冠狀動脈結(jié)扎制備大鼠心肌梗死模型及評價實驗研究*

胡　珍，陳景瑞，魏　靜，李　瀾，王玲燕，樊官偉

·實驗研究·

冠狀動脈結(jié)扎制備大鼠心肌梗死模型及評價實驗研究*

胡珍，陳景瑞，魏靜，李瀾，王玲燕，樊官偉

（天津中醫(yī)藥大學，天津300193）

［目的］探討建立穩(wěn)定可靠、易操作和高存活率的大鼠心肌梗死模型制備方法及其有效的評價手段。［方法］40只雄性SD大鼠腹腔麻醉后，開胸手術(shù)結(jié)扎其冠狀動脈左前降支。術(shù)后24 h，超聲心動圖觀察左室功能變化，左室導管術(shù)檢測大鼠血流動力學，取出心臟，觀察心臟外形，切片進行2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色，全自動生化儀檢測血液心肌酶學指標。［結(jié)果］該法的手術(shù)存活率高達91.67%，術(shù)后24 h取出心臟可見左心室梗死區(qū)心室壁顏色較周圍心肌淺，超聲心動圖和血流動力學結(jié)果顯示模型組大鼠左室功能及室壁運動情況明顯弱于假手術(shù)組。TTC染色顯示模型組大鼠心肌梗死明顯。［結(jié)論］該方法提高了大鼠急性心肌梗死模型的存活率，模型穩(wěn)定，重復性好，可滿足一次結(jié)扎或缺血再灌注的需求。

急性心肌梗死；動物模型；超聲心動圖；血流動力學

據(jù)《中國心血管病報告2013》資料，中國心血管病患病率處于持續(xù)上升的階段。目前，估計中國有心血管病患者2.9億，其中心肌梗死患者約250萬。近年來，隨著中國國民經(jīng)濟的持續(xù)發(fā)展和人口的老齡化，急性心肌梗死（AMI）的發(fā)病率持續(xù)升高。為了更加全面的了解AMI的發(fā)生、發(fā)展及其對機體的影響，增加臨床診斷和治療手段的有效性，提高AMI患者的生存率和生活質(zhì)量，進行AMI的基礎性研究對于臨床診療具有重要價值。制備和應用動物AMI模型是研究人類AMI病理過程和診斷治療的主要方法［1-2］。

自Johns等［3］報道了通過結(jié)扎大鼠左冠狀動脈建立大鼠心肌梗死模型的方法，由于心肌梗死（MI）動物模型穩(wěn)定性好、重復性高可以較好地模擬臨床心肌梗死的病理狀態(tài)和病理生理過程倍受基礎研究人員的親睞，但是目前現(xiàn)有的MI模型制作方法普遍存在操作復雜，設備要求高，術(shù)后死亡率高等缺點。MI模型的制備多選擇Sprague-Dawley（SD）和Wistar兩個常用品種大鼠，雌雄不限［4］。故本實驗選取成年健康的雄性SD大鼠作為實驗動物，結(jié)扎冠狀動脈制備MI模型，采用及時有效的手段評價模型的成功與否，為開展有關(guān)實驗研究奠定了較好的實驗技術(shù)基礎。

1　材料與儀器

1.1實驗動物成年健康的雄性SD大鼠，體質(zhì)量為（220±20）g，SPF級，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生學環(huán)境醫(yī)學研究所實驗動物中心提供，許可證號為SCXK（軍）2014-0001。大鼠采用標準飼養(yǎng)方式，明暗環(huán)境各12 h交替。

1.2試劑與儀器水合氯醛（天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：Q/12HB 4218-2009），異氟烷（國藥準字H19980141），2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，索萊寶），醫(yī)用生理鹽水等。蔡司解剖顯微鏡（STEMI2000-C，德國），BIOPAC多導生理記錄儀MP100-CE（美國），Millar壓力-容積系統(tǒng)（澳大利亞），Vevo2100超高分辨率小動物超聲實時影像系統(tǒng)（加拿大），全自動生化檢測儀（Microlab 300，荷蘭），恒溫電熱毯。

