• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    抗-HCV ELISA單陽、雙陽獻(xiàn)血者補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)及跟蹤分析研究

    2016-08-22 07:23:21張艷梅王新梅郭喜彪贠世文姜燕娟孟毓王富強(qiáng)新鄉(xiāng)市中心血站河南新鄉(xiāng)453000
    關(guān)鍵詞:獻(xiàn)血者核酸試劑

    張艷梅,王新梅,郭喜彪,贠世文,姜燕娟,孟毓,王富強(qiáng)新鄉(xiāng)市中心血站,河南新鄉(xiāng)453000

    抗-HCV ELISA單陽、雙陽獻(xiàn)血者補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)及跟蹤分析研究

    張艷梅,王新梅,郭喜彪,贠世文,姜燕娟,孟毓,王富強(qiáng)
    新鄉(xiāng)市中心血站,河南新鄉(xiāng)453000

    目的對(duì)抗-HCV ELISA有反應(yīng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤檢測(cè),了解其真實(shí)的病毒感染情況。方法對(duì)抗-HCV ELISA有反應(yīng)性獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血3個(gè)月、6個(gè)月時(shí)采集標(biāo)本,進(jìn)行ELISA試驗(yàn)、HCV PCR檢測(cè)及RIBA確證3種平衡檢測(cè)。結(jié)果36例單試劑陽性標(biāo)本中,1例跟蹤核酸檢測(cè)陽性,RIBA確證陽性。36例雙試劑陽性標(biāo)本中有20例確證陽性(55.6%),不確定11例(30.6%),陰性5例(13.9%),跟蹤結(jié)果無變化。結(jié)論應(yīng)盡快出臺(tái)并實(shí)施獻(xiàn)血者補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)的具體規(guī)定,確保血液安全,減少獻(xiàn)血者流失;在試劑的選擇上應(yīng)選擇特異性和靈敏度都高的試劑,無論選擇哪種檢測(cè)方式,建議ELISA方法應(yīng)選擇雙抗原夾心法,也希望盡快在獻(xiàn)血者中開展NAT和ELISA平行檢測(cè),以有效降低輸血傳播感染病毒的風(fēng)險(xiǎn)。

    抗-HCV ELISA有反應(yīng)性;HCV-RNA檢測(cè);RIBA檢測(cè);補(bǔ)充實(shí)驗(yàn);跟蹤檢測(cè)

    [Abstract]Objective To know their true virus infection by tracking and detecting the blood donors reactive to anti-HCV and ELISA.M ethods The specimens of blood donors reactive to anti-HCV and ELISA were collected at 3-month and 6-month after donating blood,and were given three balanced detections including ELISA test,HCV PCR test and RIBA confirmation.Results In 36 cases of sero-concordant specimens,1 positive case was detected by tracking nucleic acids,and 1 positive case was confirmed by RIBA.In 36 cases of sero-discordant specimens,20 positive caseswere confirmed(55.6%),11 caseswere uncertain(30.6%),5 caseswere negative(13.9%),and the tracking results had no change.Conclusion We should make and implement specific regulations of complementary experiment of blood donors as soon as possible to ensure the blood safety and reduce the loss of blood donors,and choose the reagentwith higher specificity and sensitivity degree,the double antigen sandwich method in ELISA method is suggested to be selected whichever detection method we choose and we hope to carry out NAT and ELISA parallel detection for donors as soon as possible thus effectively reducing risks of transfusion-transmitted infection virus.

    [Key words]Reactive to anti-HCV and ELISA;HCV-RNA detection;RIBA detection;Complementary experiment;Trace detection

    據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),全球每年有三四百萬人感染丙肝病毒,有1.3億~1.7億人患丙型肝炎。在我國(guó),丙肝患者約有4000萬人,丙肝發(fā)病率在所有病毒性肝炎中僅次于乙肝[1]。為控制HCV經(jīng)血液傳播,我國(guó)規(guī)定采用兩家ELISA抗體診斷試劑篩選獻(xiàn)血者丙型肝炎抗體或采用1種ELISA試劑檢測(cè)HCV抗體,采用1種試劑檢測(cè)HCV核酸[2]。對(duì)有反應(yīng)性的血液及其制備的所有成分報(bào)廢,并將該獻(xiàn)血者實(shí)施獻(xiàn)血屏蔽和淘汰,為了解其真實(shí)的感染情況,我們對(duì)部分抗-HCV ELISA有反應(yīng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)和跟蹤檢測(cè),現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1一般資料

