糞便微生物粗提液修復(fù)潰瘍性結(jié)腸炎的研究

徐　敏,邊　鑫,杜金城,丁秀云,于上富,霍貴成

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué),乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,黑龍江哈爾濱 150030)

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糞便微生物粗提液修復(fù)潰瘍性結(jié)腸炎的研究

徐敏,邊鑫,杜金城,丁秀云,于上富,霍貴成*

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué),乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,黑龍江哈爾濱 150030)

研究了糞便微生物粗提液對潰瘍性結(jié)腸炎修復(fù)作用的影響。將64只健康小鼠隨機(jī)分為4組,即完全空白組(n=20)、腸炎空白組(n=20)、SASP(柳氮硫胺吡啶)組(n=12)和FMT(糞便微生物移植)組(n=12),處理組小鼠自由飲用3%葡聚糖硫酸鈉鹽(DSS)溶液8 d,建立潰瘍性結(jié)腸炎(UC)模型,并于建模第8 d,解剖完全空白組、腸炎空白組小鼠各8 只,以驗(yàn)證UC模型是否建立成功。造模后,SASP組、FMT組同時(shí)分別給予柳氮硫胺吡啶片及鼠源糞便微生物提取液干預(yù)治療4周,灌胃頻率2 d/次,然后進(jìn)行為期兩周的后續(xù)觀察,期間觀察各組小鼠表觀狀態(tài)、體重變化,結(jié)腸組織長度變化,結(jié)腸組織病理學(xué)改變,并測定各組血清IL-1β、IL-6、TNF-α的濃度變化。結(jié)果表明:與腸炎空白組小鼠相比,糞便微生物移植療法使小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平顯著降低(p<0.05),并使結(jié)腸長度及體重顯著增加,結(jié)腸組織更加完整。因此證實(shí),糞便微生物提取液對潰瘍性結(jié)腸炎具有較好的治療作用,具有應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)的潛力。

糞便微生物粗提液,潰瘍性結(jié)腸炎,結(jié)腸,血清

炎癥性腸病(IBD)是一種病因尚不十分清楚的慢性非特異性腸道炎癥性疾病,包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)[1]。我國尚缺乏IBD群體調(diào)查資料,估計(jì)UC患病率約為11.6/10萬,然而,近年來我囯U(xiǎn)C的患病人數(shù)呈明顯上升趨勢[2]。潰瘍性結(jié)腸炎臨床表現(xiàn)為腹瀉,黏液膿血便,腹痛,里急后重等,多呈反復(fù)發(fā)作的慢性病程[3]。潰瘍性結(jié)腸炎嚴(yán)重影響到患者的身體健康和生活質(zhì)量,被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一[4]。臨床上治療 UC 的藥物主要有氨基水楊酸類藥物、腎上腺糖皮質(zhì)激素類和免疫抑制劑類等[5]?？傮w來說,上述藥物治療見效快、療效好,可緩解UC患者燃眉之苦,但仍存在很多問題,如耐藥抗藥性,易引起患者頭疼、惡心,造成機(jī)體消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)異常。臨床研究表明,糞便微生物作為一種SASP的替代品,能有效治療潰瘍性結(jié)腸炎。

糞菌移植,定義為將健康機(jī)體糞便中的功能菌群,移植到患者胃腸道內(nèi),重建具有正常功能的腸道菌群,實(shí)現(xiàn)腸道及腸道外疾病的診療。糞菌移植能夠發(fā)揮確切療效的原因,是移植的人糞菌群盡可能維持了健康供者的功能腸道菌群,并最終在受者腸道內(nèi)重建適合受者的功能菌群[4]。

本研究以健康小鼠的糞便微生物提取液為目標(biāo)菌群,通過建立潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型和灌胃鼠源糞便微生物提取液方法,研究糞便微生物提取液對腸黏膜損傷的BALB/c小鼠表觀狀態(tài)、體重、結(jié)腸長度、組織病理學(xué)及血清細(xì)胞因子的影響,旨在探討糞便微生物提取液對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠疾病的治療效果。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

