HPLC法測定西洛他唑分散片有關(guān)物質(zhì)

任萃文

（哈爾濱商業(yè)大學生命科學與環(huán)境科學研究中心，哈爾濱150076）

HPLC法測定西洛他唑分散片有關(guān)物質(zhì)

任萃文

（哈爾濱商業(yè)大學生命科學與環(huán)境科學研究中心，哈爾濱150076）

建立西洛他唑分散片有關(guān)物質(zhì)的檢測方法.采用C8柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相A為乙腈-水（25∶75），流動相B為乙腈-水（50∶50）；梯度洗脫：0-6 min-10 min-40 min，流動相A∶B的比例為100∶0-50∶50-0∶100-0∶100；檢測波長254 nm.結(jié)果表明，西洛他唑與各已知雜質(zhì)及降解產(chǎn)物均良好分離，最低檢測限與最低定量限分別為0.1 ng與0.2 ng，精密度良好.本方法操作簡單，對西洛他唑分散片有關(guān)物質(zhì)檢測快速，準確，專屬性強，靈敏度高.

西洛他唑；有關(guān)物質(zhì)；HPLC；梯度洗脫

西洛他唑為抗血小板藥物，主要通過抑制磷酸二酯酶活性而用于血栓性疾病的治療；尤其對肢體動脈缺血性疾病作用顯著，是治療間歇性跛行的首選藥物［1-2］.目前，國內(nèi)上市的西洛他唑制劑主要為普通片劑和膠囊，為了使吸收更迅速并給服藥困難者提供方便，研制了西洛他唑分散片，本文對所研制的西洛他唑分散片有關(guān)物質(zhì)檢測方法進行研究.

文獻報道，西洛他唑一般采用高效液相色譜法進行質(zhì)量控制［3-6］，USP35收載了西洛他唑原料的有關(guān)物質(zhì)檢測方法，并列出3種可能存在的已知雜質(zhì)，從其結(jié)構(gòu)（見圖1）分析，西洛他唑雜質(zhì)B與西洛他唑結(jié)構(gòu)相對接近，西洛他唑雜質(zhì)A和C的結(jié)構(gòu)相差較大，采用一般的等強度洗脫難以實現(xiàn)各已知雜質(zhì)及主峰的同時分離，故本文選用梯度洗脫方式對本品有關(guān)物質(zhì)檢查，并進行方法學研究.

圖1　西洛他唑及其雜質(zhì)結(jié)構(gòu)圖

1　儀器與試藥

1.1儀器

JASCO高效液相色譜儀（日本），PU-2089泵，UV-2075可見-紫外檢測器，AS-2055自動進樣器，ChromPass色譜工作站.

1.2試藥

西洛他唑?qū)φ掌罚ㄖ袊称匪幤窓z定研究院，批號：100363-201202）；Cilostazol Related Compound A（西洛他唑雜質(zhì) A對照品，USP，批號：F0G160）；Cilostazol Related Compound B（西洛他唑雜質(zhì)B對照品，USP，批號：F0G073）；Cilostazol Related Compound C（西洛他唑雜質(zhì)C對照品，USP，批號：F0G074，質(zhì)量分數(shù)99.5%）；西洛他唑分散片（自制，批號：140901、140902、140903）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純.

2　試驗內(nèi)容與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：采用phenomenex C8柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相A為乙腈-水（25∶75），流動相B為乙腈-水（50∶50）；梯度洗脫：0-6 min-10 min-40 min，流動相A∶B的比例為100∶0-50 ∶50-0∶100-0∶100；檢測波長254 nm；流速：1.0 mL/min；進樣量：20μL；理論板數(shù)按西洛他唑峰計算不低于2 000.

2.2供試品溶液的配制

精密稱取西洛他唑分散片樣品細粉適量（約含西洛他唑40 mg），置100 mL量瓶中，加入乙腈40 mL，超聲，使西洛他唑溶解后，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液.

2.3系統(tǒng)適用性試驗

取西洛他唑?qū)φ掌芳案麟s質(zhì)對照品適量，加乙腈溶解制成混合溶液.在2.1色譜條件下進樣，記錄色譜圖.西洛他唑及其雜質(zhì)A、B和C保留時間分別為17.28、4.21、15.52、33.86 min，分離度為3.53、西洛他唑主峰理論塔板數(shù)為30 274，西洛他唑與各雜質(zhì)均能有效分離，見圖2.

圖2　系統(tǒng)適用性圖譜

2.4輔料干擾試驗

取處方量的西洛他唑分散片空白輔料適量，按

2.2項的方法配制，進樣.結(jié)果見圖3.空白輔料在此波長處沒有吸收，不干擾西洛他唑及其雜質(zhì)的測定.

圖3　輔料干擾圖譜

2.5專屬性試驗

酸破壞試驗精密稱取西洛他唑分散片細粉適量（約含西洛他唑40 mg），置100 mL錐形瓶中，加入2 mol/L的鹽酸溶液5 mL，在100℃條件下放置5 h，取出，加2 mol/L的氫氧化鈉溶液5 mL中和，加入乙腈40 mL，超聲，使西洛他唑溶解后，加入蒸餾水50 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為酸破壞溶液.

堿破壞試驗精密稱取西洛他唑分散片細粉適量（約含西洛他唑40 mg），置100 mL錐形瓶中，加入2 mol/L的氫氧化鈉溶液5 mL，在100℃條件下放置5 h，取出，加2 mol/L的鹽酸溶液5 mL中和，加入乙腈40 mL，超聲，使西洛他唑溶解后，加入蒸餾水50 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為堿破壞溶液.

