活血通絡(luò)解毒方對(duì)腦缺血Wistar大鼠血液流變學(xué)的影響*

艾宗耀易燕鋒肖梅紅嵇冰楊春華陸周翔（.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州中醫(yī)院，浙江湖州33000；.湖州師范學(xué)院醫(yī)學(xué)院，浙江湖州33000）

·研究報(bào)告·

活血通絡(luò)解毒方對(duì)腦缺血Wistar大鼠血液流變學(xué)的影響*

艾宗耀1易燕鋒2肖梅紅1嵇冰1楊春華1陸周翔1
（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州中醫(yī)院，浙江湖州313000；2.湖州師范學(xué)院醫(yī)學(xué)院，浙江湖州313000）

目的觀察活血通絡(luò)解毒方對(duì)腦缺血Wistar大鼠血液流變學(xué)的影響。方法將60只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分成5組，分別為假手術(shù)組、模型組和中藥低、中、高劑量組。采用改良Longa法建立大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞再灌注模型，造模成功24 h后，經(jīng)大鼠尾靜脈取血檢查血液流變學(xué)指標(biāo)。治療第7天評(píng)估各組神經(jīng)功能缺損評(píng)分。治療第14天，經(jīng)大鼠腹主動(dòng)脈取血再次檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)。結(jié)果中藥各劑量組治療后血液流變學(xué)指標(biāo)均有改善（P《0.05），且高劑量組血液流變學(xué)指標(biāo)改善較中低劑量組明顯（P《0.05），中劑量組改善較低劑量組明顯（P《0.05）。結(jié)論活血通絡(luò)解毒方可改善缺血性Wistar大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，這可能是治療腦梗死的機(jī)制之一。

腦缺血再灌注腦梗死活血通絡(luò)解毒方血液流變學(xué)指標(biāo)

【Abstract】Objective：To study the influence of Huoxue tongluo jiedu Decoction on hemorheology ofWistar rats with cerebral ischemia.Methods：Sixty male Wistarmice were randomly divided into sham operation group，the model group，low-dose group，middle-dose group，and high-dose group.The middle cerebral artery occlusion modelwas established by Longa and othermethods.After successfulmodeling of 24 h，the blood rheology indexes were examined by blood examination of rat tail vein.The neurological deficit score of each group was evaluated on 7th day after treatment.On fourteenth day after treatment，the blood rheology indexes were detected again by the abdominal aorta of rats.Results：The blood rheology indexes of the drug delivery group were better than those of the model group and the sham operation group，and the larger the dose，the more obvious the improvement of blood rheology index.Conclusion：Huoxue tongluo jiedu Decoction can improve hemorheology indexes ofWistar ratswith cerebral ishcemia，whichmay be one of themechanisms for the treatment of cerebral infarction.

【Key words】Cerebarl ischemia reperfusion；Cerebral infarction；Huoxue tongluo jiedu Decoction；Hemorheology

急性腦梗死是由于腦部供血障礙，引起腦組織缺血性壞死。課題組前期研究表明［1］，活血通絡(luò)解毒方可通過降低血清炎癥細(xì)胞因子的水平而達(dá)到改善神經(jīng)功能的作用。本研究旨在探討活血通絡(luò)解毒方對(duì)腦缺血Wistar大鼠血液流變學(xué)的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性Wistar大鼠60只，體質(zhì)量（280±20）g，購于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK（浙）2003-0003，經(jīng)檢疫合格備用。大鼠在24～25℃下分籠飼養(yǎng)，保持相對(duì)濕度約為12%、光照明暗比為13∶1。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物活血通絡(luò)解毒方組成：茯苓15 g，玄參10 g，金銀花12 g，當(dāng)歸10 g，赤芍10 g，大黃3 g，梔子10 g，川芎6 g，地龍10 g，紅花10 g，全蝎3 g，甘草6 g（中藥材由浙江中藥材公司提供）、藥材經(jīng)煎煮液濃縮至每毫升含原生藥材2 g（高劑量）、1 g（中劑量）/0.5 g（低劑量）備用。

1.3模型制備將Wistar雄性大鼠按照改良Longa［2］法建立大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型。假手術(shù)組未建立大腦中動(dòng)脈阻塞模型，僅做頸部手術(shù)切口，鈍性分離頸前肌，游離暴露頸總、頸外、頸內(nèi)動(dòng)脈。除假手術(shù)組外，其余組造模成功后按隨機(jī)數(shù)字表法分組為模型組和中藥低、中、高劑量組，每組12只。慶大霉素按照每日35mg/kg大鼠體質(zhì)量抗感染，腹腔注射3 d。Wistar大鼠在再灌注術(shù)后完全蘇醒后，參照改良Berdson評(píng)分［3］分級(jí)法分別觀察大鼠神經(jīng)和行為學(xué)改變。評(píng)分≥2分者表示模型制作成功，納入本實(shí)驗(yàn)。

