武漢漢族人群rs1799983基因多態(tài)性和肥胖在冠心病中交互作用研究

盛蕾，胡良焱，羅松輝，洪李鋒

武漢漢族人群rs1799983基因多態(tài)性和肥胖在冠心病中交互作用研究

盛蕾1，胡良焱1，羅松輝1，洪李鋒1

目的 探討武漢漢族人群rs1799983多態(tài)性與冠心病關(guān)聯(lián)性及其與肥胖交互作用。方法 選取2014年2月～2015年8月于武漢市第五醫(yī)院心血管科住院CHD患者120例作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)選取體檢中心健康漢族個(gè)體140例作為對(duì)照組，均為武漢籍漢族。采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法分析120例CHD患者（實(shí)驗(yàn)組）和140名正常對(duì)照rs1799983基因型（對(duì)照組）。非條件Logistic分析各基因型與發(fā)病中易感性關(guān)系以及與肥胖的交互作用。結(jié)果 攜帶C（CC/CT）基因個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)較非C基因攜帶者（TT）風(fēng)險(xiǎn)明顯增加1.55倍（OR=1.55，95%CI：1.41～3.71，P＜0.001；校正OR=1.79，95%CI：1.51～4.01，P＜0.001）；非條件Logistic分析表明攜帶CC/CT基因型肥胖個(gè)體CHD罹患風(fēng)險(xiǎn)是攜帶TT基因非肥胖個(gè)體的3.88倍（OR=3.88，95%CI：2.72～5.76，P＜0.001）；RERI=2.51，95%CI：1.22～3.80；AI=0.54，95%CI：0.34～0.74；S=1.56，95%CI：1.12～2.83。結(jié)論 eNOS rs1799983多態(tài)性增加武漢漢族個(gè)體CHD罹患風(fēng)險(xiǎn)，且與肥胖存在CHD發(fā)病中存在協(xié)同效應(yīng)。

rs1799983；多態(tài)性；冠心病；易感性；交互作用

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟?，CHD）在其疾病過程中發(fā)生諸多病理生理改變。既往研究證實(shí)超氧自由基蓄積，血小板異常聚集，粘附和白細(xì)胞的趨化激活，血管異常舒張?jiān)诠谛牟〉陌l(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用［1］。內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（eNOS）是一種主要在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，催化左旋精氨酸生成一氧化氮的關(guān)鍵酶［2］。生理狀態(tài)下，NOS釋放維持正常的血管張力，當(dāng)NOS釋放減少時(shí)，冠狀動(dòng)脈會(huì)異常收縮。一氧化氮具有維持血管穩(wěn)態(tài)和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、抑制白細(xì)胞，血小板活化與平滑肌細(xì)胞增殖等生物學(xué)效應(yīng)［3］?；诨蚨鄳B(tài)性在冠心病中發(fā)揮著重要作用［4］。本研究通過限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)探討武漢漢族e(cuò)NOSrs1799983多態(tài)性與CHD易感性關(guān)系及與肥胖的交互作用。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象和分組 選取2014年2月～2015年8月于武漢市第五醫(yī)院心血管科住院CHD患者120例為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)選取體檢中心健康漢族個(gè)體140例為對(duì)照組，對(duì)照組人群為武漢籍漢族。受試者年齡為45～86歲。CHD診斷符合《冠心病診斷與治療指南》（2014）診斷標(biāo)準(zhǔn)，受試者均為武漢漢族。肥胖診斷標(biāo)準(zhǔn)為體質(zhì)指數(shù)大于或等于28kg/m2。排除標(biāo)準(zhǔn)：＜18周歲。

1.2一般資料的收集 通過詢問及形態(tài)學(xué)測(cè)量，收集受試者年齡、性別及體重、身高等資料。

1.3血糖血脂檢測(cè) 抽取受試者空腹靜脈血，全部采用日本東芝全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清總膽固醇（TC），三酰甘油（TG），高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），空腹血糖（FPG）。

1.4eNOS rs1799983多態(tài)性性檢測(cè) 采取經(jīng)典酚-氯仿方法提取外周血基因組DNA。根據(jù)eNOS基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)各個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增引物使用PCR擴(kuò)增目的基因片段。PCR 擴(kuò)增引物序列：eNOS（rs1799983）引物為：上游：5'-TGGCCT TGCCAGAGCCGGGG-3'；下游：5'-CTCTTTAC TCCCCGCTCCGAC-3'；PCR反應(yīng)體系（25μL）包含100ng提取DNA，1.0UTaq酶，2μL上游以及下游引物2×PCR buffer.PCR反應(yīng)條件：95℃ 變性6 min，94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 45 s 30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。限制性內(nèi)切酶BsaHI，NlaIII酶切。酶切產(chǎn)物進(jìn)行3%瓊脂糖電泳，EB染色成像以此判定酶切基因型。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0進(jìn)行分析，基因型和等位基因頻率比較采用非條件Logistic回歸分析，基因型Hardy-Weinberg平衡法χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)（構(gòu)成比）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。

