閩北地區(qū)豬偽狂犬病抗體檢測(cè)分析

馬華魁　章秋月　張英超　林神通　康聯(lián)波　鄭新平　修金生

（1.南平市星星畜牧有限公司　福建南平　353000；2.福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院　福州　350002）

閩北地區(qū)豬偽狂犬病抗體檢測(cè)分析

馬華魁1章秋月1張英超1林神通1康聯(lián)波1鄭新平1修金生2*

（1.南平市星星畜牧有限公司福建南平353000；2.福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院福州350002）

為了解豬偽狂犬病在閩北地區(qū)的流行情況，整理并分析2015年度血清抗體檢測(cè)數(shù)據(jù)。采用ELISA檢測(cè)方法對(duì)閩北地區(qū)45個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)進(jìn)行檢測(cè)分析，通過(guò)檢測(cè)樣品血清中偽狂犬病gE抗體和gB抗體的水平進(jìn)行結(jié)果判定。結(jié)果顯示：送檢的45個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)，偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性場(chǎng)達(dá)25個(gè)，豬場(chǎng)陽(yáng)性率達(dá)55.6%；共檢測(cè)1 304份血清，其中偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性213份、可疑24份、陰性1 067份，抗體陽(yáng)性率達(dá)20.6%。從偽狂犬病gE抗體陰性豬場(chǎng)抽檢豬偽狂犬gB抗體380份，gB抗體陽(yáng)性258份，豬群偽狂犬病抗體保護(hù)率僅有67.9%。

豬偽狂犬病ELISAgE抗體gB抗體

豬偽狂犬病是由偽狂犬病病毒引起的一種急性發(fā)熱性傳染病，是目前影響我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)的主要疾病之一［1］。豬是PRV感染后可以存活的唯一物種，也是PRV的貯存宿主。PRV的傳染性不是太強(qiáng)，因?yàn)橐坏└腥静⒉皇切笊醿?nèi)的所有豬只都感染，動(dòng)物的感染率為10%～90%，同一群體的感染率決定于動(dòng)物之間直接接觸的幾率，在同一圍欄內(nèi)的感染性很高，但圍欄之間的感染性比較低［2］。

豬偽狂犬病不但會(huì)感染豬使之成為原發(fā)感染宿主，又使受感染的患豬成為長(zhǎng)期的帶毒者和排毒者［3］。新生仔豬感染該病，將導(dǎo)致出生后1周內(nèi)大量死亡，斷乳仔豬表現(xiàn)為腹瀉及神經(jīng)癥狀，發(fā)病率和病死率高；該病在育肥豬的感染體現(xiàn)為隱性感染，受感染的育肥豬出現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩、飼料報(bào)酬降低的情況，最終影響豬場(chǎng)的生產(chǎn)收益［4］。感染偽狂犬病病毒的成年豬則在大多數(shù)情況下表現(xiàn)為潛伏感染，并且在一定條件下，呈潛伏感染的偽狂犬病病毒會(huì)在成年豬體內(nèi)會(huì)重新激活并排毒。當(dāng)前，規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)基本通過(guò)廣泛地開(kāi)展對(duì)偽狂犬病病毒的疫苗接種，該措施對(duì)于消除潛在的傳染源和加快偽狂犬病病毒的凈化有重要作用。當(dāng)前我國(guó)養(yǎng)殖場(chǎng)中使用的疫苗大部分為偽狂犬病病毒的gE基因缺失苗［5］，由于gE基因是PRV的主要毒力基因之一，但PRV的毒力受多基因控制而gE基因又不是病毒復(fù)制增殖所必需的成分［6］。因此，對(duì)gE抗體的血清學(xué)檢測(cè)將有助于進(jìn)行PRV疫苗株與野毒株感染的鑒別判定。近年來(lái)，隨著疫苗免疫接種策略的進(jìn)一步實(shí)施和疫苗免疫覆蓋率的提升，偽狂犬病的流行趨勢(shì)得到控制，流行現(xiàn)象有所緩和，但是該病的隱性感染現(xiàn)象仍然在很多養(yǎng)殖場(chǎng)中普遍存在，雖然豬群的發(fā)病率和病死率已經(jīng)顯著降低，但仍然對(duì)豬群的生長(zhǎng)和繁殖能力造成了嚴(yán)重的影響，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展壯大［7-9］。

