小花棘豆提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究

陳根元，賈琦珍，鄧　利，王　帥

（塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 阿拉爾 843300）

小花棘豆提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究

陳根元，賈琦珍，鄧?yán)?，王?/p>

（塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 阿拉爾 843300）

為探討小花棘豆活性成分的抗炎鎮(zhèn)痛作用，通過(guò)醋酸扭體法、二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹法、蛋清致小鼠足趾腫脹法和熱板法，觀察其作用效果。結(jié)果顯示，小花棘豆氯仿相與正丁醇相均可顯著抑制小鼠耳腫脹和足趾腫脹，還具有較好的鎮(zhèn)痛效果，其作用效果與陽(yáng)性藥物相當(dāng)。結(jié)果表明，小花棘豆活性成分具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

小花棘豆；活性成分；抗炎鎮(zhèn)痛

小花棘豆（Oxytropis glabra DC）為豆科棘豆屬，是我國(guó)西部草原危害最嚴(yán)重的有毒植物，現(xiàn)已嚴(yán)重威脅本區(qū)草地畜牧業(yè)發(fā)展。但近有研究發(fā)現(xiàn)小花棘豆具有一定的藥用價(jià)值，能夠治療牙痛、關(guān)節(jié)炎等，具有麻醉、鎮(zhèn)靜、止痛等功效[1]。李觀海等[2]從小花棘豆根中提取得到總生物堿，發(fā)現(xiàn)其可抑制小鼠肉瘤S180的生長(zhǎng)，并具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用。王帥等[3]研究發(fā)現(xiàn)，小花棘豆黃酮類物質(zhì)具有較強(qiáng)的自由基清除能力，并可緩解運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的脂質(zhì)抗氧化作用。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)小花棘豆的研究主要集中在家畜的中毒機(jī)理及防治，對(duì)其利用的研究報(bào)道較少。而且由于地域差異，不同產(chǎn)地的小花棘豆化學(xué)成分組成差異較大[4]。本試驗(yàn)通過(guò)提取小花棘豆的活性成分，對(duì)其抗炎、鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行研究，以期為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料、試劑與儀器小花棘豆2014年8月采集于新疆克州阿合奇縣色帕巴依鄉(xiāng)，取植株的地上部分，陰干、20目粉碎后備用。

BS124型精密電子天平，德國(guó)Sartorius；BR-200型智能熱板儀，成都泰盟科技有限公司；Direct-Q3型超純水系統(tǒng)，美國(guó)Millipore；二甲苯、醋酸等試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純；實(shí)驗(yàn)室用水為超純水。

陽(yáng)性藥物：布洛芬緩釋膠囊（國(guó)藥準(zhǔn)字H10900089），中美天津史克制藥有限公司。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物選用6～8周齡昆明系小鼠，體重20 g左右，由塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)站提供。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1小花棘豆活性物質(zhì)的提取準(zhǔn)確稱取小花棘豆樣品1 000 g，加入1 L超純水，超聲波協(xié)助提取30 min，過(guò)濾即得小花棘豆水提液。將水提液濃縮后依次利用5倍體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，即得小花棘豆活性成分各極性段萃取部分，分別濃縮至浸膏。各萃取相分別溶于生理鹽水，制備高劑量（1 g/L）、中劑量（0.5 g/L）和低劑量（0.1 g/L）溶液，備用。

1.3.2小花棘豆活性成分對(duì)二甲苯所致耳廓腫脹的影響將小鼠隨機(jī)分為試驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，試驗(yàn)組分別使用小花棘豆總提取物、石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和正丁醇相灌胃，陰性對(duì)照組使用生理鹽水灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組使用布洛芬緩釋劑（劑量50 mg/mL體重）。每個(gè)試驗(yàn)組分別設(shè)置高（1 g/L）、中（0.5 g/L）和低（0.1 g/L）3個(gè)劑量，每個(gè)劑量組3只小鼠。各組小鼠按均灌胃0.2 mL，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后，在小鼠右耳正反兩面使用微量移液器均勻涂布二甲苯，劑量為50 μL/只，左耳為對(duì)照。30 min后處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，用打孔器在兩耳同一部位扎下耳片稱重，然后計(jì)算腫脹率和腫脹抑制率[3]。計(jì)算方法為：腫脹率=（右耳片重-左耳片重）/左耳片重×100%；腫脹抑制率=（對(duì)照組平均腫脹率-試驗(yàn)組平均腫脹率）/對(duì)照組平均腫脹率×100%。