BALB/c小鼠,64只,雌性,清潔級,7周 購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,保持飼養(yǎng)環(huán)境溫度(23±2)℃,每天人工燈光照明12 h,標(biāo)準(zhǔn)小鼠飼料喂養(yǎng),自由飲水;IL-1β提取試劑盒,IL-6試劑盒,IL-10試劑盒購自武漢博士德生物科技有限公司;甲醛溶液天津博迪化工股份有限公司。

電子顯微鏡Motic;注射器江蘇治宇醫(yī)療器械有限公司;液氮罐成都金鳳液氮容器有限公司;眼科解剖盒沈陽市久鳴鋁制品廠。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1糞便微生物提取液的制備觀察小鼠精神狀態(tài)、毛發(fā)情況、排便頻率、糞便形態(tài)等信息,篩選出目標(biāo)小鼠,并對其進(jìn)行標(biāo)記,作為糞便微生物移植捐贈(zèng)組小鼠。制備時(shí),將捐贈(zèng)組小鼠的新鮮晨便標(biāo)本置于無菌厭氧容器中,冰上保存,2 h內(nèi)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理,按7∶15(g/mL)的比例將糞便溶于無菌PBS中,分別用2.0、1.0、0.5、0.25 mm的不銹鋼篩過濾,6000×g、15 min離心,取菌體,無菌PBS清洗3次,重置于PBS溶液中,4 ℃冰箱保存[6]。

1.2.2動(dòng)物模型的建立將64只BALB/c雌鼠隨機(jī)分成4組,Ⅰ完全空白組(20只)、Ⅱ腸炎空白組(20只)、Ⅲ SASP組(12只)和Ⅳ FMT組(12只)。將3%葡聚糖硫酸鈉(DSS)溶于水瓶中,讓Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組小鼠自由飲用8 d,以誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型[7],然后第8 d,分別解剖完全空白組、腸炎空白組小鼠8只(參考ELISA實(shí)驗(yàn)血清的用量),摘眼球取血,并取小鼠結(jié)腸組織,記錄小鼠結(jié)腸組織長度;然后以小鼠體重變化、表觀狀況、結(jié)腸長度、病理學(xué)等為指標(biāo),驗(yàn)證小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型是否建立成功。Ⅰ完全空白組小鼠飲用滅菌蒸餾水。

1.2.3實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)本研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下:Ⅰ完全空白組(20只):正常飲食,無特殊處理;Ⅱ腸炎空白組(20只):建模后,按照0.3 mL PBS/只進(jìn)行灌胃,灌胃持續(xù)4周,灌胃頻率1次/2 d;Ⅲ SASP組(12只):DSS造模后,按照0.0092 g SASP溶液/0.3 mL PBS/只進(jìn)行灌胃,灌胃持續(xù)4周,灌胃頻率1次/2天;Ⅳ FMT組(12只):造模后,按照0.14 g糞便微生物/0.3 mL PBS/只進(jìn)行灌胃,灌胃持續(xù)4周,灌胃頻率1次/2 d。灌胃期間每天記錄小鼠體重、糞便性狀、毛發(fā)情況、隱血等[7];灌胃結(jié)束后,每組分別處死小鼠8只,摘眼球取血,并取小鼠結(jié)腸組織,記錄小鼠結(jié)腸組織長度;并對小鼠結(jié)腸組織行HE染色,記錄病理學(xué)指標(biāo)圖片;每組剩余的小鼠進(jìn)行后續(xù)觀察,2周后同上進(jìn)行處理。本研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)圖如圖1。

圖1　實(shí)驗(yàn)方案Fig.1　The experimental design

1.2.4小鼠的表觀觀測在小鼠灌胃期間(如圖1,2～6周)及后續(xù)觀察期間(如圖1,6～8周),每天觀察并記錄各組小鼠生長狀態(tài),包括體重變化、進(jìn)食情況、外觀毛發(fā)、糞便性狀及糞便隱血、便血情況。

1.2.5小鼠結(jié)腸組織長度的變化灌胃結(jié)束后,各組隨機(jī)選取待解剖小鼠,對其腹腔注射20%氨基甲酸乙酯麻醉(6 mL/kg),固定于解剖臺(tái)上,眼球取血分離血清,脫頸處死小鼠,然后沿腹部正中切口,將結(jié)腸從盲腸、直腸中間剪開,快速剖取結(jié)腸,觀察各組小鼠結(jié)腸的變化,測量整個(gè)結(jié)腸長度[8]。后續(xù)觀察結(jié)束后,進(jìn)行同樣的處理。

