當(dāng)歸正丁醇萃取物化學(xué)成分研究

馬建蘋　魏萬彩　郭濤　李善家　王雅　晉玲（. 蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院， 甘肅 蘭州 70050；2. 蘭州理工大學(xué)中藏藥篩選評(píng)價(jià)及深加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 70050；. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 甘肅 蘭州 70000）

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當(dāng)歸正丁醇萃取物化學(xué)成分研究

馬建蘋1，2魏萬彩1郭濤1李善家1王雅1晉玲3
（1. 蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院， 甘肅 蘭州 730050；2. 蘭州理工大學(xué)中藏藥篩選評(píng)價(jià)及深加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730050；3. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 甘肅 蘭州 730000）

目的：研究當(dāng)歸正丁醇萃取物的化學(xué)成分。方法：當(dāng)歸的正丁醇萃取物采用硅膠、Sephadex LH-20凝膠、反相ODS柱進(jìn)行分離純化，通過理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定所得化合物的結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：分離得到10個(gè)化合物，分別鑒定為巴內(nèi)加素（1）、β-腺苷 （2）、1，2-di-O-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine （3）、1-O-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine （4）、洋川芎內(nèi)酯R （5）、洋川芎內(nèi)酯S （6）、麥芽糖 （7）、蔗糖 （8）、β-谷甾醇 （9）、胡蘿卜苷 （10）。結(jié)論：化合物1、3、4和7為首次從該科植物中分離得到，化合物5、6為首次從該屬植物中分離得到，化合物2為首次從當(dāng)歸中分離得到。

傘形科；當(dāng)歸屬；當(dāng)歸；正丁醇萃取物；化學(xué)成分

中藥當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis （Oliv.） Diels.的干燥根，具有補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤腸通便的功效，尤其在治療心血管系統(tǒng)和婦科疾病方面療效顯著，醫(yī)家素有“十方九歸”之稱［1-4］。研究表明，當(dāng)歸中主要含有藁本內(nèi)酯類、苯丙素類、萜類以及揮發(fā)油等有效成分。本文對(duì)當(dāng)歸的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從其正丁醇萃取物分離得到10個(gè)化合物，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)鑒定其結(jié)構(gòu)為：巴內(nèi)加素 （1）、β-腺苷 （2）、1，2-di-O-hexadeca-noyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine （3）、1-O-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine （4）、洋川芎內(nèi)酯 R （5）、洋川芎內(nèi)酯S （6）、麥芽糖 （7）、蔗糖 （8）、β-谷甾醇 （9）和胡蘿卜苷 （10）。

1、儀器與材料

Yanaco 微量熔點(diǎn)測(cè)定儀 （溫度計(jì)未校正）；Varian mercury 400 MHz超導(dǎo)核磁共振波譜儀；柱層析硅膠、薄層層析硅膠購自青島海洋化工廠；Sephadex LH-20購自上海安瑪西亞生物技術(shù)有限公司；ODS購自北京京京時(shí)代科技發(fā)展有限公司；所用溶劑均為分析純，由上海振興化學(xué)試劑廠和天津化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

當(dāng)歸于2012年9月采自甘肅省定西市岷縣當(dāng)歸種植基地，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院晉玲教授鑒定為當(dāng)歸 Angelica sinensis （Oliv.） Diels. 的根。

2、提取與分離

干燥的當(dāng)歸粉碎后分別用95%乙醇 （13kg）和丙酮 （5.5kg）加熱回流提取，減壓回收溶劑得到乙醇提取物830g和丙酮提取物354g。兩種提取物分別經(jīng)水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各部分減壓回收溶劑。乙醇提取物得到石油醚萃取物280g、乙酸乙酯萃取物120g、正丁醇萃取物17g和水萃取物70g。丙酮提取物得到石油醚萃取物115g、乙酸乙酯萃取物50g、正丁醇萃取物7g和水萃取物25g。

正丁醇萃取物 （17g） 進(jìn)行硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇 （1∶ 0， 10∶ 1， 5∶ 1， 2∶ 1， 1∶ 1， 0∶ 1） 進(jìn)行梯度洗脫，得到6個(gè)洗脫組分：Frs. A～F。組分E經(jīng)ODS柱層析得到化合物1（55mg）。組分C經(jīng)反復(fù)的硅膠、ODS和凝膠柱層析純化得到化合物2（40mg）和10 （28mg）。組分F經(jīng)反復(fù)的ODS和凝膠柱層析純化得到化合物3 （16mg）、4 （34mg）和8 （3.55g）。正丁醇萃取物 （7g） 進(jìn)行硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇 （ 1∶ 0， 10∶ 1， 5∶ 1， 2∶ 1， 1∶ 1， 0∶ 1） 進(jìn)行梯度洗脫，得到9個(gè)洗脫組分：Frs. A～I(xiàn)。組分G經(jīng)反復(fù)的硅膠、ODS和凝膠柱層析得到化合物5和6的混合物 （20mg）、9 （17mg）。組分C經(jīng)反復(fù)的硅膠、ODS和凝膠柱層析純化得到化合物 7 （33mg）。

