銀杏達莫注射液肌肉刺激性及血管刺激性的試驗研究

張金娟 劉 偉 劉 揚 吳 寧 熊 英 吳艷俊 李建英 吳炯樹 王世平（貴州醫(yī)科大學(xué)，貴州 貴陽 520025）

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銀杏達莫注射液肌肉刺激性及血管刺激性的試驗研究

張金娟 劉 偉 劉 揚 吳 寧 熊 英 吳艷俊 李建英 吳炯樹 王世平
（貴州醫(yī)科大學(xué)，貴州 貴陽 520025）

目的 觀察銀杏達莫注射液的肌肉刺激性及血管刺激性，為其臨床安全應(yīng)用提供試驗依據(jù)。方法 以家兔為對象，分別采用肌肉刺激性試驗及血管刺激性試驗觀察高劑量（實驗中能夠?qū)崿F(xiàn)的最大給藥濃度）和低劑量（臨床推薦的最大給藥濃度）下舒肝寧注射液的肌肉刺激性及血管刺激性。結(jié)果 低劑量的銀杏達莫注射液無明顯肌肉刺激性及血管刺激性，但高劑量的銀杏達莫注射液有明顯的肌肉刺激性及血管刺激性。結(jié)論 提示銀杏達莫注射液在臨床推薦劑量和濃度下使用是安全的，但若增加藥物劑量或濃度則可能出現(xiàn)注射部位血管和肌肉組織的損傷。

銀杏達莫注射液；肌肉刺激性；血管刺激性；家兔

銀杏達莫注射液為銀杏提取物與雙嘧達莫組成的復(fù)方制劑，其中的銀杏葉提取物能夠促進大腦循環(huán)代謝，改進記憶功能，降低腦血管阻力和心肌耗氧量，擴張腦血管，增加腦血流量，抑制血小板凝集，抗自由基、抗過敏、抑制致癌啟動因子，抗病毒、抗癌；而雙嘧達莫是一種傳統(tǒng)的心血管系統(tǒng)藥物，具有抗凝及擴張冠狀動脈的作用；臨床廣泛應(yīng)用于預(yù)防和治療冠心病、血栓栓塞性疾病。本課題按照國家食品藥品監(jiān)督管理局制定的《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原》對銀杏達莫注射液進行了肌肉刺激性試驗及血管刺激性試驗，對其在肌肉刺激性及血管刺激性方面的特性進行了觀察，旨在為該藥的臨床安全應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料：銀杏達莫注射液：淡黃色澄明液體，由貴州益佰制藥股份有限公司提供，批號：20120102；規(guī)格：10毫升/支；0.9%氯化鈉注射液，貴州科倫藥業(yè)有限公司，批號：20121124。家兔，體質(zhì)量2～2.5 kg，貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（黔）2002-0001。家兔每籠1只適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后用于實驗。顯微鏡：UB203型，重慶澳浦光電技術(shù)有限公司；BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)：成都泰盟科技有限公司。

1.2方法

1.2.1肌肉刺激性試驗：取家兔8只，體質(zhì)量2～2.5 kg，♀♂各半。隨機分成高劑量組和低劑量組，每組4只，♀♂各半。于高劑量組家兔的左側(cè)大腿股四頭肌內(nèi)注射銀杏達莫注射液原液（濃度按體積分數(shù)計為100%）1 mL；低劑量組家兔的左側(cè)大腿股四頭肌內(nèi)注射0.9%氯化鈉注射液稀釋后的銀杏達莫注射液（稀釋比例為20∶1，濃度按體積分數(shù)計為4.8%）1 mL；兩組動物的右側(cè)大腿相同部位均注射0.9%氯化鈉注射液1 mL作對照。注射給藥后24 h、48 h肉眼觀察注射局部有無充血、紅腫、變性、壞死等異常。觀察后麻醉、處死動物。解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉的刺激反應(yīng)，按表1計算相應(yīng)的反應(yīng)級。觀察后取注射部位組織放入10%福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察其病理學(xué)改變。