1.2.6病理組織學(xué)分析小鼠腸黏膜組織灌胃結(jié)束后,各組隨機(jī)選取待解剖小鼠,對其腹腔注射20%氨基甲酸乙酯麻醉(6 mL/kg),固定于解剖臺(tái)上,眼球取血分離血清,脫頸處死小鼠,然后沿腹部正中切口,將結(jié)腸從盲腸、直腸中間剪開,快速剖取結(jié)腸,沿著腸系膜剪開,取出肛門至盲腸末端的整個(gè)結(jié)腸和直腸段,并于結(jié)腸末端(距肛門1 cm)處剪取0.5 cm長的結(jié)腸,福爾馬林浸泡,進(jìn)行HE染色以做病理檢查。后續(xù)觀察結(jié)束后,進(jìn)行同樣的處理[9]。

1.2.7小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量的測定研究表明,潰瘍性結(jié)腸炎與炎性細(xì)胞水平密切相關(guān)。當(dāng)機(jī)體受到外界刺激(如脂多糖、IL-1β、IL-6、TNF-α)時(shí),NF-κB會(huì)與IκB分離,游離的NF-κB將進(jìn)入細(xì)胞核,從而調(diào)控IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性細(xì)胞因子的表達(dá),從而活化機(jī)體NF-κB信號(hào)通路,迫使機(jī)體處于持續(xù)的活化狀態(tài),過多的炎性細(xì)胞因子會(huì)引起機(jī)體炎癥,從而導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎等炎癥性疾病。因此,選取IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性細(xì)胞因子為指標(biāo),研究鼠源糞便微生物提取液對人工潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的作用[10]。灌胃結(jié)束后,各組隨機(jī)選取待解剖小鼠,對其腹腔注射20%氨基甲酸乙酯麻醉(6 mL/kg),固定于解剖臺(tái)上,眼球取血,室溫自然凝固1 h后,離心,取血清,待所有樣品收集完后分別用細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)ELISA試劑盒檢測[9]。

表1　灌胃期間糞便微生物提取液對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織長度的影響Table 1　The effects of fecal microbial extracts on the colon length UCmice in the period of the oral administration

注:表中數(shù)據(jù)均與腸炎空白組數(shù)據(jù)對比進(jìn)行顯著性分析,標(biāo)不同字母表示差異顯著(p<0.05)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,兩兩比較采用Duncan法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用Mean±SD表示,p<0.05為差異有顯著性意義。

2　結(jié)果與討論

2.1實(shí)驗(yàn)說明

灌胃期間,腸炎空白組小鼠進(jìn)行僅PBS灌胃處理,不進(jìn)行治療,結(jié)果灌胃期間腸炎空白組小鼠死亡11只,以上死亡小鼠均及時(shí)進(jìn)行解剖,死亡原因均為消化道出血;一方面說明潰瘍性結(jié)腸炎模型建立成功,另外一方面說明潰瘍性結(jié)腸炎小鼠不能靠自我修復(fù)得以痊愈;所以,后續(xù)的對比實(shí)驗(yàn),均為橫向?qū)Ρ?即同組前后的對比,小鼠治療后與治療前的對比。

2.2潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型的驗(yàn)證

從建模起始(第0 d)到建模結(jié)束(第8 d),小鼠體重下降率為13.76%,腸炎空白組小鼠表觀狀態(tài)不佳,具體表現(xiàn)在小鼠目光呆滯、毛發(fā)暗沉卷曲,有羌毛現(xiàn)象,見圖2a;并且,腸炎空白組小鼠尾根處有血斑,說明小鼠有顯性便血現(xiàn)象,見圖2b;由HE染色圖(見圖2c)可知,腸炎空白組相對于完全空白組HE染色圖,小鼠結(jié)腸組織,腸黏膜萎縮,黏膜表面鈍化,隱窩破壞,結(jié)構(gòu)不完整,因此急性潰瘍性結(jié)腸炎模型建立成功,可進(jìn)行下一步治療實(shí)驗(yàn)。