1.3.3小花棘豆活性成分對(duì)蛋清致足趾腫脹的影響小鼠分組同1.3.2。末次給藥1 h后，于右后肢足趾皮下注射100 mL/L新鮮雞蛋清-生理鹽水溶液0.1 mL致炎，用游標(biāo)卡尺分別測(cè)量致炎前和致炎后2 h時(shí)的小鼠足趾厚度，然后計(jì)算腫脹率和腫脹抑制率[5]。計(jì)算方法為：腫脹率=（致炎后足趾厚度-致炎前足趾厚度）/致炎前足趾厚度× 100%；腫脹抑制率=（對(duì)照組平均腫脹率-試驗(yàn)組平均腫脹率）/對(duì)照組平均腫脹率×100%。

1.3.4小花棘豆活性成分對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響小鼠分組同1.3.2。末次給藥1 h后，各組小鼠按每10 g體重分別腹腔注射0.6%醋酸0.1 mL，觀察小鼠扭體潛伏期及15 min內(nèi)出現(xiàn)的扭體次數(shù)。計(jì)算小鼠鎮(zhèn)痛抑制率[6]。計(jì)算方法為：鎮(zhèn)痛抑制率=（對(duì)照組扭體反應(yīng)次數(shù)-試驗(yàn)組扭體反應(yīng)次數(shù)）/對(duì)照組扭體反應(yīng)次數(shù)×100%。

1.3.5小花棘豆活性成分對(duì)電熱板致痛的影響

小鼠分組同1.3.2。末次給藥1 h后，將小鼠置于55℃±0.5℃的智能熱板儀上，記錄小鼠足底接觸熱板至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間作為痛閾指標(biāo)，并計(jì)算痛閾提高率[6]。計(jì)算方法為：痛閾提高率=（給藥后痛閾時(shí)間-給藥前痛閾時(shí)間）/給藥前痛閾時(shí)間×100%。1.4數(shù)據(jù)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 11.5軟件中One-Way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析。

2　結(jié)果與分析

2.1小花棘豆活性成分對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，3個(gè)濃度梯度的小花棘豆正丁醇相和氯仿相與陰性對(duì)照相比，對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹均有極顯著的抑制作用（P<0.01），其中正丁醇相的中、高濃度及氯仿相的高濃度抑制效果與陽(yáng)性藥物相近。高濃度的石油醚相對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的抑制率顯著高于陰性對(duì)照（P<0.05），其余各組與陰性對(duì)照差異不顯著（P>0.05）。

表1　小花棘豆活性成分對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

2.2小花棘豆活性成分對(duì)蛋清致小鼠足趾腫脹的影響由表2可知，中、高濃度的小花棘豆正丁醇相和氯仿相對(duì)蛋清致小鼠足趾腫脹的抑制率均極顯著高于陰性對(duì)照（P<0.01），低濃度的小花棘豆正丁醇相和氯仿相對(duì)蛋清致小鼠足趾腫脹的抑制率顯著高于陰性對(duì)照（P<0.05），其余各組與陰性對(duì)照差異不顯著（P>0.05）。高濃度的小花棘豆正丁醇相和氯仿相作用效果與陽(yáng)性藥物相近。

表2　小花棘豆活性成分對(duì)蛋清致小鼠足趾腫脹的影響

2.3小花棘豆活性成分對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響由表3可知，中、高濃度的小花棘豆氯仿相和所有濃度的正丁醇相對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的抑制率均極顯著高于陰性對(duì)照（P<0.01），低濃度的小花棘豆氯仿相對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的抑制率顯著高于陰性對(duì)照（P<0.05），其余各組與陰性對(duì)照差異不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)表明，小花棘豆氯仿相與正丁醇相中的活性成分具有一定的鎮(zhèn)痛作用，并呈現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)。

