大馬勃及大口靜灰球的抗炎鎮(zhèn)痛作用比較研究*

相聰坤，關(guān)勝江，馬娟娟

（河北省中醫(yī)院，石家莊　050011）

·中藥研究·

大馬勃及大口靜灰球的抗炎鎮(zhèn)痛作用比較研究*

相聰坤，關(guān)勝江，馬娟娟

（河北省中醫(yī)院，石家莊050011）

［目的］比較大馬勃及大口靜灰球的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為區(qū)分馬勃真?zhèn)蔚谋匾蕴峁┮罁?jù)。［方法］分別采用二甲苯致小鼠右耳腫脹、蛋清致大鼠足腫脹和大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)觀察大馬勃及大口靜灰球的抗炎作用。采用醋酸扭體法、酒石酸銻鉀扭體法和熱板法觀察藥物鎮(zhèn)痛作用。［結(jié)果］大馬勃的抗炎作用明顯高于混淆品大口靜灰球，大口靜灰球沒(méi)有明顯的鎮(zhèn)痛作用。［結(jié)論］大馬勃與其混淆品大口靜灰球在抗炎、鎮(zhèn)痛作用方面都存在一定的差異。

大馬勃；混淆品；抗炎；鎮(zhèn)痛

馬勃，最早載于《名醫(yī)別錄》［1］，味辛性平，有清肺利咽，止血等功效，用于風(fēng)熱郁肺、咽痛、咳嗽、音?。煌庵伪囚?，創(chuàng)傷出血?，F(xiàn)代藥理研究表明，馬勃在抑菌［2］、止血［3］、殺蟲(chóng)［4］、抗腫瘤［5］等方面具有明顯作用，現(xiàn)代研究還表明馬勃具有抗炎鎮(zhèn)痛活性［6］。據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》，馬勃為灰包科真菌脫皮馬勃 Lasiosphaera fenzlii Reich、大馬勃Calvatia gigantean（Batsch ex Pers.）Lloyd或紫色馬勃Calvatia lilacina（Mont.et Berk）Lloyd的干燥子實(shí)體［7］。在中醫(yī)臨床多年的應(yīng)用實(shí)踐中，馬勃的品種一直較為混亂，灰包科多種大型、小型子實(shí)體均作為馬勃使用。其中最常見(jiàn)、應(yīng)用最多的是灰包科真菌大口靜灰球Bovistella sinensis Lloyd。在1987年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中，把大口靜灰球收入馬勃項(xiàng)下，而2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中，為了與藥典相區(qū)別，則把大口靜灰球和長(zhǎng)根靜灰球另立新名：川西馬勃Chuanximabo BOVISTELLA，從而收入四川的地方標(biāo)準(zhǔn)。時(shí)至今日，其他各地市場(chǎng)上仍然能發(fā)現(xiàn)大口靜灰球混充馬勃，供臨床使用。兩者之間是否有功效上的差別？筆者從抗炎、鎮(zhèn)痛方面進(jìn)行了比較。

1　材料

1.1動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠96只，雄性，體質(zhì)量（180± 220）g；SPF級(jí)昆明小鼠192只，雄性，體質(zhì)量（18± 22）g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2受試藥物實(shí)驗(yàn)用的大馬勃（購(gòu)自安國(guó)市藥興藥材有限公司），為灰包科真菌大馬勃（Calvatia gigantea Lloyd）的干燥子實(shí)體；大口靜灰球（購(gòu)自安國(guó)市藥興藥材有限公司），為灰包科植物大口靜灰球（Bovistella sinensis Lloyd）的干燥擔(dān)子果。藥材經(jīng)河北省藥檢所段吉平主任中藥師鑒定。

1.3大馬勃水提液和大口靜灰球水提液由河北省中醫(yī)院煎藥室制備：取大馬勃粉末250 g，裝入紗布口袋，加水750 mL，浸泡0.5 h后，砂鍋煎煮0.5 h，濾出提取液；二次加水700 mL，提取0.5 h，濾出提取液；三次加水700 mL，提取0.5 h，濾出提取液。合并3次大馬勃提取液，再次過(guò)濾，加熱濃縮，量瓶定容至250mL，成1kg/L的水溶液，真空包裝為10g/袋，共25袋，冰箱冷藏備用。用同樣的方法制備大口靜灰球水提液。

