血漿谷氨酸脫氫酶活性測(cè)定在肝膽疾病中的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)

易婷婷，羅光成，胡帥，劉素蘭，張國(guó)元，蔣興亮

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 南充　637000)

?

血漿谷氨酸脫氫酶活性測(cè)定在肝膽疾病中的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)

易婷婷，羅光成，胡帥，劉素蘭，張國(guó)元，蔣興亮

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 南充637000)

目的：探討血漿谷氨酸脫氫酶(glutamate dehydrogenase，GLDH)活性測(cè)定在肝臟疾病中的臨床意義。方法：采用速率法檢測(cè)229例肝功能異常者(急性肝損傷25例；慢性乙型肝炎60例；肝硬化47例；肝衰竭31例；膽道梗阻性疾病29例；肝癌37例)及 120 例健康體檢者(作為對(duì)照組)的血漿GLDH活性，并與 AST、ALT、ALT、GGT等常用肝膽疾病指標(biāo)進(jìn)行比較分析。結(jié)果：本室采用速率法測(cè)定GLDH活性的參考區(qū)間為4.4～13.3 U/L。膽道梗阻性疾病和肝癌患者血漿GLDH較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，膽道梗阻性疾病患者的GLDH/AST比值也明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。血漿GLDH濃度與AST濃度呈顯著的正相關(guān)(r=0.230，P<0.001)。血漿GLDH濃度與肝損傷程度相關(guān)，隨病情好轉(zhuǎn)而降低。結(jié)論：膽道梗阻性疾病和肝癌患者血漿GLDH升高最為明顯，GLDH可作為判斷肝細(xì)胞損傷程度和療效觀察的指標(biāo)。

谷氨酸脫氫酶；肝損傷；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶

【Abstract】Objective：To investigate the clinical significance of glutamate dehydrogenase (GLDH)in patients with liver disease.Methods：A total of 229 patients with liver disease (25 patients with acute hepatitis,60 CHB patients,47 patients with liver cirrhosis,31 patients with liver failure,29 patients with biliary obstruction,37 patients with liver carcinoma)and 120 healthy subjects were enrolled.The liver enzymes of GLDH,AST,ALT,ALT and GGT were determined.Results：The activity of GLDH in liver diseases,especially in patients with biliary obstruction and liver carcinoma,were significantly higher than that in healthy controls (P<0.05).The ratio of GLDH to AST in patients with biliary obstruction was significantly higher than that in healthy controls (P<0.05).The activities of GLDH closely related to the severity of liver damage and correlated with AST (r=0.230,P<0.001).Conclusion：The activity of GLDH was significantly increased in patients with biliary obstruction and liver carcinoma,and may be a biochemical marker for diagnosing and evaluating the liver injury.

谷氨酸脫氫酶(glutamate dehydrogenase，GLDH)是一種含鋅的線粒體酶，廣泛存在于肝臟、腎臟、腦及胰腺等多種組織細(xì)胞中，以肝臟的含量最高[1]。GLDH亞細(xì)胞定位于線粒體中，所以是一種反映肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞壞死的指標(biāo)。GLDH與谷氨酸代謝和能量代謝有關(guān)，故在一些腫瘤患者中也表達(dá)異常[2-5]。而近年來采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法的GLDH檢測(cè)試劑盒在臨床上已廣泛應(yīng)用。本室也即將開展GLDH測(cè)定，作為一個(gè)重要的肝損傷指標(biāo)，評(píng)價(jià)其臨床應(yīng)用價(jià)值顯得尤為重要。

1　材料和方法

1.1研究對(duì)象

選取川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2015年3至2015年6月的229例肝功能異?；颊?，患者入組參考《藥物性肝損傷診治指南》[6]，以ALT≥3 ULN作為肝功能異常的入組標(biāo)準(zhǔn)。研究對(duì)象包括男性139例，女性90例，年齡 16～61歲，其中急性肝損傷25例，慢性乙型肝炎60例，慢性乙型肝炎肝硬化47例，肝衰竭31例，膽道梗阻性疾病(結(jié)石和占位)29例，肝癌(原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性)37例。選擇來我院體檢的120 名健康人作為正常對(duì)照組，其中男性65例，女性55例，年齡21～55歲，均無心、腦、肝、腎等系統(tǒng)疾病。所有對(duì)象采清晨空腹外周血3 mL，肝素抗凝并分離血漿，所有標(biāo)本均無溶血和脂血現(xiàn)象，在2 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.2試劑與儀器

