鹽酸副玫瑰苯胺法測定腐竹中二氧化硫含量

◎洪　莉（閩侯縣質量計量檢測所，福建 福州 350100）

鹽酸副玫瑰苯胺法測定腐竹中二氧化硫含量

◎洪莉
（閩侯縣質量計量檢測所，福建 福州 350100）

采用GB/T5009.34-2003《食品中亞硫酸鹽的測定》鹽酸副玫瑰苯胺法對腐竹中二氧化硫含量進行測定，討論該檢測方法的注意事項。結果表明：福建閩侯腐竹中二氧化硫含量相對穩(wěn)定，檢測結果均在規(guī)定范圍內；鹽酸副玫瑰苯胺溶液中鹽酸（1∶1）用量為10～15 mL；二氧化硫標準溶液避光低溫保存一個月后須重新標定；控制顯色時間20 min，顯色溫度25 ℃。

鹽酸副玫瑰苯胺法；腐竹；二氧化硫；測定；注意事項

腐竹是福建省閩侯縣的特色產品，營養(yǎng)豐富，老少皆宜。腐竹的質量安全是老百姓們所關心的。腐竹生產中常添加亞硫酸鹽，起到漂白、防腐、抗氧化作用，但人類食用過量的亞硫酸鹽會導致頭痛、惡心、暈眩、氣喘等過敏反應［1］。更有一些不法腐竹生產者不顧消費者健康，在腐竹中添加吊白塊、烏洛托品等令人體肝臟、腎臟受損的非食用性化工原料。吊白塊易分解，通過監(jiān)測腐竹中二氧化硫和次硫酸氫鈉甲醛的含量及比值可以判定是否含有吊白塊［2，3］。其中樣品中的次硫酸氫鈉甲醛采用衛(wèi)法監(jiān)發(fā)［2001］159號附件2進行測定。本文擬針對腐竹中二氧化硫含量的測定進行討論，為提高該檢驗方法的準確性提供參考依據(jù)，進而更好的監(jiān)督腐竹的品質，保證消費者食用放心的腐竹。國標GB/T5009.34-2003《食品中亞硫酸鹽的測定》包括兩種方法：第一種方法鹽酸副玫瑰苯胺法；第二種方法蒸餾法。其中蒸餾法靈敏度低，鹽酸副玫瑰苯胺法是首選的經典方法，筆者就此法的試劑、原理、分析步驟進行詳細介紹，并通過多年的實踐和查閱相關文獻，對實驗中的注意事項進行討論。

1 材料與設備

1.1材料

5種福建閩侯腐竹。

1.2設備和試劑

1.2.1設備

UV-1750紫外可見分光光度計：島津公司；酸式棕色滴定管、比色管以及碘量瓶等玻璃儀器。

1.2.2試劑

四氯汞鈉吸收液：稱取13.6 g氯化高汞及6.0 g氯化鈉，溶于水中并稀釋至1 000 mL，放置過夜，過濾后備用。2 g/L甲醛溶液：吸取0.55 mL無聚合沉淀的甲醛（36％），加水稀釋至100 mL，混勻。乙酸鋅溶液：稱取22 g乙酸鋅溶于少量水中，加入3 mL冰乙酸，加水稀釋至100 mL。

鹽酸副玫瑰苯胺溶液：稱取0.1 g鹽酸副玫瑰苯胺于研缽中，加少量水研磨使溶解并稀釋至100 mL。取出20 mL，置于100 mL容量瓶中，加鹽酸（1∶1），充分搖勻后使溶液由紅變黃，如不變黃再滴加少量鹽酸至出現(xiàn)黃色，再加水稀釋至刻度，混勻備用（如無鹽酸副玫瑰苯胺可用鹽酸品紅代替）。