熱破壞試驗取西洛他唑分散片置120℃烘箱中高溫破壞5 h，取出.精密稱取細粉適量（約含西洛他唑40 mg），置100 mL量瓶中，加入乙腈40 mL，超聲，使西洛他唑溶解后，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為熱破壞溶液.

氧破壞試驗精密稱取西洛他唑分散片細粉適量（約含西洛他唑40 mg），置100 mL錐形瓶中，加入3%的過氧化氫溶液5 mL，在100℃條件下放置2 h，取出，加入乙腈40 mL，超聲，使西洛他唑溶解后，加入蒸餾水45 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為氧破壞溶液.

光破壞試驗精密稱取西洛他唑分散片樣品細粉適量（約含西洛他唑40 mg），置100 mL量瓶中，加入乙腈40 mL，超聲，使西洛他唑溶解后，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，置4 500 Lx下強光照射72 h，取出，濾過，取續(xù)濾液作為光破壞溶液.

精密稱取西洛他唑分散片樣品細粉適量（約含西洛他唑40 mg），置100 mL量瓶中，加入乙腈40 mL，超聲，使西洛他唑溶解后，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為未破壞的供試品溶液；精密吸取上述供試品溶液各20μL，注入色譜儀，記錄色譜圖.結(jié)果表明西洛他唑各降解產(chǎn)物均能和主峰達到良好分離，說明上述色譜系統(tǒng)能有效檢測雜質(zhì)，專屬性強.

2.6供試品溶液穩(wěn)定性試驗

取批號為140901的西洛他唑分散片樣品，照2.2項供試品溶液的配制方法配制成每1 mL約含西洛他唑0.4 mg的溶液，分別于0、1、2、3、4、5 h測定，記錄色譜圖，計算峰面積的RSD值，結(jié)果見表1.結(jié)果表明，本品溶液穩(wěn)定性較好.

表1　穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.7進樣精密度試驗

精密量取西洛他唑?qū)φ掌啡芤?0μL進樣測定，連續(xù)平行分析6次，記錄色譜圖，計算主峰面積RSD值為0.71%.

2.8檢測限和定量限

將西洛他唑?qū)φ掌酚?0%乙腈逐步稀釋，進樣，記錄S/N約為3時的量為最低檢測限，S/N約為10時的量為最低定量限，結(jié)果本品的檢測限為0.1 ng，定量限0.2 ng.

2.9有關(guān)物質(zhì)檢測

取西洛他唑分散片樣品適量，照2.2供試品溶液的配制方法配制成每1 mL約含西洛他唑0.4 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1 mL，置100 mL量瓶，用40%乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液.照2.1項下的色譜條件，精密量取對照溶液20μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成份色譜峰的峰高為滿量程的20%，再精密量取供試品溶液和對照溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見表2.

表2　西洛他唑分散片有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果（%）

3　討論

3.1波長的選擇

分別取適量濃度的西洛他唑及其雜質(zhì)對照品溶液在190～400 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果西洛他唑在254 nm處有最大吸收，西洛他唑雜質(zhì)A、B和C分別在256、262、259 nm處有最大吸收，綜合考慮選擇本品的檢測波長為254 nm.

3.2色譜柱選擇

由于西洛他唑及其已知雜質(zhì)之間結(jié)構(gòu)的差異，采用極性較弱的C18色譜柱檢測本品，西洛他唑雜質(zhì)A與溶劑峰不能有效分離，還會使檢測時間延長；本文采用中等極性的C8色譜柱檢測，既能保證西洛他唑雜質(zhì)A與溶劑峰的效分離，還能縮短檢測時間，提高檢測靈敏度.經(jīng)上述方法驗證，本品色譜條件重現(xiàn)性好，精準度高.

［1］陳小勇，彭潤濤，江宇，等.抗血小板藥物西洛他唑市場分析［J］.中國醫(yī)藥情報，2003，9（6）：39-43.

［2］萬文輝，錢曉明.經(jīng)典抗血小板治療藥物臨床研究進展［J］.中國誤診學雜志，2011，11（7）：1533-1535.

［3］唐坤.反相高效液相色譜法測定西洛他唑片含量［J］.華夏醫(yī)學，2010（3）：297-299.

［4］楊金霞.超高效液相色譜法測定西洛他唑含量［J］.中國中醫(yī)藥咨訊，2011，3（10）：115。

［5］李曉紅.HPLC法測定西洛他唑片的有關(guān)物質(zhì)［J］.中國藥事，2010（12）：1219-1220，1247.

［6］鄭一美.反相高效液相色譜法檢測西洛他唑中有關(guān)物質(zhì)［J］.中國藥業(yè)，2006，15（14）：20-21.

Determ ination of cilostazol dispersible tablets related substances by HPLC

REN Cui-wen
（Research Center on Life Sciences and Environmental Sciences，Harbin University of Commerce，Harbin 150076，China）

To establish amethod for cilostazol dispersible tablets relativematerials，the determinationswere carried out on a C8column（250 mm×4.6 mm，5μm）with acetonitrile：water（flow phase A）25∶75-acetonitrile∶water（flow phase B）50∶50 asmobile phase；gradient elution：0min-6min-10min-40min，the ratio of phase A∶phase B was100 ∶0-50∶50-0∶100-0∶100.The detection UV wavelength was 254 nm.The results indicated that the developed method could be used for the determination of cilostazol impurities and itsmetabilite with a good resolution.The limit of detection and limit of quantification of cilostazolwere 0.1 ng and 0.2 ng，respectively.Themethod was proved to be simple，accurate，reproducible and feasible，and can be used for the quality control of cilostazol dispersible tablets.

cilostazol；related substances；HPLC；gradient elution

R927

A

1672-0946（2016）02-0157-04

2015-08-28.

任萃文（1980-），女，碩士，高級工程師，研究方向：制備工藝及質(zhì)量標準.