GLDH試劑盒及其配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品由廣州科方生物技術(shù)有限公司提供，按試劑盒說明書在BECKMAN AU5800全自動(dòng)化分析儀上設(shè)置實(shí)驗(yàn)參數(shù)，用配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)，并在室內(nèi)質(zhì)控在控后進(jìn)行標(biāo)本測(cè)定。

1.3方法原理

采用速率法測(cè)定GLDH活性。樣本中的GLDH在還原型輔酶Ⅱ(NADPH)的存在下催化α酮戊二酸與氨反應(yīng)生成L-谷氨酸和水，同時(shí)NADPH被氧化，通過監(jiān)測(cè)340 nm吸光度下降速率即可得出樣本中GLDH活性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2　結(jié)果

2.1參考區(qū)間

120例健康體檢者的GLDH結(jié)果經(jīng)kolmogorov-smirnov正態(tài)性檢驗(yàn)，結(jié)果顯示偏度系數(shù)(skewness)=0.421(標(biāo)準(zhǔn)誤0.221)，峰度系數(shù)(Kurtosis)=0.334(標(biāo)準(zhǔn)誤0.438)，Z=0.880，雙側(cè)P=0.422，即呈正態(tài)分布。方差分析顯示不同性別和不同年齡組間GLDH水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。以95%可信區(qū)間(±1.96 s)初步確定參考區(qū)間為4.4～13.3 U/L，略高于試劑說明書提供的參考區(qū)間(0～10 U/L)。

2.2GLDH與其它肝臟酶學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性分析

本研究檢測(cè)229例肝功能異?；颊叩难獫{GLDH、AST 、ALT、ALP、GGT 、5’-NT、ADA等酶學(xué)指標(biāo)。各指標(biāo)Pearson相關(guān)分析顯示：血漿GLDH濃度與AST濃度呈顯著的正相關(guān)(r=0.230，P<0.001)，與ALT濃度正相關(guān)(r=0.145，P=0.01)。與其它指標(biāo)間無明顯相關(guān)性。

2.3GLDH在不同類型肝病中的表達(dá)情況

不同類型肝病患者的GLDH水平如表1所示。其中，膽道梗阻性疾病和肝癌患者血漿GLDH較對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而急性肝損傷、慢性乙型肝炎、乙型肝硬化、肝衰竭等患者血漿GLDH與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。另外，膽道梗阻性疾病的GLDH/AST比值較對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余各組患者的GLDH/AST比值較對(duì)照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。以前文所得參考區(qū)間為界，膽道梗阻性疾病和肝癌患者血漿GLDH陽性率也分別到達(dá)了100%和78%。

表1　不同類型肝病患者的GLDH水平±s)

*P<0.05，與正常對(duì)照組比較。

2.4GLDH隨疾病轉(zhuǎn)歸的動(dòng)態(tài)變化

本研究對(duì)15例GLDH、AST明顯升高的的肝損傷患者進(jìn)行了GLDH的動(dòng)態(tài)觀察。如圖1所示，在整個(gè)疾病轉(zhuǎn)歸過程中，血漿GLDH與AST具有良好的協(xié)同變化關(guān)系，且GLDH入院時(shí)升高程度較AST明顯。血漿GLDH與肝損傷程度(AST)相關(guān)，隨病情好轉(zhuǎn)而降低。