表1　肌肉刺激反應(yīng)分級標準

1.2.2血管刺激性試驗：取家兔16只，體質(zhì)量2～2.5 kg，♀♂各半。將家兔隨機分成高劑量組和低劑量組，每組8只，♀♂各半。分別在高、低劑量組家兔的左側(cè)耳緣靜脈注射高濃度及低濃度（濃度同肌肉刺激性試驗）銀杏達莫注射液10 mL/kg，在兩組動物的右側(cè)耳緣靜脈均注射0.9%氯化鈉注射液10 mL/kg作自身對照。每天給藥1次，連續(xù)5 d。每天給藥前及末次給藥后48 h、96 h肉眼觀察注射部位局部血管刺激情況。末次給藥96 h并觀察后，高、低劑量組各處死4只家兔，剪取耳緣靜脈周圍的耳廓組織，放入10%福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡下觀察耳緣靜脈及其周圍組織的病理學(xué)改變。余下的動物繼續(xù)觀察至末次給藥后21 d再處死，并按前述方法對耳緣靜脈及其周圍組織進行組織學(xué)觀察。

1.2.3統(tǒng)計學(xué)處理：實驗數(shù)據(jù)采用SSPS17.0軟件進行處理，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2　結(jié) 果

2.1肌肉刺激性試驗結(jié)果

2.1.1肉眼觀察結(jié)果：肌內(nèi)注射給藥后，各組動物均活動正常，無跛行，進食、飲水、大小便等一般情況均正常。于注射后24 h及48 h肉眼觀察家兔注射部位時，均未見注射部位紅腫、皮下出血及其他異常。處死動物，分別剖取股四頭肌，縱向切開，肉眼觀察注射部位的反應(yīng)情況如下：低劑量組有1只家兔的左側(cè)（給低劑量銀杏達莫注射液）股四頭肌內(nèi)有一明顯的出血點，直徑約0.2 cm，無充血、水腫、變性及其他改變；其余家兔左右兩側(cè)股四頭肌均無明顯異常，左右兩側(cè)比較無明顯差異（圖1A、B）。高劑量組有1只家兔右側(cè)（給0.9%氯化鈉注射液）股四頭肌內(nèi)出現(xiàn)輕度出血現(xiàn)象，范圍約0.5 cm×0.9 cm，無充血、水腫、變性、壞死等表現(xiàn)；其余家兔的右側(cè)（給0.9%氯化鈉注射液）股四頭肌內(nèi)未見明顯改變；高劑量組的4只家兔左側(cè)（給高劑量銀杏達莫注射液）股四頭肌均出現(xiàn)不同程度的出血、充血、水腫及肌肉白色樣改變，病變面積在0.5 cm×1.0 cm～0.5 cm×2.5 cm；左右兩側(cè)股四頭肌表現(xiàn)差異明顯（圖1C、D）。肌肉刺激反應(yīng)分級結(jié)果見表1。

表1　各組家兔股四頭肌注藥后肌肉刺激反應(yīng)分級表

2.1.2鏡下觀察結(jié)果：光鏡下可見，低劑量組家兔的左右兩側(cè)股四頭肌標本表現(xiàn)為偶有肌纖維斷裂、溶解，有輕度變性，但肌束基本完整，無間質(zhì)水腫、炎細胞浸潤等病變；左右兩側(cè)肌肉組織表現(xiàn)無明顯差異。高劑量組家兔右側(cè)股四頭肌表現(xiàn)與低劑量組一致，高劑量組家兔左側(cè)（給高劑量銀杏達莫注射液）股四頭肌注射部位肌肉組織內(nèi)則出現(xiàn)肌纖維明顯變性壞死，肌束不完整，肌束間質(zhì)明顯增寬，病灶內(nèi)可見散在分布的炎細胞及紅細胞浸潤等改變。高劑量組左側(cè)肌肉組織的損傷程度明顯重于右側(cè)，兩側(cè)表現(xiàn)差異明顯。見圖2。

圖1　家兔股四頭肌注藥后肉眼觀察結(jié)果［A為低劑量組家兔左側(cè)股四頭肌（低劑量銀杏達莫注射液）；B為低劑量組家兔右側(cè)股四頭肌（0.9%氯化鈉注射液）；C為高劑量組家兔左側(cè)股四頭?。ǜ邉┝裤y杏達莫注射液）；D為高劑量組家兔右側(cè)股四頭?。?.9%氯化鈉注射液）］

