秩邊透水道技術(shù)對(duì)催產(chǎn)素致痛經(jīng)大鼠下丘腦5-羥色胺調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

郝裕峰，溫進(jìn)中，金曉飛

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

秩邊透水道技術(shù)對(duì)催產(chǎn)素致痛經(jīng)大鼠下丘腦5-羥色胺調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

郝裕峰，溫進(jìn)中，金曉飛

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

目的：觀察傳統(tǒng)針刺與針刺秩邊透水道對(duì)催產(chǎn)素致痛經(jīng)大鼠下丘腦5-羥色胺（5-HT）含量的影響。方法：20只雌性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、關(guān)元組、秩邊透水道組，制備催產(chǎn)素痛經(jīng)大鼠模型，觀察各組大鼠的扭體次數(shù)，通過放射免疫分析檢測大鼠下丘腦5-HT含量。結(jié)果：秩邊透水道組大鼠扭體發(fā)生率明顯低于模型組，下丘腦5-HT含量顯著高于模型組（P＜0.05），與對(duì)照組、關(guān)元組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：秩邊透水道技術(shù)能提高大鼠中樞5-HT的合成率與利用率，加強(qiáng)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，起到中樞鎮(zhèn)痛作用，從而有效緩解痛經(jīng)。

原發(fā)性痛經(jīng)；秩邊透水道技術(shù)；5-HT

秩邊透水道技術(shù)作為傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)針灸的一種療法，在臨床治療原發(fā)性痛經(jīng)方面療效顯著、經(jīng)濟(jì)、簡便，但其作用機(jī)制尚不明確。為深入探討秩邊透水道技術(shù)的治療機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)以傳統(tǒng)針刺作為對(duì)照療法，各設(shè)對(duì)照組與模型組，通過觀察大鼠的扭體發(fā)生率及測量下丘腦5-HT的含量，探討其治療痛經(jīng)的調(diào)控機(jī)制，從而提供臨床秩邊透水道技術(shù)治療原發(fā)性痛經(jīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

健康雌性SD大鼠20只，體質(zhì)量（230±15）g，由北京動(dòng)物研究院動(dòng)物室提供。苯甲酸雌二醇注射液（批號(hào)110202511），縮宮素注射液（批號(hào)H3402474），一次性針灸針，低速離心機(jī)，免疫分析試劑盒（由北京?？迫鹕锷锛夹g(shù)中心提供），其余實(shí)驗(yàn)器材均由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與造模采用隨機(jī)數(shù)字表法將動(dòng)物隨機(jī)分為4組：對(duì)照組、模型組、關(guān)元組、秩邊透水道組，每組5只。采用縮宮素致大鼠子宮劇烈收縮模擬痛經(jīng)。模型組、關(guān)元組、秩邊透水道組大鼠股部皮下注射苯甲酸雌二醇連續(xù)10 d，第1天、第10天0.5mg/只，第2天～第9天0.2mg/只，末次給藥1 h后，腹腔注射縮宮素2 U/只。對(duì)照組大鼠每日股部皮下注射同等劑量的生理鹽水。

1.2.2 干預(yù)方法從造模開始第1天即給予干預(yù)治療，對(duì)照組、模型組僅抓取固定5min，連續(xù)3 d；關(guān)元組于每天造模后針刺關(guān)元穴，深度為8～10mm，行平補(bǔ)平瀉手法，留針5min，每日1次，連續(xù)3 d；秩邊透水道組于每天造模后即進(jìn)行秩邊透水道干預(yù)，俯臥位固定大鼠，用針灸針迅速刺入秩邊穴，針尖朝同側(cè)水道穴方向，深度為8～10 mm，行平補(bǔ)平瀉手法，留針5min，每日1次，連續(xù)3 d。

1.2.3 指標(biāo)檢測大鼠一般情況的觀察、在實(shí)驗(yàn)過程中觀察各實(shí)驗(yàn)組大鼠的毛發(fā)色澤、動(dòng)作行為、精神狀態(tài)、體質(zhì)量等，并做好相關(guān)記錄。

大鼠扭體次數(shù)：第10天腹腔注射縮宮素，誘發(fā)扭體反應(yīng)為子宮收縮（痛經(jīng)）的指標(biāo)，觀察并記錄30min內(nèi)每只大鼠的扭體次數(shù)。