    2013年8月—2014年6月新鄉(xiāng)市無償獻(xiàn)血者進(jìn)行初篩實(shí)驗(yàn)有反應(yīng)性標(biāo)本44例,(初篩試劑為抗HCV ELISA間接法(上??迫A和廈門新創(chuàng))和雙抗原夾心法(北京萬泰));2014年6月—2014年10月無償獻(xiàn)血者進(jìn)行抗-HCV ELISA初篩試驗(yàn)有反應(yīng)性標(biāo)本28例(初篩試劑為抗HCV ELISA間接法(廈門新創(chuàng))和雙抗原夾心法(北京萬泰))。其中抗-HCV ELISA 2次檢測(cè)結(jié)果不一致的標(biāo)本(單試劑陽性)36例,雙試劑陽性36例,分別在其獻(xiàn)血間隔3月、6月后電話追蹤,預(yù)約靜脈采樣進(jìn)行檢測(cè)。獻(xiàn)血者年齡18~55歲,男性占61%(44/ 72),女性占39%(28/72)。

    1.2標(biāo)本采集

    電話預(yù)約在本站采血點(diǎn)采集靜脈血樣,留取核酸檢測(cè)標(biāo)本及血清學(xué)檢測(cè)標(biāo)本各5mL,及時(shí)分離血清/漿,并存放于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3試劑與設(shè)備

    ①血液篩查ELISA診斷試劑:上??迫A、廈門新創(chuàng)、北京萬泰雙抗原夾心試劑。所有試劑均經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所批批檢合格,并在有效期內(nèi)使用。②確證試驗(yàn)試劑:抗-HCV重組免疫印跡試驗(yàn)(RIBA):北京萬泰公司產(chǎn)品(RC20140101)。③核酸檢測(cè)試劑:上??迫A生物工程股份有限公司(14042511)。④設(shè)備:RSP150全自動(dòng)加樣系統(tǒng)、EVO全自動(dòng)加樣系統(tǒng)(瑞士TECAN),F(xiàn)AME24/20全自動(dòng)酶免處理系統(tǒng)(瑞士Hamilton)BEP150全自動(dòng)酶免分析儀(德國(guó)貝林),HT3酶標(biāo)儀,340RT溫控酶標(biāo)儀(奧斯幫生物工程有限公司),全自動(dòng)蛋白印跡儀PROFIBLOT48(瑞士TECAN),美國(guó)ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀。

    1.4檢測(cè)方法

    為了解ELISA篩查有反應(yīng)性獻(xiàn)血者的真實(shí)感染情況,我們對(duì)抗-HCV ELISA初篩試驗(yàn)有反應(yīng)性標(biāo)本分為2次檢測(cè)結(jié)果不一致的標(biāo)本(單試劑陽性)和雙試劑陽性兩組,分別對(duì)其3個(gè)月、6個(gè)月的標(biāo)本采用了ELISA試驗(yàn)、HCV PCR檢測(cè)及RIBA確證3種平衡檢測(cè)方案。

    1.4.1ELISA檢測(cè),對(duì)隨訪到的獻(xiàn)血者均進(jìn)行ELISA檢測(cè)。選用不同生產(chǎn)廠商ELISA試劑檢測(cè)2次,雙試劑有反應(yīng)判定為陽性,單試劑有反應(yīng)再用相同試劑做雙孔復(fù)查,雙孔有反應(yīng)或單孔有反應(yīng)判定為陽性,反之判為陰性。

    1.4.2HCV-RNA檢測(cè)采用美國(guó)ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果≥103 IU/mL為陽性。1.4.3 RIBA確證試驗(yàn)抗-HCV RIBA確證采用重組免疫印跡實(shí)驗(yàn)(RIBA),未出現(xiàn)HCV抗體特異條帶強(qiáng)度1+及以上判為陰性,至少出現(xiàn)兩種HCV抗體特異條帶(Core、NS3、NS4和NS5)強(qiáng)度1+及以上判為陽性,僅出現(xiàn)一種HCV抗體特異條帶(Core、NS3、NS4和NS5)強(qiáng)度1+及以上判為不確定。