1.4給藥方法大鼠所用藥物的等效劑量按照成人的臨床日用量與體質(zhì)量折算系數(shù)比計(jì)算，中藥低劑量組（約為正常70 kg成人藥量的3.5倍）8 g/（kg·d）；中劑量組（約為正常70 kg成人藥量的7倍）16 g/（kg·d）；高劑量組（約為正常70 kg成人藥量的14倍）32 g/（kg·d）。每日用活血通絡(luò)解毒方灌胃1次，術(shù)后24 h后給藥。模型組和假手術(shù)組按照相同的方法分別給予相同體積生理鹽水灌胃。各組用藥時(shí)間均為14 d。

1.5標(biāo)本采集與檢測(cè)分別于術(shù)后當(dāng)日，術(shù)后第1日、第7日、第14日進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。評(píng)分方法與造模后的神經(jīng)行為學(xué)的評(píng)分方法相同。術(shù)后24 h檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)，采用大鼠尾靜脈取血，大鼠置于小籠內(nèi)，固定尾巴，取之前用酒精擦洗，使血管充盈，用注射器抽取血1mL。術(shù)后14 d再次檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血。動(dòng)物麻醉，仰臥固定在手術(shù)架上，從腹正中線皮膚切開腹腔，使腹主動(dòng)脈暴露清楚，用注射器吸取血液1mL，取血完畢后處死動(dòng)物。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)和重復(fù)方差分析。P《0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1死亡分析到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，假手術(shù)組無大鼠死亡，模型組死亡3只，分別死于術(shù)后第2天、第5天，中藥高劑量組死亡2只，分別死于術(shù)后第4天和第7天，中、低劑量組未見動(dòng)物死亡。

2.2各組大鼠治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)比較見表1。中藥低、中、高劑量組治療后血液流變學(xué)指標(biāo)均有改善，且高劑量組改善較中、低劑量組明顯，中劑量組改善較低劑量組明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P《0.05）。

3討論

急性腦梗死是腦血管閉塞引起支配區(qū)域的腦血流減少或中斷，組織進(jìn)入缺血、缺氧狀態(tài)而發(fā)生一系列病理生理及生化反應(yīng)，如乳酸堆積、自由基釋放、興奮性氨基酸毒性、細(xì)胞內(nèi)鈣超載等引起的腦組織壞死性疾?。?］。腦梗死是世界范圍內(nèi)致死率和致殘率排名第3的疾?。?］，有研究表明急性腦梗死患者血液黏度異常增高，血液處于濃、黏、凝、聚狀態(tài)［6-7］。蔣氏等［8］研究發(fā)現(xiàn)，急性腦梗死患者各項(xiàng)血液流變學(xué)指標(biāo)均高于對(duì)照組，突出表現(xiàn)為高黏滯血癥和高凝血癥。而血液的高黏滯、高凝狀態(tài)又導(dǎo)致局部微循環(huán)持續(xù)惡化而誘發(fā)神經(jīng)元凋亡，是梗死擴(kuò)大和遲發(fā)神經(jīng)元損傷的重要機(jī)制，也是再發(fā)腦死的危險(xiǎn)因素。因此急性腦梗死的治療不僅要及早恢復(fù)閉塞血管的血液流通，保護(hù)神經(jīng)功能，也要兼顧到高血黏度的治療，預(yù)防梗死、神經(jīng)元損傷擴(kuò)大，預(yù)防腦梗死的再發(fā)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)急性腦缺血大鼠灌服活血通絡(luò)解毒方后能明顯改善神經(jīng)功能缺損癥狀，降低腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)癥狀評(píng)分，對(duì)神經(jīng)功能的恢復(fù)有顯著的促進(jìn)作用；而且能明顯降低血黏度，改善血液的高黏滯、高凝狀態(tài)，血液流變學(xué)的各項(xiàng)指標(biāo)均有所下降。

