蒙藥小白蒿與炒白蒿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

其其日樂格　薩茹拉　那生桑

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蒙藥小白蒿與炒白蒿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

其其日樂格薩茹拉那生桑

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué),呼和浩特,010110;內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院,呼和浩特,010020;內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué),呼和浩特,010110)

目的:制訂蒙藥小白蒿飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案。方法:用薄層鑒別法對小白蒿、炒白蒿含有的主要止血有效成分綠原酸建立鑒別方法;照《中華人民共和國藥典》(2010年版一部)與檢查項(xiàng)相關(guān)規(guī)定,對該二品種進(jìn)行逐項(xiàng)檢查;用HPLC測定小白蒿、炒白蒿中綠原酸建立了定量分析方法。結(jié)果:質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別中綠原酸薄層斑點(diǎn)清晰可辨;各檢查項(xiàng)數(shù)據(jù)均符合《中華人民共和國藥典》要求。含量測定的色譜條件中色譜柱:GraceSmart RP18(250 mm×4.6 mm,5 μm);波長:327 mm;流動(dòng)相:乙腈-0.4%磷酸溶液(12∶88);流速:1.0 mL/min;柱溫25℃;色譜柱理論塔板數(shù)按綠原酸色譜峰面積計(jì)算不得超過3 000;與相鄰峰的分離度(R＞1.5),空白無干擾;線性范圍為2～12 g(R2=0.9998);平均回收率為105.775%(RSD =2.8%)。結(jié)論:質(zhì)控方法可靠,靈敏度高,專屬,穩(wěn)定,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好。

蒙藥;炒白蒿;博層色譜鑒別;含量測定;高效液相色譜法

小白蒿是蒙醫(yī)最常用藥材之一。是菊科多年生植物冷蒿(Artemisia frigida Willd)的地上部分,秋季花盛開時(shí)采集,陰干[1]。味苦,性涼。主要止血,消腫,消“奇哈”;用于各種出血,關(guān)節(jié)腫脹,腎熱,月經(jīng)不調(diào),瘡癰等。其植物資源豐富,北半球寒帶、亞熱帶幾乎有分布。蒙醫(yī)用于消腫,消“奇哈”,或人工藥浴時(shí)處方入用小白蒿;而止血或診療血液病證處方和制劑中主要用小白蒿炒制品—炒白蒿[2]。蒙醫(yī)臨床一直以來用小白蒿、炒白蒿,但缺乏該二品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),無法控制其內(nèi)在質(zhì)量[3]。本文經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究采取TLC、HPLC等方法,為建立小白蒿和炒白蒿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

1　材料

1.1儀器 P230型液相色譜儀(大連伊力特牌); EC2000型色譜站(大連伊力特牌);UV230+型紫外分光光度儀(大連伊力特牌);AB135-S型電子分析天平(德國);RE52CS-2旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。

1.2試藥 綠原酸對照品(批號(hào):110753-200413):由中國食品藥品檢定研究院提供;小白蒿藥材:采自呼和浩特大青山、赤峰市巴林右旗、赤峰市罕山、錫盟阿巴嘎旗和鄂爾多斯市等5個(gè)產(chǎn)地10批樣品。經(jīng)內(nèi)蒙古藥檢所鑒定為正品;炒白蒿:由本校炮制實(shí)驗(yàn)中心自行炮制成品;甲醇、乙腈等色譜試劑:市售;純凈水等。

2　方法

2.1藥材性狀 小白蒿為不規(guī)則段,多破碎。莖圓柱形,長短不一,直徑0.5～1 mm;表面灰綠色,具縱棱線,密被灰白色茸毛;質(zhì)脆,易折斷,斷面中部有髓,白色或中空。葉互生,灰黃綠色,1～3回羽狀全裂,小裂片條狀披針形或矩圓形,密被灰白色茸毛。氣香特異,味微苦;炒白蒿形如小白蒿,表面呈棕黃色,多破碎。氣香,味苦。

