Mcl-1表達情況，發(fā)現(xiàn)經(jīng)治療完全緩解與部分緩解的患者較未緩解者Mcl-1水平明顯降低，提示Mcl-1可作為CLL潛在療效和預(yù)后的指標(biāo)。

Puma、Bim、Bcl-2等在結(jié)腸癌中的表達及意義國內(nèi)外均有相關(guān)報道［10，11］，而同為Bcl-2家族成員的Mcl-1蛋白在結(jié)腸癌中的表達國內(nèi)外研究較少且結(jié)論不一。2010年，Evita等［12］在123例結(jié)腸組織中（103例結(jié)腸癌，8例腺瘤，14例正常組織）檢測了Mcl-1和p-akt，結(jié)果顯示兩種蛋白在結(jié)腸癌中的表達均高于正常和腺瘤組織，此結(jié)果與Krajewski等［13］的研究相反，Krajewski等［13］研究結(jié)果顯示Mcl-1在結(jié)腸癌中的表達低于正常和腺瘤組織，結(jié)果產(chǎn)生分歧的原因可能是選擇偏移，即他們所選病例均是分化差的結(jié)腸癌。Evita等［12］研究還顯示，Mcl-1與腫瘤分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但筆者認(rèn)為此結(jié)果需更多的病例樣本進行證實，因為他們所選病例大部分為中分化，且僅9例有轉(zhuǎn)移。

本研究我們發(fā)現(xiàn)，Mcl-1蛋白在結(jié)腸癌組織中表達高于正常結(jié)腸黏膜組織，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義，此外Mcl-1在不同的臨床分期、不同分化程度的結(jié)腸癌組織及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中有不同程度的表達，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，此與Evita等［12］的研究結(jié)果基本一致。提示抑制Mcl-1基因的表達或阻斷調(diào)節(jié)Mcl-1基因表達的信號途徑能有效誘導(dǎo)細胞凋亡，此可能為臨床腫瘤治療提供了新的藥物干預(yù)靶點，Mcl-1蛋白檢測可能成為判斷預(yù)后的重要標(biāo)記和預(yù)測因子。

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石家莊市科學(xué)技術(shù)與發(fā)展指導(dǎo)計劃課題（141462183）。

2015-12-10）