• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    Not c h1在肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的作用及表達(dá)變化*

    2016-09-01 02:13:04于秀文曾林祥
    關(guān)鍵詞:肌動(dòng)蛋白肺纖維化纖維細(xì)胞

    于秀文,曾林祥

    (1.浙江省杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院 呼吸科,浙江 杭州 311200;2.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 呼吸科,江西 南昌 330006)

    論著

    Not c h1在肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的作用及表達(dá)變化*

    于秀文1,曾林祥2

    (1.浙江省杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院 呼吸科,浙江 杭州 311200;2.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 呼吸科,江西 南昌 330006)

    目的探討在成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞過程中,N ot c h1表達(dá)的變化規(guī)律,以及γ-分泌酶抑制劑(DA P T)抑制N ot c h信號后,對細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響。方法取新出生2~3 d SD大鼠的肺組織,用胰酶消化法分離肺成纖維細(xì)胞,再將培養(yǎng)至第3代的細(xì)胞分為3組:對照組、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(T G F-β1)組、T G F-β1+ DA P T組。對照組為空白對照,T G F-β1組加入5ng/m l T G F-β1,T G F-β1+DA P T組同時(shí)加入5 ng/m l T G F-β1及5μm ol/L DA P T。采用免疫細(xì)胞化學(xué)法對α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-S M A)的表達(dá)變化進(jìn)行檢測。同時(shí)通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(R T-P C R)及W e s t e r n blot檢測N ot c h1 mR NA和蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果α-S M A免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果表明,對照組大部分細(xì)胞無染色,而T G F-β1組則可見大部分細(xì)胞內(nèi)有黃色和棕黃色顆粒及條紋,DA P T組和對照組無明顯差異。對照組、T G F-β1組、T G F-β1+DA P T組N ot c h1 mR NA表達(dá)量分別為(0.278±0.022)、(0.783±0.018)和(0.313±0.029),對照組與T G F-β1組、T G F-β1組與T G F-β1+DA P T組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),對照組與T G F-β1+DA P T組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對照組、T G F-β1組、T G F-β1+DA P T組N ot c h1蛋白表達(dá)量分別為(0.312±0.019)、(0.701±0.026)和(0.345±0.022),組間比較結(jié)果同N ot c h1 mR NA。結(jié)論N ot c h1可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,進(jìn)而促進(jìn)肺纖維化。

    N ot c h1;α-平滑肌肌動(dòng)蛋白;肌成纖維細(xì)胞;肺纖維化

    Notch信號通路是一個(gè)調(diào)節(jié)細(xì)胞分化的經(jīng)典信號通路,1917年首次在果蠅體內(nèi)發(fā)現(xiàn),在多種動(dòng)物中都有其同源分子的存在,脊椎動(dòng)物細(xì)胞主要是對于4 種Notch受體及5種Notch配體有相應(yīng)的表達(dá)[1]。Notch信號通路生物學(xué)作用的發(fā)揮需要經(jīng)過3步酶切作用,以及多種信號分子的聯(lián)鎖反應(yīng),而γ-分泌酶復(fù)合體的酶切作用則是其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié),用γ-分泌酶抑制劑{N-[N-(3,5-di f l u orophenacetyl)-L-alanyl]-(S)-phenyl g lycinet-b u tylester,D A P T}能夠?qū)τ讦?分泌酶復(fù)合體進(jìn)行抑制,也就阻斷Notch信號通路。

    Notch信號通路在多種組織器官的發(fā)育和動(dòng)態(tài)平衡中發(fā)揮重要作用,可以通過控制呼吸系統(tǒng)中多種細(xì)胞的功能和分化的方式,來調(diào)節(jié)肺的發(fā)育和維持成人體內(nèi)呼吸道細(xì)胞種類的平衡[2],同時(shí)在慢性肺部疾病,如慢性阻塞性肺疾病、肺纖維化、肺動(dòng)脈高壓、哮喘和肺癌中發(fā)揮重要作用[3]。近年來,有關(guān)Notch信號通路在肺損傷及肺纖維化中的作用機(jī)制亦是研究的熱點(diǎn),但仍然不甚明確。本研究旨在探討成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞過程中,Notch1的作用及表達(dá)變化,為臨床治療肺纖維化提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)試劑

    兔抗山羊Notch1多克隆二抗(美國S anta cr uz公司),山羊抗鼠Notch1多克隆一抗(美國S anta cr uz公司),免疫組織化學(xué)法試劑(北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司),鼠α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth m u scle actin,α-S M A)單克隆抗體(武漢博士德公司),鼠β-肌動(dòng)蛋白多克隆抗體、蛋白抽提試劑盒、二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,B C A)法蛋白定量試劑盒(美國P ierce公司),彩色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(上海碧云天生物技術(shù)研究所),DN A M ar k er(北京天根生物科學(xué)技術(shù)有限公司),逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(re v erse transcription-polymerase chain reaction,R T-PC R)試劑盒(大連寶生生物工程有限公司),轉(zhuǎn)化生長因子-β1(trans f ormin g g ro w th f actor-β1,T G F-β1)(美國P eproTech公司),D A P T(美國S i g ma公司),總R N A提取試劑。