2　方法

2.1大馬勃及大口靜灰球的抗炎作用比較

2.1.1二甲苯致小鼠右耳腫脹反應(yīng)將48只小鼠隨機(jī)分為3組，每組12只，即：模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥組、大馬勃水煎劑組、大口靜灰球水煎劑組。大馬勃和大口靜灰球水煎劑組小鼠分別灌胃給予大馬勃及大口靜灰球水煎劑3.6 g/kg（含生藥，相當(dāng)于臨床用量的18倍），陽(yáng)性藥組小鼠給予地塞米松片0.001 2 g/kg，模型對(duì)照組灌胃給予相應(yīng)量的生理鹽水，每日1次，連續(xù)7 d。第7天末次灌胃給藥40 min后，在每只小鼠右耳涂二甲苯0.02 mL，左耳涂生理鹽水。1 h后處死小鼠，剪下耳片，用8 mm打孔器取左右同一部位耳片，稱質(zhì)量。兩耳重量的差值即為耳腫度，以mg（耳腫度）/g體質(zhì)量表示。

2.1.2蛋清致大鼠足腫脹反應(yīng)大鼠分組給藥同

2.1.1，第7天末次灌胃給藥40 min后，分別在大鼠后肢足跖皮下注射蛋清每只0.1 mL致炎。40 min后測(cè)量大鼠足跖腫脹程度。兩足厚度的差值即為足腫度，分別計(jì)算各組大鼠的足腫脹度。

*基金項(xiàng)目：河北省科技計(jì)劃項(xiàng)目（12277794）。

作者簡(jiǎn)介：相聰坤（1973-），女，副主任中藥師，主要從事中藥學(xué)方面的研究工作。

2.1.3大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)大鼠分組給藥同2.1.1，各組大鼠均以3%戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射麻醉，剪去腹部被毛，無(wú)菌條件下剪開(kāi)下腹部正中皮膚，切口長(zhǎng)1cm，向雙側(cè)腹股溝皮下植入10mg無(wú)菌干燥棉球，縫合切口。術(shù)后當(dāng)日按10 mL/kg容積腹腔注射受試藥物，每日1次，連續(xù)給藥7 d。術(shù)后8 d，戊巴比妥鈉麻醉大鼠，手術(shù)取出棉球，剔凈周圍脂肪組織，放烘箱中60℃烘干24 h，稱干質(zhì)量，該干質(zhì)量減去棉球原質(zhì)量即得肉芽腫干質(zhì)量，以mg（肉芽腫）/100 g體質(zhì)量表示。

2.2大馬勃及大口靜灰球的鎮(zhèn)痛作用比較

2.2.1醋酸致小鼠扭體反應(yīng)小鼠分組給藥同2.1.1，陽(yáng)性藥組小鼠給予復(fù)方乙酰水楊酸片0.2 g/kg，第7天末次灌胃給藥40 min后，各組小鼠均腹腔注射0.1 mL/10 g，1%冰醋酸，立即觀察20 min內(nèi)各組小鼠的扭體次數(shù)。

2.2.2酒石酸銻鉀致小鼠扭體反應(yīng)小鼠分組給藥同2.2.1，第7天末次灌胃給藥40 min后，各組小鼠均腹腔注射0.15 mL/10 g，0.05%酒石酸銻鉀，立即觀察20 min內(nèi)各組小鼠的扭體次數(shù)。

2.2.3熱板法致痛實(shí)驗(yàn)小鼠分組給藥同2.2.1，第7天末次灌胃給藥40 min后，將小鼠置于熱板上（55.0±0.5）℃，密切觀察小鼠反應(yīng)。秒表記錄從置于熱板上到舔后足的時(shí)間，取其為該鼠的痛閾值。如小鼠在60 s內(nèi)仍無(wú)產(chǎn)生疼痛反應(yīng)，應(yīng)立即取出不再刺激，按60 s計(jì)算。

2.3統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較若方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett's T3法以，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　結(jié)果

3.1大馬勃及大口靜灰球?qū)π∈笥叶[脹的影響見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，與模型組相比，大馬勃組和偽品組均能明顯降低二甲苯所致的小鼠右耳腫脹程度，具有明顯的抗炎作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。但是，與大馬勃組相比較，偽品大口靜灰球的抗炎作用明顯降低（P＜0.05）。

3.2大馬勃及大口靜灰球?qū)Υ笫笞隳[脹的影響見(jiàn)表2。表2顯示的結(jié)果與表1相同，大馬勃組和偽品組均能明顯降低蛋清所致的大鼠足腫脹程度，具有明顯的抗炎作用，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。而與大馬勃組相比較，偽品大口靜灰球的抗炎作用顯著降低（P＜0.01）。

表1　大馬勃及其大口靜灰球?qū)π∈笥叶[脹的影響（±s）Tab.1　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice right ear swelling model induced by dimethybenzene（±s）

表1　大馬勃及其大口靜灰球?qū)π∈笥叶[脹的影響（±s）Tab.1　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice right ear swelling model induced by dimethybenzene（±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01；與大馬勃組比較，#P＜0.05。

組別　動(dòng)物數(shù)　耳腫度［mg/（g·wt）］模型組　12　0.48±0.10地塞米松組　12　0.16±0.10**大馬勃組　12　0.19±0.10**大口靜灰球組　12　0.30±0.10**#

