冠心病患者KIF6基因rs20455多態(tài)性及其與血糖、血脂水平的關(guān)系

陳娟，王婷，王書俠，施建豐，張家明，吳娟

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，南京 210028)

?

冠心病患者KIF6基因rs20455多態(tài)性及其與血糖、血脂水平的關(guān)系

陳娟，王婷，王書俠，施建豐，張家明，吳娟

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，南京 210028)

目的了解冠心病患者驅(qū)動蛋白分子6(KIF6)基因rs20455多態(tài)性，并觀察其與血糖、血脂水平的關(guān)系。方法80例冠心病(CHD)患者(觀察組)，健康體檢者147例(對照組)，采用TaqMan等位基因終點法分析各組KIF6基因rs20455多態(tài)性，比較不同KIF6基因rs20455多態(tài)性基因型血脂、血糖水平。結(jié)果觀察組KIF6基因rs20455多態(tài)性TT基因型29例、TC基因型36例、CC基因型15例、T等位基因頻率58.8%、C等位基因頻率41.2%，對照組分別為44、70、33例和53.7%、46.3%，兩組基因型及等位基因頻率比較，P均>0.05。KIF6基因rs20455多態(tài)性TT、CC+CT基因型的TC、TG、HDL-C、LDL-C、FBG水平比較，P均>0.05。結(jié)論冠心病患者KIF6基因rs20455多態(tài)性與正常人相似，且與患者血脂、血糖水平無關(guān)。

冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。或?qū)動蛋白分子6；基因多態(tài)性；血脂；空腹血糖

冠心病(CHD)是發(fā)達國家和地區(qū)人口的主要死亡原因之一，近年我國CHD的發(fā)病率與病死率均呈上升趨勢，已接近發(fā)達國家水平[1]。驅(qū)動蛋白分子6(KIF6)是近年發(fā)現(xiàn)的驅(qū)動蛋白家族9的一類分子馬達，研究[2]發(fā)現(xiàn)KIF6基因單核苷酸多態(tài)性與高加索人群的CHD患病風(fēng)險有潛在相關(guān)性，而目前國內(nèi)鮮有KIF6基因與中國漢族人群CHD患病風(fēng)險相關(guān)性的報道。本研究觀察了CHD患者KIF6基因rs20455多態(tài)性，并觀察其與血糖、血脂水平的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1臨床資料CHD患者80例(觀察組)，男48例，女32例；年齡(63.1±8.6)歲。CHD診斷標(biāo)準(zhǔn)：冠狀動脈造影陽性(至少1支冠狀動脈狹窄≥50%)，或者既往有明確心肌梗死病史。健康體檢者147例(對照組)，男95例，女52例；年齡(46.1±8.8)歲。兩組均排除心腦血管病變、糖尿病、腎病、腫瘤及免疫系統(tǒng)疾病等。

1.2KIF6基因rs20455多態(tài)性分析所有受試對象禁食12 h后，采集肘靜脈血4 mL。3 mL置于無抗凝劑管，分離血清，用于生化指標(biāo)檢測；另1 mL置于EDTA-K2抗凝管，分離白細胞層，用于基因組DNA的提取。提取基因組DNA。取全血300 μL，根據(jù)試劑盒操作說明提取基因組DNA(試劑盒由美國Gentra公司提供)，并于-20 ℃保存?zhèn)溆?。DNA標(biāo)本于波長260 nm和280 nm處進行吸光度分析并計算DNA濃度。采用TaqMan等位基因終點法分析。根據(jù)美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)公共數(shù)據(jù)庫Blast功能設(shè)計并初步驗證引物：正義鏈5′-GCCATTTCTCCAGACATCTGACT-3′，反義鏈5′-GTGATTCTCACCTTACCTTTTGTTAGA-3′。探針5′端標(biāo)記的熒光報告基團是FAM，3′端標(biāo)記熒光猝滅基團MGB。PCR反應(yīng)在羅氏z480 PCR擴增儀上進行，PCR反應(yīng)總體積25 μL，基因組DNA 2 μL，TaqMan通用PCR擴增預(yù)混試劑12.5 μL，KIF6 SNP分型試劑0.625 μL，無菌ddH2O 9.875 μL；空白對照管(即無模板對照，NTC)中加入11.875 μL無菌ddH2O，TaqMan通用PCR擴增預(yù)混試12.5 μL，KIF6 SNP分型試劑0.625 μL。擴增程序：95 ℃預(yù)變性10 min；92 ℃、15 s，60 ℃、1 min，進行40個循環(huán)。不同基因型的PCR產(chǎn)物測序由上海生工測序部完成。

1.3血脂、血糖檢測方法采用已糖激酶紫外終點比色法檢測FBG，酶法檢測血清TC、TG，直接勻相法檢測HDL-C、LDL-C。以上項目均在羅氏cobas8000生化分析儀上檢測(試劑盒均由美國Roche公司提供)，所有測定均嚴格按照儀器、項目標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行，用高、低兩個水平質(zhì)控品進行質(zhì)量控制(質(zhì)控品由美國BioRad公司提供)。

2　結(jié)果

兩組KIF6基因rs20455位點基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。觀察組KIF6基因rs20455多態(tài)性TT基因型29例、TC基因型36例、CC基因型15例、T等位基因頻率58.8%、C等位基因頻率41.2%，對照組分別為44、70、33例和53.7%、46.3%，兩組基因型及等位基因頻率比較，P均>0.05。不同基因型血脂、血糖水平比較見表1，由表1可知,KIF6基因rs20455多態(tài)性TT、CC+CT基因型的TC、TG、HDL-C、LDL-C、FBG水平比較，P均>0.05。