二氧化硫標準溶液：稱取0.5 g亞硫酸氫鈉，溶于200 mL四氯汞鈉吸收液中，放置過夜，上清液用定量濾紙過濾備用。吸取10.0 mL亞硫酸氫鈉-四氯汞鈉溶液于250 mL碘量瓶中，加100 mL水，準確加入20.0 mL碘溶液（0.100 mol/L），5 mL冰乙酸，搖勻，放置于暗處，2 min后迅速以硫代硫酸鈉（0.100 mol/L）標準溶液滴定至淡黃色，加0.5 mL淀粉指示劑，繼續(xù)滴至無色。另取100 mL水，準確加入20.0 mL碘溶液（0.100 mol/L）、5 mL冰乙酸，按同一方法做試劑空白。

二氧化硫使用液：臨用前將二氧化硫標準溶液以四氯汞鈉吸收液稀釋成每毫升相當于2 μg二氧化硫。

12 g/L氨基磺酸胺溶液；淀粉指示液；亞鐵氰化鉀溶液；碘溶液［c（I/2I2）=0.100 mol/L］；硫代硫酸鈉標準溶液［c（Na2S2O3·5H2O）=0.100 mol/L］。

2 分析方法

2.1原理

鹽酸副玫瑰苯胺法：亞硫酸鹽與四氯汞鈉反應生成穩(wěn)定的絡合物，再與甲醛及鹽酸副玫瑰苯胺作用生成紫紅色絡合物，與標準系列比較定量。

2.2腐竹樣品處理

稱取5.0 g研磨均勻的腐竹，以少量水濕潤并移入100 mL容量瓶中，然后加入20 mL四氯汞鈉吸收液，浸泡4 h以上，若上層溶液不澄清可加入亞鐵氰化鉀及乙酸鋅溶液各2.5 mL，最后用水稀釋至100 mL刻度，過濾后備用。

2.3二氧化硫標準曲線的繪制

吸 取 0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50 mL 和2.00 mL二氧化硫標準使用液（相當于0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、3.0 μg和4.0 μg二氧化硫），分別置于25 mL帶塞比色管中。于比色管中各加入四氯汞鈉吸收液至10 mL，然后再加入氨基磺酸銨溶液（12 g/L）、甲醛溶液（2 g/L）及鹽酸副玫瑰苯銨溶液各1 mL，搖勻，放置20 min。用1 cm比色杯，以零管調節(jié)零點，于波長550 nm處測吸光度，繪制標準曲線。

2.4樣品測定

吸取1.0 mL上述腐竹樣品過濾后的處理液，分別置于25 mL比色管中。按上述標準曲線的測定法，在550 nm波長下分別測定其吸光度值，計算各樣品中二氧化硫的含量。

2.5計算公式

2.5.1二氧化硫標準溶液的標定

以硫代硫酸鈉標定二氧化硫標準溶液的計算公式：

式（1）中：X——二氧化硫標準溶液濃度，單位為毫克每毫升（mg/ mL）；V1——測定用亞硫酸氫鈉-四氯汞鈉溶液消耗硫代硫酸鈉標準溶液體積，單位為毫升（mL）；V2——試劑空白消耗硫代硫酸鈉標準溶液體積，單位為毫升（mL）；c ——硫代硫酸鈉標準溶液的摩爾濃度，單位為摩爾每升（mol/L）；32.03——每毫升硫代硫酸鈉［c（Na2S2O3·5H2O）=1.000 mol/L］標準溶液相當于二氧化硫的質量，單位為毫克（mg）。

2.5.2樣品二氧化硫含量的計算

式（2）中：X——試樣中二氧化硫的含量，單位為克每千克（g/kg）；A——測定用樣液中二氧化硫的質量，單位為微克（μg）；m——試樣質量，單位為克（g）；V——測定用樣液的體積，單位為毫升（mL）。計算結果表示到3位有效數(shù)字。

3 結果與分析

3.1二氧化硫標準曲線的制作

采用鹽酸副玫瑰苯胺法繪制出二氧化硫標準曲線，得回歸方程y=0.042 4x-0.001 9，R2=0.999 4，即0.4～4.0 μg之間二氧化硫的含量與吸光度值有良好的線性關系。標準曲線見圖1。