2　實驗方法

2.1動物術(shù)前準備適應性飼養(yǎng)3 d，術(shù)前12 h禁食，自由飲水。隨機將大鼠分為假手術(shù)組（n＝10）和模型組（n＝30）。將大鼠稱質(zhì)量，用5%水合氯醛按6 mL/kg劑量腹腔注射麻醉。

2.2動物模型制備大鼠麻醉后去毛，仰臥位固定，碘附消毒左側(cè)胸前及腋窩下皮膚，胸部備皮。將電極分別插入大鼠右上肢（負極）和左下肢（正極）記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖。沿左側(cè)第四肋間（或心臟搏動最明顯處）做一斜行切口約1.5 cm，用止血鉗逐層分離皮下組織，少量鈍性分離肋間肌。在心臟搏動最明顯處用止血鉗輕輕穿破胸膜，撐開胸廓（力度適中切忌撐斷肋骨）。在手術(shù)顯微鏡下，暴露心臟，剝開心包，輕壓右胸，將心臟輕輕擠壓出胸壁外，持5/0無創(chuàng)縫合針絲線，于肺動脈圓錐與左心耳之間，平行左心耳下邊緣1～2 mm處進針，深度為1.0～1.5 mm進行結(jié)扎，結(jié)扎力度適中，以防將心肌和血管切斷。個別大鼠在冠狀動脈結(jié)扎后會出現(xiàn)短暫心律失常，絕大多數(shù)能夠自行恢復，快速心律失常發(fā)生時可直接在心臟表面滴少許利多卡因；當心率過慢時可直接心臟按摩恢復。清理胸腔，擠出胸腔內(nèi)空氣，用3/0的縫合線逐層縫合肌肉，關(guān)閉胸腔并對切口消毒。手術(shù)過程中保持溫度。假手術(shù)組大鼠只穿針不結(jié)扎冠狀動脈，其余操作步驟與模型組相同，正常組大鼠不做任何處理。

模型成功判斷標準：結(jié)扎后肉眼可見心臟表面相應區(qū)域鮮紅色變成蒼白色，血管供應范圍心肌紫紺，室壁活動減弱；結(jié)扎后心電表現(xiàn)為ST段弓背抬高或（和）T波高聳或與其形成單向曲線，QRS波電壓增高或（且）波幅增寬均為心肌缺血標志。

3　模型評價

3.1超聲評價左室功能變化術(shù)后24 h進行大鼠心動超聲。Vevo2100超高分辨率小動物超聲實時影像儀（加拿大）開機后待用，將探頭MS-250固定，升降臺調(diào)節(jié)探頭高度，旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)探頭方向。將大鼠稱重后標記，用異氟烷麻醉（完全麻醉：1%氧氣+5%異氟烷于麻醉盒內(nèi)麻醉；持續(xù)麻醉：1%氧氣+2%異氟烷）。用膠帶將大鼠腹部向上固定于操作臺，設置溫度為37℃。在大鼠胸部均勻涂抹一層超聲耦合劑，將操作臺向右下傾斜30°～45°，并通過X、Y微調(diào)操作臺位置。胸骨旁長軸，B-型超聲長軸切面（二維成像），可見左心室，主動脈和二尖瓣瓣葉，獲得圖像。位置不變，M-型超聲長軸切面，獲得M-mode圖像，取樣線位于最大腔徑處。對M-型超聲圖像進行測量，選擇長軸測量包（PLAX）對大鼠收縮期和舒張期進行測量，獲得左室前壁厚度（LVAW）、左室內(nèi)徑（LVID）、左室后壁厚度（LVPW）、左室射血分數(shù)（EF）、左室短軸縮短率（FS）、左室容積（LV Vol）等參數(shù)。在B-Mode下記錄一段影像，測量左室面積變化分數(shù)（FAC）。使用血流多普勒測量二尖瓣血流變化情況。所有數(shù)據(jù)均在實驗結(jié)束后，采用超聲系統(tǒng)自帶軟件進行分析。