圖2　家兔股四頭肌注射部位石蠟切片HE染色［A為低劑量組家兔左側(cè)（低劑量銀杏達莫注射液）注射部位股四頭?。籅為低劑量組家兔右側(cè)（0.9%氯化鈉注射液）；C為高劑量組家兔左側(cè)（高劑量銀杏達莫注射液）注射部位股四頭肌；D為低劑量組家兔右側(cè)（0.9%氯化鈉注射液）注射部位股四頭肌］

2.2血管刺激性試驗結(jié)果

2.2.1肉眼觀察結(jié)果：每次給藥前及末次給藥后48 h、96 h對肉眼觀察動物耳緣經(jīng)脈進行觀察，低劑量組家兔左側(cè)耳緣靜脈（給低劑量銀杏達莫注射液）及兩組家兔右側(cè)耳緣靜脈（給0.9%氯化鈉注射液）可見針刺部位有注射時留下的“針疤”，“針疤”周圍偶有血管輕度擴張現(xiàn)象，而針刺部位的近心端靜脈未見明顯的充血水腫或血栓形成。高劑量組左側(cè)耳緣靜脈（給高劑量銀杏達莫注射液）針刺部位除有“針疤”外，還可見靜脈內(nèi)有明顯的血栓現(xiàn)象。末次給藥后96 h仍未處死的動物左右耳緣靜脈注射部位的“針疤”逐漸愈合；末次給藥后21 d，低劑量組左側(cè)耳緣靜脈（給低劑量銀杏達莫注射液）及高、低劑量兩組家兔的右側(cè)耳緣靜脈（給0.9%氯化鈉注射液）整條靜脈均無充血、水腫、血栓形成等現(xiàn)象。高劑量組左側(cè)耳緣靜脈（給高劑量銀杏達莫注射液）依然可見有血栓存在。

2.2.2鏡下觀察結(jié)果：給藥96 h后，在低劑量組左（給低劑量銀杏達莫注射液）及兩劑量組右側(cè)（給0.9%氯化鈉注射液）耳廓組織樣本中，有個別樣本可見血管有輕微破損、血管壁不完整，紅細胞逸出血管外，但無管壁增厚及其他異常，其余樣本的血管壁完整、無增厚，管腔內(nèi)無血栓，靜脈周圍組織均無異常。高劑量組左側(cè)（給高劑量銀杏達莫注射液）耳緣靜脈明顯擴張，血管內(nèi)可見大量紅細胞聚集，新鮮血栓形成。給藥后21 d，低劑量組左側(cè)（給低劑量銀杏達莫注射液）及高、低劑量組右側(cè)（給0.9%氯化鈉注射液）耳緣靜脈及周圍組織均表現(xiàn)正常。高劑量組左側(cè)（給高劑量銀杏達莫注射液）耳緣靜脈血管內(nèi)可見到血栓內(nèi)部形成裂隙或新的血管，使血栓機化再通。見圖3。

3　討 論

靜脈給藥可使藥物直接進入血液循環(huán)，作用迅速。對于生物利用度低又需要迅速發(fā)揮作用的藥物、急重患者及因昏迷而不能吞咽的患者，常采用靜脈給藥方式。但靜脈給藥時，高濃度的藥液直接與血管內(nèi)壁接觸，可能會造成血管內(nèi)皮損傷，引發(fā)紅腫、熱痛和瘙癢等不良反應(yīng)，即臨床表現(xiàn)的靜脈炎［2］。此外，在靜脈給藥過程中常常會出現(xiàn)由于靜脈穿刺技術(shù)等原因造成藥物外漏，可能導(dǎo)致穿刺部位局部組織的刺激性損傷。國家食品藥品監(jiān)督管理局下發(fā)的《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》中明確規(guī)定［3］：中藥注射劑應(yīng)進行血管刺激性試驗及肌肉刺激性試驗。本課題按該指導(dǎo)原則的要求對銀杏達莫注射液進行了血管刺激性試驗及肌肉刺激性試驗。