表1　不同基因型血脂、血糖水平比較

3　討論

KIF6是驅(qū)動蛋白超家族中一類參與胞內(nèi)轉(zhuǎn)運的特殊蛋白質(zhì)。KIF6基因位于染色體6p21，跨越約390 000堿基對。KIF6在大腦、結(jié)腸、眼、咽、皮膚、睪丸及結(jié)締組織中低表達。近年研究發(fā)現(xiàn)，KIF6基因Trp719Arg(又稱rs20455)SNPs區(qū)域強連鎖不平衡，該變異體靠近KIF6基因尾部，由非極性殘基色氨酸取代堿性殘基精氨酸，由此改變基因尾部與“貨物”分子的親和力或調(diào)節(jié)KIF6蛋白質(zhì)運動活性，影響“貨物”結(jié)合[3]。因此，KIF6基因與心血管疾病易感性有相關(guān)性，且強化他汀類藥物治療可使KIF6基因變異者顯著獲益。

本研究顯示，觀察組KIF6基因rs20455多態(tài)性TT基因型29例、TC基因型36例、CC基因型15例、T等位基因頻率58.8%、C等位基因頻率41.2%，對照組分別為44、70、33例和53.7%、46.3%，兩組基因型及等位基因頻率比較無統(tǒng)計學(xué)差異。C等位基因頻率分布與我國北方地區(qū)、印度地區(qū)人群相差無幾[4～7]，與高加索人群、北美地區(qū)和非裔美洲人群等差異較大[8,9]，可見KIF6基因rs20455多態(tài)性基因人群種族分布的差異，可能造成基因頻率，等位基因頻率不同。本研究還發(fā)現(xiàn)，KIF6基因rs20455多態(tài)性對觀察組患者血脂、FBG水平無顯著影響，與之前研究[10～13]結(jié)果一致，這說明KIF6基因多態(tài)性可能通過非血脂代謝途徑來達到他汀藥物降低心血管風(fēng)險的療效。

本研究存在一定年齡組間不完全匹配的不足，對中國不同地域、不同民族人口進行大規(guī)模調(diào)查研究KIF6基因多態(tài)性與CHD的相關(guān)性及其機制，對其防治、發(fā)生、發(fā)展提供遺傳學(xué)依據(jù)具有重要意義。

[1] 邱方,張葵,李雷,等.人載脂蛋白A5基因c.553G>T多態(tài)性與冠心病及脂質(zhì)代謝的相關(guān)性研究[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2007,30(7):753-756.

[2] Davani S, Gozalo C, Gambert S, et al. The polymorphism Trp719Arg in the kinesin-like protein 6 is associated with the presence of late outgrowth endothelial progenitor cells in acute myocardial infarction[J]. Atherosclerosis, 2010,210(1):48-50.

[3] Piddini E, Schmid JA, de Martin R, et al. The Ras-like GTPase Gem is involveed in cell shape remodelling and interacts with the novel kinesin-like protein KIF9[J]. Embo J, 2001,20(15):4076-4087.

[4] 石生河,許文燊,鄢盛愷,等.中國北方漢族人2型糖尿病合并冠心病與KIF6基因Trp719Arg多態(tài)性的相關(guān)性[J].中國心血管雜志,2012,17(4):104-108.

[5] Bhanushali AA, Contractor A, Shah VT, et al. Investigation of KIF6 Trp719Arg in a case-control study of coronary artery disease in Western Indians[J]. Molecules, 2011,15(12):883-886.

[6] Wu G, Li GB, Dai B. Association of KIF6 variant with lipid level and angiographic coronary artery disease events risk in the Han Chinese population[J]. Molecules, 2012,17(9):11269-11280.

[7] 陳娟,李雷,張葵,等.TaqMan-MGB熒光定量PCR檢測人載脂蛋白A5基因方法的建立及評價[J].檢驗醫(yī)學(xué),2012,27(5):386-389.

[8] Shiffman D, Chasman DI, Zee RY, et al. A kinesin family member 6 variant is associated with coronary heart disease in the Women′s Health Study[J]. J Am Coll Cardiol, 2008,51(4):444-448.

[9] Iakoubova OA, Tong CH, Rowland CM, et al. Association of the Trp719Arg polymorphism in kinesin-like protein 6 with myocardial infarction and coronary heart disease in 2 prospective trials: the CARE and WOSCOPS trials[J]. J Am Coll Cardiol, 2008,51(4):435-443.

[10] 陳娟,施建豐.驅(qū)動蛋白6基因多態(tài)性與心血管疾病相關(guān)性研究進展[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(19):2663-2665.

[11] Iakoubova OA, Robertson M, Tong CH, et al. KIF6 Trp719Arg polymorphism and the effect of statin therapy in elderly patients: resultsfrom the PROSPER study[J]. Eur J Cardiovasc Prev Rehabil, 2010,17(4):455-461.

[12] 許文燊,鄢盛愷,楊輝,等.KIF6基因rs20455多態(tài)性與中國北方漢族人冠心病及血脂水平的關(guān)聯(lián)研究[J].中國分子心臟病學(xué)雜志,2011,11(6):350-354.

[13] Shiffman D, Sabatine MS, Louie JZ, et al. Effect of pravastatin therapy on coronary events in carriers of the KIF6 719Arg allele from the cholesterol and recurrent events trial[J]. Am J Cardiol, 2010,105(9):1300-1305.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.15.027

R514.4

B

1002-266X(2016)15-0073-02

2015-08-04)