3.2左室插管評價血流動力學變化超聲結(jié)束后，用5%水合氯醛按6 mL/kg劑量腹腔注射麻醉，將大鼠固定在鼠板上，待大鼠平穩(wěn)后記錄心電圖。頸部皮膚去毛，碘酒消毒，取頸前正中縱行切口約2 cm，分離右側(cè)頸總動脈1.5 cm左右，用3/0縫合線結(jié)扎右側(cè)頸總動脈遠心端，再用中號動脈夾夾住頸總動脈近心端。導管近端經(jīng)壓力換能器與微機相連，通過Millar壓力-容積系統(tǒng)進行監(jiān)測。將1 mL注射器針頭尖端彎曲（自制）在結(jié)扎線處下方挑開一小斜口，導管自右頸總動脈壁切口向近心端輕輕插入（同時慢慢放松動脈夾），推入過程手法要輕，遇阻力時不可用力強行推進，避免刺破血管而且可減少血管受刺激后的痙攣，推進4～5 cm至主動脈瓣處，稍加用力可產(chǎn)生輕微的突破感，再繼續(xù)伸入約0.5 cm，顯示屏上出現(xiàn)振幅較高，波寬較大的心室內(nèi)壓變化波形，舒張壓在0 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa，下同）左右表示導管已進入左心室，停止插管，用絲線將導管固定在套管的側(cè)壁上。穩(wěn)定數(shù)分鐘后，分別記錄大鼠心率（HR）、左心室收縮壓峰值（LVSP）、左心室舒張末壓（LVEDP）及左心室收縮及舒張最大壓力變化速率（±dp/dt max）。

3.3血清心肌酶學：磷酸肌酸激酶（CK），肌酸激酶同工酶（CK-MB），乳酸脫氫酶（LDH）的檢測左室插管結(jié)束后，大鼠腹經(jīng)主動脈取血，收集全血，置于37℃水浴30 min，3 000 r/min離心10 min，分離血清，收集上清液，分裝于1.5 mL EP管，全自動生化分析儀檢測CK、LDH、CK-MB含量。

3.4心肌梗死TTC染色心臟樣本采集在取血后進行，剪破右心耳，沿取血位置灌入50 mL左右生理鹽水，沖洗心臟。取心臟包裹于錫箔紙中，放入-80℃冰箱速凍30 min，置于大鼠腦切片槽中，將心臟切成1～2 mm厚度的切片，放入1%TTC溶液中，將盛有TTC溶液的避光容器放入37℃水浴，5～8 min后取出心臟切片放入10%甲醛溶液中固定，24 h后進行拍照，觀察梗死范圍。梗死范圍以梗死心肌占缺血心肌重量百分比表示。

3.5統(tǒng)計學方法實驗數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件包進行統(tǒng)計學處理，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

4　結(jié)果

4.1大鼠心電圖及梗死面積變化術(shù)后24 h，二導聯(lián)心電圖結(jié)果顯示模型組大鼠ST段抬高，假手術(shù)組大鼠心電圖基本正常（圖1）。TTC結(jié)果顯示模型組大鼠較之假手術(shù)組心肌梗死明顯，假手術(shù)組基本沒有梗死區(qū)域（圖2）。模型組大鼠心肌梗死范圍達35.67%。

圖1　模型組與假手術(shù)組大鼠心電圖對比Fig.1　Comparison of the electrocardiograph in rats between model and sham group

圖2　模型組與假手術(shù)組大鼠心肌梗死面積對比Fig.2　Comparison of the myocardial infarct size in rats between model and sham group

4.2大鼠心肌酶學變化模型組大鼠血清中CK、LDH、CK-MB含量與假手術(shù)組大鼠CK、LDH、CK-MB水平比較均顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表1。

表1　模型組與假手術(shù)組大鼠LDH，CK及CK-MB的比較Tab.1　Comparison of LDH，CK and CK-MB between model and sham group（U/L

表1　模型組與假手術(shù)組大鼠LDH，CK及CK-MB的比較Tab.1　Comparison of LDH，CK and CK-MB between model and sham group（U/L

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01。

組別　LDH　CK　CK-MB假手術(shù)組 1 405.50±472.28　0 784.67±108.94　1 333.67±259.90模型組　2 614.67±394.97**1 665.33±76.62**2 465.67±143.31**