圖2　潰瘍性結(jié)腸炎小鼠癥狀Fig.2　Clinical symptoms of UC mice

2.3糞便微生物提取液對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠體重的影響

小鼠實(shí)驗(yàn)灌胃及后續(xù)觀察期間,每天稱重,取平均值,做出糞便微生物提取液對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠體重變化的影響圖,如圖3。由圖3可知,兩個(gè)療程的灌胃結(jié)束后,糞便微生物提取液作用顯著,表現(xiàn)在FMT組小鼠非但沒有因?yàn)槟c炎的原因體重下降而死亡,反而體重增長了(4.57±0.21)g,說明糞便微生物粗提液具有一定的抗?jié)冃越Y(jié)腸炎功效,可改善UC小鼠的體重;后續(xù)觀察2周(即從灌胃結(jié)束至后續(xù)觀察結(jié)束的期間)的結(jié)果表明,FMT組小鼠體重持續(xù)增長,說明糞便微生物移植療法并未出現(xiàn)快速消退的現(xiàn)象。

圖3　糞便微生物提取物 對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠體重變化的影響Fig.3　The effects of the fecal microbial extracts on the weight of UC mice注:同一類型不同組小鼠均與完全空白組小鼠對比, 進(jìn)行顯著性分析,標(biāo)不同字母表示差異顯著(p<0.05)。

2.4糞便微生物提取液對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織的影響

腸炎空白組、SASP組、完全空白組和FMT組的小鼠結(jié)腸全長的標(biāo)本照片見圖4,所得的糞便微生物提取液對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織長度的影響見表1。由圖4、表1可知,完全空白組小鼠結(jié)腸約為12.82 cm,腸管內(nèi)充滿成型糞便,腸炎空白組結(jié)腸長度約為8.64 cm,整個(gè)腸管內(nèi)糞便較少,糞便不成型狀態(tài),說明建立潰瘍性結(jié)腸炎之后,小鼠的結(jié)腸長度變短。糞便微生物移植組與SASP組長度均約為12.2 cm左右,與正?？瞻捉M小鼠的結(jié)腸長度無顯著的差異,結(jié)腸內(nèi)充滿成型糞便,說明糞便微生物移植療法顯著增長了腸炎小鼠的結(jié)腸長度,與SASP療法具有很好的修復(fù)小鼠結(jié)腸組織完整性的作用。

圖4　各組小鼠結(jié)腸長度Fig.4　The colon length of different groups

2.5糞便微生物提取液對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)的影響

腸炎空白組、FMT組、SASP組、完全空白組的HE染色病理圖見圖5。

圖5　小鼠HE染色圖Fig.5　The HE staining picture of different groups mice注:a為腸炎空白組小鼠,b為FMT組小鼠, c為SASP組小鼠,d為完全空白組小鼠。

由圖5可知,腸炎空白組小鼠,腸黏膜萎縮,黏膜表面鈍化,隱窩破壞,基本處于腸黏膜屏障失衡狀態(tài)(5a);經(jīng)過兩個(gè)療程的糞便微生物移植療法治療之后,FMT組小鼠腸黏膜細(xì)胞排列基本整齊,腸黏膜結(jié)構(gòu)完整,無組織壞死現(xiàn)象(5b),說明糞便微生物移植療法可以很好的修復(fù)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的腸黏膜損傷;并且與SASP組、完全空白組小鼠HE染色圖相比,無明顯的差異,說明糞便微生物提取液具有很好的抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用。

2.6小鼠血清細(xì)胞因子水平

用酶標(biāo)儀在450 nm處檢測細(xì)胞因子反應(yīng)板的OD值。在平行標(biāo)準(zhǔn)品OD值中選取一組線性相關(guān)性較大的點(diǎn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。其中,TNF-α的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=0.0008x+0.0623,R2=0.9916;x為TNF-α濃度,y為TNF-α的OD值,相關(guān)系數(shù)為0.9916。IL-6的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=0.0022x+0.0218,R2=0.9993;x為IL-6濃度,y為IL-6的OD值,相關(guān)系數(shù)為0.9993。IL-1β的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=0.0028x+0.0541,R2=0.9992;x為IL-1β濃度,y為IL-1β的OD值,相關(guān)系數(shù)為0.9992。