    2 結(jié)果

    44份標(biāo)本RIBA及抗-HCV ELISA結(jié)果見表1,抗-HCV ELISA單試劑陽性標(biāo)本的確證結(jié)果和NAT結(jié)果見表2,雙試劑陽性獻(xiàn)血者追蹤檢測(cè)結(jié)果見表3。

    表1 44份標(biāo)本RIBA及抗-HCV ELISA結(jié)果

    2014年6月—2014年10月ELISA有反應(yīng)性標(biāo)本28例,其中RIBA陽性10例,RIBA不確定7例,RIBA陰性11例。

    表2 36例抗-HCV ELISA單試劑陽性獻(xiàn)血者追蹤檢測(cè)結(jié)果

    表3 36例抗-HCV ELISA雙試劑陽性獻(xiàn)血者追蹤檢測(cè)結(jié)果

    2 結(jié)果說明

    ①36例雙試劑陽性標(biāo)本中有20例確證陽性(55.6%),不確定11例(30.6%),陰性5例(13.9%),跟蹤結(jié)果無變化。②36例單試劑陽性標(biāo)本中,有1例跟蹤核酸檢測(cè)陽性,RIBA確證陽性,有14例RIBA不確定,經(jīng)跟蹤不確定結(jié)果無變化。

    3 討論

    該研究跟蹤的ELISA篩查有反應(yīng)性獻(xiàn)血者,分別在3個(gè)月、6個(gè)月進(jìn)行相關(guān)抽樣檢測(cè),旨在確???HCV病毒檢出前的窗口期。2001年6月召開的血液制品咨詢委員會(huì)(Blood Products Advisory Committee,BPCA)會(huì)議上報(bào)告的數(shù)據(jù)證實(shí),6個(gè)月的等待期已足以涵蓋HCV感染血清陽轉(zhuǎn)前的窗口期[3,4]。目前,國(guó)內(nèi)大多數(shù)采供血機(jī)構(gòu)未實(shí)施HCV NAT檢測(cè),更未對(duì)抗-HCV ELISA有反應(yīng)性獻(xiàn)血者作RIBA確證試驗(yàn)。單單由ELISA篩查“抗-HCV有反應(yīng)性”屏蔽獻(xiàn)血者,特別是一些長(zhǎng)期獻(xiàn)血者。容易給獻(xiàn)血者帶來心理負(fù)擔(dān),造成對(duì)無償獻(xiàn)血工作的誤解,引起對(duì)血站的抱怨和投訴。根據(jù)表2可以看出,ELISA篩查單試劑有反應(yīng)性者中有58.3%(21/36)均為潛在的合格獻(xiàn)血者,略低于龐棟等報(bào)告的69.4%[5],高于劉天宇等在血液篩查抗-HCV假陽性獻(xiàn)血者回歸的調(diào)查分析報(bào)道的54.88%[6]。WHO發(fā)布的《篩查獻(xiàn)血者血液經(jīng)輸血傳播感染的建議書》要求血站實(shí)驗(yàn)室開展篩查和確證試驗(yàn),分別用于血液篩查和獻(xiàn)血者管理[7]。目前美國(guó)、英國(guó)、澳大利亞等國(guó)均對(duì)此類獻(xiàn)血者的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)及回招標(biāo)準(zhǔn)做了明確規(guī)定[3,4]。鑒于此,我們建議相關(guān)部門盡快出臺(tái)此類獻(xiàn)血者進(jìn)一步補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)的具體規(guī)定,明確時(shí)間間隔,規(guī)范檢測(cè)流程。國(guó)外研究表明,RIBA不確定者在隨訪過程中一般轉(zhuǎn)為陰性或者繼續(xù)保持不確定結(jié)果,即判為假陽性結(jié)果[8-10]。該研究中共有25例不確定標(biāo)本,在隨后的跟蹤檢測(cè)中仍然保持不確定結(jié)果,因此,判定為假陽性。