3、結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1∶ 白色固體，易溶于DMSO。1H-NMR （600MHz，DMSO-d6） δ∶ 7.55 （1H， d， J = 7.8 Hz， H-6'）， 7.34 （1H， d， J = 8.4 Hz， H-3'）， 7.21 （1H， s， H-5）， 7.04 （1H， t， J = 7.8 Hz， H-4'）， 6.95 （1H， t， J = 7.2 Hz， H-5'）， 3.45 （1H， br d， J = 4.2， H-2）， 3.29 （1H，dd， J = 15.0， 3.6 Hz， H-3b）， 2.97 （1H， dd， J = 15.0， 9.0 Hz，H-3a）。13C-NMR （150 MHz， DMSO-d6） δ∶ 170.1 （C-6）， 136.3 （C-2'）， 127.3 （C-1'）， 124.1 （C-5）， 120.9 （C-4'）， 118.3 （C-5'）， 118.3 （C-6'）， 111.3 （C-3'）， 109.6 （C-4）， 54.7 （C-2）， 27.1 （C-3）。ESIMS m/z∶ 205.1 ［M + H］+，188.0 ［M + H- OH］+， 409.1 ［2M + H］+；203.1 ［M - H］-， 407.2 ［2M - H］-。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物1為巴內(nèi)加素。

化合物2∶ 白色固體，易溶于DMSO。1H-NMR （600MHz，DMSO-d6） δ∶ 8.33 （1H， s， H-8）， 8.11 （1H， s， H-2）， 7.33 （2H， s，NH2）， 5.86 （1H， d， J = 6.6 Hz， H-1'）， 5.42 （1H， t， J = 4.8 Hz，5'-OH）， 5.41 （1H， d， J = 4.8 Hz， 2'-OH）， 5.17 （1H， d， J = 4.8 Hz， 3'-OH）， 4.60 （1H， dd， J = 6.6， 5.4 Hz， H-2'）， 4.12 （1H， dd， J = 7.8， 4.8 Hz， H-3'）， 3.94 （1H， q， J = 3.0 Hz， H-4'）， 3.65 （1H，m， H-5'b）， 3.54 （1H， m， H-5'a）。13C-NMR （150 MHz， DMSO-d6） δ∶156.2 （C-6）， 152.4 （C-2）， 149.1 （C-4）， 139.9 （C-8）， 119.4 （C-5）， 87.9 （C-1'）， 85.9 （C-4'）， 73.4 （C-2'）， 70.6 （C-3'）， 61.7 （C-5'）。ESI-MS m/z∶ 268.1 ［M + H］+， 136.0 ［M - C5H8O4+ H］+，266.1 ［M-H］-。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道完全一致，因此鑒定化合物2 為β-腺苷。

化合物3∶ 無色油狀物，易溶于甲醇。1H-NMR （600 MHz，CD3OD） δ∶ 5.23 （1H， m， H-2）， 4.42 （1H， dd， J = 12.0， 3.0 Hz，H-1b）， 4.27 （2H， br s， H-4）， 4.17 （1H， dd， J = 12.0， 7.2 Hz，H-1a）， 4.00 （2H， t， J = 5.4 Hz， H-3）， 3.64 （2H， m， H-5）， 3.22 （9H， s， H-6， 7， 8）， 2.34 （2H， t， J = 7.2 Hz， H-2"）， 2.30 （2H， t，J = 6.6 Hz， H-2'）， 1.60 （4H， m， H-3'， 3"）， 1.28 ～ 1.32 （48H， m，H-4' ～ H-15'， H-4" ～ H-15"）， 0.89 （6H， t， J = 6.6 Hz， H-16'，16"）。13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ∶ 175.0 （C-1'）， 174.6 （C-1"）， 71.8 （C-2）， 67.5 （C-1）， 64.9 （C-3）， 63.6 （C-5）， 60.5 （C-4），54.7 × 3 （C-6， 7， 8）， 34.9 （C-2'）， 33.1 （C-2"）， 30.8 ～ 30.2， 26.0 × 2， 23.8 × 2 （C-3' ～ C-15'， C-3" ～ C-15"）， 14.5 × 2 （C-16'， 16"）。ESI-MS m/z∶ 718.5 ［M - CH3］-。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道完全一致，因此鑒定化合物3為1，2-di-O-hexadecanoyl-snglycero-3-phosphorylcholine。