大鼠下丘腦及血漿5-HT測定：各組大鼠的扭體記錄完成后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉后快速斷頭，在無菌工作臺(tái)冰盤上取大鼠下丘腦組織，立即用預(yù)冷生理鹽水沖洗1～2次，用濾紙拭干后用分析天平稱重，處理后勻漿、離心取上清夜，-70℃保存?zhèn)溆?。由于勻漿（提?。┻^程中會(huì)產(chǎn)生一定的系統(tǒng)誤差，需對(duì)其進(jìn)行較正，可根據(jù)測其上清液中蛋白濃度進(jìn)行較正。之后按照ELISA試劑盒的說明書進(jìn)行試劑的準(zhǔn)備、加樣、保溫、洗滌、顯色和比色等正確操作，最后進(jìn)行結(jié)果的判定。

2 結(jié)果

2.1 一般狀態(tài)

對(duì)照組大鼠一般狀況良好，毛色順滑，動(dòng)作靈敏，精神良好，體質(zhì)量增長，未見明顯異常。模型組大鼠毛色暗淡萎黃，精神變差，動(dòng)作遲緩，體質(zhì)量下降。關(guān)元組與秩邊透水道組大鼠毛色略暗淡萎黃，精神尚可，體質(zhì)量稍下降。

2.2 各組大鼠扭體反應(yīng)比較

對(duì)照組大鼠未出現(xiàn)扭體反應(yīng)，模型組、關(guān)元組及秩邊透水道組大鼠全部發(fā)生扭體反應(yīng)。模型組大鼠扭體反應(yīng)較明顯，大鼠腹部收縮內(nèi)凹，軀干與后肢伸展，臀部與一側(cè)肢體內(nèi)旋。與對(duì)照組比較，其余各組大鼠扭體次數(shù)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），說明痛經(jīng)模型造模成功。與模型組比較，關(guān)元組及秩邊透水道組大鼠30min內(nèi)扭體反應(yīng)次數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠扭體次數(shù)比較

2.3 各組大鼠下丘腦5-HT含量比較

結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠5-HT含量比較（ng/g，±s）

表2 各組大鼠5-HT含量比較（ng/g，±s）

注：與對(duì)照組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05

組別n下丘腦5-HT對(duì)照組5 63.53±8.33模型組5 50.62±5.561）關(guān)元組5 61.86±6.312）秩邊透水道組5 63.35±4.082）

與對(duì)照組比較，模型組大鼠下丘腦5-HT含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明造模后大鼠中樞5-HT含量降低；關(guān)元組、秩邊透水道組與模型組相比，大鼠下丘腦組織5-HT含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；且關(guān)元組、秩邊透水道組與對(duì)照組比較，大鼠下丘腦組織5-HT含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明針刺關(guān)元治療或是秩邊透水道治療能夠提高下丘腦組織中5-HT含量，對(duì)痛經(jīng)均有一定的緩解鎮(zhèn)痛效果。

3 討論

據(jù)研究發(fā)現(xiàn)針灸鎮(zhèn)痛主要通過調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)神經(jīng)體液系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)，而神經(jīng)體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)是通過復(fù)雜的化學(xué)遞質(zhì)活動(dòng)來完成的。下丘腦5-HT是人體內(nèi)重要的神經(jīng)遞質(zhì)和調(diào)節(jié)生理功能的物質(zhì)，與多方面的生理功能有關(guān)，是實(shí)現(xiàn)針刺鎮(zhèn)痛效應(yīng)的重要環(huán)節(jié)。實(shí)驗(yàn)證明，電針可促使大鼠全腦5-HT的合成率增加43%，利用率增加26%，以致全腦、腦干或下丘腦的5-HT含量增高。使用5，6-雙羥色胺選擇性損毀5-HT能神經(jīng)纖維，隨著有關(guān)腦內(nèi)的5-HT含量下降，針刺鎮(zhèn)痛效應(yīng)也明顯減弱。與此相反，給動(dòng)物注射5-HT的前體5-HT酸或應(yīng)用優(yōu)降寧等單膠氧化酶抑制劑阻斷5-HT的降解，均可使腦內(nèi)5-HT含量增高，同時(shí)針刺鎮(zhèn)痛效應(yīng)也顯著增強(qiáng)［1-2］。