    目前多數(shù)采供血機(jī)構(gòu)使用第三代國(guó)產(chǎn)間接法檢測(cè)試劑,由于受到非特異性抗體的影響較大,易造成假陽性.隨著丙肝重組抗原技術(shù)的進(jìn)步,采用雙抗原夾心法檢測(cè)丙肝抗體的理念也得以實(shí)現(xiàn),由表1可知,科華、新創(chuàng)、萬泰3個(gè)廠家的抗-HCV有反應(yīng)性標(biāo)本經(jīng)RIBA實(shí)驗(yàn)確證后,假陽性率分別為31%(5/16)、63%(10/16)、13%(2/16),萬泰雙抗原夾心法明顯優(yōu)于其他兩種試劑。雙抗原夾心法抗-HCV ELISA是檢測(cè)抗-HCV總抗體,既縮短了“窗口期”,又可以降低間接法引起的假陽性。因此,在試劑的選擇上應(yīng)選擇特異性和靈敏度都高的試劑,無論采用兩家ELISA抗體診斷試劑篩選獻(xiàn)血者丙型肝炎抗體或采用1種ELISA試劑檢測(cè)HCV抗體,1種試劑檢測(cè)HCV核酸,建議ELISA方法應(yīng)選擇雙抗原夾心法。也希望在獻(xiàn)血者中開展NAT和ELISA平行檢測(cè),以有效降低輸血傳播感染病毒的風(fēng)險(xiǎn)。

    在對(duì)36例抗-HCV ELISA雙試劑陽性獻(xiàn)血者追蹤檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)有RIBA陽性20例,NAT陽性12例。理論上,血清中即使存在1個(gè)病毒核酸分子,都能通過NAT方法檢測(cè)出來,但在實(shí)際工作中,往往由于血清中病毒核酸含量太少導(dǎo)致核酸提取失敗、PCR試劑的檢測(cè)靈敏度、樣本和擴(kuò)增體系中可能存在某些抑制病毒核酸擴(kuò)增的因素等均可能影響病毒核酸的檢出[11],但考慮到是無償獻(xiàn)血人群,更有可能與獻(xiàn)血者HCV病毒血癥消退等因素有關(guān),尚需進(jìn)一步進(jìn)行研究。

    在對(duì)36例單試劑陽性者追蹤中發(fā)現(xiàn)有1例出現(xiàn)血清學(xué)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象,證實(shí)獻(xiàn)血者當(dāng)時(shí)處于病原體感染的窗口期,因此,對(duì)ELISA篩查單試劑陽性獻(xiàn)血者血液實(shí)施報(bào)廢處置及獻(xiàn)血者實(shí)施6個(gè)月的屏蔽期是非常有必要的,值得引起重視。

    [1]《丙型肝炎感染者調(diào)查、關(guān)護(hù)和治療指南》.世界衛(wèi)生組織. 2014年4.

    [2]《血站技術(shù)操作規(guī)程》2012版.

    [3]郭永健,姚鳳蘭,林授,等.HIV-1和HCV核酸檢測(cè)血液處置和獻(xiàn)血者屏蔽與歸隊(duì)指引(上),中國(guó)輸血雜志,2011,24 (1):79-85.

    [4]葛紅衛(wèi),林授,汪德海,等.HIV-1和HCV核酸檢測(cè)血液處置和獻(xiàn)血者屏蔽與歸隊(duì)指引(下),中國(guó)輸血雜志,2011,24 (2):172-176.

    [5]龐棟,申衛(wèi)東,張翙,等.ELISA篩查單試劑反應(yīng)獻(xiàn)血者追蹤檢測(cè),中國(guó)輸血雜志,2014,27(4):381-383.

    [6]劉宇寧,蔡菊英,劉曉音.血液篩查HBsAg、抗-HCV假陽性獻(xiàn)血者歸隊(duì)的調(diào)查分析.中國(guó)輸血雜志,2012,25(3):260-262.

    [7]WHO.Screening donated blood for transfusin-transmissible infections(Recommen dations).Geneva,2009:50-52.

    [8]Centers for Disease Control and Prevention.Recommendations for pre-vention andcontrol of hepatitis C virus(HCV)infection and HCV-re-lated chronic disease.MMWR Recomm Rep,1998,47(RR-19):1-39.