    1.2細(xì)胞分組

    試驗(yàn)動(dòng)物為江西中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房所提供的出生2~3 d的S D大鼠乳鼠(批號:J Z D W N O:2011-0093)。取其肺組織培養(yǎng)為肺成纖維細(xì)胞,具體培養(yǎng)方法參照文獻(xiàn)并加以改進(jìn)[4]。取第3代成纖維細(xì)胞,接種于6孔板,細(xì)胞密度達(dá)到85%~90%時(shí),無血清同步24h。把細(xì)胞分為對照組、T G F-β1組和T G F-β1+D A P T組。其中,對照組為空白對照,在T G F-β1組中,T G F-β1的量為5 n g/ml,T G F-β1+D A P T組先加入終濃度為5μmol/l的D A P T,30min后再加入終濃度為5 n g/ml的T G F-β1,每組復(fù)孔3個(gè),觀察24 h后,分別用于提取細(xì)胞總R N A及總蛋白。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.3α-SM A免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)

    將18mm×18mm蓋玻片置于6孔板內(nèi),同時(shí)在六孔板中進(jìn)行第3代成纖維細(xì)胞的接種,其密度為每孔約1×105個(gè)細(xì)胞,按上述方法將細(xì)胞分為3組,每組復(fù)孔3個(gè),觀察24 h后取出蓋玻片,4%多聚甲醛固定細(xì)胞,再用3%雙氧水H2O2處理細(xì)胞10 min,封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,磷酸鹽緩沖溶液(phosphate b uff er saline,P B S)沖洗3次,10%動(dòng)物血清封閉10min,降低非特異性結(jié)合,一抗4℃過夜,P B S沖洗3次,室溫下孵育二抗1 h,鏈霉親和素-生物素復(fù)合物(strept a v idin-biotin comple x,S A B C)復(fù)合物室溫下30min,二氨基聯(lián)苯胺顯色,蘇木素復(fù)染,中性樹膠封片后,光鏡下觀察各組染色變化,α-S M A陽性標(biāo)準(zhǔn)以出現(xiàn)棕黃色顆?;驐l紋為依據(jù),隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野,計(jì)算陽性率。

    1.4RT-PCR反應(yīng)檢測Not c h1 m RN A

    通過胰酶消化法實(shí)現(xiàn)對于六孔板內(nèi)細(xì)胞的提取,Tri z ol法提取細(xì)胞總R N A并逆轉(zhuǎn)錄成cDN A。Notch1引物由美國I n v itro g en生命技術(shù)公司設(shè)計(jì)并合成,正向引物為:5'-G AA GG AA CG A GCC T GGG T GC C T G T A-3',反向引物為:5'-T GGC T GGG A GC A T C T C AA GCC T-3',擴(kuò)增引物268 bp。反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性5 min,94℃變性30 s,59℃退火30 s,72℃延伸1min,共30次循環(huán),總時(shí)間8min。在進(jìn)行電泳時(shí),取6μl PC R產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳,對于結(jié)果通過凝膠成像分析系統(tǒng)的紫外分光成像進(jìn)行相應(yīng)分析,對于積分吸光度進(jìn)行記錄。

    1.5Wester n blot檢測Not c h1蛋白

    使用單去污細(xì)胞裂解液提取6孔板內(nèi)細(xì)胞總蛋白,沸水煮10min使蛋白變性,冷卻至室溫后,置入-20℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?。B C A法進(jìn)行蛋白定量,取變性后的蛋白質(zhì)樣品行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺(sodi u m dodecyl s u l f ate-polyacrylamide g elelectrophoresis,S D S-P A G E)電泳,每個(gè)泳道上樣量為30μg,用垂直電泳儀進(jìn)行電泳后取下凝膠,將蛋白轉(zhuǎn)移至0.45mm醋酸纖維膜上,依次進(jìn)行封閉、洗膜,加一抗在4℃孵育過夜(稀釋至1∶200),二抗室溫孵育2 h(稀釋至1∶5 000)。通過化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行顯影,將Notch1和β-肌動(dòng)蛋白的灰度值進(jìn)行相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化后,計(jì)算Notch1蛋白表達(dá)的相對半定量比值。

    1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用S P SS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量分析用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多個(gè)樣本均數(shù)比較用單因素方差分析,組間比較用LS D-t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1α-SM A免疫細(xì)胞化學(xué)

