慢性胃炎脾胃濕熱證骨橋蛋白的表達(dá)及臨床意義

黃曉映 曾耀明 余維微 鄭偉偉 何璠

·診治分析·

慢性胃炎脾胃濕熱證骨橋蛋白的表達(dá)及臨床意義

黃曉映 曾耀明 余維微 鄭偉偉 何璠

目的 探討骨橋蛋白（OPN）在慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃竇黏膜組織中的表達(dá)。方法 經(jīng)內(nèi)鏡活檢獲取胃竇黏膜，采用免疫組化SABC法檢測(cè)比較慢性胃炎脾胃濕熱證、脾虛氣滯證患者胃竇黏膜組織和正常胃竇黏膜組織中OPN的表達(dá)情況。結(jié)果 OPN在脾胃濕熱組、脾虛氣滯組及正常胃竇黏膜組織中陽性表達(dá)率分別80.00% 、45.16%和 10.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；3組患者胃竇黏膜中均有OPN表達(dá)，脾胃濕熱證組高于脾虛氣滯組和正常對(duì)照組。結(jié)論 慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃竇黏膜組織中OPN的表達(dá)高于脾虛氣滯證及正常對(duì)照組，提示OPN的測(cè)定可能對(duì)慢性胃炎證型的病情判斷有一定意義。

慢性胃炎 脾胃濕熱證 骨橋蛋白

慢性胃炎屬于臨床常見病﹑多發(fā)病，脾胃濕熱證是慢性胃炎的主要證型之一。有研究表明，慢性胃炎的證型與胃黏膜病理改變存在十分密切的關(guān)系［1］。骨橋蛋白（OPN）是一種有多功能的非膠原性骨基質(zhì)磷酸化糖蛋白，在炎癥和腫瘤的生理病理過程中起重要作用［2］。本文探討骨橋蛋白（OPN）在慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃竇黏膜組織中的表達(dá)。

1　臨床資料

1.1一般資料 2014年1月至12月本院消化科門診就診的慢性淺表性胃炎患者61例，分為2組。脾胃濕熱證組30例，男18例，女12例；平均年齡（47.5±10.7）歲。平均病程（7.64±3.65）年。幽門螺桿菌（Hp）陰性11例，Hp陽性19例。脾虛氣滯證組31例，男17例，女14例；平均年齡（43.4±10.3）歲。平均病程（7.70±2.37）年。Hp陰性16例﹑Hp陽性15例，兩組在年齡﹑性別和Hp感染﹑病程等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。另選擇10名健康體檢者為正常對(duì)照組，其中男5例，女5例，平均年齡（40.22±9.23）歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：慢性胃炎診斷標(biāo)準(zhǔn)按照《慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診治方案（草案）》［3］及《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》［4］。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）不符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)。（2）有明顯兼夾證或合并證候。（3）合并肝﹑腎﹑造血系統(tǒng)﹑內(nèi)分泌疾病等嚴(yán)重原發(fā)性疾病及精神病患者。（4）病情危重患者。（5）慢性萎縮性胃炎﹑消化性潰瘍或胃腸道腫瘤患者。

1.2方法 （1）步驟：常規(guī)胃鏡檢查時(shí)取胃竇黏膜2顆，石蠟標(biāo)本常規(guī)4μm連續(xù)切片，56℃烤箱中過夜，脫蠟至水后室溫下置于3%過氧化氫中5min，枸櫞酸工作液高壓鍋噴氣2min進(jìn)行抗原修復(fù)，滴加一抗，4℃過夜，PBS清洗后滴加二抗反應(yīng)20 min，PBS清洗后DAB顯色。蘇木精復(fù)染，常規(guī)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察顯色結(jié)果。主要試劑：OPN兔抗人多克隆抗體（武漢博士德公司）；即用型SABC-POD（兔IgG）試劑盒（武漢博士德公司）。（2）判定標(biāo)準(zhǔn)：鏡下觀察胃黏膜上皮細(xì)胞，以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，高倍鏡下取4個(gè)不同視野，各計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，無陽性細(xì)胞為（-），陽性細(xì)胞＜10%為（+），陽性細(xì)胞占10%～50%為陽性（++），陽性細(xì)胞＞50%為強(qiáng)陽性（+++）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料兩兩比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