    [9]Lemaire JM,Courouce AM,Defer C,etal.HCV RNA in blood donors with isolated reactivities by third-generation RIBA. Transfusion,2000,40(7):867-870.

    [10]Stefania CMartin L.Lndeterminate third-generation hepatitis C recombinant immunoblot assay and HCV RNA analysis:isolated reactivitiy againstwith HCV viraemia in clinical patients but not bloods.Scand J Infect Dis,2005,37(6-7): 488-492.

    [11]李文新.不同方法試劑檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體結(jié)果分析.中國(guó)輸血雜志,2014,27(6):622-624.

    Research on Com p lementary Experiment and Tracking Analysis of Anti-HCV and ELISA Sero-concordant and Sero-discordant Blood Donors

    ZHANG Yan-mei,WANG Xin-mei,GUO Xi-biao,YUAN Shi-wen,JIANG Yan-juan,MENG Yu,WANG Fu-qiang
    Xinxiang Central Blood Station,Xinxiang,Henan Province,453000 China

    R7

    A

    1672-5654(2016)06(a)-0043-03

    10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.16.043

    新鄉(xiāng)市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):14SF13)。

    張艷梅(1972.2-),女,河南新鄉(xiāng)人,本科,副主任技師,主要從事血液檢驗(yàn)及質(zhì)量管理。

    2016-03-21)