根據(jù)細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)曲線,得出灌胃結(jié)束后小鼠血清細(xì)胞因子水平含量表見表2。

表2　灌胃結(jié)束后小鼠血清細(xì)胞因子水平(X±SD)Table 2　The serum levels of cytokines in mice after the oral administration(X±SD)

注:單位為pg/mL;均與腸炎空白組數(shù)據(jù)對比進(jìn)行顯著性分析,標(biāo)不同字母表示差異顯著(p<0.05)。

由表2可知,從IL-1β角度來看,腸炎空白組小鼠血清中IL-1β含量相對于其他組,其含量顯著較高,可能是由于患潰瘍性結(jié)腸炎,促使機(jī)體持續(xù)活化,從而促進(jìn)IL-1β的高度表達(dá);而經(jīng)過糞便微生物移植療法,使?jié)冃越Y(jié)腸炎小鼠血清中IL-1β含量顯著降低,并于SASP組小鼠此種細(xì)胞因子含量無顯著的差異,說明鼠源糞便微生物提取液可以顯著降低機(jī)體細(xì)胞因子IL-1β的水平。從IL-6角度來看,腸炎空白組小鼠血清細(xì)胞因子IL-6的水平與FMT組、SASP組及完全空白組細(xì)胞因子水平有顯著差異,說明FMT及SASP處理均可以降低機(jī)體此種細(xì)胞因子水平,其中,FMT組小鼠與SASP組小鼠此種細(xì)胞因子水平差異不顯著,說明糞便微生物移植療法能達(dá)到市面上傳統(tǒng)治療潰瘍性結(jié)腸炎的方法。從TNF-α角度來看,腸炎空白組小鼠血清TNF-α水平較高,經(jīng)過2個(gè)療程的治療之后,FMT及SASP組小鼠血清TNF-α水平顯著降低,說明鼠源糞便微生物移植療法可顯著降低血清炎性因子水平。

2.7討論

潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制多認(rèn)為與環(huán)境因素、遺傳因素、免疫因素等有關(guān),其中,遺傳及免疫因素在UC致病中起著至關(guān)重要的作用,可以肯定的是,腸黏膜屏障功能失調(diào)參與了UC的發(fā)生[11]。腸道上皮屏障破壞,黏膜通透性增加,腸組織長期暴露于大量抗原中,導(dǎo)致腸道免疫系統(tǒng)過度反應(yīng)和錯(cuò)誤識(shí)別,引起巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的激活,釋放一系列細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì),激活機(jī)體的免疫應(yīng)答,炎癥反應(yīng)逐級放大,最終導(dǎo)致組織損傷,出現(xiàn)UC的病理改變和臨床表現(xiàn)[12]。最近的研究熱點(diǎn)多集中于,潰瘍性結(jié)腸炎與炎性細(xì)胞水平及NF-kB信號(hào)通路的研究。當(dāng)機(jī)體受到外界刺激(如脂多糖、IL-1β、IL-6、TNF-α)時(shí),NF-κB會(huì)于IκB分離,游離的NF-κB將進(jìn)入細(xì)胞核,從而調(diào)控IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性細(xì)胞因子的表達(dá),從而活化機(jī)體NF-κB信號(hào)通路,迫使機(jī)體處于持續(xù)的活化狀態(tài),過多的炎性細(xì)胞因子會(huì)引起機(jī)體炎癥,從而導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎等炎癥性疾病[13-14]。

