2種檢測(cè)方法對(duì)不同年齡組涂陰肺結(jié)核病診斷價(jià)值的對(duì)比分析

李玉靜，吳海峰，孫志平，馬京華，王　亮，呂翠環(huán)*

(1.河北省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 石家莊 050041；2.河北中醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院,河北 石家莊 050200；3.河北省胸科醫(yī)院呼吸科，河北 石家莊 050041)

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·論著·

2種檢測(cè)方法對(duì)不同年齡組涂陰肺結(jié)核病診斷價(jià)值的對(duì)比分析

李玉靜1，吳海峰1，孫志平1，馬京華2，王亮3，呂翠環(huán)1*

(1.河北省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 石家莊 050041；2.河北中醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院,河北 石家莊 050200；3.河北省胸科醫(yī)院呼吸科，河北 石家莊 050041)

目的探討γ干擾素釋放試驗(yàn)(T-SPOT.TB)及結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)對(duì)不同年齡組抗酸染色涂片陰性肺結(jié)核病的診斷價(jià)值。方法分別選取已確診的涂陰肺結(jié)核病例191例、肺炎病例91例,分為3組：青少年組(7～40歲)，中年組(>40～65歲)，老年組(>65歲)，均進(jìn)行T-SPOT.TB 及結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)。結(jié)果青少年組和中年組2種檢測(cè)方法敏感度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)、特異性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而老年組敏感度、特異度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論T-SPOT.TB方法對(duì)青少年及中年涂陰肺結(jié)核的診斷有一定的價(jià)值，對(duì)老年涂陰肺結(jié)核的診斷則應(yīng)視具體情況選擇。

結(jié)核,肺；干擾素γ釋放試驗(yàn)；蛋白質(zhì)芯片

10.3969/j.issn.1007-3205.2016.06.019

目前臨床常用診斷肺結(jié)核的方法有結(jié)核菌培養(yǎng)、抗酸染色涂片、熒光定量PCR、結(jié)核抗體檢測(cè)、 γ干擾素釋放試驗(yàn)(T-SPOT.TB)等。改良羅氏結(jié)核菌培養(yǎng)是診斷肺結(jié)核的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，一般為4～8周，影響結(jié)核病的及時(shí)診斷。痰涂片抗酸染色能快速檢測(cè)結(jié)核菌，但對(duì)于涂片陰性的患者診斷很困難。T-SPOT.TB與結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)結(jié)核抗體是快速輔助診斷肺結(jié)核的方法。國(guó)內(nèi)既往鮮見(jiàn)年齡對(duì)結(jié)核患者免疫機(jī)制影響[1]的報(bào)道。本研究通過(guò)對(duì)這2種檢測(cè)方法進(jìn)行對(duì)比分析，探討其對(duì)不同年齡組涂陰肺結(jié)核病的診斷價(jià)值。

1　資料與方法

1.1一般資料選取河北省胸科醫(yī)院2013年10月—2014年10月確診為肺結(jié)核[2]且經(jīng)痰涂片抗酸染色結(jié)果陰性的患者191例分為3組：青少年組(7～40歲)98例，男性57例，女性41例,年齡8～39歲，平均(23.78±6.01)歲；中年組(>40～65歲)67例，男性44例，女性23例，年齡41～65歲，平均年齡(53.55±7.08)歲；老年組(>65歲)26例，男性18例，女性8例，年齡61～82歲，平均(75.04±4.74)歲。選擇同期住院的肺炎患者91例為對(duì)照組，同樣分為3組：青少年組(7～40歲)39例，男性20例，女性19例，年齡8～38歲，平均(22.90±7.92)歲；中年組(>40～65歲)37例，男性22例，女性15例，年齡41～63歲，平均(52.76±6.59)歲；老年組(>65歲)15例，男性8例，女性7例，年齡66～87歲，平均(73.73±7.27)歲。

1.2方法對(duì)結(jié)核組和肺炎組282例患者進(jìn)行T-SPOT.TB及結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)。

1.2.1T-SPOT.TB法①外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離、收集與計(jì)數(shù)。②體外抗原刺激與孵育。③結(jié)果判定：陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為0～5個(gè)，抗原A和抗原B檢測(cè)孔任一孔計(jì)數(shù)-陰性孔計(jì)數(shù)≥6判為陽(yáng)性；如果陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6,檢測(cè)孔斑點(diǎn)數(shù)≥2倍陰性孔斑點(diǎn)數(shù)判為陽(yáng)性。操作過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2結(jié)核蛋白芯片法嚴(yán)格按照南京大淵結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測(cè)試劑盒(蛋白芯片)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，檢測(cè)脂阿拉伯甘露聚糖抗體、38 000抗體、16 000抗體。結(jié)果用南京大淵生物技術(shù)公司生產(chǎn)的PBT-X2型生物識(shí)別儀自動(dòng)判讀。一種抗體陽(yáng)性，則判斷該患者結(jié)核分枝桿菌抗體陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

青少年組和中年組T-SPOT.TB法與結(jié)核蛋白芯片法檢測(cè)敏感度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)、特異度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而老年組敏感度、特異度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1～3。

表1　青少年組敏感度及特異度比較

表2　中年組敏感度及特異度比較

表3　老年組敏感性度特異度比較

3　討　　論

痰涂片抗酸染色是檢測(cè)結(jié)核菌的快速方法，患者可以快速取得檢驗(yàn)結(jié)果，痰涂片抗酸染色陽(yáng)性患者則可快速診斷和治療，但其敏感度低[3]；而對(duì)涂陰患者的診斷則相對(duì)困難。T-SPOT.TB及結(jié)核蛋白芯片法是近幾年發(fā)展起來(lái)的快速結(jié)核病實(shí)驗(yàn)診斷的新技術(shù)，可以快速檢測(cè)結(jié)核菌[4-7]。本研究收集涂陰肺結(jié)核191例,按國(guó)家年齡劃分標(biāo)準(zhǔn)分為3組,分別進(jìn)行T-SPOT.TB及結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)，并進(jìn)行對(duì)比分析。