表2　大馬勃及其大口靜灰球?qū)Υ笫笞隳[脹的影響（±s）Tab.2　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on rat paw swelling model induced by albumen（±s）

表2　大馬勃及其大口靜灰球?qū)Υ笫笞隳[脹的影響（±s）Tab.2　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on rat paw swelling model induced by albumen（±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01；與大馬勃組比較，##P＜0.01。

組別　動(dòng)物數(shù)　足腫度模型組　12　0.65±0.076地塞米松組　12　0.30±0.069**大馬勃組　12　0.39±0.033**大口靜灰球組　12　0.52±0.080**##

3.3大馬勃及大口靜灰球?qū)Υ笫竺耷蛉庋磕[的影響 見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，與模型組相比，大馬勃組和偽品組均能明顯降低棉球肉芽腫脹程度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），具有明顯的抗炎作用，而與大馬勃組相比較，偽品提取液的抗炎作用明顯降低（P＜0.01）。

表3　大馬勃及其大口靜灰球?qū)Υ笫竺耷蛉庋磕[的影響（±s）Tab.3　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on the cotton ball granuloma of rats（±s）

表3　大馬勃及其大口靜灰球?qū)Υ笫竺耷蛉庋磕[的影響（±s）Tab.3　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on the cotton ball granuloma of rats（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與大馬勃組比較，##P＜0.01。

組別　動(dòng)物數(shù)　耳腫度（mg/100 g·wt）模型組　12　49.51±2.70地塞米松組　12　20.74±2.45**大馬勃組　12　22.40±2.45**大口靜灰球組　12　45.72±3.90*##

3.4大馬勃及大口靜灰球?qū)π∈蟠姿崤んw反應(yīng)的影響見(jiàn)表4。由表4可以看出，與模型組相比，大馬勃組對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)有明顯的鎮(zhèn)痛作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。然而偽品組大口靜灰球提取液對(duì)小鼠扭體反應(yīng)無(wú)明顯的鎮(zhèn)痛作用（P＞0.05）。

表4　大馬勃及大口靜灰球?qū)π∈蟠姿崤んw反應(yīng)的影響（±s）Tab.4　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice acetic acid writhing model（±s）

表4　大馬勃及大口靜灰球?qū)π∈蟠姿崤んw反應(yīng)的影響（±s）Tab.4　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice acetic acid writhing model（±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01。

組別　動(dòng)物數(shù)　扭體次數(shù)模型組　12　48.83±11.76陽(yáng)性藥組　12　25.00±8.44**大馬勃組　12　30.92±9.97**大口靜灰球組　12　41.00±9.95

3.5大馬勃及大口靜灰球?qū)π∈缶剖徜R鉀扭體反應(yīng)的影響見(jiàn)表5。表5顯示的結(jié)果與表4相同，與模型組相比，大馬勃組對(duì)酒石酸銻鉀致小鼠扭體反應(yīng)有明顯的鎮(zhèn)痛作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。然而偽品組大口靜灰球提取液對(duì)小鼠扭體反應(yīng)無(wú)明顯的鎮(zhèn)痛作用（P＞0.05）。

表5　大馬勃及其大口靜灰球?qū)π∈缶剖徜R鉀扭體反應(yīng)的影響（±s）Tab.5　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice antimony potassium tartrate writhing model（±s）

表5　大馬勃及其大口靜灰球?qū)π∈缶剖徜R鉀扭體反應(yīng)的影響（±s）Tab.5　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice antimony potassium tartrate writhing model（±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01。

組別　動(dòng)物數(shù)　扭體次數(shù)模型組　12　51.58±10.44陽(yáng)性藥組　12　25.75±7.80**大馬勃組　12　33.42±8.10**大口靜灰球組　12　46.00±10.22

3.6大馬勃及大口靜灰球?qū)π∈鬅岚宸磻?yīng)的影響見(jiàn)表6。表6結(jié)果顯示，與模型組相比，大馬勃組對(duì)小鼠熱板反應(yīng)有明顯的鎮(zhèn)痛作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。然而偽品組大口靜灰球提取液對(duì)小鼠熱板反應(yīng)無(wú)明顯的鎮(zhèn)痛作用（P＞0.05）。

表6　大馬勃及其大口靜灰球?qū)π∈鬅岚宸磻?yīng)的影響（±s）Tab.6　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on hot plate model（±s）

表6　大馬勃及其大口靜灰球?qū)π∈鬅岚宸磻?yīng)的影響（±s）Tab.6　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on hot plate model（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　動(dòng)物數(shù)　痛閾值（s）模型組　12　24.92±5.92陽(yáng)性藥組　12　50.83±7.65**大馬勃組　12　48.33±8.17*大口靜灰球組　12　26.50±7.98