4.3大鼠血流動力學變化反映左室收縮功能的指標LVSP和+dp/dtmax和反映舒張功能的指標-dp/dtmax，模型組大鼠明顯低于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與假手術(shù)組相比，模型組LVEDP和HR沒有明顯變化，而模型組左室發(fā)展壓（LVDP＝LVSP-LVEP）較之假手術(shù)組則顯著降低（P＜0.01），對于左心室舒張末壓和心率，兩組間差異無統(tǒng)計學意義。見表2。

表2　模型組與假手術(shù)組大鼠LVSP，LVEDP，LVDP，HR及±dp/dtmax的比較（Tab.2　Comparison of LVSP，LVEDP，LVDP，HR and ±dp/dtmax between model and sham group

表2　模型組與假手術(shù)組大鼠LVSP，LVEDP，LVDP，HR及±dp/dtmax的比較（Tab.2　Comparison of LVSP，LVEDP，LVDP，HR and ±dp/dtmax between model and sham group

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01。

組別　LVSP（mmHg）　LVEDP（mmHg）　LVDP（mmHg）假手術(shù)組　118.93±4.35**　28.19±3.66　90.74±2.67**模型組　096.94±4.09**　24.57±3.24　72.37±2.73**組別　HR（bmp）　+dp/dtmax（mmHg） -dp/dtmax（mmHg）假手術(shù)組　440.33±18.05　5 734.30±298.74**-6 275.38±556.92**模型組　422.46±28.11　3 416.72±627.89**-3 323.06±399.54**

4.4大鼠左室功能變化與假手術(shù)組相比，模型組大鼠左室前壁和后壁收縮末期厚度（LVAWs和LVPWs）均明顯變?。≒＜0.05），舒張末期左室前壁厚度（LVAWd）略有變薄但無統(tǒng)計學差異，同時模型組大鼠左室舒張末內(nèi)徑（LVIDd）和收縮末內(nèi)徑（LVIDs）較之假手術(shù)組顯著增加（P＜0.01），見表3。模型組大鼠左室EF、FS及FAC與假手術(shù)組比較均勻明顯下降，具有統(tǒng)計學差異（P＜0.01），見表4。模型組較假手術(shù)組E/A和射血時間（ET）顯著下降，而等容舒張時間和心肌做功指數(shù)（Tei指數(shù)）則明顯變大，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。見表5。

表3　模型組與假手術(shù)組大鼠左室壁厚度和內(nèi)徑的比較（x±s）Tab.3　Comparison of left ventricular wall thickness and inner diameter between model and sham group（mm

表3　模型組與假手術(shù)組大鼠左室壁厚度和內(nèi)徑的比較（x±s）Tab.3　Comparison of left ventricular wall thickness and inner diameter between model and sham group（mm

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　LVAWd　LVAWs　LVIDd　LVIDs　LVPWs假手術(shù)組1.34±0.02 2.06±0.22*5.32±0.51**2.93±0.50**2.34±0.22*模型組　1.11±0.28 1.55±0.44*6.80±0.67**5.31±0.79**1.91±0.26*

表4　模型組與假手術(shù)組大鼠FAC，EF及FS的比較（x±s）Tab.4　Comparison of FAC，EF and FS between model and sham group（%

表4　模型組與假手術(shù)組大鼠FAC，EF及FS的比較（x±s）Tab.4　Comparison of FAC，EF and FS between model and sham group（%

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01。

組別　FAC　EF　FS假手術(shù)組　64.10±7.44**　75.65±5.91**　45.07±5.41**模型組　36.33±6.04**　43.47±8.86**　22.23±5.04**

表5　模型組與假手術(shù)組大鼠E/A，等容收縮時間（ICT），等容舒張時間（IRT），ET及Tei指數(shù)的比較（Tab.5　Comparison of E/A，ICT，IRT，ET，and Tei index between model and sham group

表5　模型組與假手術(shù)組大鼠E/A，等容收縮時間（ICT），等容舒張時間（IRT），ET及Tei指數(shù)的比較（Tab.5　Comparison of E/A，ICT，IRT，ET，and Tei index between model and sham group

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　E/A　ICT（ms）　IRT（ms）　ET（ms）　Tei指數(shù)假手術(shù)組1.91±0.20　14.45±3.22 18.92±2.76　60.81±5.84 0.55±0.06模型組　1.32±0.15**15.56±1.24 24.47±2.36**53.72±4.78*0.75±0.08**

