酸性鉻蘭K分光光度法測定硫酸卡那霉素*

王　麗，李楊洲，徐　紅，劉　紅

(貴州醫(yī)科大學(xué)，貴州　貴陽　550004)

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酸性鉻蘭K分光光度法測定硫酸卡那霉素*

王麗，李楊洲，徐紅，劉紅

(貴州醫(yī)科大學(xué)，貴州貴陽550004)

建立了利用分光光度法測定硫酸卡那霉素的新方法。在pH4.10的Britton-Robinson(B-R)緩沖溶液中，酸性鉻蘭K溶液的特征吸收峰出現(xiàn)于525 nm處，隨著硫酸卡那霉素的加入，該處的吸收峰強度下降?？敲顾氐臐舛仍?.08～6.0 mg/L范圍內(nèi)與對應(yīng)溶液的吸光度差值遵守比爾定律，表觀摩爾吸光系數(shù)ε=9.9×104L/mol/cm，檢測限(3σ)為0.018 mg/L。方法應(yīng)用于硫酸卡那霉素注射液的測定，結(jié)果滿意。

分光光度法；硫酸卡那霉素；酸性鉻蘭K

氨基糖苷類抗生素具有良好的殺菌作用，在臨床上常用作為抗感染藥物使用，硫酸卡那霉素(Kanamycin Sulfate，KANA)就是其中的代表藥物[1]。已有文獻報道利用高效液相色譜法[2-3]、分光光度法[4-7]、共振瑞利散射法[8-9]等對微量卡那霉素進行定量測定，因此研究卡那霉素的微量分析對于臨床用藥、測定藥物殘留等都一定意義。

本文選擇酸性偶氮染料鉻蘭K(Acid chrome blue K)為光度試劑，考察了在弱酸性條件下，酸性鉻蘭K與硫酸卡那霉素反應(yīng)的光譜特征、適宜的反應(yīng)條件和共存物質(zhì)的影響，建立了測定微量卡那霉素注射液的光度分析方法。

1　實　驗

1.1材料與儀器

20 mg/L硫酸卡那霉素標準溶液；0.34×10-4mg/L酸性鉻蘭K溶液；0.2 mg/L Britton-Robinson(B-R)系列緩沖溶液。

TU-1800pc紫外-可見分光光度計。

1.2試驗方法

于10mL比色管中，依次加入B-R緩沖溶液(pH4.10)1.0mL、0.34×10-4mg/L酸性鉻蘭K溶液2.0mL、20 mg/L硫酸卡那霉素標準溶液或樣品溶液適量，定容后靜置15 min。分別用1 cm比色皿盛裝溶液，在TU-1800pc紫外-可見分光光度計上進行光譜掃描，并選擇在波長525 nm處進行溶液吸光度測定，試劑空白吸光度記為A0，含卡那霉素者吸光度記為A，記錄ΔA=A0-A。

2　結(jié)果與討論

2.1吸收光譜

酸性鉻蘭K及其與卡那霉素締合物在400～700 nm 范圍內(nèi)的吸收光譜，如圖1所示：以水為參比，酸性鉻蘭K的最大吸收峰在525 nm處(曲線1)，隨著硫酸卡那霉素的不斷加入，此處的吸光度值逐漸減小(曲線2～4)。以試劑空白為參比時，則525 nm處出現(xiàn)一強負吸收峰(曲線5)。故實驗選擇525 nm作為測定時的工作波長。

圖1　體系的吸收光譜

2.2酸度的影響

試驗了B-R緩沖溶液、C-L緩沖溶液、HAc-NaAc緩沖溶液，發(fā)現(xiàn)酸性鉻蘭K與卡那霉素的締合在這些緩沖溶液中均能進行，但以在B-R中靈敏度較高，且pH最佳范圍為pH2.69～7.96，故試驗選擇用pH4.10 B-R 緩沖溶液，用量1.0mL為宜。

2.3酸性鉻蘭K溶液用量的選擇

卡那霉素濃度為4.0 mg/L，在選定的酸度條件下，酸性鉻蘭K最適宜的濃度范圍為0.51×10-5～1.02×10-5mg/L?？赡苁菨舛容^小，酸性鉻蘭K與卡那霉素的結(jié)合反應(yīng)不完全，靈敏度較低；濃度太大，體系顏色太深，并且酸性鉻蘭K分子可能自身聚合，導(dǎo)致靈敏度下降。試驗加入量為：10mL比色管中加入0.34×10-4mg/L酸性鉻蘭K溶液2.0mL。

2.4吸光度的穩(wěn)定性

控制反應(yīng)溫度分別為5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃，ΔA基本不變，試驗可選擇在室溫下進行。室溫(20℃)下按試驗方法配制好溶液，立即計時測定，并且每間隔2 min記錄一次吸光度值。結(jié)果顯示，計時15～96 min內(nèi)，ΔA基本不變。試驗選在反應(yīng)20～30 min期間進行測定。

