酶聯(lián)免疫法在結(jié)核病檢測中重要價(jià)值

劉坦河南省洛陽市鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南洛陽471009

酶聯(lián)免疫法在結(jié)核病檢測中重要價(jià)值

劉坦
河南省洛陽市鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南洛陽471009

目的分析結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法在結(jié)核病檢測中的重要價(jià)值。方法選取該院2013年3月—2014年5月收治的62例疑似結(jié)核病患者作為對象進(jìn)行研究，對其實(shí)施結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法試驗(yàn)與結(jié)核菌素試驗(yàn)，記錄兩種檢測方法結(jié)果，并比較兩種方法特異度、敏感度、假陽性率、假陰性率、陽性似然比（LR+）及陰性似然比（LR-）。結(jié)果結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果顯示陰性25例，陽性37例，結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)陰性24例，陽性38例；結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法結(jié)果顯示陰性16例，陽性46例，結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)陰性13例，陽性49例；結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法特異度、靈敏度均顯著優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法診斷陽性似然比（LR+）為11.94、陰性似然比（LR-）為0.99。結(jié)論結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測敏感性更高，且檢測即時(shí)性好，適用于結(jié)核病檢測，臨床價(jià)值較高。

結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法；結(jié)核菌素試驗(yàn)；結(jié)核病

［Abstract］Objective To analyze the important value of tuberculosis infection euzymelinked immunosorbent assay in de‐tecting bacillary phthisis.M ethods 62 cases of patients suspected with bacillary phthisis admitted and treated in our hospi‐tal from March 2013 to May 2014 were selected as the research objectes,and were given tuberculosis infection eu‐zymelinked immunosorbent assay test and tubercalin test,the detection method results were recorded,and the specificity, sensitivity,false positive rate,false negative rate,positive likelihood ratio and negative likelihood ratio were compared be‐tween the twomethods.Results The tubercalin test results showed that 25 cases were negative,37 cases were positive,24 negative cases and 38 positive caseswere cultivated bymycobacterium tuberculosis,the tuberculosis infection euzymelinked immunosorbent assaymethod results showed that 16 caseswere negative and 46 caseswere positive,and 13 negative cases and 49 positive cases were cultivated bymycobacterium tuberculosis,and the specificity and sensitivity of tuberculosis in‐fection euzymelinked immunosorbent assay were obviously better than those of tubercalin test,and the difference has statis‐tical significance,P《0.05,the diagnostic positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of tuberculosis infection eu‐zymelinked immunosorbent assay were respectively 11.94 and 0.99.Conclusion The detection sensitivity of tuberculosis in‐fection euzymelinked immunosorbent assay is higher,and the detection instantaneity is better,and it is suitable for bacillary phthisis detection with higher clinical value.

［Key words］Tuberculosis infection euzymelinked immunosorbent assay;Tubercalin test;Bacillary phthisis

盡管結(jié)核疫苗的應(yīng)用及有效藥物的控制使其有一定緩解趨勢，但由于近年來人口大量流動，隨著人類免疫缺陷病毒及結(jié)核分歧桿菌耐藥菌株感染率上升，結(jié)核病死率逐漸升高[1]?？焖贉?zhǔn)確檢測為控制結(jié)核病的關(guān)鍵，因此高效、準(zhǔn)確的檢測方法顯得極為重要，傳統(tǒng)結(jié)核病檢測方法效果均不佳[2]。目前，結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法準(zhǔn)確率較高、即時(shí)性較好，包涵性較強(qiáng)，結(jié)果受致病性非結(jié)核分歧桿菌干擾較小，同時(shí)不受接種卡介苗影響，檢測過程操作簡單，不受檢測人員影響[3-4]。該研究分析結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法在結(jié)核病檢測中的重要價(jià)值，結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取該院2013年3月—2014年5月收治的62例疑似結(jié)核病患者作為對象進(jìn)行研究，其中男36例，女26例，年齡39~72歲，平均年齡（48.76±6.95）歲，臨床癥狀胸腔積液20例、肺部感染性病變21例，腹腔積液5例，發(fā)熱16例，病程6 d~4個月，平均病程（1.25±0.71）月。納入標(biāo)準(zhǔn)：①存在呼吸道癥狀：胸痛、咳血、咳痰、咳嗽、不同程度胸悶、呼吸困難等癥狀。②順應(yīng)性較好。③影像學(xué)檢測胸部有陰影。