表1　各組治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)比較（±s）

表1　各組治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)比較（±s）

與本組治療前比較，*P＜0.05；與低劑量組治療后比較，△P＜0.05；與中劑量組治療后比較，▲P＜0.05。

組別時(shí)間中藥低劑量組治療前（n=12）治療后中藥中劑量組治療前全血高切黏度（mPa·s）全血低切黏度（mPa·s）血漿黏度（mPa·s）紅細(xì)胞比積（%）8.59±0.70 17.00±1.02 2.99±0.60 48.00±3.69 7.59±0.61*14.63±0.89*2.60±0.42*46.08±2.35*8.60±0.69 16.96±0.94 3.00±0.59 47.83±3.30 （n=12）治療后7.30±0.57*△13.96±0.69*△2.34±0.43*△44.92±2.57*△中藥高劑量組治療前8.59±0.73 16.97±1.01 2.99±0.59 48.10±3.48 （n=10）治療后7.02±0.70*▲13.53±0.83*▲2.10±0.48*▲43.30±2.75*▲模型組治療前8.58±0.81 17.06±1.03 2.97±0.62 48.22±3.53 （n=9）治療后8.48±0.71 16.87±1.14 2.89±0.47 47.56±3.00假手術(shù)組治療前7.82±0.63 15.11±0.94 2.78±0.56 47.06±3.14 （n=12）治療后7.76±0.59 15.01±0.87 2.63±0.42 46.52±2.98

中醫(yī)認(rèn)為中風(fēng)病的基本病機(jī)［9］總屬陰陽失調(diào)，氣血逆亂。近年來提出的“毒損腦絡(luò)”病機(jī)假說認(rèn)為毒邪損傷腦絡(luò)，絡(luò)脈破損，或絡(luò)脈拘攣瘀閉，營衛(wèi)失和，衛(wèi)氣壅滯而化生火毒，終致氣血滲灌失常，腦神失養(yǎng)，神機(jī)失守，形成神昏閉厥、半身不遂的病理狀態(tài)［10］?！凹眲t治其標(biāo)”，活血通絡(luò)解毒方針對(duì)急性腦梗死“毒損絡(luò)瘀”的病機(jī)，以活血化瘀、解毒通絡(luò)為大法，方中金銀花、大黃、梔子具有清熱解毒的作用，梔子清三焦之熱從小便而去，大黃導(dǎo)軀體之熱、毒從大便而出，熱清毒解，火熱得去，腦絡(luò)受損減輕，上逆之血得復(fù)，腦神失用減輕；紅花、桃仁、當(dāng)歸、赤芍、川芎有活血的功效，全蝎、地龍有搜風(fēng)、祛痰、通絡(luò)作用，共奏祛風(fēng)化痰、活血化瘀之效，腦絡(luò)、經(jīng)脈得通，則腦神失用、肢體偏枯不用得復(fù)，患者神經(jīng)功能缺損癥狀自然得到改善，清熱解毒、活血化瘀、祛風(fēng)化痰的作用更是祛除了血中之瘀、熱、毒，活血，血液的高黏滯、高凝狀態(tài)得以改善?，F(xiàn)代中藥作用機(jī)理研究顯示：川芎含阿魏酸及川芎嗪，具有清除氧自由基及促進(jìn)纖維蛋白溶解，改善微循環(huán)，對(duì)引發(fā)卒中的黏附分子有明顯的抑制作用，降低缺血后腦組織中Ca2+的含量，提高Ca2+-Na+-ATP酶活性，拮抗Ca2+內(nèi)流，有擴(kuò)張血管作用［11］。有報(bào)道，阿魏酸能拮抗ET受體和ET效應(yīng)，抑制血小板聚集，使已聚集的血小板解聚率提高，從而降低血液黏度，改善微循環(huán)［12］。紅花中的紅花黃色素可減少TXA2、ET1的含量，且增加PGI2、NO的釋放，起到擴(kuò)張血管，改善微循環(huán)，抗血小板聚集的作用［13］。桃仁提高血小板內(nèi)CAMP水平，從而抑制TXA2合成，抑制血小板聚集，改善微循環(huán)［14］。地龍含有效蚓激酶，具有抗凝、降纖、降脂，抑制血小板聚集，降低血液黏度作用［15］。全蝎純化液對(duì)血小板最大聚集率有明顯抑制作用，使纖維蛋白原含量和優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間明顯減少［16］。諸藥物共同起到降低血黏度的作用，而且本實(shí)驗(yàn)顯示，藥物的劑量越大降低血黏度的作用越強(qiáng)，但對(duì)于改善神經(jīng)功能缺損的作用卻是以中劑量組效果最佳?；钛ńj(luò)解毒方可改善缺血性Wistar大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)、改善大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀，并且與劑量呈相關(guān)性。

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The Effect of Huoxue Tongluo Jiedu Decoction on Hemorheology ofW istar Ratsw ith Cerebral Ischem ia

Ai Zongyao，YIYangfeng，Xiao Meihong，et al.Huzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang，Huzhou 313000，China.

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R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

1004-745X（2016）07-1288-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.07.007

浙江省中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013ZB126）

2016-03-24）