2.2薄層鑒別 取小白蒿和炒白蒿粉末各0.5 g,分別置具塞瓶中,各加稀鹽酸0.05 mL,乙酸乙酯7.5 mL,超聲(功率150,頻率40 kHz)提取20min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状? mL使溶解,作為2種供試品溶液。另取綠原酸對照品,加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液,作為對照品溶液。按照《中華人民共和國藥典》(2010年版一部附錄VIB)薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述3種溶液各6 L,分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1 ∶15∶1∶1∶2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視[4-5]。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見下圖1。

圖1　小白蒿與炒白蒿薄層色譜

2.3水分 按照《中華人民共和國藥典》(2010年版一部附錄IXH)法第一法(烘干法)測定樣品中的水分[4],結(jié)果5個(gè)產(chǎn)地10批樣品水分含量均不超過5.0%,放涼后樣品重量差別不超過5 mg,可以確定為該品水平含量不超過5.0%。見表1。

2.4總灰分 按照《中華人民共和國藥典》(2010年版一部附錄ⅨK)總會(huì)分測定法測定樣品中的總灰分[4],結(jié)果5個(gè)產(chǎn)地10批樣品總灰分含量,均不超過6.5%。見表2。

表1　小白蒿炮制樣品中水分含量(±s,n=2)

表1　小白蒿炮制樣品中水分含量(±s,n=2)

樣品樣品量(g)減少量(g)重量差距(g)水分含量(%) 2.3210.1090.0034.7巴林右旗2.4570.0930.0044.0赤峰罕山2.2700.0930.0034.0阿巴嘎旗2.4260.0950.0044.1鄂爾多斯呼和浩特2.3570.0970.0044.2

表2　小白蒿炮制樣品總灰分含量

2.5含量測定 按照《中華人民共和國藥典》(2010年版一部)高效液相色譜法(附錄VID)測定樣品中止血主要成分綠原酸的含量[6-12]。

2.5.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱: GraceSmart RP18(250 mm×4.6 mm,5 μm);波長: 327 nm;流動(dòng)相:乙腈:0.4%磷酸溶液(12∶88);流速:1.0 mL/min;柱溫:25℃;理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不得低于3 000;與相鄰峰的分離度(R＞1.5),空白無干擾;線性范圍為2～12 μg(R2= 0.999 8),平均回收率為105.775%(RSD=2.8%)。

2.5.2對照品溶液的制備 取綠原酸對照品適量,精密稱定,加50%色譜甲醇制成0.838 mg/mL的溶液,即得。

2.5.3供試品溶液的制備 取本品粗粉0.5 g,精密稱定,置具塞瓶中,加50%色譜甲醇50 mL,稱重,加塞過夜,超聲提取(功率150 W,40 kHz)40min,放涼,補(bǔ)充溶液失重,搖勻,離心(3 000 r/min)15min,傾取上清溶液,準(zhǔn)確量取2 mL,置100 mL具塞錐形瓶中,加50%色譜甲醇稀釋至刻度,搖勻即得。

2.5.4線性關(guān)系考察 精密吸取綠原酸對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、mL、5 mL、6 mL分別置10 mL量瓶,加上述甲醇至刻度,搖勻。從中各取10 μL注入液相色譜儀,測定其峰面積積分值。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算得回歸方程為:Y=772.59X+92.768, R2=0.999 8。結(jié)果表明綠原酸對照品在0.838～5.028 μg范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系,結(jié)果見下圖2和表3。

表3　綠原酸線性關(guān)系考察

圖2　綠原酸溶液線性關(guān)系

2.5.5精密度試驗(yàn) 精密吸取綠原酸對照品溶液10 μL,重復(fù)進(jìn)樣5次,測定吸收峰結(jié)果精密度良好,峰面積RSD為0.88%,結(jié)果見表4。

表4　精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5.6重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批炒白蒿,同上方法平行制備供試品溶液5份,按上述色譜條件進(jìn)行測定,樣品中綠原酸的平均含量為0.0753%,峰面積RSD 為2.5%,證明本法重復(fù)性良好,結(jié)果見表5。

