HCV感染與ANA譜陽性率的關(guān)系研究

范紅梅董麗妍孫士敏

HCV感染與ANA譜陽性率的關(guān)系研究

范紅梅①董麗妍①孫士敏①

目的：分析丙型肝炎病毒（HCV）感染與抗核抗體（ANA）譜陽性率的關(guān)系。方法：選取2014年1月-2015年12月本院診斷的130例HCV患者作為HCV組，另擇40例排除自身免疫性疾病和肝炎病毒感染的健康人群作為對照組，比較兩組患者的ANA抗體陽性率和ANA抗體分布情況。結(jié)果：HCV組的ANA總陽性率為48.46%，明顯高于對照組的12.50%，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中HCV 組1種ANA抗體陽性49例、2種11例、≥3種3例。結(jié)論：HCV感染患者的ANA抗體陽性表達(dá)率顯著升高。

丙型病毒肝炎； 抗核抗體； 陽性率

First-author’s address： Shenzhen Shajing Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Shenzhen 518104，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.22.033110（3）：210-216.

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丙型肝炎由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染所致，主要由血液或體液傳播，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，全球有1.7億人感染HCV。我國健康人群抗HCV陽性率為0.7%～3.1%，約3800萬人［1］。由于病毒生物學(xué)特點和宿主免疫功能等多方面因素，機(jī)體免疫往往難以有效清除病毒，致使50%～80%的HCV感染者發(fā)展為慢性肝炎，其中20%～30%將發(fā)展成肝硬化［2］。一般認(rèn)為HCV導(dǎo)致的丙型肝炎是一組自身免疫性疾病，通過檢測血清中抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）、抗平滑肌抗體（SMA）、抗雙鏈DNA抗體（dsDNA）、抗線粒體抗體（AMA）等，可以為早期診斷HCV提供幫助［3］。然而對于抗核抗體譜在HCV中的差異性表達(dá)研究較少，本研究探討了HCV感染與ANA譜陽性表達(dá)率的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2014年1月-2015年12月本院診斷的130例HCV患者作為HCV組，其中男79例，女51例；年齡18～65歲，平均（44.1±15.8）歲；急性HCV肝炎16例，慢性HCV肝炎85例，肝硬化29例；HCV RNA陽性（≥1.0×103copies/mL）患者78例，HCV RNA陰性（＜1.0×103copies/mL）患者52例。另擇同期40例排除自身免性疾病和肝炎病毒感染的健康人群作為對照組，其中男23例，女17例；年齡23～52歲，平均（42.3±9.5）歲。兩組年齡和性別構(gòu)成比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2儀器與藥品 丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒購自abcum公司，丙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒購自南京凱基生物科技有限公司，抗核抗體譜檢測試劑盒購自江蘇羅氏檢測公司，超速離心機(jī)購自美國beckman公司，ABI7300熒光定量PCR購自美國ABI公司。

1.3方法 采用ELISA法檢測血清中ANA抗體譜的表達(dá)：采集患者或者對照組正常人群肘部靜脈血，經(jīng)1500 rpm離心5 min后得到血清，4 ℃保存待測。以標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶，靜置15 min后混勻，倍比稀釋為7個濃度，取出板條，除了對照孔外加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，劑量為100 μL/孔，采用封板蓋封住，室溫反應(yīng)120 min。使用PBS液體洗滌3次，除了空白對照孔，每孔加入檢測液（100 μL），室溫孵育1 h，PBS洗滌3次，加入底物（50 μL/孔），避光孵育25 min，加入終止液5 min后測定450 nm處吸光度。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 使用SAS 9.3軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

兩組ANA抗體陽性率比較 HCV組的ANA陽性率為48.46%，明顯高于健康組的12.50%，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。17種ANA抗體具體分布情況見表2。