    猜你喜歡
    獻(xiàn)血者核酸試劑
    測(cè)核酸
    中華詩詞(2022年9期)2022-07-29 08:33:50
    全員核酸
    第一次做核酸檢測(cè)
    快樂語文(2021年34期)2022-01-18 06:04:14
    [聚焦6·14]世界獻(xiàn)血者日來臨前,了解一下無償獻(xiàn)血流程吧
    人人健康(2021年11期)2021-06-17 03:18:26
    國(guó)產(chǎn)新型冠狀病毒檢測(cè)試劑注冊(cè)數(shù)據(jù)分析
    核酸檢測(cè)
    影響單采獻(xiàn)血者保留的相關(guān)因素分析
    人人健康(2019年17期)2019-09-16 03:22:28
    環(huán)境監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)中有害試劑的使用與處理
    非配套脂蛋白試劑的使用性能驗(yàn)證
    分析重復(fù)獻(xiàn)血者與初次獻(xiàn)血者血液檢測(cè)結(jié)果比較
    可以在线观看的亚洲视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 熟女人妻精品中文字幕| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲最大成人手机在线| 好男人在线观看高清免费视频| www.www免费av| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲精品粉嫩美女一区| АⅤ资源中文在线天堂| 免费电影在线观看免费观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产主播在线观看一区二区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 成人三级黄色视频| 国产男靠女视频免费网站| 国产一区二区三区视频了| 又黄又爽又免费观看的视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久人妻av系列| 中文字幕免费在线视频6| 国产中年淑女户外野战色| 国产亚洲av嫩草精品影院| 啪啪无遮挡十八禁网站| 男女视频在线观看网站免费| 乱人视频在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 色吧在线观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 免费看美女性在线毛片视频| 久久久久性生活片| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲av五月六月丁香网| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 麻豆国产97在线/欧美| 日韩高清综合在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国产高清有码在线观看视频| 国产v大片淫在线免费观看| 看片在线看免费视频| 久久香蕉精品热| www日本黄色视频网| 色综合站精品国产| 麻豆国产av国片精品| 天堂影院成人在线观看| 一级黄色大片毛片| 他把我摸到了高潮在线观看| 午夜免费激情av| 中文字幕免费在线视频6| 91狼人影院| 久久精品人妻少妇| 亚洲精品国产成人久久av| 日韩亚洲欧美综合| 黄色欧美视频在线观看| 欧美日韩黄片免| 黄色女人牲交| 日本 欧美在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产精品99久久久久久久久| 国产av在哪里看| 99热只有精品国产| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲久久久久久中文字幕| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 欧美在线一区亚洲| 亚洲不卡免费看| 日韩国内少妇激情av| 亚洲乱码一区二区免费版| 精品久久久久久久久av| 一级黄片播放器| 国产熟女欧美一区二区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久人人爽人人爽人人片va| 午夜老司机福利剧场| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 搞女人的毛片| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美成人性av电影在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲av二区三区四区| 精品久久久久久久久亚洲 | 亚洲经典国产精华液单| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日本一本二区三区精品| 国产极品精品免费视频能看的| 丰满的人妻完整版| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲图色成人| 国产视频一区二区在线看| 99久久精品热视频| 色精品久久人妻99蜜桃| av黄色大香蕉| 久久精品91蜜桃| 色吧在线观看| 在现免费观看毛片| 美女被艹到高潮喷水动态| 1000部很黄的大片| 欧美性猛交黑人性爽| 成人av在线播放网站| 国内精品久久久久精免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产久久久一区二区三区| 成人国产综合亚洲| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久亚洲真实| 亚洲第一电影网av| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 色吧在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 在线播放无遮挡| 精品人妻1区二区| a级毛片免费高清观看在线播放| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产乱人视频| 日韩欧美三级三区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 欧美中文日本在线观看视频| 99久久九九国产精品国产免费| 1000部很黄的大片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲va在线va天堂va国产| 级片在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产69精品久久久久777片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 一夜夜www| 亚洲精品456在线播放app | 成人无遮挡网站| 久久久久久久久久久丰满 | 少妇裸体淫交视频免费看高清| 男人狂女人下面高潮的视频| 又紧又爽又黄一区二区| 国产男人的电影天堂91| 国产成人av教育| 18+在线观看网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 18禁在线播放成人免费| 干丝袜人妻中文字幕| 搞女人的毛片| 精品乱码久久久久久99久播| 午夜激情欧美在线| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲成人中文字幕在线播放| videossex国产| 久久久久精品国产欧美久久久| 女同久久另类99精品国产91| 色综合站精品国产| 中文字幕免费在线视频6| 波野结衣二区三区在线| 精品久久久久久久久av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美三级亚洲精品| a级毛片a级免费在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 特级一级黄色大片| 免费电影在线观看免费观看| 99热6这里只有精品| 国产精品99久久久久久久久| 色吧在线观看| 99热6这里只有精品| 伦精品一区二区三区| 美女免费视频网站| 精品欧美国产一区二区三| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲av熟女| 日本在线视频免费播放| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 