圖3　模型組與假手術(shù)組左心室二尖瓣血流頻譜示意圖對照Fig.3　Comparison of left ventricular mitral inflow schematic diagram in rats between model and sham group

5　討論

實驗通過建立大鼠急性心肌梗死模型，術(shù)后24h后結(jié)合心電圖、超聲心動圖、左心室插管術(shù)及心肌酶學指標和TTC染色，全面評價模型的成功與否。

心肌梗死或受損后，心肌細胞膜通透性增加，心肌細胞中CK、LDH、CK-MB泄露，血液中含量急劇上升，其表達水平為心肌梗死的指示性指標之一［5］。由于開胸及穿針不可避免的會對肌肉和心肌造成輕微的損傷，各種類型的的心臟手術(shù)都會引起血清CK-MB等心肌酶活性的增加，且心肌梗死發(fā)生后其活性在12～36 h達峰，但這并不表明這些反應心肌梗死變化的指標沒有意義，CK-MB作為傳統(tǒng)的心肌標志物也有它的應用價值，臨床上血清CK-MB測定的意義在于診斷急性心肌梗死。本研究也采用心肌酶學來作為評價急性心梗模型成功的一個標準。

血流動力學測定評價心功能的方法，以其結(jié)果直接可靠和客觀的特點，已成為評價左室心功能的一種重要手段［6］。實驗采用左室插管術(shù)這種直接的血流動力學檢測方法，初步探討了大鼠急性心肌梗死24 h后血流動力學指標的變化，結(jié)果顯示模型組大鼠LVSP、LVDP和左心室收縮及舒張最大壓力變化速率（±dp/dt max）明顯低于假手術(shù)組，標志著大鼠急性心肌缺血模型的成功，結(jié)果與文獻［7］報道的結(jié)果相似。

一直以來，左室功能都是急性心肌梗死后的一項重要預后及評價指標，超聲心動圖可以客觀直接的評價大鼠急性心肌梗死后左心功能改變［8］。近年來國外也有采用超聲心電圖評價大鼠梗死后左心室功能變化的研究［9］，實驗采用超聲心動圖及多普勒成像技術(shù)結(jié)合Tei指數(shù)對大鼠急性心肌梗死后24 h左室功能進行全面的評價。檢查結(jié)果顯示模型組大鼠射血分數(shù)，左室面積變化，短軸縮短率，E/A較之假手術(shù)組均明顯下降，反映心臟整體功能的Tei指數(shù)，左室收縮末期內(nèi)徑顯著高于假手術(shù)組。這些反映左心室功能指標的改變，進一步表明了大鼠急性心肌梗死模型建立成功。

Tei指數(shù)是一個綜合評價心臟收縮與舒張功能的指標［10］。隨著心肌梗死的發(fā)生，左室功能的下降，Tei指數(shù)逐漸增大［11］。通過Tei指數(shù)不僅可以評價大鼠急性心肌梗死后的心臟的整體功能變化情況，根據(jù)其計算公式Tei指數(shù)＝（ICT+IRT）/ET還可以了解心功能障礙的時相，從而更加準確深入地分析急性心肌梗死早期的心功能變化情況［12-13］。ST段抬高是急性心肌梗死早期最重要的心電圖表現(xiàn)［14］，Tei指數(shù)與LVEF值、ICT與心電圖ST段抬高程度相關(guān)性良好，且測量方法重復性高，甚至有學者認為Tei指數(shù)還可作為急性心肌梗死的獨立預測因子［15-16］。因此，將Tei指數(shù)及相關(guān)參數(shù)結(jié)合超聲心動圖、多普勒成像技術(shù)等傳統(tǒng)直觀的評價指標進行綜合分析，可以進一步完善基礎研究中對大鼠急性心肌梗死早期的評價，同時也能更為準確地評估大鼠心梗后心功能變化。

有研究表明超聲心動圖在診斷急性心肌梗死的特異性、陽性預測值高于心電圖，而心電圖假陽性率高于超聲心動圖［17］。在急性心肌梗死早期應用超聲心動圖檢測左室功能異常是評價及診斷的重要手段之一。超聲心動圖具有無痛苦，安全，方便，重復性好等優(yōu)點，可以提供準確客觀的評價結(jié)果。因此，超聲心動圖對于左室功能的無創(chuàng)性評估已成為急性心肌梗死后危險分層的重要方法［18］。