1.2檢驗(yàn)方法

結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測：采集患者4mL外周靜脈血，予以肝素抗凝，分別裝入P、T、N 3種培養(yǎng)管內(nèi)，P管是陽性對照培養(yǎng)管，其中添加非特異性刺激原植物雪球凝集素；T管是測試培養(yǎng)管，其中添加結(jié)合特異性抗原CFP-10、ESAT-6；N管是本地對照培養(yǎng)管。分裝前混勻3次以上，將其放置37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，24 h后取出放入離心機(jī)，5 000 r/min，離心血清，依據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行INF-γ雙抗體定量測試。依據(jù)刺激培養(yǎng)系統(tǒng)中升高的INF-γ的含量，判斷患者是否為結(jié)核感染。結(jié)核菌素試驗(yàn)檢測：在患者前臂皮內(nèi)注射純化蛋白衍生物0.1 mL（含20個結(jié)素國際單位PPD），72 h后檢測反應(yīng)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)硬結(jié)平均直徑。

1.3觀察指標(biāo)

記錄兩種檢測方法結(jié)果，比較其特異度、敏感度、陽性似然比（LR+）及陰性似然比（LR-）。特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%；靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%；假陰性率=假陰性例數(shù)/金標(biāo)準(zhǔn)陰性例數(shù)；假陽性率=假陽性例數(shù)/金標(biāo)準(zhǔn)陽性例數(shù)；陽性似然比=靈敏度/（1-特異度）；陰性似然比=（1-靈敏度）/特異度。結(jié)核病檢測以結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，確診患者是否為結(jié)核病。

1.4判定方法

結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法結(jié)果判定[5]，陽性為：P-N≥20 且T-N＜14；陰性為：P-N≥20且T-N≥14；結(jié)果不確定：P-N＜20且N＞400。結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果判定，陽性為：5 mm≤硬結(jié)平均直徑＜15 mm；陰性為：硬結(jié)直徑在5 mm以下；強(qiáng)陽性為出現(xiàn)水泡雙圈或硬結(jié)直徑在15mm以上。

1.5統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，n（%）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果與結(jié)核菌素試驗(yàn)檢測結(jié)果

結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果顯示陰性25例，陽性37例，結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)陰性24例，陽性38例；結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法結(jié)果顯示陰性16例，陽性46例，結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)陰性13例，陽性49例。診斷結(jié)果詳見表1、表2。

表1　結(jié)核菌素試驗(yàn)檢測結(jié)果（n）

表2　結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果（n）

2.2比較結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測與結(jié)核菌素試驗(yàn)檢測

結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法特異度、靈敏度均顯著優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3　比較結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測與結(jié)核菌素試驗(yàn)檢測

3　討論

結(jié)核病是易發(fā)于青年群體中慢性、緩發(fā)性傳染病，全年均可發(fā)病，16~36歲為結(jié)核病高發(fā)年齡段，結(jié)核病潛伏期一般為6周左右，多發(fā)生于肺部，骨骼、皮膚、腸、腹膜、腦膜、頸淋巴均可繼發(fā)感染，其傳染的主要方式為呼吸道傳播，傳染源為排菌的肺結(jié)核患者。近年來，結(jié)核病發(fā)病率日益增長[6]。臨床上結(jié)核病多呈慢性過程，但也有少數(shù)患者發(fā)病急促。其臨床主要表現(xiàn)為咳血、咳嗽、乏力、低熱等癥狀。健康人感染結(jié)核分枝桿菌后不一定發(fā)病，僅在機(jī)體免疫力降低時(shí)才發(fā)病，全世界每年結(jié)核病發(fā)病人數(shù)高達(dá)1000萬，大約每年有300萬人死于結(jié)核病，是病死率最高的單一傳染病，對結(jié)核病患者早期準(zhǔn)確檢測對改善預(yù)后具有重要意義[7]。臨床上多應(yīng)用結(jié)核菌素試驗(yàn)檢測結(jié)核病，但其檢測準(zhǔn)確度不高，本研究應(yīng)用結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)核病，檢測結(jié)果較可靠。