精品久久久久久久久av| 极品教师在线视频| 国内精品美女久久久久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 桃色一区二区三区在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| or卡值多少钱| 天堂影院成人在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久香蕉精品热| 亚洲av成人av| 两人在一起打扑克的视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品午夜福利在线看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成熟少妇高潮喷水视频| 动漫黄色视频在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 日韩欧美精品免费久久| 日本三级黄在线观看| 18+在线观看网站| 欧美三级亚洲精品| 国产不卡一卡二| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美色视频一区免费| 91精品国产九色| 99精品在免费线老司机午夜| 色哟哟哟哟哟哟| avwww免费| 成人特级av手机在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 99久久无色码亚洲精品果冻| 精品午夜福利视频在线观看一区| 搞女人的毛片| 精品一区二区三区人妻视频| 久久久久久久久久黄片| a在线观看视频网站| 如何舔出高潮| 日韩欧美 国产精品| 最近视频中文字幕2019在线8| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩av在线大香蕉| 少妇的逼水好多| 91av网一区二区| a在线观看视频网站| 免费一级毛片在线播放高清视频| 午夜影院日韩av| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产高清三级在线| 亚洲精品成人久久久久久| 嫁个100分男人电影在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 搡老岳熟女国产| 高清毛片免费观看视频网站| 特级一级黄色大片| 亚洲av免费在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| av.在线天堂| 中文字幕熟女人妻在线| 中文在线观看免费www的网站| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 88av欧美| 老司机福利观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 舔av片在线| 色av中文字幕| 大型黄色视频在线免费观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日韩欧美在线乱码| 久久99热这里只有精品18| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 哪里可以看免费的av片| 免费黄网站久久成人精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 色播亚洲综合网| 国产色婷婷99| 草草在线视频免费看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 日本成人三级电影网站| 18禁在线播放成人免费| 亚洲三级黄色毛片| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 乱系列少妇在线播放| 黄色配什么色好看| 亚洲最大成人av| 久久久久久久久久久丰满 | 色精品久久人妻99蜜桃| 国产成人一区二区在线| 有码 亚洲区| 精品日产1卡2卡| 欧美日韩黄片免| 一夜夜www| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲成人精品中文字幕电影| 熟女人妻精品中文字幕| 在线天堂最新版资源| 中文字幕熟女人妻在线| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 好男人在线观看高清免费视频| 国产探花极品一区二区| 久久久久久国产a免费观看| 日本三级黄在线观看| 亚洲av中文av极速乱 | 色哟哟哟哟哟哟| 天美传媒精品一区二区| 窝窝影院91人妻| 一a级毛片在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产成人一区二区在线| 99在线人妻在线中文字幕| 久久草成人影院| 我的老师免费观看完整版| 偷拍熟女少妇极品色| 国产高清三级在线| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产成人一区二区在线| 国产精品av视频在线免费观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲,欧美,日韩| 精品乱码久久久久久99久播| 如何舔出高潮| 午夜福利在线在线| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲色图av天堂| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 午夜福利高清视频| 成人无遮挡网站| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 99精品在免费线老司机午夜| 一区福利在线观看| 很黄的视频免费| 欧美最新免费一区二区三区| 观看美女的网站| 黄色欧美视频在线观看| 丰满的人妻完整版| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| av福利片在线观看| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲三级黄色毛片| 高清日韩中文字幕在线| 老司机福利观看| 亚洲 国产 在线| 国产成人影院久久av| 搞女人的毛片| 色综合站精品国产| 黄色欧美视频在线观看| 日日撸夜夜添| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产视频一区二区在线看| 我要搜黄色片| 麻豆一二三区av精品| 国产私拍福利视频在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲av免费高清在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 国产精品精品国产色婷婷| 精品一区二区三区av网在线观看| 热99在线观看视频| 亚洲精品456在线播放app | 91麻豆av在线| 日韩人妻高清精品专区| 俺也久久电影网| 国产精品国产高清国产av| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 在线播放国产精品三级| 亚洲精品日韩av片在线观看| 一级黄片播放器| 日本黄大片高清| www.www免费av| 亚洲国产精品合色在线| 综合色av麻豆| 窝窝影院91人妻| 国产91精品成人一区二区三区| 91精品国产九色| 午夜福利高清视频| 欧美色视频一区免费| 伊人久久精品亚洲午夜| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产成人a区在线观看| 午夜福利欧美成人| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产视频一区二区在线看| 91在线精品国自产拍蜜月| 午夜视频国产福利| 精品久久国产蜜桃| 天堂网av新在线| 国产精品久久久久久精品电影| 一级黄片播放器| 我的老师免费观看完整版| 一边摸一边抽搐一进一小说| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 韩国av一区二区三区四区| 国产黄a三级三级三级人| 最近最新中文字幕大全电影3| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 日本在线视频免费播放| 黄色女人牲交| 精品久久久久久久久久久久久| 久久精品国产自在天天线| 又爽又黄无遮挡网站| 神马国产精品三级电影在线观看| 很黄的视频免费| 日韩一本色道免费dvd| 国产真实乱freesex| 色哟哟哟哟哟哟| 国内精品宾馆在线| 免费在线观看影片大全网站| 