    在對照組中,染色的細(xì)胞只占一小部分,能夠看到少部分細(xì)胞中有淡黃色的顆?;蛘呤菞l紋,但是黃色以及棕黃色的顆粒和條紋卻是極少的。但是T G F-β1組出現(xiàn)黃色以及棕黃色顆粒及條紋的細(xì)胞占據(jù)大多數(shù)。對照組、T G F-β1組、T G F-β1+D A P T組的α-S M A免疫細(xì)胞化學(xué)陽性率分別為(0.314± 0.019)%、(0.704±0.022)%和(0.339±0.026)%,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=10.172,P=0.072)。T G F-β1組與對照組和T G F-β1+D A P T組比較,經(jīng)LS D-t檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=23.176和18.354,P=0.023和0.034),T G F-β1組較對照組和T G F-β1+ D A P T組的α-S M A表達(dá)增加。T G F-β1+D A P T組與對照組比較,經(jīng)LS D-t檢驗(yàn),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t= 2.573,P=0.112)。見圖1。

    圖1 α-SM A細(xì)胞免疫化學(xué)電鏡圖 (×30)

    2.2Not c h1 m RN A的表達(dá)

    在對于R T-PC R產(chǎn)物進(jìn)行電泳時(shí),在268和207bp處,Notch1與β-肌動(dòng)蛋白有著一定的表達(dá)條帶。對照組、T G F-β1+D A P T組、T G F-β1組的 Notch1 m R N A表達(dá)量分別為(0.278±0.022)、(0.313±0.029)和(0.783±0.018),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,T G F-β1組Notch1 m R N A表達(dá)量升高,而對照組與D A P T組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見附表和圖2。

    2.3Not c h1蛋白的表達(dá)

    Notch1蛋白在120 k D處表達(dá),在對照組(0.312±0.019)僅有少量Notch1表達(dá)。T G F-β1+D A P T組(0.345±0.022)與對照組的Notch1蛋白表達(dá)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。T G F-β1組(0.701±0.026)較對照組及T G F-β1+D A P T組中Notch1表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見附表和圖3。

    圖2 RT-PCR反應(yīng)檢測各組細(xì)胞中Not c h1 m RN A表達(dá)的變化

    附表 Not c h1 m RN A積分吸光度值比較 (n=3

    附表 Not c h1 m RN A積分吸光度值比較 (n=3

    組別蛋白對照組 0 . 2 7 8 ± 0 . 0 2 2  0 . 3 1 2 ± 0 . 0 1 9 T G F -β1組 0 . 7 8 3 ± 0 . 0 1 8  0 . 7 0 1 ± 0 . 0 2 6 T G F -β1+ D A P T組 0 . 3 1 3 ± 0 . 0 2 9  0 . 3 4 5 ± 0 . 0 2 2 F值 1 2 . 8 2 9  9 . 7 5 4 P值 0 . 0 6 9  0 . 0 8 0 t1值 2 7 . 6 7 0  2 1 . 3 4 4 P1值 0 . 0 1 5  0 . 0 2 8 t2值 1 . 8 1 3  1 . 9 1 7 P2值 0 . 2 0 2  0 . 1 8 7 t3值 2 5 . 7 4 3  1 9 . 5 1 2 P3值 0 . 0 1 7  0 . 0 3 0 m R N A

    圖3 Wester n blot檢測各組細(xì)胞中Not c h1蛋白表達(dá)的變化

    3 討論

    肺纖維化是多種肺部疾病的共同結(jié)局,其主要病理特征是細(xì)胞外基質(zhì)的沉積,以及肺泡結(jié)構(gòu)的破壞,如肺泡囊腫的形成。而細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分是Ⅰ型膠原蛋白。研究表明,肌成纖維細(xì)胞是產(chǎn)生Ⅰ型膠原蛋白的主要細(xì)胞,也是肺纖維化的責(zé)任細(xì)胞[5],而對于肌成纖維細(xì)胞來說,其表型的標(biāo)志就是α-平滑肌肌動(dòng)蛋白。而T G F-β1主要的作用是能夠促進(jìn)肺內(nèi)成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,將其轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞[6],這在本研究中亦得到證實(shí)。α-S M A免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示,T G F-β1組可見大部分細(xì)胞內(nèi)有黃色和棕黃色顆粒及條紋,α-S M A表達(dá)較對照組明顯增加,電鏡下細(xì)胞內(nèi)亦可見大量微絲束,提示T G F-β1可以促使成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞。