圖1　二氧化硫標準曲線圖

3.2腐竹試樣中二氧化硫含量

5種腐竹試樣中二氧化硫含量見表1。

表1　5種腐竹試樣中二氧化硫含量表

檢測的5種福建閩侯腐竹樣品，二氧化硫含量均在標準范圍內。我國食品安全國家標準食品添加劑使用標準GB2760-2014對腐竹類亞硫酸鹽的使用量明確規(guī)定，以二氧化硫殘留量計，要求殘留量低于0.2 g/kg。

4 注意事項

4.1關鍵控制環(huán)節(jié)

4.1.1鹽酸副玫瑰苯胺溶液的配制

影響該實驗的因素有很多，其中顯色劑鹽酸副玫瑰苯胺溶液的配制為實驗的關鍵試劑之一。

國標GB/T5009.34-2003《食品中亞硫酸鹽的測定》第一法中對顯色劑鹽酸副玫瑰苯胺的配制，規(guī)定“加鹽酸（1∶1），充分搖勻后使溶液由紅變黃，如不變黃再繼續(xù)滴加少量鹽酸至出現(xiàn)黃色”，其中鹽酸（1∶1）的量沒有給出明確的數(shù)值，用量不易控制，但是鹽酸的加入量對顯色反應有很大影響。鹽酸副玫瑰苯胺的顏色是因其分子中共軛體系的變化所致，鹽酸副玫瑰苯胺隨著溶液pH的變化產生顯著的顏色效應：pH越高顏色越深，pH越低顏色越淺［4］。經文獻資料查證，多年來有不少學者在鹽酸及用量方面做了研究，高明菊［5］等人認為配制顯色劑時，鹽酸用量為8 mL時可滿足實驗要求；杜明海［6］認為吸取0.1％鹽酸副玫瑰苯胺溶液20 mL后直接加入一定量的（1∶1）鹽酸使鹽酸的濃度為0.7～1.0 mol/L間即可使用；葉文芳［7］研究認為鹽酸（1∶1）加入量在12～15 mL最適合。筆者也做了多次實驗，各加入鹽酸（1∶1）5、 10、13、15 mL和25 mL，結果顯示5 mL時溶液顏色偏向紅色，25 mL時顏色太深，都不符合標準規(guī)定的黃色。10、13、15 mL時顏色適中，回歸方程R2都在0.998 0以上，其中以10 mL時顯色效果最佳，靈敏度也高，回歸方程為y=0.042 4x-0.001 9，R2=0.999 4。由于環(huán)境、試劑、儀器及人員操作的誤差，結合參考文獻及筆者的實驗，建議鹽酸副玫瑰苯胺溶液中鹽酸（1∶1）的加入量在10～15 mL時最合適，滿足實驗要求。

4.1.2二氧化硫標準溶液的存放時間

二氧化硫標準溶液不穩(wěn)定，容易氧化變質，放置一段時間后容易被氧化為三氧化硫，且吸光度值隨存放時間的延長逐漸降低。新配制的1.014 mg/mL二氧化硫標準溶液與避光存放冰箱中一個月后的吸光度值的比較見圖2。因此，二氧化硫標準溶液避光低溫保存一個月后必須重新標定。

圖2　二氧化硫標準溶液存放時間對吸光度值的影響圖

4.2其他注意點

①腐竹試樣處理過程中若不加亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液，過濾液相對較渾濁，影響了吸光度，使結果偏高，因此建議添加亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液。②鹽酸副玫瑰苯胺法顯色時，若不加氨基磺酸銨溶液，則實驗吸光度值明顯增高，為了消除亞硝酸鹽的干擾，須加入1.0 mL 12 g/L的氨基磺酸銨溶液，使亞硝酸鹽分解。③本實驗添加的試劑較多，根據(jù)實驗原理，添加的試劑順序不能亂，應為四氯汞鈉吸收液，氨基磺酸銨溶液，甲醛溶液，鹽酸副玫瑰苯胺溶液。④顯色溫度及顯色時間對測定結果有影響。顯色時間20 min時，吸光度值最高，顯色充分；10 min時顯色不夠充分；30 min時吸光度值又降低。因此要求標準系列及樣品管在相同溫度條件下靜置20 min后測定。溫度控制在25 ℃，過高過低，均會影響實驗結果（見表2）。⑤用過的比色皿及比色管及時洗滌，否則紅色難于洗凈。具塞比色管用（1∶1）鹽酸溶液洗滌，比色皿用（1∶4）鹽酸溶液加1/3體積乙醇的混合液洗滌，洗凈后倒扣在清潔濾紙上控干［8］。