T-SPOT.TB原理是結(jié)核分枝桿菌感染機(jī)體后使其產(chǎn)生記憶性T細(xì)胞，結(jié)核分枝桿菌特異性抗原再次刺激機(jī)體時(shí)使其釋放γ干擾素，可以在體外對(duì)釋放的γ干擾素水平或能有效釋放γ干擾素的T細(xì)胞進(jìn)行定量，從而判斷機(jī)體是否是結(jié)核分枝桿菌的感染者。結(jié)核蛋白芯片以微孔濾膜為載體，利用微陣列技術(shù)將純化的脂阿拉伯甘露聚糖、經(jīng)基因工程重組DNA技術(shù)生產(chǎn)純化的結(jié)核菌16 000和38 000特異性抗原固定在特制的載體上，利用微孔濾膜的滲濾、濃縮、凝集作用，捕捉被檢樣品中特異性抗體,使抗原抗體反應(yīng)在固相膜上快速進(jìn)行，復(fù)合物再與膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG作用,在膜上形成紫紅色的斑點(diǎn)。然后通過(guò)芯片識(shí)別系統(tǒng)進(jìn)行結(jié)果分析。結(jié)核蛋白芯片法可分別檢測(cè)結(jié)核菌的特異性細(xì)胞壁脂阿拉伯甘露聚糖抗體、16 000抗體和38 000抗體，以快速診斷結(jié)核菌感染情況。

本研究結(jié)果顯示，青少年組、中年組及老年組T-SPOT.TB檢測(cè)的敏感度分別為85.7%、77.6%和76.9%，結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)的敏感度分別為67.3%、58.2%和57.7%，青少年組及中年組T-SPOT.TB檢測(cè)敏感度明顯高于結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而老年組2種檢測(cè)方法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究T-SPOT.TB檢測(cè)的敏感度高于Yan等[8]的研究結(jié)果，而Yan等的研究未對(duì)所選病例進(jìn)行痰菌抗酸染色檢測(cè)結(jié)果分類，且病例來(lái)源為肺結(jié)核與肺外結(jié)核；與Dai等[9]和劉艷等[10]的分析結(jié)果基本相符，但其均未對(duì)患者進(jìn)行年齡分組。本研究結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)的敏感度與吳友根等[11]和楊群等[12]相符。

本研究結(jié)果還顯示，青少年組、中年組及老年組T-SPOT.TB檢測(cè)的特異度分別為89.7%、70.3%和80.0%，結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)的特異度分別為74.4%、73%和86.7%，2種檢測(cè)方法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究T-SPOT.TB檢測(cè)的特異度低于劉艷等[10]的報(bào)道，原因可能與年齡和樣本例數(shù)有關(guān)。

本研究青少年組及中年組T-SPOT.TB檢測(cè)的敏感度明顯高于結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)；而老年組2種檢測(cè)方法的敏感度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與研究本年齡組樣本量偏少及老年人的免疫功能低下有關(guān)。2種檢測(cè)方法在3個(gè)年齡組中的特異度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。筆者認(rèn)為臨床在選擇診斷涂陰肺結(jié)核檢測(cè)方法時(shí)，對(duì)于青少年及中年人應(yīng)優(yōu)選T-SPOT.TB檢測(cè)，老年人應(yīng)根據(jù)具體情況而定。

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(本文編輯：劉斯靜)

Comparative analysis of the diagnostic value of smear negative pulmonary tuberculosis in different age groups by two methods

LI Yu-jing1, WU Hai-feng1, SUN Zhi-ping1, MA Jing-hua2, WANG Liang3, LV Cui-huan1*

(1.Depertment of Clinical Laboratory, the Chest Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang 050041, China;2.Nursing college of Hebei Traditional Chinese Medical College, Shijiazhuang 050200, China;3.Depertment of Respiratory, the Chest Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang 050041, China)

ObjectiveTo evaluate the diagnostic value of T-SPOT.TB and tuberculosis protein chip test for difference age patients with smear-negative pulmonary tuberculosis. MethodsOne hundred and ninety-one tuberculosis patients(smear-negative pulmonary tuberculosis) and 91 pneumonia patients were enrolled in our test. They were divided into three groups: the teenage group(7～40 years old), the middle-aged group(>40～65 years old) and the gerontism group(more than >65 years old). The three groups were examined with T-SPOT.TB and tuberculosis protein chip test. ResultsThe sensitivity of T-SPOT.TB and tuberculosis protein chip test in teenage group and middle-aged group were significant difference between the two methods(P<0.05)， but the specificity of two methods was no significant difference(P>0.05). The sensitivity and specificity in gerontism group were no significant difference(P>0.05). ConclusionT-SPOT.TB was important in the diagnosis for teenage and middle-aged patients with smear-negative pulmonary tuberculosis. The diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis in the elder patients should be selected according to the specific status.

tuberculosis, pulmonary； interferon-gamma release tests； protein chip

2015-08-17；

2015-09-02

河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃(132777269)

李玉靜(1982-),女,河北新樂(lè)人,河北省胸科醫(yī)院主管技師,醫(yī)學(xué)學(xué)士,從事臨床檢驗(yàn)學(xué)研究。

R446.9

A

1007-3205(2016)06-0690-03