表1　兩組ANA抗體陽性率比較 例（%）

表2　17種ANA抗體的分布情況 例（%）

續(xù)表2

3　討論

丙型肝炎病毒（Hepatitis C rirus，HCV）感染導(dǎo)致的疾病進(jìn)展的病因機(jī)制尚不清楚，但一般認(rèn)為與自身免疫性抗原表位在HCV感染后的暴露有關(guān)，同時CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞在抗原提呈中的異?；罨赡苁谴龠M(jìn)丙肝患者肝臟纖維化和肝細(xì)胞炎癥性損傷的重要因素［4-5］。隨著HCV RNA在丙肝患者血清中的異常表達(dá)發(fā)現(xiàn)，自身免疫系統(tǒng)紊亂在丙型肝炎患者中的作用越來越受到關(guān)注。HCV RNA整合進(jìn)入患者肝細(xì)胞內(nèi)后，主要通過對肝細(xì)胞周邊間質(zhì)細(xì)胞的免疫病理損傷和病毒復(fù)制導(dǎo)致宿主免疫反應(yīng)發(fā)揮協(xié)同作用，而與HCV感染對肝細(xì)胞膜的直徑損傷無關(guān)。細(xì)胞有絲分裂、凋亡或者被吞噬的肝細(xì)胞在病理性免疫損傷中細(xì)胞核分解、染色體斷裂，導(dǎo)致部分帶有遺傳單位的抗原暴露，抗核抗體（ANA）抗體可明顯增高［6］。大規(guī)模的基礎(chǔ)人群和HCV病毒感染的流行病學(xué)分析可見，ANA、ENA抗體及類風(fēng)濕因子抗體（rheumatoid factor，RF）為HCV感染患者體內(nèi)主要存在的抗體譜，其中ANA抗體表達(dá)的陽性率最高，可達(dá)35.7%～43.8%。本次研究主要通過ANA在HCV患者中表達(dá)分析，可以為HCV的診治和預(yù)后評估提供依據(jù)［7-8］。

ANA是反映自身免疫性紊亂的重要內(nèi)源性抗體譜，主要包括SSA/Ro52kD抗體、SSB/La抗體、PCNA抗體、抗ds-DNA抗體等。本次研究發(fā)現(xiàn)，HCV組患者血清中的ANA表達(dá)陽性率較對照組增加了35.96%，增加幅度較為明顯，提示HCV感染可以促進(jìn)體內(nèi)ANA的表達(dá)，引起免疫紊亂的發(fā)生；另一方面，增高的ANA可以進(jìn)一步促進(jìn)HCV RNA與肝細(xì)胞遺傳單位的整合，進(jìn)而促進(jìn)肝細(xì)胞的損傷和間質(zhì)成分的代償性增生。合并1種ANA譜陽性的丙型肝炎患者的陽性率為37.69%，這與文獻(xiàn)［9-10］報道的陽性率較為相似，同時隨著合并ANA陽性種類的增加，HCV感染患者的陽性率不足3%。通過PCR計數(shù)檢測不同的ANA抗體譜的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)SSA/Ro52kD抗體、SSB/La抗體、PCNA抗體、抗ds-DNA抗體等仍然為HCV感染患者的主要抗核抗體。雖然AMA-m2、抗組蛋白、SSA/Ro60kD抗體等抗體同樣存在一定數(shù)量的表達(dá)，但陽性率較低，SSA/Ro60kD抗體等在HCV發(fā)病中的作用仍不清晰。相關(guān)研究者通過對慢性HCV感染導(dǎo)致的肝纖維化患者的臨床分析發(fā)現(xiàn)，ANA中SSA/Ro52kd 和PCNA抗體表達(dá)陽性率最高，可達(dá)15%以上，同時SSA/Ro52k可以通過介導(dǎo)組織浸潤細(xì)胞CD3+、細(xì)胞毒T細(xì)胞（TC）等特異攻擊HCV感染的靶細(xì)胞，可引起肝細(xì)胞損傷［11-12］。臨床上可以對于主要表達(dá)的幾種抗體如SSA/Ro52kD抗體、SSB/La抗體、PCNA抗體等進(jìn)行聯(lián)合檢測，從而為疾病的早期診斷及治療轉(zhuǎn)歸的評估提供一定的參考，但仍然需要后研究擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步探討。然而本次研究中并未探討ANA與肝臟纖維化指標(biāo)如Ⅲ型前膠原、透明質(zhì)酸酶的關(guān)系，ANA對于肝臟纖維化病情的評估價值缺乏足夠的說服力。

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Study on the Relationship between HCV Infection and the Positive Rate of ANA Spectrum

FAN Hong-mei，DONG Li-yan，SUN Shi-min.//Medical Innovation of China，2016，13（22）：115-117

Objective：To analyze the relationship between the severity of hepatitis C virus（HCV）infection and the positive rate of anti nuclear antibody （ANA） spectrum.Method：From January 2014 to December 2015，130 cases of HCV infection were selected as the HCV group，40 healthy people who ruled out autoimmune disease and hepatitis virus infection were selected as the control group，the positive rate of ANA antibody and the distribution of ANA antibody in two groups were compared.Result：The total positive rate of ANA in HCV group was 48.46%，which was significantly higher than 12.50% of control group，the differences was statistically significant （P＜0.05）.In HCV group，1 ANA antibody positive in 49 cases，2 kinds of ANA antibody positive in 11 cases，more than 3 kinds of ANA antibody positive in 3 cases.Conclusion：The positive expression rate of ANA antibody spectrum is significantly increased in HCV infected patients.

Hepatitis C virus； Antinuclear antibodies； Positive rate

①廣州醫(yī)科大學(xué)附屬深圳沙井醫(yī)院 廣東 深圳 518104

范紅梅

（2016-03-29） （本文編輯：周亞杰）

（2016-04-27） （本文編輯：李穎）