    Notch信號通路與肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7],其通過多種途徑干預(yù)肺纖維化的病理生理過程,同時(shí)可以直接促進(jìn)Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)。在肺纖維化患者的肺組織中,可見明顯呈蜂巢樣改變的肺泡囊腫,同時(shí)可以檢測到Notch信號的過度表達(dá)。肺損傷后的結(jié)局是自我修復(fù),還是發(fā)展為肺纖維化,可能部分取決于譜系陰性上皮干/祖細(xì)胞中的Notch信號通路[8]。P A U L等[9]證實(shí)活性氧簇(reacti v e o x y g en species,R O S)通過轉(zhuǎn)錄因子Nr f2依賴的方式激活Notch信號通路,從而促進(jìn)氣道基底干細(xì)胞的自我更新,啟動(dòng)清除細(xì)胞內(nèi)活性氧的抗氧化程序。而這種氧化還原機(jī)制對肺內(nèi)干細(xì)胞的生物學(xué)功能具有重要意義,比如肺損傷、肺纖維化、肺癌等。HU等[10]利用基因敲除及報(bào)告基因等方法證實(shí)在小鼠L929細(xì)胞及人胚肺成纖維細(xì)胞(H u man l u n g f ibroblasts,M R C-5)中,Notch信號通過H es1依賴方式調(diào)控成纖維細(xì)胞表達(dá)C ol1α1及C ol1α2,從而上調(diào)Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá),促進(jìn)肺纖維化。

    Notch信號通路可以促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞的表達(dá)。A OY A GI-I K ED A等[11]用免疫組織化學(xué)法證實(shí),不管是在博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化模型中,還是在特發(fā)性肺纖維化的患者肺組織樣本中,Notch信號在肌成纖維細(xì)胞中的表達(dá)都明顯增強(qiáng)。研究還表明,Notch通過T G F-β-S mad3的途徑激活在肺泡上皮細(xì)胞中輻射敏感啟動(dòng)子(radiation sensiti v e promoter,C ar G)依賴性和 T淋巴細(xì)胞抗原表位(Tlymphocyteepitope,T C E)依賴性的平滑肌肌動(dòng)蛋白基因轉(zhuǎn)錄,以此來誘導(dǎo)肌成纖維細(xì)胞的分化[11]。本研究結(jié)果提示,在T G F-β1誘導(dǎo)生成的肌成纖維細(xì)胞中,Notch1表達(dá)較對照組明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明Notch1與肌成纖維細(xì)胞的生成相關(guān)。同時(shí)當(dāng)D A P T抑制Notch1后,肌成纖維細(xì)胞表型標(biāo)志α-S M A表達(dá)明顯降低,提示抑制Notch1可以抑制肌成纖維細(xì)胞的生成。進(jìn)而筆者推測,T G F-β1可能通過活化Notch信號促進(jìn)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,阻斷Notch信號可以抑制這種轉(zhuǎn)化,即抑制肺纖維化的形成。

    綜上所述,T G F-β1可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,在肌成纖維細(xì)胞中,Notch1表達(dá)升高,D A P T阻斷Notch后,可以抑制肌成纖維細(xì)胞的生成,其表型標(biāo)志物α-S M A明顯降低。由此可見,Notch信號通路在肌成纖維細(xì)胞生成以及肺纖維化中發(fā)揮著重要作用,阻斷Notch信號可能成為治療肺纖維化的新靶點(diǎn)。

    [1]T H I B A U T Q,JU L I E D,S TE P H A N I E C,et al.I n f lammation dysre g u lates Notch si g nalin g in endothelial cells:I mplicationo f Notch2 and Notch4 to endothelial dys fu nction[J].B iochemical P harmacolo g y,2010,80:2032-2041.

    [2]Z H A N G S,L O C H A J,R A DT K E F,et al.J a gg edl is the ma j or re g u lator o f Notch-dependent cell f ate in pro x imal air w ays[J].De v Dyn,2013,242(6):678-686.

    [3]X U K,M O G H A L N,E G A N S E.Notch si g nalin g in l u n g de v elopment and disease[J].A d v E x p M ed B iol,2012,727:89-98.

    [4]于秀文,曾林祥.Notch信號通路對肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化中α-S M A表達(dá)變化的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2013,23(13):11-14.

    [5]E M B L O M-C A LL A H A N M C,C HH I N A M K,S H L OB I N O A,et al.G enomic phenotype o f non-c u lt u red p u lmonary f ibroblasts in idiopathic p u lmonary f ibrosis[J].G enomics,2010,96:134-145.

    [6]C O NTE E,F(xiàn) R U CI A N O M,F(xiàn) A G O NE E,et al.Nhibition o f PI3K pre v ents the proli f eration and di ff erentiation o f h u man l u n g f ibroblasts into myo f ibroblasts:the role o f class I P110 iso f orms[J]. P L o S O ne,2011,6:1-10.