3　討論

GLDH廣泛存在于肝臟、腎臟、腦及胰腺等多種組織細(xì)胞中，以肝臟的含量最高，故可作為肝損傷的標(biāo)志物[1]。GLDH大量存在于肝細(xì)胞線粒體基質(zhì)及內(nèi)膜中，并且其在肝小葉不同區(qū)域肝細(xì)胞內(nèi)的分布是有所不同的，肝小葉中央靜脈周圍肝細(xì)胞中活性為周邊細(xì)胞的1.72倍[2]。由于GLDH主要存在于細(xì)胞的線粒體中，當(dāng)肝細(xì)胞壞死及線粒體崩解時(shí)，GLDH 才會(huì)逸出細(xì)胞進(jìn)入血流。故測(cè)定血清GLDH 活性可作為線粒體損傷標(biāo)志和作為診斷肝細(xì)胞嚴(yán)重病變的指標(biāo)[7]。近年來研究表明：GLDH在一些腫瘤患者中表達(dá)升高，其升高可能與谷氨酸代謝和能量代謝有關(guān)[8]。另外，人類血漿GLDH活性具有個(gè)體差異小、無季節(jié)性波動(dòng)、影響因素少等特點(diǎn)。因此，測(cè)定血漿GLDH 活性對(duì)肝膽疾病的診療具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，健康體檢者的血漿GLDH呈正態(tài)分布，不同性別和不同年齡組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，以95%可信區(qū)間(±1.96 s)為標(biāo)準(zhǔn)，初步確定參考區(qū)間為4.4～13.3 U/L。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)：急性肝損傷、慢性乙型肝炎、乙型肝硬化、肝衰竭等患者血漿GLDH升高并不明顯，而膽道梗阻性疾病和肝癌患者的血漿GLDH升高是最為明顯的，其明顯高于其它各組(P<0.05)。以前文所得參考區(qū)間為界，膽道梗阻性疾病和肝癌患者血漿GLDH陽性率也分別到達(dá)了100%和78%。這與趙元明[9]的研究結(jié)果基本一致。McGill等[10-11]指出對(duì)乙酰氨基酚介導(dǎo)的肝損傷患者，其血清線粒體DNA、GLDH和ALT均是升高的，但GLDH升高較ALT晚，McGill認(rèn)為GLDH既是肝損傷指標(biāo)，更是線粒體損傷指標(biāo)。因此，GLDH應(yīng)當(dāng)是一個(gè)損傷機(jī)制標(biāo)志物，用于診斷線粒體源性肝損傷[7]。Tang等[12-14]研究發(fā)現(xiàn)梗阻性黃疸會(huì)導(dǎo)致明顯線粒體損傷，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和腫瘤治療過程中都存在明顯的線粒體損傷和功能障礙。因此，本研結(jié)果提示膽道梗阻性疾病和肝癌患者的肝細(xì)胞線粒體損傷較其他各組更為明顯。既往研究[15-16]表明GLDH在各種肝炎中是明顯升高的，以急性肝炎患者升高最為明顯。本研究中，僅部分肝炎、肝硬化、肝衰竭患者的血漿GLDH高于參考區(qū)間，但與對(duì)照組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)較差異(P>0.05)。這可能與肝炎產(chǎn)生原因、肝細(xì)胞損傷程度、樣本采集時(shí)間，以及這些病例組患者數(shù)量較少有關(guān)，我們將進(jìn)一步研究證實(shí)。

Pearson相關(guān)分析顯示：血漿GLDH濃度與AST呈顯著的正相關(guān)。因此，本文進(jìn)一步比較了各類肝病患者的GLDH/AST比值，結(jié)果顯示膽道梗阻性疾病患者的GLDH/AST比值明顯高于對(duì)照組，其余各組肝膽疾病患者的GLDH/AST比值明顯低于對(duì)照組。即膽道梗阻患者特征性的表現(xiàn)為血漿GLDH和GLDH/AST明顯升高的，而AST升高相對(duì)不明顯，這有助于膽道梗阻性疾病的診斷。另外，通過對(duì)肝損傷患者GLDH的動(dòng)態(tài)觀察，結(jié)果顯示：GLDH與AST具有良好的協(xié)同變化關(guān)系，與肝損傷程度相關(guān)，隨病情好轉(zhuǎn)而降低，可作為判斷肝細(xì)胞損傷程度和療效觀察的可靠指標(biāo)。

綜上所述，各類肝病患者血漿GLDH升高程度不盡相同，而膽道梗阻性疾病和肝癌患者血漿GLDH升高最為明顯，其中膽道梗阻性疾病患者的GLDH/AST比值明顯高于對(duì)照組。GLDH與肝損傷程度相關(guān)，隨病情好轉(zhuǎn)而降低，可作為判斷肝細(xì)胞損傷程度和療效觀察的可靠指標(biāo)之一。

[1]Li M,Li C,Allen A,et al.Glutamate dehydrogenase:structure,allosteric regulation,and role in insulin homeostasis[J].Neurochem Res,2014,39(3):433-445.