結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法通過人體感染結(jié)核分歧桿菌后產(chǎn)生的特異性T淋巴細(xì)胞檢測，特異性T淋巴細(xì)胞易受抗原刺激從而產(chǎn)生INF-γ，與試驗(yàn)微孔中INF-γ抗體反應(yīng)，利用催化顯色劑顯示不同顏色，經(jīng)過酶標(biāo)儀對吸光度進(jìn)行檢測，計(jì)算INF-γ含量，判斷其是否感染結(jié)核分歧桿菌[8]。因此，結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法與其他檢測方法相比，優(yōu)勢在于檢測快速，無需隨訪判斷，1天內(nèi)即可確認(rèn)結(jié)果；接種卡介苗無法影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；檢測均在體外進(jìn)行，可反復(fù)檢測；檢測包涵性較強(qiáng)，可同時(shí)應(yīng)用于肺外結(jié)核檢測；檢測結(jié)果不易受常見致病性非結(jié)核分歧桿菌影響；檢測過程試驗(yàn)穩(wěn)定、操作簡便，結(jié)果客觀性強(qiáng)，不受醫(yī)務(wù)人員主觀因素影響，且結(jié)果易于判讀；檢測錯誤率低，使抗藥性降低，節(jié)約醫(yī)療成本。結(jié)核菌素試驗(yàn)為通過對機(jī)體細(xì)胞免疫功能的檢測來判斷是否感染結(jié)核分歧桿菌的方法，實(shí)驗(yàn)所用的純化蛋白衍生物為結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)上清液粗提物，包含200種以上的成分[9]。其根據(jù)IV型變態(tài)反應(yīng)原理的皮膚試驗(yàn)，有結(jié)核菌液體培養(yǎng)基中提取結(jié)核蛋白，注射于皮內(nèi)。其機(jī)制為機(jī)體若感染過結(jié)核分歧桿菌，會產(chǎn)生對應(yīng)致敏淋巴細(xì)胞，其可識別結(jié)核分歧桿菌或結(jié)核桿菌中的特異蛋白成分，再次遇到時(shí)，致敏淋巴細(xì)胞受刺激產(chǎn)生多種可溶性淋巴因子，進(jìn)而增加血管通透性，巨噬細(xì)胞局部浸潤及聚集，60 h左右，局部產(chǎn)生紅腫硬結(jié)，顯示變態(tài)反應(yīng)陽性。結(jié)核菌素試驗(yàn)廣泛應(yīng)用于結(jié)核病臨床檢測，但其結(jié)果顯示陽性時(shí)無法區(qū)分是卡介苗接種導(dǎo)致的免疫反應(yīng)還是結(jié)核分歧桿菌自然感染。因此，近年來隨著卡介苗接種的廣泛推行，使結(jié)核菌素試驗(yàn)檢測結(jié)核分歧桿菌感染受到一定程度的限制[10]。該研究結(jié)果顯示，結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法特異度、靈敏度均顯著優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果充分表明結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測準(zhǔn)確性更高，與此同時(shí)，結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測陽性似然比（LR+）為11.94、陰性似然比（LR-）為0.99，顯著優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)檢測，LR可充分說明檢測結(jié)果與檢測方法關(guān)系緊密，顯著表明結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)核病檢測準(zhǔn)確性更加可靠。

綜上所述，結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測敏感性更高，且檢測即時(shí)性好，適用于結(jié)核病檢測，盡管試劑盒成本較高，限制其廣泛推廣，但無法掩蓋結(jié)核感染酶聯(lián)免疫法檢測準(zhǔn)確性較高的優(yōu)勢。

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Im portant Value of Euzymelinked Immunosorbent Assay in Detecting Bacillary Phthisis

LIU Tan
Department of Clinical Laboratory,Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University,Luoyang,Henan Province, 471009 China

R7

A

1672-5654（2016）06（a）-0108-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.16.108

劉坦（1983.12-），女，河南洛陽人，碩士，主管技師，研究方向：免疫學(xué)。

2016-03-10）