表5　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.5.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 μL,每隔2h進(jìn)樣1次,測得5次的峰面積RSD為2.30%,表明綠原酸在8h內(nèi)穩(wěn)定,結(jié)果見表6。

2.5.8加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的炒白蒿粗粉約0.5 g(6份),分別加入綠原酸對照品適量,同上制備供試品溶液并依法測定,平均回收率為105.78,峰面積RSD為2.8%,結(jié)果見表7。2.5.9 樣品含量測定 取5個(gè)產(chǎn)地小白蒿炮制品(炒白蒿)各2份,同上制備供試品溶液,精密吸取10 μL,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定。結(jié)果樣品中綠原酸的平均含量為0.064 mg/g (0.0064%),RSD為1.5%,結(jié)果見表8和圖3、4。

表6　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表7　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

圖3　綠原酸HPLC

圖4　炒白蒿樣品HPLC

表8　含量測定結(jié)果

3　討論

小白蒿雖是常用蒙藥材,但一直沒有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。借此小白蒿飲片標(biāo)準(zhǔn)的建立的機(jī)會(huì),可完善了其藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。以止血有效物質(zhì)綠原酸為目標(biāo)成分,建立了小白蒿、炒白蒿的薄層鑒別方法和高效液相色譜法含量測定方法。該法簡單易行,分離效果理想,靈敏度高,專屬。經(jīng)精密度等方法學(xué)考察證明穩(wěn)定可靠,重現(xiàn)性好。可作為小白蒿藥材、小白蒿飲片和炒白蒿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。綠原酸作為炒白蒿的含量測定指標(biāo)具有較強(qiáng)的專屬性。

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(2015-05-11收稿 責(zé)任編輯:張文婷)

Study on Quality Standard of Xiaobaihao and Chaobaihao

Qiqirilege,Sarula,Nashengsang
(1 Inner Mongolia Medical University,Huhehaote 010110,China;2 Inner Mongolia international Mongolian Medicinehospital,Huhaote 010020,China;3 Inner Mongolia Medical University,Huhehaote 010110,China)

Objective:Todraft the quality specification of Xiaobaihao slices.Methods:Chlorogenic acid,the mainhemostatic component in Xiaobaihao and Chaoxiaobaihao was identified by TLC identification method.According to the inspection correlation stipulation provisioned in the Chinese Pharmacopoeia(2010 edition),the Xiaobaihao and Chaoxiaobaihao were inspected item by item and quantitative analysis method was established with thehighly effective liquid phase for chlorogenic acid.Results:In the quality specification,the chlorogenic acid spot in TLC was clear and easilydistinguished and all test items conformed to the Chinese Pharmacopoeia(2010 edition).Chromatographic column in contentdetermination was set as Grace Smart RP18(250 mm× 4.6 mm 5 μm);Wave length was 327 nm;Flowing was at the second grade;nitrile was 0.4%phosphoric acid solution(12∶88);flow speed was 1.0mL/min;and the column warm was set at 25℃.The theoretical plate number was less than 1000 according to the chlorogenic acid computation.Compared with the neighboring peakdegree ofdissociation(R＞1.5),there was no obviousdisturbance.The linear scope was 2～12 μg(R2=0.9998),and the average returns-ratio was 105.775%(RSD=2.8%).Conclusion:The indictment method is reliable,stable and accurate withhigh sensitivity,specificity and replicability.

Mongolian medicine;Chaobaihao;TLC;Quality standard;HPLC

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.04.040

內(nèi)蒙古政府重大項(xiàng)目(編號(hào):2013-006)

其其日樂格(1991.09—),女,在讀研究生,內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙藥學(xué)研究,研究方向:蒙藥現(xiàn)代化研究,E-mail:601977642@qq.com

那生桑(1956.01—),男,博士,教授,調(diào)研員,研究方向:蒙藥現(xiàn)代化研究,E-mail:nasang56@sina.com