目前，大鼠心肌梗死模型制備有多種方法，主要分為手術(shù)造模和藥物誘導建模［19-20］。手術(shù)造模主要有冠狀動脈結(jié)扎術(shù)，冠狀動脈阻塞術(shù)和冠狀動脈夾閉術(shù)等手術(shù)方法；藥物造模主要用到的藥物為異丙腎上腺素和垂體后葉素，給藥方式一般為腹腔注射。本研究造模方法為手術(shù)結(jié)扎冠狀動脈左前降支，運用此類方法的主要優(yōu)點為周期短，梗死心肌定位準確，操作簡便、迅速。同時也可以觀察梗死后再灌注對心肌細胞的變化及損傷、恢復情況。冠狀動脈左前降支結(jié)扎造成心肌梗死的病理生理、生化改變與臨床心肌梗死的契合度度更高，可以人為反復造成心肌梗死或缺血后再灌注，模型的穩(wěn)定性以及可重復性好［21］。因此，冠脈左前降支結(jié)扎制備心肌梗死模型是目前各種心肌梗死模型中最有價值、最易于推廣的方法。

在諸多報道中，采用手術(shù)方法制備心肌梗死模一般會采用氣道插管。經(jīng)口氣管插管和氣管切開插管是當下最為常見的兩種氣道插管方法。氣管切開插管雖然比較準確直觀，但在切開氣管時易造成氣道內(nèi)分泌物過多導致窒息，術(shù)后肺感染的可能性也大，在縫合時容易造成氣管塌陷，氣管狹窄或氣管瘺，這些都嚴重影響術(shù)后大鼠的存活率。經(jīng)口氣管插管要求技巧性和精細程度都較高，也會在頸部造成創(chuàng)傷增加術(shù)后感染率，拉舌、插管需多次訓練，對手法的要求較高，多次插管失敗可造成喉頭黏膜水腫，導致窒息。有證據(jù)表明經(jīng)口氣管插管的方式會影響大鼠的心率，使大鼠心率明顯下降，且在手術(shù)中常有心臟驟停死亡現(xiàn)象的發(fā)生，這可能與反復刺激大鼠咽喉部，導致興奮迷走神經(jīng)引起竇性停搏有關(guān)［4］。

鑒于上述原因，本實驗造模方法不使用氣管插管和呼吸機，簡化了手術(shù)操作過程，盡管在一定程度增加了手術(shù)難度，也對實驗者提出了較高的要求，但是避免了不必要的損傷術(shù)后并發(fā)癥減少，術(shù)后存活率增加，同時通過反復訓練可降低術(shù)中死亡率，這也是一個科研作者應該追求的。本實驗的手術(shù)存活率高達91.67%，且綜合上述評價結(jié)果及結(jié)合二導聯(lián)心電圖和TTC染色，結(jié)果表明本實驗方法操作簡單迅速，創(chuàng)傷輕，模型成功率高，結(jié)果穩(wěn)定可靠。

綜上所述，實驗通過超聲、血流動力學、TTC染色、心肌酶學等指標客觀評價了急性心肌缺血動物模型，為進一步的基礎研究提供了穩(wěn)定可靠、重復性好的動物模型制備方法。為從事心肌梗死及相關(guān)方面研究的研究者在模型建立和評價中提供了借鑒。

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（本文編輯：馬英，高杉）

《天津中醫(yī)藥大學學報》新增DOI全文上網(wǎng)服務

《天津中醫(yī)藥大學學報》獲得了中國科技信息研究所的立項資助，免費開通了自1982年創(chuàng)刊以來所有文章的DOI全文上網(wǎng)服務，讀者可以通過輸入有效的DOI標志符（例如DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.01），即可解析到原始資源，從而實現(xiàn)在本編輯部網(wǎng)站下載全文。包括兩種方法：1）直接登陸中文DOI標志符的網(wǎng)址http://www.chinadoi.cn/，或者IDF的網(wǎng)址http://dx. doi.org/，輸入某篇文章的DOI號10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.01，直接檢索。2）IDF的網(wǎng)址http://dx.doi.org/轉(zhuǎn)換成可以直接訪問的URL地址，例如：http://dx.doi.org/10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.01，從而實現(xiàn)文章檢索和下載。

