百部-紫菀藥對不同配比組方的藥效作用研究*

姜登釗，肖欣戈，唐進波

(1 九江學(xué)院藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，江西　九江　332000；

2 江西博萊大藥廠有限公司，江西　九江　332100)

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百部-紫菀藥對不同配比組方的藥效作用研究*

姜登釗1,2，肖欣戈2，唐進波2

(1 九江學(xué)院藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，江西九江332000；

2 江西博萊大藥廠有限公司，江西九江332100)

分別采用小鼠呼吸道酚紅排泄法，小鼠濃氨水噴霧法，乙酰膽堿-組胺引喘豚鼠平喘實驗考察百部、紫菀配伍前后及不同配比的止咳、化痰、平喘藥效作用。結(jié)果表明配伍能夠增強藥物的止咳、化痰、平喘藥效作用，其中百部-紫菀(1:2)組祛痰作用最強，百部-紫菀(1:1)組止咳、平喘作用最強，而配伍比例對于藥對的藥效作用也具有重要影響。

百部；紫菀；配伍；配比；止咳；化痰；平喘

藥對是中藥復(fù)方最小的組成單位，作為中藥配伍應(yīng)用的最常見形式，反映了復(fù)方配伍的特殊規(guī)律與內(nèi)在聯(lián)系，加強中藥藥對的配伍機制研究有助于對中藥復(fù)方配伍機制的理解。百部-紫菀藥對源自《醫(yī)學(xué)心語》中方劑止嗽散，臨床常用其加減方治療咳嗽變異性哮喘，具有非常良好的療效[1-2]。止嗽散原方由百部、紫菀、陳皮等七味藥物組成，其中百部-紫菀為其核心藥對，屬相須相使的協(xié)同配伍，體現(xiàn)著該方藥效的核心作用。本研究通過觀察配伍前后及不同配伍比例百部-紫菀對止咳、化痰、平喘藥效作用的影響，初步探討藥對的配伍機理并探索配伍比例對藥對的藥效作用影響。

1　實　驗

1.1實驗動物與藥材

雄性昆明種小鼠，體重18～22 g；雄性豚鼠，體重180～200 g；動物飼養(yǎng)在室溫(25±2) ℃動物房，給藥前自由攝食飲水。

百部，紫菀均購自于九江市開心人大藥房，經(jīng)九江學(xué)院高春華教授鑒定為對葉百部StemonatuberosaLour.，紫菀AstertataricusL.f.。百部、紫菀藥材粉碎，將百部、紫菀單味藥材及百部-紫菀藥對按比例(1:1，1:2，2:1)經(jīng)過蒸餾水浸泡0.5 h后，煮沸提取，第一次提取1 h，第二次提取0.5 h，合并兩次提取液，水浴濃縮至原生藥量含量為3 g/mL。

1.2試劑與儀器

酚紅，上海試劑三廠；氯化乙酰膽堿，上海三愛思試劑；磷酸組胺，中科院上海生物化學(xué)研究所；氨水，上海試劑三廠；以上試劑均為分析純。

2100型紫外分光光度計，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；402型超聲霧化器，上海四菱醫(yī)療器械廠；B-Z型電子分析天平，梅特勒—托利多儀器上海有限公司。

2　實驗方法

2.1小鼠呼吸道酚紅排泄實驗[3-4]

昆明種小鼠90只，隨機分為6組，每組15只，分別為空白對照組，百部組，紫菀組，百部-紫菀(1:1)組，百部-紫菀(1:2)組，百部-紫菀(2:1)組，每組連續(xù)灌胃給藥5天，每天一次，百部組，紫菀組給藥劑量為9 g/kg(相當(dāng)于成人臨床用量20倍)，百部-紫菀藥對各組給藥劑量為18 g/kg(相當(dāng)于成人臨床用量20倍)，空白組灌胃0.5% CMCNa。實驗前禁食不禁水12 h。末次給藥后1 h，各實驗組腹腔注射5% 酚紅生理鹽水溶液500 mg/kg，注射后30 min，脫頸椎處死小鼠，分離氣管，剪下0.5 cm長的氣管段放入2 mL生理鹽水試管中，加入1 mol/L NaOH 0.1 mL，振蕩30 min。以分光光度計在波長546 nm 條件下測定吸光值，根據(jù)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算酚紅排出量。