    [7]K A V I A N N,S E R V ETT A Z A,M O N G A R ET C,et al.Tar g etin g A D A M-17/Notch si g nalin g abro g ates the de v elopment o f systemic sclerosis ina m u rine model[J].A rthritis R he u m,2010,62: 3477-3487.

    [8]V A U G H A N A E,B R U M W E LL A N,X I Y L,et al.L inea g e-ne gati v e pro g enitors mobili z e to re g enerate l u n g epitheli u m a f ter maj or in j u ry[J].Nat u re,2015,517(7536):621-625.

    [9]P A U L M K,B I S H T B,D A R M A W A N D O,et al.Dynamic chan g es in intracell u lar R O S le v els re g u late air w ay basal stem cell homeostasis thro u g h Nr f2-dependent Notch si g nalin g[J].C ell S tem C ell,2014,15(2):199-214.

    [10]HU M,OUY A N G H F,WU CG,et al.Notch si g nalin g re g ulates col1α1 and col1α2 e x pression in air w ay f ibroblasts[J]. E x p B iol M ed,2014,239(12):1589-1596.

    [11]A OY A GI-I K ED A K,M A EN O T,M A T S U I H,et al.Notch ind u ces myo f ibroblast di ff erentiation o f al v eolar epithelial cells v ia trans f ormin g g ro w th f actor-β-S mad3 path w ay[J].A m J R espir C ell M ol B iol,2011,45(1):136-144.

    (童穎丹 編輯)

    Function and expressive change of Notch1 during transformation of m yofibroblasts*

    Xiu-wen Yu1,Lin-xiang Zeng2
    (1.Department of Respiratory Diseases,the First People's Hospital of Xiaoshan,Hangzhou,Zhejiang 311200,China;2.Department of Respiratory Diseases,the Second Affiliated Hospital,Nanchang University,Nanchang,Jiangxi 330006,China)

    Objective To study the law of changes of Notch1 expression in the transformative procession from fibroblasts to myofibroblasts and the effect of DAPT inhibition of Notch signal on cell transformation. M ethods The lung tissue was taken from new-born 2 or 3 day Sprague-Dawley rats.Fibroblasts were separated with pancreatin digestion method.The third-generation cultivated cells were divided into three groups: comparison group,TGF-β1group and TGF-β1+DAPT group.The comparison group was labeled as the control group,the TGF-β1group was added with 5 ng/m l TGF-β1,and the TGF-β1+DAPT group was added with 5 ng/m l TGF-β1and 5μmol/L DAPT.Immunocytochemistry was used to assess change ofα-smooth muscle actin(α-SMA)expression.RT-PCR was used to assess change of Notch1 mRNA expression.Western blot was used to assess change of Notch1 protein expression.Statistical software SPSS 18.0 was used for the dataanalysis with t-test.Resultsα-SMA immunocytochemistry demonstrated the majority of cells in the control group were not stained,the majority of cells in the TGF-β1group had yellow and brown-yellow granules and stripes,and there was no obvious difference between the DAPT group and the control group.The Notch1 mRNA expressive value of the control group,the TGF-β1group and the TGF-β1+DAPT group was(0.278± 0.022),(0.783±0.018)and(0.313±0.029)respectively;the Notch1 protein expressive value of the control group,the TGF-β1group and the TGF-β1+DAPT group was(0.312±0.019),(0.701±0.026)and(0.345± 0.022)respectively;there were significant differences in the mRNA and protein levels of Notch1 between the TGF-β1group and both the control and the TGF-β1+DAPT groups(P<0.05),while the control group and the TGF-β1+DAPT group had no statistical differences(P>0.05).Conclusions Notch1 can promote transformation of fibroblasts into myofibroblasts,and then promote pulmonary fibrosis.

    Notch1;α-smooth muscle actin;myofibroblast;lung fibrosis

    R 363

    A

    10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.011

    1005-8982(2016)15-0060-05

    2015-09-16

    江西省自然科學(xué)基金(No:20132B A B205014)