[2]Aubrecht J,Schomaker S.Serum glutamate dehydrogenase as a potential biomarker of mitochondrial dysfunction[J].Toxicol Sci,2013,134(1):223.

[3]Piras-Straub K,Khairzada K,Gerken G,et al.Glutamate dehydrogenase and alkaline phosphatase as very early predictors of hepatocellular carcinoma recurrence after liver transplantation[J].Digestion,2015,91(2):117-127.

[4]邱平,唐明薇,梅希,等.病理學(xué)診斷的非酒精性脂肪性肝病患者的臨床特點(diǎn)分析[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015,30(2):182-186.

[5]付寧,馬明坤,羅道蘊(yùn).肝切除術(shù)治療肝細(xì)胞癌并門靜脈高壓患者的臨床療效及安全性[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015,30(2):212-216.

[6]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)藥物性肝病學(xué)組.藥物性肝損傷診治指南[J].中華肝臟病雜志,2015,23(11):810-820.

[7]Jaeschke H,McGill MR.Serum glutamate dehydrogenase—biomarker for liver cell death or mitochondrial dysfunction?[J].Toxicol Sci,2013,134(1):221-222.

[8]Liu G,Zhu J,Yu M,et al.Glutamate dehydrogenase is a novel prognostic marker and predicts metastases in colorectal cancer patients[J].J Transl Med,2015,13(5):144-153.

[9]趙元明.血清谷氨酸脫氫酶活性檢測(cè)在肝膽疾病中的臨床價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,28(2):163-165.

[10]McGill MR,Sharpe MR,Williams CD,et al.The mechanism underlying acetaminophen induced hepatotoxicity in humans and mice involves mitochondrial damage and nuclear DNA fragmentation[J].J Clin Invest,2012,122(4):1574-1583.

[11]McGill MR,Williams CD,Xie Y,et al.Acetaminophen-induced liver injury in rats and mice: comparison of protein adducts,mitochondrial dysfunction,and oxidative stress in the mechanism of toxicity[J].Toxicol Appl Pharmacol,2012,264(3):387-394.

[12]Tang C,Lin H,Feng CL,et al.Mitochondrial DNA damage and its effect on mitochondrial function in rats with obstructive jaundice[J].Mol Med Rep,2012,6(6):1393-1398.

[13]Morais KL,Pacheco MT,Berra CM,et al.Amblyomin-X induces ER stress,mitochondrial dysfunction,and caspase activation in human melanoma and pancreatic tumor cell[J].Mol Cell Biochem,2016,34(3):1355-1402.

[14]Facciorusso A,Villani R,Bellanti F,et al.Mitochondrial Signaling And Hepatocellular Carcinoma:Molecular Mechanisms And Therapeutic Implications[J].Curr Pharm Des,2016，22(18)：2689-2696.

[15]Schomaker S,Warner R,Bock J,et al.Assessment of emerging biomarkers of liver injury in human subjects[J].Toxicol Sci,2013,132(2):276-283.

[16]邢俊,李江華.血清谷氨酸脫氫酶檢測(cè)在肝細(xì)胞損傷性疾病中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2007,30(5):34-35.

(學(xué)術(shù)編輯：趙明才)

The clinical significance of plasma GLDH activity in patients with liver disease

YI Ting-ting,LUO Guang-cheng,HU Shuai,LI Su-lan,ZHANG Guo-yuan,JIANG Xing-liang

(Department of Clinical Laboratory,Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College,Nanchong 637000,Sichuan,China)

GLDH;Liver injury;AST

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.04.022論著

天晴肝病研究基金(TQGB20150016)

2016-03-21

易婷婷(1985-)，女，碩士，檢驗(yàn)技師。E-mail: yiyening@163.com

蔣興亮，E-mail: jiangxl_666@163.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-8-217∶48網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160802.1748.044.html

1005-3697(2016)04-0532-03

R446.1

A