2.2小鼠濃氨水噴霧法引咳實驗[5]

取小鼠90只，實驗分組及給藥劑量同小鼠呼吸道酚紅排泄實驗。末次給藥后1 h，將小鼠置于2 L玻璃鐘罩內(nèi)，超聲霧化器噴入氨水10 s引咳，記錄小鼠咳嗽潛伏期及3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)(從開始噴氨水到產(chǎn)生咳嗽的時間為小鼠咳嗽潛伏期；小鼠咳嗽的表現(xiàn)以小鼠收縮腹肌并張口為準(zhǔn)，有時會發(fā)出咳聲)。

2.3乙酰膽堿-組胺引喘豚鼠平喘實驗[3]

實驗豚鼠預(yù)篩：采用噴霧致喘法，將豚鼠置于4 L透明玻璃鐘罩中，每只超聲霧化0.4%磷酸組胺和2%氯化乙酰膽堿1:1混合液30 s，動物在吸入上述藥液后經(jīng)過一定的潛伏期，即產(chǎn)生哮喘反應(yīng)，“哮喘”反應(yīng)按程序可分為四級，I級呼吸加速，II級呼吸困難，III級抽搐，IV級跌倒。挑選潛伏期在120 s內(nèi)出現(xiàn)III級或IV級反應(yīng)(即抽搐和跌倒)的豚鼠。

取60只預(yù)篩合格豚鼠，隨機分為6組，每組10只，分別為空白對照組，百部組，紫菀組，百部-紫菀(1:1)組，百部-紫菀(1:2)組，百部-紫菀(2:1)組，每組連續(xù)灌胃給藥5天，百部組，紫菀組給藥劑量為13.5 g/kg(相當(dāng)于成人臨床用量20倍)，百部-紫菀藥對各組給藥劑量為27 g/kg(相當(dāng)于成人臨床用量20倍)，每天一次，空白對照組灌胃0.5% CMCNa。實驗前禁食不禁水12 h，末次給藥后1 h再按上法噴霧致喘，記錄出現(xiàn)III級及IV級哮喘反應(yīng)的潛伏期，引喘潛伏期超過6 min者以6 min計。

2.4統(tǒng)計分析

3　結(jié)　果

3.1祛痰實驗結(jié)果

各實驗組小鼠酚紅排出情況如表1所示。實驗結(jié)果表明，與空白對照組相比，所有給藥組均能夠促進小鼠氣道酚紅排出，均具有顯著性差異(P<0.05)，紫菀組小鼠酚紅排出強于百部組，且差異具有顯著性(P<0.05)，表明紫菀的祛痰作用強于百部。百部-紫菀藥對各組小鼠酚紅排出均強于百部、紫菀單味藥組，且差異具有顯著性(P<0.05)，表明配伍后祛痰作用增強。百部-紫菀各藥對組間比較，百部-紫菀(1:2)組祛痰作用強于另外兩組，且具有顯著性差異(P<0.05)，提示百部、紫菀配比不同對藥對的祛痰作用具有重要影響。

3.2止咳實驗結(jié)果

各實驗組對小鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)的影響如表2所示。實驗結(jié)果表明，與空白對照組比較，各實驗組均能夠延長小鼠咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)，且具有顯著性差異(P<0.05)。百部組止咳效果強于紫菀組，且差異具有顯著性(P<0.05)，但咳嗽潛伏期并無顯著性差異；百部-紫菀藥對各組小鼠止咳效果及延長小鼠咳嗽潛伏期均強于百部、紫菀單味藥組，且差異具有顯著性(P<0.05)，表明配伍后止咳作用增強。百部-紫菀各藥對組間比較，百部-紫菀(1:1)組延長小鼠咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)作用強于另外兩組，且具有顯著性差異(P<0.05)，提示百部、紫菀配比不同對藥對的止咳作用具有重要影響。

表1　各實驗組小鼠酚紅排出濃度

注：①與空白對照組比較，P<0.05；②與百部組比較，P<0.05；③與百部組比較，P<0.05；④與百部-紫菀(1:1)組比較，P<0.05；⑤與百部-紫菀(1:2)組比較，P<0.05；⑥與百部-紫菀(2:1)組比較，P<0.05。