3組免疫組化結(jié)果比較 見表1﹑圖1﹑2﹑3。

作者單位：325000 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬溫州中醫(yī)院消化科

圖1　脾胃濕熱組OPN 表達(dá)情況（×40倍）

圖2　脾虛氣滯組OPN 表達(dá)情況（×40倍）

圖3　正常組OPN 表達(dá)強(qiáng)度情況（×40倍）

表1　3組 OPN 表達(dá)強(qiáng)度比較（n）

3　討論

慢性胃炎是消化科門診最常見疾病，嚴(yán)重影響患者的工作與生活質(zhì)量，目前西醫(yī)治療易復(fù)發(fā)，而中醫(yī)藥對(duì)本病的治療積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，因此積極開展中醫(yī)藥對(duì)本病的診斷與治療研究具有現(xiàn)實(shí)意義。祖國醫(yī)學(xué)無“慢性胃炎”病名，根據(jù)其癥狀相當(dāng)于“胃痞”﹑“胃痛”等范疇，中醫(yī)證型常見肝胃不和﹑肝胃郁熱﹑脾胃濕熱﹑脾虛氣滯﹑脾胃陰虛﹑胃絡(luò)瘀血等幾種。溫州地處浙南沿海，常年空氣濕度較大，當(dāng)?shù)鼐用裼惺群ｕr﹑啤酒飲食習(xí)慣。臨床所見慢性胃炎患者表現(xiàn)為脾胃濕熱證，脾主運(yùn)化水液，濕邪困脾，導(dǎo)致脾胃氣機(jī)升降失常，納運(yùn)失司，故臨床可見脘痞腹脹，食欲減退，濕邪蘊(yùn)久化熱，則表現(xiàn)為口苦口臭，小便黃，大便溏等癥狀?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實(shí)，胃竇黏膜能較好的從微觀層面反映胃部病變，因此作者選擇脾胃濕熱證患者的胃黏膜組織免疫組化與證型進(jìn)行同步觀察，從分子水平了解脾胃濕熱證的變化規(guī)律，提高對(duì)脾胃濕熱證本質(zhì)的認(rèn)識(shí)，充實(shí)四診客觀化研究和微觀辨證的成果，切實(shí)提高中醫(yī)證的微觀研究水平。骨橋蛋白是一種有多功能的非膠原性骨基質(zhì)磷酸化糖蛋白，在炎癥和腫瘤的生理病理過程中起重要作用［2］。故作者選擇骨橋蛋白作為觀察指標(biāo)。本資料顯示，正常對(duì)照組胃竇黏膜中OPN的表達(dá)極低，而慢性胃炎OPN的表達(dá)明顯升高，且脾胃濕熱組明顯高于脾虛氣滯組。慢性胃炎脾胃濕熱證組胃黏膜OPN表達(dá)顯著高于非脾胃濕熱組（P＜0.05），分析認(rèn)為由于在水液的代謝過程中，肺為水之上源，腎為水之下源，而脾居中焦，為水液升降輸布的樞紐，脾運(yùn)化失職，氣機(jī)升降失常則產(chǎn)生濕邪內(nèi)阻，濕熱內(nèi)蘊(yùn)等病機(jī)，有研究發(fā)現(xiàn)清熱利濕藥物能抑制小鼠腎組織OPN的表達(dá)［6］，因此推測(cè)OPN的高度表達(dá)可能是“脾胃濕熱證”的微觀辨證證據(jù)之一，清熱利濕治法能下調(diào)慢性胃炎胃竇黏膜OPN的表達(dá)。Junnila等［5］研究發(fā)現(xiàn)，OPN在胃癌組織中過表達(dá)，提示OPN在胃癌的發(fā)生﹑發(fā)展中具有重要作用。另有報(bào)道在正常黏膜﹑不典型增生胃黏膜﹑胃癌3種病變組織中，OPN陽性表達(dá)率隨病變程度加重呈逐漸上升趨勢(shì)［7］，故臨床應(yīng)重視對(duì)慢性胃炎脾胃濕熱證的及時(shí)治療與病情監(jiān)測(cè)。

綜上，作者認(rèn)為OPN的高度表達(dá)可能是“脾胃濕熱證”的微觀證據(jù)之一，但要明確 OPN 在慢性胃炎脾胃濕熱證發(fā)病機(jī)制﹑診斷和治療后的表達(dá)情況，仍需進(jìn)一步深入研究。

1邢海倫，胡玲，羅琦，等.幽門螺桿菌相關(guān)胃病脾胃濕熱證患者熱休克蛋白70和白細(xì)胞介素-8的表達(dá).廣東醫(yī)學(xué)，2015，26（1）：133～136.

2Park JW， Lee SH， Go du M，et al.Osteopontin depletion decreases inflammation and gastric epithelial proliferation during Helicobacter pylori infection in mice Lab Invest，2015，95（6）：660～671.

3中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)消化系統(tǒng)疾病專業(yè)委員會(huì).慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診治方案（草案）.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005， 25（2）： 172～175.

4鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（試行）.北京：中國醫(yī)藥科技出版社， 2002： 371.

5黃彥彬，張佩青，楊馨，等.腎衰瀉濁丸對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎組織核轉(zhuǎn)錄因子κB與肝細(xì)胞生長因子及骨橋蛋白mRNA表達(dá)的影響.中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2011（4）：306～309.

6Junnila S， Kokkola A， Mizuguchi T，et al.Gene expression analysis identifies over-expression of CXCL1， SPARC， SPP1， and SULF1 in gastric cancer. Genes Chromosomes Cancer， 2010， 49：28～39.

7蘇薇， 吳會(huì)超， 楊瑩瑩，等. 胃泌素與骨橋蛋白在胃癌及癌前病變組織中表達(dá)的相關(guān)性. 世界華人消化雜志， 2014， 22（9）：1275～1279.

浙江省溫州市中醫(yī)藥科研課題（2014ZB008）