圖3　給藥后96 h及21 d家兔耳緣靜脈石蠟切片HE染色（100×）［A為低劑量組家兔給藥后96 h左側(cè)（給低劑量銀杏達莫注射液）耳緣靜脈；B為低劑量組家兔給藥后96 h右側(cè)（給0.9%氯化鈉注射液）耳緣靜脈；C為高劑量組家兔給藥后96 h左側(cè)（給低劑量銀杏達莫注射液）耳緣靜脈；D為高劑量組家兔給藥后96 h右側(cè)（給0.9%氯化鈉注射液）耳緣靜脈；E為低劑量組家兔給藥后21 d左側(cè)（給低劑量銀杏達莫注射液）耳緣靜脈；F為高劑量組家兔給藥后21 d右側(cè)（給0.9%氯化鈉注射液）耳緣靜脈；G為低劑量組家兔給藥后21 d左側(cè)（給低劑量銀杏達莫注射液）耳緣靜脈；H為低劑量組家兔給藥后21 d右側(cè)（給0.9%氯化鈉注射液）耳緣靜脈。圖中←所示為靜脈］

本試驗中設(shè)計了兩個劑量組：以臨床推薦的最大給藥濃度為低劑量組，實驗中能夠?qū)崿F(xiàn)的最大給藥濃度為高劑量組。設(shè)計臨床推薦的最大給藥濃度為低劑量，主要是為了觀察受試藥物在臨床使用劑量下是否存在肌肉及血管刺激性；在此基礎(chǔ)上又設(shè)計了實驗中能夠?qū)崿F(xiàn)的最大給藥濃度為高劑量，是為了最大限度地暴露受試藥物可能存在的刺激性，以便全面評估其安全性，為指導(dǎo)臨床應(yīng)用提供依據(jù)。銀杏達莫注射液臨床推薦的最大給藥濃度（按體積分數(shù)計）約為4.8%；銀杏達莫注射的原液濃度（即體積分數(shù)為100%）是實驗中能夠?qū)崿F(xiàn)的最大給藥濃度。

在肌肉刺激性試驗中，低劑量組注射部位肌肉組織有輕度損傷表現(xiàn)，損傷程度與對照側(cè)無明顯差異，與文獻報道一致［4］，認為這是注射造成的機械性損傷，而并非藥物所致。因此，可以認為低劑量銀杏達莫注射液無明顯肌肉刺激性。高劑量組注射部位肌肉組織出現(xiàn)了明顯的變性壞死表現(xiàn)，且呈現(xiàn)出以肌纖維的變性壞死為主、病灶內(nèi)可見散在的多少不等的炎細胞浸潤及紅細胞浸潤的特點，損傷程度明顯重于對照側(cè)，故認為高劑量銀杏達莫注射液具有肌肉刺激性。

血管刺激性試驗中，低劑量組給藥部位血管及周圍組織未見異常表現(xiàn)，可認為低劑量銀杏達莫注射液無明顯血管刺激性。高劑量組給藥后96 h，耳緣靜脈擴張、血管內(nèi)形成新鮮血栓，血管周圍組織未見明顯異常；給藥后21 d，靜脈內(nèi)的血栓未被吸收而是以機化再通的方式修復(fù)。這些結(jié)果則說明高劑量的銀杏達莫注射液，有明顯的血管刺激性。

綜上所述，低劑量的銀杏達莫注射液無明顯血管刺激性及肌肉刺激性，但高劑量的銀杏達莫注射液有明顯的血管刺激性及肌肉刺激性。提示銀杏達莫注射液在臨床推薦劑量和濃度下使用是安全的，但若增加藥物劑量或濃度則可能出現(xiàn)注射部位血管和肌肉組織的損傷。這為銀杏達莫注射液的臨床應(yīng)用提供了重要啟示：雖然在臨床推薦的劑量下使用銀杏達莫注射液是相對安全的，但隨著劑量的增加就可能會表現(xiàn)出對注射部位局部組織產(chǎn)生損害，故臨床應(yīng)用銀杏達莫注射液時，應(yīng)嚴格控制藥物的劑量和濃度，不可隨意增加藥物劑量和濃度，否則很可能帶來安全性問題。

［1］ 金毅,王曉煒,王平.中日肌肉刺激性試驗的比較研究及探討［J］.中國新藥雜志,2012,14（21）：1587-1590.

［2］ 吳雙,蔡偉惠,金方.注射劑處方篩選中血管刺激性評價研究進展［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2012,43（3）：222-226.

［3］ 《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則［M］.北京： 中國醫(yī)藥科技出版社,2006： 227-242.

［4］ 金毅,王平,王曉煒,等.對肌肉刺激性試驗在病理學(xué)方面的探討［J］.今日藥學(xué),2012,22（5）：270-271.

R282.710.7

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1671-8194（2016）20-035-02