豬不但是偽狂犬病病毒（PRV）的感染者和主要宿主，也是一個(gè)長(zhǎng)期貯存?zhèn)慰袢〔《镜膸Ф菊吆团哦菊?，在豬偽狂犬病病毒的傳播上起著重要的作用［10-13］。因此，做好血清學(xué)上的調(diào)查監(jiān)測(cè)，對(duì)凈化偽狂犬病病毒非常重要。本試驗(yàn)通過(guò)間接ELISA方法檢測(cè)豬群中的gE抗體來(lái)鑒定豬群是否被偽狂犬病野毒感染，檢測(cè)gB抗體來(lái)判定豬群的偽狂犬病抗體保護(hù)水平，由此系統(tǒng)分析閩北地區(qū)豬偽狂犬病的流行情況，為進(jìn)一步開(kāi)展偽狂犬病的綜合防治以及偽狂犬病凈化奠定基礎(chǔ)［14-15］。

1　材料與方法

1.1樣品來(lái)源被檢血清樣品共1 034份，采集自閩北6個(gè)地區(qū)45個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)，其中種豬群693份樣品、仔豬群210份樣品、育肥豬群131份樣品。

1.2試劑及儀器豬偽狂犬病gE、gB抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京愛(ài)德士生物科技有限公司；Eppendof移液器、酶標(biāo)儀、生化培養(yǎng)箱、蒸餾水或去離子水、洗板機(jī)、TGL-16G高速臺(tái)式離心機(jī)。

1.3檢測(cè)方法豬偽狂犬病PRV-gE和PRV-gB抗體檢測(cè)操作步驟參照IDEXX試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，PRV-gB抗體檢測(cè)只針對(duì)PRV-gE抗體陰性的豬。

1.4結(jié)果判定陰性對(duì)照A650的平均值減去陽(yáng)性對(duì)照A650的平均值必須大于或等于0.3，試驗(yàn)方能有效。如果試驗(yàn)無(wú)效，試驗(yàn)操作可能有誤，試驗(yàn)應(yīng)重做。結(jié)果計(jì)算：S/N值=樣品OD650/陰性對(duì)照平均OD650；當(dāng)S/N≤0.6時(shí)，樣品為偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性；當(dāng)S/ N＞0.7時(shí)，則表明樣品為偽狂犬病gE抗體陰性；若0.6＜S/N≤0.7，則為可疑樣品，必須重新測(cè)定。

2　結(jié)果與分析

2.1偽狂犬病gE抗體檢測(cè)情況2015年度從閩北地區(qū)45個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)抽檢1 034份血清進(jìn)行豬偽狂犬病野毒抗體檢測(cè)，陽(yáng)性數(shù)為213份，陽(yáng)性率達(dá)20.6%。A地區(qū)的偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率最高，說(shuō)明該地區(qū)受偽狂犬病野毒威脅最為嚴(yán)重；D地區(qū)生豬飼養(yǎng)量相對(duì)較少，規(guī)?；瘓?chǎng)能做好生物安全措施，抽檢的血清中未檢測(cè)出PRV-gE抗體。種豬群抽檢693份樣品，PRV-gE抗體陽(yáng)性 123份，陽(yáng)性率17.7%；仔豬群抽檢210份樣品，PRV-gE抗體陽(yáng)性36份，陽(yáng)性率17.1%；育肥豬群抽檢131份樣品，PRV-gE抗體陽(yáng)性54份，陽(yáng)性率41.2%，不同區(qū)域偽狂犬病野毒感染情況差異較大（見(jiàn)表1）。

表1　閩北地區(qū)偽狂犬病gE抗體檢測(cè)情況

由檢測(cè)結(jié)果可以看出，閩北地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)受偽狂犬病野毒感染較嚴(yán)重，育肥豬群的陽(yáng)性率明顯高于種豬群和仔豬群。種豬群是整個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)的核心，唯有逐步引進(jìn)偽狂犬病gE抗體陰性的后備豬群，逐步淘汰偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性種豬，豬場(chǎng)才能實(shí)現(xiàn)偽狂犬病凈化。

2.2偽狂犬病gB抗體檢測(cè)情況2015年度從閩北地區(qū)偽狂犬病gE抗體陰性豬場(chǎng)抽檢380份血清，進(jìn)行豬偽狂犬病gB抗體檢測(cè)，陽(yáng)性數(shù)為258份，陽(yáng)性率為67.9%，說(shuō)明該地區(qū)豬群的偽狂犬病抗體保護(hù)率仍較低，各地區(qū)的抗體保護(hù)率差異顯著（結(jié)果見(jiàn)表2）。