2.4小花棘豆活性成分對(duì)電熱板致痛的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，小花棘豆活性成分均可延長(zhǎng)小鼠對(duì)疼痛反應(yīng)的時(shí)間，提高痛閾。其中小花棘豆氯仿相和正丁醇相灌胃小鼠的痛閾時(shí)間均極顯著高于陰性對(duì)照（P<0.01），高濃度的小花棘豆石油醚相和乙酸乙酯相及中濃度的乙酸乙酯相灌胃小鼠的痛閾時(shí)間均顯著高于陰性對(duì)照（P<0.05），其余各組與陰性對(duì)照差異不顯著（P>0.05）。高濃度的氯仿相和正丁醇相的鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于陽(yáng)性藥物。

表3　小花棘豆活性成分對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

表4　小花棘豆活性成分對(duì)電熱板致痛小鼠的影響

3　討論

小花棘豆中含有極為復(fù)雜的化學(xué)成分，目前研究表明，小花棘豆中含有至少23種生物堿[4]，12種黃酮及其衍生物[7]，7種三萜皂苷類物質(zhì)及57種揮發(fā)油成分[8]。李觀海等[2]利用熱板法檢測(cè)小花棘豆總生物堿的鎮(zhèn)痛作用，發(fā)現(xiàn)小鼠的痛閾提高率均在130%以上，表現(xiàn)出了較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用。黃酮類化合物在抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗微生物等方面均有一定的作用[9]。本試驗(yàn)通過(guò)醋酸扭體法、二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹法、蛋清致小鼠足趾腫脹法和熱板法，研究小花棘豆不同提取相活性成分的抗炎鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小花棘豆氯仿相和正丁醇相均具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用。王帥等[4]研究發(fā)現(xiàn)，小花棘豆氯仿相和正丁醇相中含有較多的生物堿、黃酮等化合物，表明小花棘豆生物堿、黃酮類化合物具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)局部損傷的反應(yīng)，致炎因子可使血管擴(kuò)張，血管壁通透性增強(qiáng)，導(dǎo)致血漿中的白細(xì)胞和蛋白質(zhì)等滲出，從而造成組織腫脹[10]。本試驗(yàn)建立了2種炎癥模型，分別對(duì)小花棘豆不同提取相中的活性成分的抗炎作用進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，小花棘豆氯仿相和正丁醇相中的活性物質(zhì)對(duì)慢性、急性炎癥均具有較好的抑制效果，部分指標(biāo)作用效果甚至超過(guò)了陽(yáng)性藥物。表明小花棘豆活性成分具有出色的抗炎活性。TNF-α、IL-1、IL-6、IL-13、PGE2、LT等都是與炎癥反應(yīng)緊密相關(guān)的炎性介質(zhì)，小花棘豆活性成分的抗炎作用與何種炎性因子有關(guān)，需要進(jìn)一步的研究探討。鎮(zhèn)痛作用與NO、NOS及腎上腺素的合成與表達(dá)密切有關(guān)，小花棘豆活性成分的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

4　結(jié)論

小花棘豆氯仿提取相和正丁醇提取相中的活性成分可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，蛋清所致小鼠足趾腫脹和醋酸致小鼠扭體反應(yīng)，還可極顯著提高小鼠對(duì)電熱板的痛閾時(shí)間，表明小花棘豆活性成分具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

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S853.74

B

0529-6005（2016）07-0108-03

2015-04-16

國(guó)家自然科學(xué)基金（31460678）；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題（HS201402）

陳根元（1984-），男，助理研究員，碩士，研究方向?yàn)橹胁菟庂Y源開(kāi)發(fā)與利用，E-mail：cgygood207@163.com

王帥，E-mail：wangshuaidky@126.com