2.5NaCl的影響

固定測定體系中卡那霉素濃度為4 mg/L，按試驗方法配制溶液，加入NaCl試驗離子強度對ΔA值的影響。體系中加入少量NaCl，對ΔA影響不大，但隨NaCl加入量的增加(>585 mg/L)，ΔA降低。原因可能是NaCl濃度較大后，溶液中存在的大量Na+和Cl-，對酸性鉻蘭K和卡那霉素的結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)生了競爭。

2.6干擾實驗

2.7方法的線性參數(shù)

按試驗方法記錄的ΔA，以ΔA與對應(yīng)的卡那霉素濃度作圖，繪制標準曲線，得到方法的各種線性參見表1。

525 nm處ΔA有良好的線性關(guān)系，計算得到其表觀摩爾吸光系數(shù)ε=9.9×104L/mol/cm，對11份含有4.0 mg/L KANA的標準溶液進行精密度檢驗，相對標準偏差為1.68%，以3σ/k求得方法的檢出限為0.018 mg/L，更適于痕量KANA的測定。

表1　線性范圍參數(shù)和檢出限

2.8分析應(yīng)用

取一定量的硫酸卡那霉素注射液(規(guī)格：2mL:0.5 g，西南藥業(yè)股份有限公司)稀釋后，按試驗方法配制溶液，測定硫酸卡那霉素含量，并進行標準加入回收試驗，結(jié)果見表2。

表2　樣品中硫酸卡那霉素的測定結(jié)果(n=7)

3　結(jié)　論

由于在酸性條件下，酸性鉻蘭K結(jié)構(gòu)中磺酸基上的鈉離子完全解離，以陰離子形式存在；而KANA分子中的氨基被質(zhì)子化而帶正電荷，以陽離子形式存在。此外酸性鉻蘭K中萘環(huán)和苯環(huán)具有疏水作用，而KANA除質(zhì)子化氨基外的環(huán)醇母體也具有疏水性。兩者可通過靜電引力和疏水作用而形成離子締合物。本文利用該締合反應(yīng)建立了測定微量卡那霉素的分光光度法。在最佳條件下，卡那霉素的濃度在0.08～6.0 mg/L范圍內(nèi)遵守比爾定律，表觀摩爾吸光系數(shù)ε=9.9×104L/mol/cm，檢測限(3σ)為0.018 mg/L。將該方法應(yīng)用于硫酸卡那霉素注射液的測定，結(jié)果滿意。

[1]諸玲玲,孟現(xiàn)民,張永信.氨基糖苷類藥物的發(fā)展歷程[J].上海醫(yī)藥,2011,32(7):322-326.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:1316-1317.

[3]王金鳳,楊化新,朱俐,等.HPLC-NQAD和HPLC-ELSD法測定硫酸卡那霉素注射劑的含量 [J].藥物分析雜志,2014,34(4):644-648.

[4]徐紅,剛果紅光度法測定微量硫酸卡那霉素[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,32(1):50-52.

[5]唐寧莉,楊蘭玲,蔣杰,等.虎紅光度法測定硫酸卡那霉素[J].桂林理工大學(xué)學(xué)報,2010,30(1):137-139.

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[8]陳效蘭,張慧,劉冰,等.納米金核酸適配體共振瑞利散射光譜檢測卡那霉素的研究[J].分析測試學(xué)報,2014,33(6):709-713.

[9]王明霞,劉忠芳,胡小莉,等.達旦黃與氨基糖苷類抗生素相互作用的共振瑞利散射光譜研究及其應(yīng)用[J].理化檢驗-化學(xué)分冊,2006,42(1):16-21.

Spectrophotometric Determination of Kanamycin Sulfate with Acid Chrome Blue K*

WANG Li,LI Yang-zhou,XU Hong,LIU Hong

(Guiyang Medical University,Guizhou Guiyang 550004,China)

A determination method for Kanamycin Sulfate by spectrophotometry was studied.In pH4.10 Britton Robinson buffer solution,acid chrome blue K had a strong absorbance at 525 nm and the addition of Kanamycin Sulfate into acid chrome blue K solution resulted in the decrease in the absorbance value at 525 nm.The decrease in absorbance value was linear with the concention of Kanamycin Sulfate.Under the optimal conditions,Beer’s law was obeyed in the range of 0.08～6.0 mg/L,with apparent molar absorptivity of 9.9×104L/mol/cm and the detection limit of 0.018 mg/L.The method was applied to determine the sodium injection solution with satisfactory results.

spectrophotometry; Kanamycin Sulfate; acid chrome blue K

2014年高等學(xué)校大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項目(201410660010)；貴州省科技廳聯(lián)合基金(黔科合LG[2012]032號)。

王麗(1985-),女，講師，主要研究方向：環(huán)境分析。

徐紅(1970-)，女，教授，主要研究方向：分子光譜分析。

O657.31

A

1001-9677(2016)011-0158-02