表2　顯色時間對吸光度值的影響表

5 結論

檢測的5種福建閩侯腐竹樣品，二氧化硫含量均在標準范圍內。經過地方監(jiān)管部門多年來的專項整治及日常監(jiān)督，以及根據(jù)筆者長期對福建閩侯腐竹質量的監(jiān)測，腐竹產品質量水平大幅上升，合格率達到100％，二氧化硫和次硫酸氫鈉甲醛含量均相對穩(wěn)定，在規(guī)定范圍內。

應用GB/T5009.34-2003第一法測定腐竹中二氧化硫的含量時，需注意幾點：配制鹽酸副玫瑰苯胺溶液時需控制鹽酸的用量，建議添加鹽酸（1∶1）10～15 mL；新標定的二氧化硫標準溶液應避光保存于冰箱中，且一個月后須重新標定；試樣處理中添加亞鐵氰化鉀及乙酸鋅溶液使結果更準確；添加氨基磺酸銨溶液消除了亞硝酸鹽的干擾；嚴格按照標準的順序添加試劑：四氯汞鈉吸收液、氨基磺酸銨溶液、甲醛溶液、鹽酸副玫瑰苯胺溶液；控制顯色時間20 min，顯色溫度25 ℃。

［1］周德慶，張雙靈.鹽酸副玫瑰苯胺法測量食品中亞硫酸鹽的不確定度評定［J］.現(xiàn)代測量與實驗室管理，2004（4）：18-20.

［2］趙秋艷，喬明武，李 寧，等.市售腐竹安全性的初步分析［J］.湖北農業(yè)科學，2012，51（2）：380-381.

［3］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 5009.34-2003 食品中亞硫酸鹽的測定［S］.北京：中國標準出版社，2003.

［4］曹繼英.鹽酸付玫瑰苯胺的結構與顏色效應［J］.環(huán)境監(jiān)測管理與技術，1993，5（3）：15-17.

［5］高明菊，張文斌，馬 妮，等.天麻中二氧化硫的含量測定［J］.時珍國醫(yī)國藥，2006，17（5）：722-723.

［6］杜明海.鹽酸副玫瑰苯胺分光光度法測定食糖中的亞硫酸鹽［J］.廣州化工，2011，39（8）：96-99.

［7］葉文芳.二氧化硫測定中鹽酸副玫瑰苯胺中鹽酸用量的研究［J］.食品安全導刊，2015（3）：83-85.

［8］侯美玲.鹽酸副玫瑰苯胺比色法測定二氧化硫（SO2）的誤差分析［J］.儀器儀表與分析監(jiān)測，2001（1）：41-45.

The Discussion of Deter mination of Sulfur Dioxide in Dried Beancurd Stick by Pararosaniline Hydrochloride Method

Hong Li
（Minhou Testing Center of Quality & Metrology， Fuzhou 350100， China）

Determination of sulfur dioxide in dried beancurd stick by pararosaniline hydrochloride method from GB/T5009.34-2003 The Determination of Sulphite in Foods， discuss the cautions of the determination process. The results showed that the content of sulfur dioxide in minhou County's dried beancurd stick is stable and within the speci fied range； the amount of hydrochloric acid （1∶1） in pararosaniline hydrochloride solution is 10-15 mL； sulfur dioxide standard solution must be storaged in cold and dark area and recalibrated after a month； control chromogenic time of 20 min， temperature of 25 ℃.

Pararosaniline hydrochloride method； Dried beancurd stick； Sulfur dioxide； Deter mination；Cautions

TS207.3

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.12.033

洪莉（1986-），女，漢族，本科，助理工程師；主要研究方向為食品檢測。