運(yùn)用logistic分析rs1799983多態(tài)性在CHD中作用。通過非條件Logistic以及Bootstrap方法估rs1799983多態(tài)與肥胖間的相加交互作用［5］，計(jì)算相對(duì)超額危險(xiǎn)度比（RERI）、歸因比（AP）和交互作用指數(shù)（S）及其95%CI。如RERI和AP值95%CI包括0、S值95%CI包括1，表明不存在相加交互作用。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1一般情況比較 一般臨床資料如表1所示。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組在性別比例、年齡、體質(zhì)指數(shù)、吸煙和高血壓比例、LDL-C等資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。而實(shí)驗(yàn)組腰圍、體質(zhì)指數(shù)、TC、TG均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）（表1）。

2.2eNOS rs1799983多態(tài)性與CHD易感性 CHD組以及對(duì)照組eNOSrs1799983基因型頻分布如表2所示，ENOSrs1799983對(duì)照組和病例組均符合Hardy-Weinberg平衡法（χ2=0.45，P=0.41，χ2=0.47，P=0.39；rs1799983）基因型CT的患病風(fēng)險(xiǎn)是基因型TT的1.21倍（OR=1.21，95%CI：1.09～1.89，P=0.041）；CC基因型者患病風(fēng)險(xiǎn)是基因型TT的1.45倍（OR=1.45，95%CI：1.31～3.23，P＜0.001）；C基因攜帶者（CC+CT）患病風(fēng)險(xiǎn)是非C基因攜帶者（TT）的1.51倍（OR=1.51，95%CI：1.41～3.71，P ＜0.001），利用非條件logistic回歸分析校正腰圍，體質(zhì)指數(shù)，TC，TG等因素T基因攜帶者（TT/CT）患病風(fēng)險(xiǎn)是非T基因攜帶者（CC）1.61倍（OR=1.79，95%CI：1.51～4.01，P＜0.001）（表2）。

2.3eNOS rs1799983與肥胖交互作用 本文采用非條件Logistic分析eNOS rs1799983多態(tài)性與肥胖交互作用，以攜帶TT基因不肥胖個(gè)體相比，攜帶CT/CC基因型不肥胖個(gè)體罹患CHD風(fēng)險(xiǎn)增加1.21倍（OR=1.21，95%CI：1.14～2.76，P=0.039），攜帶TT基因型肥胖個(gè)體罹患CHD風(fēng)險(xiǎn)增加1.16倍（OR=1.16，95%CI：1.09～2.31，P=0.047），攜帶CT/CC基因型肥胖個(gè)體罹患CHD風(fēng)險(xiǎn)增加3.88倍（OR=3.88，95%CI：2.72～5.76，P＜0.001）；RERI=2.51，95%CI：1.22～3.80；AP=0.54，95%CI：0.34～0.74；S=1.56，95%CI：1.12～2.83；RERI和AP值95%CI不包括0、S值95%CI不包括1。相加交互作用分析結(jié)果表明OR=1.67，95%CI：1.21～2.87（表3）。

3　討論

人類eNOS基因位于染色體因定位于染色體7q35-q36區(qū)，目前發(fā)現(xiàn)其該基因存在近10個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，不同個(gè)體eNOS水平呈現(xiàn)一定的差異，這可能與eNOS多態(tài)性有關(guān)［6］。報(bào)道提示eNOS多態(tài)性與肥胖，高血壓易感性相關(guān)［7，8］。而肥胖以及高血壓病與CHD易感基因在一定程度類似［9］。目前認(rèn)為CHD發(fā)病主要與超氧自由基蓄積，血小板異常聚集，粘附和白細(xì)胞的趨化激活，血管異常舒張相關(guān)［1］。近年來，流行病學(xué)不斷證實(shí)遺傳因素在CHD發(fā)病中發(fā)揮著重要作用［4］。從遺傳易感性角度確定CHD高危人群，并進(jìn)行針對(duì)性的預(yù)防是目前降低CHD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的有效措施。迄今為止，國(guó)內(nèi)外eNOSrs1799983多態(tài)性與CHD易感性的關(guān)系可見報(bào)道。Tepliakov AT［10］發(fā)現(xiàn)俄羅斯人群CHD發(fā)病與eNOS多態(tài)性相關(guān)。我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)山西地區(qū)人群CHD發(fā)病與eNOS多態(tài)性無關(guān)［11］。上述結(jié)果提示不同地區(qū)eNOS基因多態(tài)性與CHD的關(guān)聯(lián)性表現(xiàn)出一定的差異。武漢處于我國(guó)華中地區(qū)，也是我國(guó)漢族主要聚集地之一，為此我們選取漢族個(gè)體為研究對(duì)象，探討武漢漢族人群eNOSrs1799983多態(tài)性與CHD易感性關(guān)聯(lián)性，及多態(tài)性與肥胖交互作用。