4　討論

炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子發(fā)生的防御反應(yīng)，是感染及其許多疾病的最基本病理過(guò)程。本研究采用多種炎癥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，比較大馬勃及其大口靜灰球的抗炎作用。研究結(jié)果表明，大馬勃對(duì)二甲苯致耳腫脹以及蛋清致足腫脹急性炎癥模型和棉球肉芽腫亞急性炎癥模型都具有很好的抗炎作用。然而相比較之下，大口靜灰球的抗炎作用較?。≒＜0.05或P＜0.01）。在醋酸扭體實(shí)驗(yàn)和熱板實(shí)驗(yàn)均表明大馬勃具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，然而大口靜灰球無(wú)明顯鎮(zhèn)痛作用。

本研究通過(guò)比較大馬勃及其混淆品大口靜灰球的抗炎鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)混淆品大口靜灰球的抗炎作用明顯低于大馬勃（馬勃正品），而且大口靜灰球沒(méi)有明顯的鎮(zhèn)痛作用。說(shuō)明正品馬勃與混淆品大口靜灰球在抗炎、鎮(zhèn)痛作用方面都存在一定的差異，為臨床提供了使用依據(jù)。

武翠玲等［8-9］將馬勃用熱水提取所得的粗品，經(jīng)Sevag法脫白，DEAE-sepharose fast flow離子交換層析及sephacryl S-300HR凝膠過(guò)濾法得大馬勃多糖（CGP-l）。氣相色譜表明，單糖組成為:Gal，Glc，Man 等4種單糖，其中Gal，Gle，Man摩爾比為3.92∶11.28∶1.22。經(jīng)溴代十六烷基三甲胺絡(luò)合后，再通過(guò)DEAE-纖維素和SephadexG-75柱層析得馬勃多糖精品，經(jīng)進(jìn)一步純化依次得到多糖PS。據(jù)推測(cè)馬勃產(chǎn)生抗炎鎮(zhèn)痛藥理作用的活性成分很有可能是多糖部分。馬勃所含的化學(xué)成分比較復(fù)雜，馬勃種屬的復(fù)雜性更加劇了這種復(fù)雜性［10］。目前對(duì)其化學(xué)成分的相關(guān)研究表明，馬勃中主要含有：甾體化合物、萜類化合物、以及多糖、氨基酸、脂肪酸、蛋白質(zhì)、多肽等，還含有一些微量元素。馬勃的抗炎鎮(zhèn)痛作用的有效成分到底是什么，仍需要進(jìn)一步研究。

［1］張慶康，丁永輝.10種馬勃的氨基酸含量測(cè)定及聚類分析［J］.中成藥，1996，18（8）:35-37.

［2］孫菊英，郭朝輝.十種馬勃體外抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中藥材，1994，17（4）:37-381.

［3］陶文洲，呂競(jìng)競(jìng)，楊淑云，等.經(jīng)纖維胃鏡定位噴灑復(fù)方馬勃液治療上消化道出血的療效觀察［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1987，36（1）: 12.

［4］魏艷，高錦明，郝雙紅，等.擔(dān)子菌黃硬皮馬勃?dú)⑾x(chóng)活性研究［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2005，25（2）:382-385.

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［6］蘇方華，潘日興.馬勃的抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究［J］.齊魯藥事，2010，29（10）:586-588.

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［8］武翠玲，鄧永康，孟延發(fā).大馬勃水溶性多糖的結(jié)構(gòu)研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2008，20（6）:1027-1030.

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（本文編輯：馬英，滕曉東）

Study on the comparison of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on anti-inflammatory and analgesia effects

XIANG Cong-kun，GUAN Sheng-jiang，MA Juan-juan
（Hebei Province Traditional Chinese Medicine Hospital，Shijiazhuang 050011，China）

［Objective］To compare the Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on anti-inflammatory and analgesic effects，and provide the basis for the necessity to distinguish the authenticity of Calvatia gigantea.［Methods］The anti-inflammatory effect was observed by mice right ear swelling model induced by dimethybenzene，rat paw swelling model induced by albumen，and the cotton ball granuloma of rat.The analgesic action was observed by mice acetic acid and antimony potassium tartrate writhing test，and hot plate test. ［Results］Anti-inflammatory effects of Calvatia gigantea was obviously higher than that of adulterant Bovistella sinensis lloyd.Bovistella sinensis lloyd has no obvious analgesic action.［Conclusion］Calvatia gigantea and adulterant Bovistella sinensis lloyd have some differences in the anti-inflammation and analgesic actions.

Calvatia gigantea；adulterant；anti-inflammatory；analgesic

R285.5

A

1672-1519（2016）07-0430-04

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.07.12

2016-04-25）