表2　各實驗組小鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)±s, n=15)

注：①與空白對照組比較，P<0.05；②與百部組比較，P<0.05；③與百部組比較，P<0.05；④與百部-紫菀(1:1)組比較，P<0.05；⑤與百部-紫菀(1:2)組比較，P<0.05；⑥與百部-紫菀(2:1)組比較，P<0.05。

3.3平喘實驗結(jié)果

各實驗組對豚鼠抽搐潛伏期的影響如表3所示。實驗結(jié)果表明，與空白對照組比較，各實驗組均能夠延長豚鼠抽搐潛伏期，且具有顯著性差異(P<0.05)。百部組平喘效果稍強于紫菀組，但差異并不具有顯著性(P>0.05)；百部-紫菀藥對各組豚鼠抽搐潛伏期均強于百部、紫菀單味藥組，且差異具有顯著性(P<0.05)，表明配伍后平喘作用增強。百部-紫菀各藥對組間比較，百部-紫菀(1:1)組延長豚鼠抽搐潛伏期，平喘作用強于另外兩組，且具有顯著性差異(P<0.05)，提示百部、紫菀配比不同對藥對的平喘作用具有重要影響。

表3　各實驗組豚鼠抽搐潛伏期±s, n=10)

注：①與空白對照組比較，P<0.05；②與百部組比較，P<0.05；③與紫菀組比較，P<0.05；④與百部-紫菀(1:1)組比較，P<0.05；⑤與百部-紫菀(1:2)組比較，P<0.05；⑥與百部-紫菀(2:1)組比較，P<0.05。

4　討　論

方劑配伍規(guī)律是中醫(yī)方劑理論的核心問題，以藥對研究為切入點是揭示方劑配伍規(guī)律與科學(xué)內(nèi)涵的有效途徑，也是近年來方劑研究的熱點方向。藥對的配伍不是藥物作用的簡單相加，而是通過藥物之間錯綜復(fù)雜的相互作用而發(fā)揮綜合功效。目前的研究表明，藥對配伍后能夠顯著增強藥效作用甚至可能會產(chǎn)生單味藥材沒有的生理作用[6-7]；也可能會有利于有效物質(zhì)的溶出，從而增強藥效作用[8-9]；還可能對藥物的體內(nèi)吸收、代謝過程造成影響，提高藥效成分的生物利用度[10-11]；而部分藥對配伍則能夠降低藥物的毒性或副作用產(chǎn)生影響[12]。

百部甘潤苦降，紫菀辛散苦降，百部-紫菀藥對從四氣五味和升降浮沉分析屬于溫溫配對，二者合用，共奏降氣祛痰、潤肺止咳之功效；從歸經(jīng)來看，兩藥皆專入肺經(jīng)，合用則潤肺宣肺，增強止咳祛痰之效；從七情和合來看，兩者屬相須相使的協(xié)同配伍，主潤肺降氣、化痰止咳[13]。本研究通過對比百部-紫菀配伍前后的止咳、化痰、平喘作用探討配伍對藥效的影響，同時對比了配伍比例對上述藥效作用的影響。結(jié)果表明百部-紫菀配伍后，與單味藥相比，止咳、化痰、平喘作用明顯增強，且具有顯著性差異(P<0.05)，說明百部與紫菀配伍產(chǎn)生了協(xié)同效果，增強了藥效作用。而百部-紫菀藥對不同配伍比例的止咳、化痰、平喘實驗結(jié)果表明，百部-紫菀(1:2)組祛痰作用最強，且與其他兩組具有顯著性差異(P<0.05)，表明紫菀的比例提高有利于增強藥對的祛痰作用；百部-紫菀(1:1)組止咳、平喘作用最強，且與其他兩組具有顯著性差異(P<0.05)，這也與止嗽散中兩者的比例(1:1)相吻合，表明兩者的配伍比例對于藥對的止咳、平喘作用確實具有重要意義，這也體現(xiàn)了中醫(yī)方劑配伍理論的量效關(guān)系原理[14]。

[1]胡軍旗, 郎雅麗, 張副興, 等. 止嗽散治療咳嗽變異性哮喘療效評價[J]. 中醫(yī)學(xué)報, 2015, 30(3): 333-336.