国产淫片久久久久久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产极品精品免费视频能看的| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产 一区 欧美 日韩| 又粗又爽又猛毛片免费看| 黄色视频,在线免费观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 欧美又色又爽又黄视频| 禁无遮挡网站| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产成人福利小说| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产爱豆传媒在线观看| 一区二区三区免费毛片| 国产午夜精品论理片| 99久久精品热视频| 免费在线观看成人毛片| 在线观看66精品国产| 亚洲最大成人av| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 婷婷精品国产亚洲av在线| videossex国产| 亚洲午夜理论影院| 3wmmmm亚洲av在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美最新免费一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产在线男女| 亚洲av成人av| 国产高清三级在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产高清视频在线播放一区| 99riav亚洲国产免费| 一级黄色大片毛片| 午夜免费激情av| 成人特级黄色片久久久久久久| 最近在线观看免费完整版| 久久久久久九九精品二区国产| 美女 人体艺术 gogo| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 男女啪啪激烈高潮av片| 成年女人毛片免费观看观看9| 又粗又爽又猛毛片免费看| 美女高潮的动态| 少妇丰满av| 中文在线观看免费www的网站| 国产单亲对白刺激| 欧美又色又爽又黄视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 在线免费观看的www视频| 联通29元200g的流量卡| 舔av片在线| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 男人的好看免费观看在线视频| 国内精品美女久久久久久| 午夜激情欧美在线| 精品久久久久久久久亚洲 | 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品精品国产色婷婷| 国产毛片a区久久久久| 午夜老司机福利剧场| 悠悠久久av| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 国产高清三级在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美日本视频| 一区二区三区四区激情视频 | 国产69精品久久久久777片| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 中国美女看黄片| 小说图片视频综合网站| 亚洲五月天丁香| 国产成年人精品一区二区| 亚洲成人久久性| 成人毛片a级毛片在线播放| 波野结衣二区三区在线| 一区二区三区激情视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 少妇高潮的动态图| 又紧又爽又黄一区二区| 国产高潮美女av| 欧美又色又爽又黄视频| av中文乱码字幕在线| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 性欧美人与动物交配| 九九在线视频观看精品| 亚洲av一区综合| 黄色一级大片看看| 国产精品三级大全| 尾随美女入室| 精品久久久久久久久av| 色综合婷婷激情| 日日撸夜夜添| 日韩一区二区视频免费看| 日韩强制内射视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲最大成人av| 免费观看精品视频网站| 亚洲无线在线观看| 99热这里只有是精品50| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 色5月婷婷丁香| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲中文日韩欧美视频| 免费高清视频大片| 中文在线观看免费www的网站| 国产av不卡久久| 天堂影院成人在线观看| 长腿黑丝高跟| 亚洲美女搞黄在线观看 | 美女黄网站色视频| 亚洲三级黄色毛片| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 久久久国产成人精品二区| 悠悠久久av| 两人在一起打扑克的视频| 身体一侧抽搐| 日本黄色片子视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 日韩亚洲欧美综合| 国产三级中文精品| 免费黄网站久久成人精品| ponron亚洲| 免费看av在线观看网站| 99久久精品热视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产高清视频在线观看网站| 色5月婷婷丁香| 露出奶头的视频| 人人妻人人看人人澡| 欧美bdsm另类| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲五月天丁香| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲精品成人久久久久久| 很黄的视频免费| 国产主播在线观看一区二区| 免费人成在线观看视频色| 波多野结衣高清作品| 99热这里只有精品一区| 一a级毛片在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产久久久一区二区三区| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | av在线亚洲专区| 欧美激情国产日韩精品一区| 尾随美女入室| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 色噜噜av男人的天堂激情| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 欧美中文日本在线观看视频| 99视频精品全部免费 在线| 欧美日韩乱码在线| 亚洲久久久久久中文字幕| 白带黄色成豆腐渣| 免费看美女性在线毛片视频| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲欧美清纯卡通| 精品福利观看| 亚洲无线在线观看| 成人精品一区二区免费| 亚洲自拍偷在线| 国产成人影院久久av| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产精品福利在线免费观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲最大成人av| 国产成人a区在线观看| 亚洲精品色激情综合| 一a级毛片在线观看| 嫩草影院新地址| 久久久国产成人精品二区| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成年女人看的毛片在线观看| 亚州av有码| 国产av一区在线观看免费| 身体一侧抽搐| 日本爱情动作片www.在线观看 | 色噜噜av男人的天堂激情| 日韩高清综合在线| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲中文字幕日韩| 高清毛片免费观看视频网站| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 91精品国产九色| 在线观看av片永久免费下载| 中出人妻视频一区二区| 久久久久久久久大av| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 91在线观看av| 亚洲无线在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 制服丝袜大香蕉在线| 麻豆成人av在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲第一区二区三区不卡| 99久久精品国产国产毛片| 日韩人妻高清精品专区| 老司机福利观看| 日韩精品有码人妻一区|