    曾林祥,E-mail:z en g lin x ian g@soh u.com;Tel:13037209570

    猜你喜歡
    肌動(dòng)蛋白肺纖維化纖維細(xì)胞
    我國研究人員探索肺纖維化治療新策略
    中老年保健(2022年2期)2022-11-25 23:46:31
    遺傳性T淋巴細(xì)胞免疫缺陷在百草枯所致肺纖維化中的作用
    Tiger17促進(jìn)口腔黏膜成纖維細(xì)胞的增殖和遷移
    滇南小耳豬膽道成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定
    肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能的研究進(jìn)展
    特發(fā)性肺纖維化合并肺癌
    胃癌組織中成纖維細(xì)胞生長因子19和成纖維細(xì)胞生長因子受體4的表達(dá)及臨床意義
    沙利度胺治療肺纖維化新進(jìn)展
    肌動(dòng)蛋白清除系統(tǒng)與凝血—纖溶系統(tǒng)在子癇前期患者外周血中的變化
    兩種制備大鼠胚胎成纖維細(xì)胞的方法比較
    亚洲第一电影网av| 岛国在线观看网站| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲在线自拍视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 午夜久久久久精精品| 精品久久久久久久久久久久久| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 天堂影院成人在线观看| 级片在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品一区二区免费欧美| 两个人看的免费小视频| 怎么达到女性高潮| 午夜精品一区二区三区免费看| 看免费av毛片| 国产成人精品久久二区二区免费| 中文资源天堂在线| 欧美激情久久久久久爽电影| 激情在线观看视频在线高清| av免费在线观看网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 一进一出抽搐gif免费好疼| av天堂在线播放| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 久久国产乱子伦精品免费另类| 色在线成人网| 亚洲片人在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 黄色视频不卡| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 最近最新中文字幕大全免费视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 禁无遮挡网站| 操出白浆在线播放| 亚洲免费av在线视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 一本精品99久久精品77| 欧美最黄视频在线播放免费| 欧美日本视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 两性夫妻黄色片| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 日日干狠狠操夜夜爽| 这个男人来自地球电影免费观看| 男插女下体视频免费在线播放| 国产真实乱freesex| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲国产中文字幕在线视频| 91大片在线观看| 人人妻人人看人人澡| 欧美激情久久久久久爽电影| 精品国产亚洲在线| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 天堂动漫精品| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 最近最新免费中文字幕在线| 制服诱惑二区| e午夜精品久久久久久久| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| av免费在线观看网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 午夜免费观看网址| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲av熟女| 久久性视频一级片| 国内精品久久久久久久电影| 久久草成人影院| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲av成人一区二区三| 在线a可以看的网站| 97碰自拍视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 日本 av在线| 国产黄a三级三级三级人| av在线天堂中文字幕| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 1024手机看黄色片| xxxwww97欧美| 国产激情久久老熟女| 国产精品电影一区二区三区| 国产熟女xx| 国产乱人伦免费视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产男靠女视频免费网站| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久99热这里只有精品18| 久久久久久久久久黄片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久九九热精品免费| 精品一区二区三区四区五区乱码| 99久久综合精品五月天人人| 国产av麻豆久久久久久久| 成年版毛片免费区| 999久久久国产精品视频| 五月伊人婷婷丁香| 十八禁网站免费在线| 国产高清有码在线观看视频 | or卡值多少钱| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久草成人影院| 日日夜夜操网爽| 色老头精品视频在线观看| 午夜视频精品福利| avwww免费| 久久久久久久午夜电影| 两个人视频免费观看高清| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久人妻av系列| 欧美日本视频| 亚洲电影在线观看av| 亚洲精品一区av在线观看| 日本 av在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日日干狠狠操夜夜爽| 成人手机av| 老司机福利观看| 男男h啪啪无遮挡| 一级黄色大片毛片| 久久人人精品亚洲av| 欧美黑人欧美精品刺激| 午夜亚洲福利在线播放| 一本一本综合久久| 精品欧美一区二区三区在线| 免费在线观看日本一区| 国产精品国产高清国产av| 12—13女人毛片做爰片一| 五月伊人婷婷丁香| 欧美性猛交黑人性爽| 俺也久久电影网| 欧美日韩福利视频一区二区| 成熟少妇高潮喷水视频| 怎么达到女性高潮| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲精品中文字幕在线视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 中亚洲国语对白在线视频| av片东京热男人的天堂| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美乱码精品一区二区三区| 免费在线观看影片大全网站| 91在线观看av| 精品国产亚洲在线| 欧美黑人精品巨大| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人手机av| 亚洲精品国产一区二区精华液| 午夜日韩欧美国产| 久热爱精品视频在线9| 最好的美女福利视频网| 国产成年人精品一区二区| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产激情久久老熟女| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 中亚洲国语对白在线视频| 久久草成人影院| 91在线观看av| 一进一出抽搐gif免费好疼| 18禁国产床啪视频网站| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 中文字幕高清在线视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产精品久久久av美女十八| 一个人免费在线观看的高清视频| 久久久国产成人免费| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美日韩国产亚洲二区| 又粗又爽又猛毛片免费看| 免费电影在线观看免费观看| 一个人免费在线观看电影 | x7x7x7水蜜桃| 怎么达到女性高潮| 亚洲精品在线美女| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 