疼痛與其他感覺一樣，是由一定的刺激作用于外周感受器，傷害性感受器經(jīng)換能后轉(zhuǎn)變成神經(jīng)沖動(dòng)（傷害性信息），循相應(yīng)的感覺傳入通路（傷害性傳入通路）進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，經(jīng)脊髓、丘腦中繼后到大腦皮質(zhì)，通過三級(jí)中樞整合后產(chǎn)生疼痛感覺和疼痛反應(yīng)，其形成機(jī)制包括外周神經(jīng)機(jī)制和中樞神經(jīng)機(jī)制兩個(gè)方面。5-HT是腦干下行抑制系統(tǒng)參與鎮(zhèn)痛作用的主要神經(jīng)活性物質(zhì)，許多研究表明中樞5-HT受體的激活可以產(chǎn)生痛覺抑制作用，引起抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，起到鎮(zhèn)痛的作用。實(shí)驗(yàn)研究表明動(dòng)物體內(nèi)分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)與痛及鎮(zhèn)痛有關(guān)的腦區(qū)的嗎啡樣物質(zhì)與疼痛關(guān)系密切，穴位針刺可促使嗎啡樣物質(zhì)的釋放，并作用于阿片受體而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效果。嗎啡樣物質(zhì)在針刺鎮(zhèn)痛過程中起重要的作用，而腦內(nèi)嗎啡樣物質(zhì)的釋放和利用與5-HT之間關(guān)系密切［3-4］。

本實(shí)驗(yàn)表明，秩邊透水道技術(shù)能夠明顯降低催產(chǎn)素所致痛經(jīng)大鼠的扭體次數(shù)，能提高大鼠中樞5-HT的合成率與利用率，并加強(qiáng)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，起到中樞鎮(zhèn)痛作用，從而有效緩解痛經(jīng)。本實(shí)驗(yàn)初步探討了秩邊透水道技術(shù)對(duì)痛經(jīng)大鼠的中樞鎮(zhèn)痛機(jī)制，今后還需要從其他方面對(duì)其鎮(zhèn)痛機(jī)制做進(jìn)一步的研究。

［1］徐崇權(quán).電針對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)及免疫機(jī)制的研究［D］.廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2009.

［2］冀海明.外周5-羥色胺2A受體：治療慢性炎性痛及神經(jīng)病理性痛的重要靶點(diǎn)［D］.福州：福建師范大學(xué)，2008.

［3］陳雪嬌.外周神經(jīng)組織5-羥色胺2A受體在炎性疼痛中的作用［D］.福州：福建師范大學(xué)，2007.

［4］蔡巧燕.外周組織5-羥色胺2A受體在角叉萊膠誘發(fā)的炎性痛維持過程中的作用機(jī)制［D］.福州：福建師范大學(xué)，2008.

（編輯：張世霞）

Study on Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）on 5-HT content in dysmenorrhea rats induced by oxytocin

Hao Yufeng，Wen Jinzhong，Jin Xiaofei
（ShanxiCollege of TCM，Taiyuan Shanxi030024）

Objective：To observe the change of 5-HT content in the hypothalamus of dysmenorrhea rats induced by oxytocin to exploremechanism of the treatmentmethod of Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）.Methods：20 female SD rats were randomly divided into control group，model group，Guanyuan group，Zhibian through Shuidao group.Beside the control group，the other groups′s ratswere given oxytocin tomake the dysmenorrheamodel.Guanyuan group and Zhibian through Shuidao group were given corresponding treatment.The writhing occurrence rates and the 5-HT content in the hypothalamus were observed.Results：The incidence rate of writhing in rats with Zhibian group was significantly lower than that inmodel group.The content of 5-HT in hypothalamus of Zhibian through Shuidao group was significantly higher than that inmodel group（P＜0.05）.Conclusion：The Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）can improve the synthesis rate and utilization rate of 5-HT in central nervous system，strengthen the release of inhibitory neurotransmitter and play a central analgesic effect so as to effectively relieve dysmenorrhea.

dysmenorrhea；Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）；5-HT

R285

A

1671-0258（2016）06-0011-03

國家科技支撐計(jì)劃（2013BAI05B08）

郝裕峰，在讀碩士，E-mail：694397180@qq.com

金曉飛，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：47355033@qq.com