表1　一般臨床資料

表2　eNOS rs1799983T基因型分布以及CHD易感性關(guān)系

表3　eNOS rs1799983多態(tài)性與肥胖二者交互作用

本文通過病例-對(duì)照實(shí)驗(yàn)分析發(fā)eNOSrs1799983增加CHD患病罹患風(fēng)險(xiǎn)，且eNOSrs1799983與肥胖存在CHD中有協(xié)同效應(yīng)。肥胖作為冠心病的一個(gè)危險(xiǎn)因素近年來得到重視，報(bào)道顯示肥胖個(gè)體罹患CHD的風(fēng)險(xiǎn)增加［9］。肥胖既可作為獨(dú)立危險(xiǎn)因素增加冠心病風(fēng)險(xiǎn)［9］，也可通過其他因素共同作用增加冠心病的罹患風(fēng)險(xiǎn)。CHD患病是個(gè)體遺傳因素與外界環(huán)境因素共同作用的結(jié)果［1］，為進(jìn)一步探討eNOS rs1799983多態(tài)性與肥胖對(duì)CHD患病是否有交互作用。本文可采用非條件Logistic回歸分析予以驗(yàn)證［5］。結(jié)果提示eNOSrs1799983多態(tài)性和肥胖存在相加交互作用和相乘交互作用。eNOSrs1799983多態(tài)性和肥胖在CHD病及其他疾病中交互作用鮮見報(bào)道，其機(jī)制尚不明。參照肥胖與rs1799983易感關(guān)系相關(guān)報(bào)道［11］， eNOSrs1799983既可直接增加CHD易感性，同時(shí)也可增加個(gè)體肥胖風(fēng)險(xiǎn)而間接增加CHD易感性而發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)。本研究存在一定不足，最顯著的診斷是只考慮了是否肥胖，而沒有充分考慮肥胖的程度。本文僅考慮肥胖，未考慮其他因素。且研究樣本量較小，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量。

總之，eNOSrs1799983多態(tài)性可增加個(gè)體CHD罹患風(fēng)險(xiǎn)，和肥胖在CHD發(fā)病中發(fā)揮協(xié)同作用。為更好研究eNOSrs1799983多態(tài)性在CHD易感性以及與肥胖的交互作用尚需要開展更大樣本量，設(shè)計(jì)更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯俊?/p>

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本文編輯：聶毛曉，姚雪莉

Interactive effect between obesity and rs1799983 polymorphism on coronary heart disease in Han population in Wuhan City

SHENG Lei*， HU Liang-yan， LUO Song-hui， HONG Li-feng.*Department of Cardiovasology， Fifth Hospital of Wuhan City， Wuhan， 430060， China.

HU Liang-yan， E-mail: YuJing1@sina.com

Objective To discuss the correlation between rs1799983 polymorphism and coronary heart disease （CHD）， and interactive effect between obesity and rs1799983 polymorphism in Han population in Wuhan City. Methods CHD patients （n=120） as test group and health controls （n=140） as control group （all being the Han nationality） were chosen from Feb. 2014 to Aug. 2015. The genotypes of rs1799983 were analyzed by using polymerase chain reaction-based restriction fragment length polymorphism （PCR-RFLP） method. The relationship between the genotypes of rs1799983 and CHD susceptibility and reactive effect between obesity and rs1799983 polymorphism were analyzed by using unconditional Logistic regression （ULR） analysis. Results CHD risk increased by 1.55 times in CC/CT genotype carriers compared with TT genotype carriers （OR=1.55， 95%CI: 1.41～3.71， P《0.001； corrected OR=1.79， 95%CI: 1.51～4.01， P《0.001）. The results of ULR analysis showed that CHD risk increased by 3.88 times in CC/CT genotype obesity carriers compared with TT genotype un-obesity carriers （OR=3.88， 95%CI: 2.72～5.76， P《0.001）. RERI=2.51， 95%CI: 1.22～3.80； AI=0.54， 95%CI: 0.34～0.74；S=1.56， 95%CI: 1.12～2.83. Conclusion The polymorphism of rs1799983 can increase the risk of CHD in Han population in Wuhan City， and it has a synergistic effect with obesity in occurrence of CHD.

Rs1799983； Polymorphism； Coronary heart disease； Susceptibility； Interaction

R541.4

A

1674-4055（2016）05-0602-03

1430060 武漢，湖北省武漢市第五醫(yī)院心血管內(nèi)科

胡良焱，E-mail:YuJing1@sina.com

10.3969/j.issn.1674-4055.2016.05.27