[2]冼峰. 止嗽散加味治療咳嗽變異性哮喘43例臨床觀察[J]. 中醫(yī)藥導(dǎo)報, 2014, 20(3): 95-96.

[3]徐樹楠, 張美玉, 王永梅, 等. 蟬蛻鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用的藥理研究[J]. 中國藥理學(xué)通報, 2007, 23(12): 1678.

[4]陳奇. 中藥藥理研究方法學(xué).2版[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社. 2006: 630.

[5]杜勤, 葉木榮, 王振華, 等. 青天葵鎮(zhèn)咳、平喘藥理作用研究[J]. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2006, 23(1): 45.

[6]Gao QT, Choi RCY, Anna WH, et al. Danggui BuxueTang A Chinese herbal decoction activates the phosphorylations of extra cellular signal-regulated kinase and estrogen receptor a in cultured MCF- 7 cells[J]. FEBS Letters, 2007, 581: 233-240.

[7]劉慧蘭, 歐陽建軍. 桂枝、柴胡與白芍分別配伍的相關(guān)藥效學(xué)研究[J]. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2007, 27(3): 31-33.

[8]謄慧, 朱會, 張振秋. 吳茱萸當(dāng)歸不同比例配伍對阿魏酸含量的影響[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2009, 15(5): 9-10.

[9]黃浩, 姜海霞, 周琳. 紅花與甘草配伍后的化學(xué)成分動態(tài)變化研究[J]. 中成藥, 2007, 29(1): 104-106.

[10]孟祥樂, 李紅偉, 韓永龍, 等. 梔子-連翹藥對大鼠體內(nèi)藥動學(xué)變化特征研究[J]. 中國新藥雜志, 2015, 24(17): 2003-2009.

[11]朱釗銘, 李漢成, 羅佳波. 麻黃及其與白術(shù)藥對配伍在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)及組織分布[J]. 中藥材, 2014, 37(12): 2234-2239.

[12]羅丹, 王友群, 郭盛, 等. 大棗拮抗甘遂毒性部位致炎作用的減毒效應(yīng)評價[J]. 中國藥科大學(xué)學(xué)報, 2009, 40(3): 238-243

[13]高衛(wèi)東, 高英, 李衛(wèi)民, 等. 百部紫菀配對分析和臨床應(yīng)用[J]. 新中醫(yī), 2007, 39(4): 72.

[14]羅輝, 劉建平. 中藥復(fù)方劑量效應(yīng)關(guān)系臨床研究的思考[J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2011, 31(6): 832-836.

Effect of Stemona Tuberosa and Aster Tataricus with Different Proportions on Antitussive, Antiasthmatic and Expectorant Activities*

JIANGDeng-zhao1,2,XIAOXin-ge2,TANGJin-bo2

(1 School of Pharmacy and Life Sciences, Jiujiang University, Jiangxi Jiujiang 332000;2 Jiangxi Bolai Pharmacy Co., Ltd., Jiangxi Jiujiang 331000, China)

In this study, the effects ofStemonatuberosaandAstertataricuswith different proportions on antitussive, antiasthmatic and expectorant activities were observed. The expectorant effects were observed on phenol red expectorant experiment, the antitussive effects were observed on ammonia water-induced cough model of mice and the antiasthmatic effects was observed by prolonging the latent period of asthma induced by histamine and acetylcholine mixture in guinea pigs. The results showed that the antitussive, antiasthmatic and expectorant activities were enhanced when compatibility of StemonatuberosaandAstertataricus. The effect of expectorant activity was the strongest when the compatibility ratio ofStemonatuberosaandAstertataricuswas 1:2 while antitussive and antiasthmatic activities were 1:1 which suggested that proportion had an important role in the pharmacodynamic function.

StemonatuberosaLour.;AstertataricusL.f.; compatibility; proportion; antitussive; antiasthmatic; expectorant

江西省自然科學(xué)基金項目(20142BAB205081)；國家自然科學(xué)基金項目(81560642)。

姜登釗(1982-)，男，博士，講師，主要從事中藥藥效活性成分及復(fù)方配伍機制研究。

R285.5

B

1001-9677(2016)05-0052-03