DOI（“數(shù)字對象唯一標識符”）是針對數(shù)字資源的全球唯一永久性標志符，具有對資源進行永久命名標志、動態(tài)解析連接的特性，被稱為互聯(lián)網(wǎng)上的條形碼。截止到2012年6月為止，DOI分配總量已達6 000多萬個，覆蓋刊物3萬余種，每月通過DOI完成的文獻解析連接數(shù)量接近1億次。

DOI標志符具有如下優(yōu)點：1）唯一性。DOI標志符作為數(shù)字化對象的識別符，對所標識的數(shù)字對象而言，具有唯一性。這種特性保證了在網(wǎng)絡環(huán)境下對數(shù)字化對象的準確提取，有效地避免重復。2）持久性。一個數(shù)字化對象的DOI標志符一經(jīng)產(chǎn)生就永久不變，不隨其所標志的數(shù)字化對象的版權(quán)所有者或存儲地址等屬性的變更而改變。3）兼容性。DOI標志符的兼容性體現(xiàn)在DOI號碼的后綴中可以包含任何已有的標志符，例如國際標準書號ISBN，國際標準刊號ISSN等。4）互操作性。DOI的處理系統(tǒng)可以與任何因特網(wǎng)上不同的計算機操作系統(tǒng)在處理同一數(shù)據(jù)時能保持一致，能與不同時期的技術(shù)系統(tǒng)兼容。5）動態(tài)更新。DOI系統(tǒng)可對其元數(shù)據(jù)、應用和服務功能進行快速和簡便的動態(tài)更新。DOI的主要目的是唯一標志網(wǎng)絡環(huán)境下的各種信息資源實體，包括各種物理和數(shù)字資源。DOI是從統(tǒng)一資源定位符（URL）發(fā)展而來，被稱為“下一代URL”。它與URL的最大區(qū)別就是實現(xiàn)了對資源實體的永久性標識。

DOI標志符相當于每篇論文的“身份證”，可以實現(xiàn)文章引文到其他期刊全文的動態(tài)、持久鏈接，提高出版業(yè)標準化、規(guī)范化，提升行業(yè)整體競爭力。增加了DOI標志符以后可以擴大雜志傳播范圍，最終便于讀者檢索和利用，促進雜志國際、國內(nèi)影響力的快速提升。

Establishment and evaluation experimental study of acute myocardial infarction in rats

HU Zhen，CHEN Jing-rui，WEI Jing，LI Lan，WANG Ling-yan，F(xiàn)AN Guan-wei
（Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］To explore the establishment of a stable and reliable，easy operation and high survival rates of rats with acute myocardial infarction model preparation and effective evaluation methods.［Methods］The 50 male SD rats were anesthetized，thoracotomy left anterior descending coronary artery ligation.After 24 h，observed with echocardiograph changes in left ventricular function and left ventricular catheterization rat blood dynamics.Remove the heart，TTC sections were stained；automatic biochemical analyzer to detect blood serum creatine kinase indicators.［Results］This method of surgery survival rates as high as 91.67%.After 24 h，remove the cardiac left ventricle infarcted ventricular wall visible color of light than the surrounding myocardium.In the model group，echocardiographic and hemodynamic showed left ventricular function and wall motion was obviously weaker than the sham group.TTC staining showed significant myocardial infarction in the model group.［Conclusion］This method improves the survival rate of rats with acute myocardial infarction model，the model is stable，reproducible，and can meet once ligation or ischemia-reperfusion needs.

acute myocardial infarction；animal model；echocardiography；hemodynamic

R541.4

A

1672-1519（2016）02-0090-06

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.02.08

國家重點基礎研究發(fā)展計劃（973計劃）項目（2012CB518404）；國家自然科學基金資助項目（81273891）。作者簡介：胡珍（1986-），女，博士，主要從事中藥干預內(nèi)皮祖細胞治療缺血性心臟病的臨床及藥理研究工作。

樊官偉，E-mail：fgw1005@hotmail.com。

（2015-10-17）