化合物4∶ 淡黃色油狀物，易溶于甲醇。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ∶ 4.30 （2H， br s， H-4）， 4.17 （1H， dd， J = 12.0， 4.8 Hz，H-1b）， 4.10 （1H， dd， J = 12.0， 6.6， Hz， H-1a）， 3.97 （1H， m， H-2），3.90 （2H， dd， J = 12.0， 6.6 Hz， H-3）， 3.65 （2H， m， H-5）， 3.23 （9H，s， H-6 ～ H-8）， 2.35 （2H， t， J = 7.8 Hz， H-2'）， 1.61 （2H， m， H-3'），1.31 （2H， m， H-15'）， 1.26 （22H， m， H-4' ～ H-14'）， 0.89 （3H， t，J = 7.2 Hz， H-16'）。13C-NMR （CD3OD， 150 MHz） δ∶ 175.3 （C-1'）， 69.8 （C-2）， 67.8 （C-3）， 67.4 （C-5）， 66.2 （C-1）， 60.5 （C-4），54.7 （C-6 ～ C-8）， 34.9 （C-2'）， 33.1 （C-14'）， 30.2 ～ 30.8 （C-4' ～ C-13'）， 26.0 （C-3'）， 23.7 （C-15'）， 14.5 （C-16'）。ESI-MS∶ 518.3 ［M + Na］+， 496.3 ［M + H］+。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物4為1-O-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine。

化合物5和6∶ 無色油狀物，易溶于甲醇。5∶1H-NMR （600 MHz，CD3OD） δ∶ 5.35 （1H， d， J = 9.0 Hz， H-8）， 4.60 （2H， dt， J = 9.0，7.2 Hz， H-9）， 4.25 （1H， d， J = 3.6 Hz， H-7）， 3.96 （1H， ddd， J = 5.4， 3.6， 2.4 Hz， H-6）， 2.49 ～ 2.59 （2H， m， H-4）， 1.92 ～ 2.01 （2H， m， H-5）， 1.66 ～ 1.71 （1H， m， H-10b）， 1.54 ～ 1.60 （1H，m， H-10a）， 0.93 （3H， t， J = 7.8 Hz， H-11）。13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ∶ 170.2 （C-1）， 155.5 （C-3）， 149.1 （C-3a）， 127.7 （C-7a）， 115.6 （C-8）， 70.9 （C-6）， 68.6 （C-9）， 65.3 （C-7）， 31.1 （C-10）， 25.0 （C-5）， 18.1 （C-4）， 10.0 （C-11）。6∶1H-NMR （600 MHz，CD3OD） δ∶ 5.35 （1H， d， J = 9.0 Hz， H-8）， 4.60 （2H， dt， J = 9.0，7.2 Hz， H-9）， 4.26 （1H， d， J = 3.6 Hz， H-7）， 3.96 （1H， ddd， J = 5.4， 3.6， 2.4 Hz， H-6）， 2.49 ～ 2.59 （2H， m， H-4）， 1.92 ～ 2.01 （2H， m， H-5）， 1.66 ～ 1.71 （1H， m， H-10b）， 1.54 ～ 1.60 （1H，m， H-10a）， 0.93 （3H， t， J = 7.8 Hz， H-11）。13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ∶ 170.1 （C-1）， 155.5 （C-3）， 149.1 （C-3a）， 127.7 （C-7a）， 115.6 （C-8）， 70.9 （C-6）， 68.7 （C-9）， 65.2 （C-7）， 31.1 （C-10）， 25.0 （C-5）， 18.1 （C-4）， 10.0 （C-11）。ESI-MS m/z∶ 257.6 ［M + NH4］+。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道［9］基本一致，因此鑒定化合物5和6為洋川芎內(nèi)酯 R和洋川芎內(nèi)酯S。

化合物7∶ 無色針狀結(jié)晶 （CH3OH），mp 133 ～ 135 ℃。1H-NMR （600 MHz， CD3OD） δ∶ 4.98 （1H， br s， H-1）， 4.35 （1H， d，J = 7.2 Hz， H-1'）， 2.99 ～ 3.92 （10H， H-2 ～ H-5， H-2' ～ H-5'）。13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ∶ 98.1 （C-1）， 93.9 （C-1'）， 78.0 （C-5）， 78.0 （C-4）， 76.2 （C-3）， 74.8 （C-3'）， 73.8 （C-2'）， 72.9 （C-2），71.8 （C-5'）， 71.7 （C-4'）， 62.8 （C-6）， 62.7 （C-6'）。ESI-MS m/z∶325.2 ［M - OH］-， 179.1 ［M -C6H11O5］-。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道［10］基本一致，因此鑒定化合物7為麥芽糖。

化合物8∶ 白色方晶 （H2O），mp 163 ～ 165 ℃。經(jīng) TLC與蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，其 Rf 值完全一致，因此鑒定化合物8為蔗糖。

化合物9∶ 無色針狀結(jié)晶 （EtOAc），mp 143 ～ 145 ℃。經(jīng)TLC 與標(biāo)準(zhǔn)品β-谷甾醇對(duì)照，其 Rf 值完全一致，因此鑒定化合物9為β-谷甾醇。

化合物10∶ 白色無定形粉末（CH3OH）。經(jīng) TLC 與標(biāo)準(zhǔn)品胡蘿卜苷對(duì)照，其 Rf 值完全一致，因此鑒定化合物10為胡蘿卜苷。

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“十二五”國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2011BAI05B02）