日韩有码中文字幕| 亚洲第一电影网av| 欧美不卡视频在线免费观看 | 欧美丝袜亚洲另类 | 色精品久久人妻99蜜桃| 婷婷丁香在线五月| 亚洲一区二区三区不卡视频| 91字幕亚洲| 亚洲精品粉嫩美女一区| 1024手机看黄色片| 国产精品一区二区免费欧美| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲国产看品久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美丝袜亚洲另类 | 午夜老司机福利片| 国产99久久九九免费精品| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产精品久久久人人做人人爽| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美日韩一级在线毛片| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 午夜福利欧美成人| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日本一区二区免费在线视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲专区国产一区二区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产片内射在线| 国产精品1区2区在线观看.| 国产一区二区在线观看日韩 | 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品影院久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 1024手机看黄色片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 熟女电影av网| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲精华国产精华精| 成人18禁在线播放| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 啦啦啦免费观看视频1| 国产成人精品无人区| 色av中文字幕| 亚洲av五月六月丁香网| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲性夜色夜夜综合| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲成a人片在线一区二区| 精品国内亚洲2022精品成人| av福利片在线观看| 亚洲电影在线观看av| 国产91精品成人一区二区三区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产精品久久视频播放| 久久久久精品国产欧美久久久| 婷婷精品国产亚洲av| 久久亚洲精品不卡| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 女警被强在线播放| 国产激情偷乱视频一区二区| ponron亚洲| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 丁香欧美五月| 日本a在线网址| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品国产高清国产av| 99久久精品热视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国产69精品久久久久777片 | 欧美成人午夜精品| 久久精品国产清高在天天线| 禁无遮挡网站| 99精品在免费线老司机午夜| 女同久久另类99精品国产91| 国产主播在线观看一区二区| 免费看十八禁软件| 正在播放国产对白刺激| 国产亚洲av高清不卡| 欧美黑人欧美精品刺激| 一级作爱视频免费观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产三级中文精品| 黄色视频,在线免费观看| 女人被狂操c到高潮| 天天一区二区日本电影三级| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品久久视频播放| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 老熟妇仑乱视频hdxx| 黄色视频不卡| 午夜激情福利司机影院| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产主播在线观看一区二区| 国产成人影院久久av| 高潮久久久久久久久久久不卡| 午夜视频精品福利| av在线天堂中文字幕| 国产v大片淫在线免费观看| 日本熟妇午夜| 国内揄拍国产精品人妻在线| 免费看十八禁软件| 91老司机精品| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 桃色一区二区三区在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 美女免费视频网站| 中国美女看黄片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 久久久久亚洲av毛片大全| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产黄片美女视频| 99热只有精品国产| 日韩有码中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久这里只有精品中国| 91国产中文字幕| 99久久99久久久精品蜜桃| avwww免费| 香蕉国产在线看| 国产亚洲精品av在线| avwww免费| 一本一本综合久久| 中文资源天堂在线| 国产不卡一卡二| 成人手机av| 国产亚洲精品av在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 韩国av一区二区三区四区| 色噜噜av男人的天堂激情| 午夜福利视频1000在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 听说在线观看完整版免费高清| 成人三级做爰电影| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲人成77777在线视频| 国产激情久久老熟女| 免费在线观看影片大全网站| 我要搜黄色片| 一本精品99久久精品77| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产精品精品国产色婷婷| 精品欧美一区二区三区在线| 曰老女人黄片| 哪里可以看免费的av片| 亚洲免费av在线视频| 国产亚洲av高清不卡| 久久久国产精品麻豆| 午夜成年电影在线免费观看| 午夜福利高清视频| 亚洲av美国av| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产黄片美女视频| 国产黄a三级三级三级人| 欧美中文日本在线观看视频| 精品不卡国产一区二区三区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产成人系列免费观看| 午夜精品在线福利| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美极品一区二区三区四区| 大型黄色视频在线免费观看| 黄片大片在线免费观看| 国产亚洲精品一区二区www| 欧美黑人欧美精品刺激| 精品日产1卡2卡| 一进一出抽搐gif免费好疼| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 欧美最黄视频在线播放免费| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 90打野战视频偷拍视频| 最新美女视频免费是黄的| 欧美性长视频在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 国产乱人伦免费视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 在线免费观看的www视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 久99久视频精品免费| 在线播放国产精品三级| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲精品美女久久av网站| 久久婷婷成人综合色麻豆| 神马国产精品三级电影在线观看 | aaaaa片日本免费| 制服人妻中文乱码| 欧美精品啪啪一区二区三区| 大型黄色视频在线免费观看| 天堂动漫精品| 