3　討　論

豬偽狂犬病是一種高度接觸性傳染病，能夠引起仔豬死亡和懷孕母豬流產(chǎn)，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失［16］。各階段的豬只均易感，但癥狀和病死率有明顯的區(qū)別，乳豬最敏感，發(fā)病后呈現(xiàn)急性型致死過(guò)程。隨著仔豬月齡增加，病程延長(zhǎng)，癥狀減輕，死亡率逐漸降低。妊娠初期母豬，可于感染后20 d左右發(fā)生流產(chǎn)；妊娠后期的母豬，胎兒可死于子宮內(nèi)，引起死產(chǎn)和流產(chǎn)，死產(chǎn)的發(fā)生率可達(dá)50%左右［17-18］。從豬的流行病學(xué)和臨床癥狀可對(duì)豬偽狂犬病作出初步診斷，目前最常用ELSIA檢測(cè)方法，可以檢測(cè)PRV-gE抗體，并區(qū)分野毒與疫苗毒［19-21］。

表2　閩北地區(qū)偽狂犬gB抗體抽檢情況

PRV-gE抗體檢測(cè)結(jié)果表明，閩北地區(qū)豬群受偽狂犬病野毒感染較嚴(yán)重，且種豬群的陽(yáng)性率較高，不同區(qū)域間差異較大。對(duì)于感染偽狂犬病野毒的種豬，一般要全部清群或及時(shí)淘汰。如果檢測(cè)為陽(yáng)性、經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的種豬，可以考慮不直接淘汰，通過(guò)合理的疫苗免疫、做好生物安全措施來(lái)減少陽(yáng)性動(dòng)物排毒和提高易感動(dòng)物感染閾值，并逐漸引進(jìn)陰性后備豬更替陽(yáng)性種豬。對(duì)PRV-gE陽(yáng)性的豬場(chǎng)，建議母豬群一年用gE基因缺失弱毒苗普免3～4次，同時(shí)在產(chǎn)前30～40 d用偽狂犬病gE缺失滅活苗加強(qiáng)免疫1次；其次，盡量加速淘汰高胎次或有任何瑕疵、缺陷的母豬，建立和更新偽狂犬病陰性后備母豬群，公豬群全部檢測(cè)，及時(shí)淘汰PRV-gE陽(yáng)性公豬；對(duì)商品豬實(shí)施 “1日齡滴鼻，70日齡二免，120日齡三免”，同時(shí)認(rèn)真做好滅鼠、滅蚊蠅、消毒等生物安全工作。

PRV-gB抗體抽檢結(jié)果表明，當(dāng)前閩北地區(qū)健康豬群偽狂犬病抗體保護(hù)率僅有67.9%，區(qū)域間差異顯著。造成以上情況的原因，除了流行毒株與現(xiàn)有疫苗抗原表位發(fā)生變異以外，可能與豬群的健康度、免疫程序是否合理、母源抗體干擾、疫苗質(zhì)量等有一定關(guān)聯(lián)。建議生豬飼養(yǎng)場(chǎng)做好生物安全工作，一年進(jìn)行4次規(guī)范操作注射，定期監(jiān)測(cè)種豬群偽狂犬病gE抗體和gB抗體情況，及時(shí)淘汰偽狂犬病帶毒種豬，同時(shí)結(jié)合使用偽狂犬病gE基因缺失弱毒苗和滅活苗，充分激活豬只的細(xì)胞免疫和體液免疫，使豬群獲得較高的抗體保護(hù)率。

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Analysis of antibody detection of porcine pseudorabies virus in northern Fujian

Ma Huakui1Zhang Qiuyue1Zhang Yingchao1Lin Shentong1Kang Lianbo1Zheng Xinping1Xiu Jinsheng2*
（1.Nanping Xingxing Animal Husbandry Co.，Ltd.，Nanping，F(xiàn)ujian 353000；2.College of Animal Science，F(xiàn)ujian Agriculture and Forestry University，F(xiàn)uzhou 350002）

To understand the prevalence of the PR in northern Fujian，the data of the serum antibody of the PR in 2015 was analyzed. The antibody of the gE and gB in serum samples which were from 45 farms in northern Fujian were detected with ELISA.The result showed that the number of the positive of the gE antibody was 25 in 45 farms and the positive rate was 55.6%.From 1 304 serum samples，the number of the positive of gE antibody was 213，and 24 samples were suspicious，and 1 067 samples were negative.The gB antibody detected from 380 gE negative samples，The result showed that the number of the positive of the gB antibody was 258 and the percent of the protection was only 67.9%.

Pseudorabies ELISA gEantibody gB antibody

A

1003-4331（2016）04-0012-03

福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目（2014-01）、福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2013J05042）資助。

馬華魁（1988-），男，碩士生。
*

修金生（1957-），男，教授，碩士生導(dǎo)師，從事豬病防治和生態(tài)養(yǎng) 豬的研究 。E-mail：xiujinsheng@163.com。