本實(shí)驗(yàn)建立潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型,以小鼠病理學(xué)狀態(tài)及與NF-κB信號(hào)通路密切相關(guān)的IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性細(xì)胞因子為指標(biāo),研究鼠源糞便微生物提取液對人工潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的作用,得出鼠源糞便微生物粗提物可顯著改善UC小鼠的病理學(xué)損傷,并通過抑制NF-κB信號(hào)通路來降低小鼠機(jī)體炎癥反應(yīng),從而降低與NF-κB信號(hào)通路密切相關(guān)的IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性細(xì)胞因子的含量。糞便微生物移植療法發(fā)揮作用的機(jī)制可能是因?yàn)?一方面,正常健康小鼠糞便微生物粗提取液中可能存在某種活性物質(zhì),如LPS或者過氧化物,可能通過抑制NF-κB與IκB分離,從而阻止游離的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核,抑制機(jī)體NF-κB信號(hào)通路的持續(xù)活化,來起到抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的功效[15-16];另一方面糞便微生物提取液可以平衡腸道菌群,糞便微生物移植之前,患者腸道菌群多樣性減小,以厚壁菌門和擬桿菌門為主,而糞便微生物移植可以增加小鼠腸道菌群多樣性,主要是擬桿菌門及產(chǎn)生丁酸鹽的菌群組成,其中,厚壁菌門和擬桿菌門在維持腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面均具有重要作用,厚壁菌門通過產(chǎn)生丁酸鹽維持腸上皮細(xì)胞的完整性,并增強(qiáng)機(jī)體免疫反應(yīng),擬桿菌門能抑制有害菌的增殖[17-18]。

3　結(jié)論

本研究證實(shí)糞便微生物提取液能夠改善潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的病理學(xué)狀態(tài),增加小鼠體重,維持小鼠結(jié)腸組織完整,增強(qiáng)小鼠隱窩深度,并增長小鼠結(jié)腸組織長度,由灌胃之前的8.64 cm左右增長至12.86 cm左右。另外,鼠源糞便微生物提取液可顯著降低潰瘍性結(jié)腸炎小鼠血清中IL-1β含量、IL-6含量及TNF-α含量,使?jié)冃越Y(jié)腸炎小鼠IL-1β含量、IL-6含量及TNF-α含量從103.5、84.8、91.0 pg/mL,分別降低至21.9、19.8、31.4 pg/mL,差異顯著(p<0.05),從而抑制了機(jī)體炎性細(xì)胞因子持續(xù)活化狀態(tài),從而發(fā)揮抗炎性功效。

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Recovery effect of fecal microbial extracts on mouse with ulcerative colitis

XU Min,BIAN Xin,DU Jin-cheng,DING Xiu-yun,YU Shang-fu,HUO Gui-cheng*

(Northeast Agriculture University,Key Laboratory of Dairy Science,Ministry of Education,Harbin 150030,China)

The recovery effect of fecal microbial extracts on ulcerative colitis mouse was studied.64 healthy mice were randomly divided into 4 groups,which was the sham group(n=20),the negative control group(n=20),the positive control group(n=12),and the FMT group(n=12).The mice from the treated groups were freely drunken 3% dextran sulfate sodium salt(DSS)solution for 8 days to establish the ulcerative colitis(UC)model,and 8 mice from the sham group and 8 mice from the negative group were died to verify whether the UC model was set successfully at the 8-th day.After the UC model,the SASP group mice were treated with the SASP solution for four weeks,2 days/time,and the FMT group mice were treated with the fecal microbial extracts from the healthy mouse for four weeks,2 days/time.After that,the follow-up of the mice was studied for two weeks,to observe the mouse state,the weight,the colon length,the colon organization pathology and the serum IL-1β,and IL-6,and TNF-α. Results showed that the serum levels of IL-6,IL-1βand TNF-αwere significantly decreased in fecal microbial extracts group(p<0.05),compared with the negative group,the length and weight of the colon were significantly increased in fecal microbial extracts group,and the colon was made more complete.Thus,stool microbial extracts had good effect on the ulcerative colitis and have the potential to be applied into the clinical medicine.

fecal microbial extracts;ulcerative colitis;colon;serum

2015-10-30

霍貴成(1958-),男,博士,教授,研究方向?yàn)槭称肺⑸锱c生物技術(shù),E-mail:1252017463@qq.com

徐敏(1991-),女,碩士研究生,研究方向?yàn)槭称房茖W(xué),E-mail:15104595049@126.com。

國家自然科學(xué)基金(31401512);國家863 項(xiàng)目:乳酸菌特色資源庫及乳酸菌發(fā)酵劑和代謝工程技術(shù)研究(2011AA100902)。

TS201.4

A

1002-0306(2016)09-0367-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.09.064