成人手机av| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲色图av天堂| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久草成人影院| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美激情久久久久久爽电影| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美黑人精品巨大| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 女警被强在线播放| 一区二区三区国产精品乱码| 久久99热这里只有精品18| 国产精品爽爽va在线观看网站| 成人手机av| 毛片女人毛片| 国产成人啪精品午夜网站| 白带黄色成豆腐渣| 午夜免费成人在线视频| 88av欧美| 亚洲av熟女| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 在线免费观看的www视频| 最近最新免费中文字幕在线| x7x7x7水蜜桃| 国产成人av激情在线播放| 国产午夜福利久久久久久| 在线免费观看的www视频| av视频在线观看入口| 精品久久蜜臀av无| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲色图av天堂| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 99国产综合亚洲精品| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 又紧又爽又黄一区二区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久久久久大精品| 一本久久中文字幕| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 国产亚洲欧美98| 真人做人爱边吃奶动态| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 18禁国产床啪视频网站| 岛国在线免费视频观看| 又爽又黄无遮挡网站| 波多野结衣巨乳人妻| 精品电影一区二区在线| 国产精品,欧美在线| 99久久无色码亚洲精品果冻| 在线看三级毛片| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 一区二区三区高清视频在线| 亚洲18禁久久av| 亚洲人成电影免费在线| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美性长视频在线观看| 黄片大片在线免费观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲国产欧美网| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| cao死你这个sao货| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 精品久久久久久,| 51午夜福利影视在线观看| av片东京热男人的天堂| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 少妇人妻一区二区三区视频| 天天添夜夜摸| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲精华国产精华精| 国产精品永久免费网站| 国产精品1区2区在线观看.| 精品乱码久久久久久99久播| 日韩大码丰满熟妇| 国产成人av激情在线播放| 老司机靠b影院| 88av欧美| 毛片女人毛片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产精品一区二区精品视频观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一本大道久久a久久精品| 国产高清激情床上av| 一级片免费观看大全| 高清在线国产一区| 在线观看免费视频日本深夜| 久久精品国产清高在天天线| 黄片大片在线免费观看| 亚洲av成人精品一区久久| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产av不卡久久| 黄色片一级片一级黄色片| 俺也久久电影网| 国产区一区二久久| 757午夜福利合集在线观看| 久久亚洲精品不卡| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 免费一级毛片在线播放高清视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 我要搜黄色片| 在线播放国产精品三级| 久久人人精品亚洲av| 黄色片一级片一级黄色片| 一区二区三区高清视频在线| 欧美性猛交黑人性爽| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 我的老师免费观看完整版| 中文字幕熟女人妻在线| 性欧美人与动物交配| 一二三四在线观看免费中文在| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产99久久九九免费精品| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 男女视频在线观看网站免费 | 在线a可以看的网站| 国产一区二区激情短视频| 精品无人区乱码1区二区| 黄色成人免费大全| 在线永久观看黄色视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产黄a三级三级三级人| 少妇的丰满在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 丝袜美腿诱惑在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 岛国在线观看网站| 亚洲av美国av| 女人被狂操c到高潮| 全区人妻精品视频| 亚洲av成人av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 波多野结衣巨乳人妻| 搡老岳熟女国产| 嫁个100分男人电影在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产免费av片在线观看野外av| 国产欧美日韩一区二区精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲av成人av| 国产单亲对白刺激| 久久香蕉精品热| 久久精品综合一区二区三区| 欧美一级毛片孕妇| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 精品国产美女av久久久久小说| 99久久精品国产亚洲精品| 精品第一国产精品| 久久久久亚洲av毛片大全| 一本久久中文字幕| 757午夜福利合集在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 午夜久久久久精精品| 国产高清视频在线播放一区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 色综合婷婷激情| 精品乱码久久久久久99久播| 国产v大片淫在线免费观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久久精品大字幕| 男人舔奶头视频| 99riav亚洲国产免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲精品色激情综合| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 日本在线视频免费播放| 亚洲美女黄片视频| 1024手机看黄色片| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美日韩乱码在线| 精品第一国产精品| 亚洲国产精品999在线| 国产成人aa在线观看| 熟女电影av网| 久久久精品欧美日韩精品| 两个人看的免费小视频| 美女大奶头视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲av熟女| 国内精品一区二区在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 一级毛片女人18水好多| 久久99热这里只有精品18| 国产区一区二久久| 午夜福利高清视频| tocl精华| 午夜两性在线视频| 午夜亚洲福利在线播放| 啦啦啦韩国在线观看视频| 美女黄网站色视频| svipshipincom国产片| 美女免费视频网站| 久久久国产成人精品二区| 男人舔奶头视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 一夜夜www| 欧美性长视频在线观看| 露出奶头的视频| 国产精品电影一区二区三区| 18禁国产床啪视频网站| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 最好的美女福利视频网| 午夜激情福利司机影院| 午夜视频精品福利| 操出白浆在线播放| 久久久久亚洲av毛片大全|