老年心腦血管病患者亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與血清葉酸、同型半胱氨酸水平的關(guān)系

王愛玲　安翠平　楊衛(wèi)衛(wèi)　郝津

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老年心腦血管病患者亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與血清葉酸、同型半胱氨酸水平的關(guān)系

王愛玲安翠平楊衛(wèi)衛(wèi)郝津

目的探討老年心腦血管病患者亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態(tài)性與血漿同型半胱氨酸(HCY)、葉酸、維生素B12的關(guān)系。方法檢測104例老年心腦血管病患者的MTHFRC667T基因多態(tài)性，血清HCY、葉酸、維生素B12水平，分析老年心腦血管病患者M(jìn)THFRC667T基因多態(tài)性與血清HCY、葉酸、維生素B12水平的關(guān)系。結(jié)果老年心腦血管病患者中MTHFRC667基因野生型(CC型)比例為20.19%，雜合突變型(CT型)和純合突變型(TT型)比例為79.81%，心腦血管病組CT/TT型比例高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血漿HCY與葉酸、維生素B12水平呈負(fù)相關(guān)(P<0．05)，TT型的葉酸、維生素B12明顯低于CC型(P<0．05)， TT型、CT型的血HCY濃度高于CC型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論老年心腦血管患者M(jìn)THFR基因多態(tài)性與血漿HCY有一定關(guān)系，且血HCY與葉酸、維生素B12呈負(fù)相關(guān)。

心腦血管??；MITHFR基因多態(tài)性；葉酸；同型半胱氨酸

中國目前每年死于心腦血管疾病的人數(shù)約為三百萬人，約占全部死亡人數(shù)的45%，是我國居民健康的主要?dú)⑹?，其中，腦血管疾病超越癌癥，在死亡中排名第一。因此，預(yù)防和治療心血管疾病，特別是預(yù)防中風(fēng)，是我們長期的醫(yī)療衛(wèi)生工作的重要任務(wù)之一。高血壓是心腦血管事件最重要的危險(xiǎn)因素。因此，有效治療高血壓是預(yù)防心腦血管事件的重心。高同型半胱氨酸(HCY)是導(dǎo)致心腦血管疾病的另一個(gè)重要因素。大量的前瞻性研究和基因位點(diǎn)多態(tài)性研究表明，高HCY是腦血管事件、缺血性心臟病和深靜脈血栓形成的重要危險(xiǎn)因素之一。人體高水平HCY是心腦血管病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素已成定論[1]。亞甲基四氫葉酸還原酶(MITHFR)是人體內(nèi)葉酸代謝的關(guān)鍵酶，HCY甲基化的參與物N5-甲基葉酸是葉酸代謝的中間產(chǎn)物，MITHFR基因突變是否成為心腦血管疾病的危險(xiǎn)因素也變?yōu)槿藗儫嶙h的話題[2]。目前國內(nèi)關(guān)于MTHFRC677T基因多態(tài)性與老年心腦血管病患者的報(bào)道較少，本文旨在探討老年心腦血管患者M(jìn)THFR基因多態(tài)性與血清葉酸、HCY的關(guān)系。

1　資料與方法

1．1一般資料選取2014至2015年本院老年科老年心腦血管病患者104例(心腦血管病組)，男68例，女36例；平均年齡(68.7±5.3)歲；對照組80例，男52例，女28例；平均年齡(67.8±4.9)歲。心血管患者56例，腦卒中48例，記錄患者既往病史、高血壓史、吸煙史、飲酒病史、心腦血管家族史，排除有糖尿病，腎功能不全的患者，禁服葉酸、維生素B12 1個(gè)月。

1.2方法

1.2.1要求受檢者隔夜禁食至少12 h，次日清晨空腹抽取肘前靜脈血4 ml，并于30 min內(nèi)分離血清貯存于-70℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2血清維生素B12和葉酸水平測定：采用羅氏E601化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑盒(維生素B12試劑盒及葉酸試劑盒)，按試劑盒說明測定血清維生素B12和葉酸濃度。

1.2.3HCY濃度的測定：采用日本日立全自動生化分析儀(H7180)、上海德賽診斷系統(tǒng)生產(chǎn)的同型半胱氨酸測定試劑盒，嚴(yán)格按照采用循環(huán)酶法測定Hcy濃度的試劑盒說明書測定HCY濃度。

1.2.4在MTHFR基因C677T突變檢測：清晨空腹靜脈血1 ml(用EDTA抗凝管)。通過PCR多態(tài)性MTHFR基因檢測芯片雜交。實(shí)驗(yàn)所用的儀器和軟件：Baio BRCA E.混合自動雜交儀，BaiO⑩BE．2.0生物芯片識讀儀(BSE01011)及配套試劑盒：MTHFR(C677T)基因檢測試劑盒(PCR芯片雜交法)，提取血液基因組DNA試劑盒(BST01051，上海百傲科技有限公司)，Baio BRCA基因芯片圖像分析軟件(Baio Array Doctor)V 2.0.mthfr基因型分析軟件(bse040101)。詳細(xì)步驟包括：樣品DNA的制備：根據(jù)血液基因組DNA提取試劑盒用來說明純化DNA的提取——擴(kuò)增PCR溶液制備，PCR擴(kuò)增-雜交，雜交反應(yīng)結(jié)束后，取出芯片，芯片到生物芯片閱讀儀。Baio基因芯片圖像分析軟件V 2圖像掃描和數(shù)據(jù)分析，輸出測試結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1MTHFR各基因型及等位基因頻率分布情況心腦血管病組MTHFRC667T基因CC型占20.19%，CT/TT型占79.81%，對照組MTHFRC667T基因CC型占46.25%，CT/TT型占53.75%，心腦血管病組CT/TT型對照組比例顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.22，P<0.05)。見表1。

表1　MTHFR各基因型頻率及等位基因頻率分布比例　例(%)

注：與對照組比較,*P<0.05

2.2老年心腦血管病患者血HCY濃度與葉酸、維生素B12相關(guān)性分析血HCY濃度與葉酸、維生素B12水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2　HCY與葉酸、維生素B12相關(guān)性分析

2.3老年心腦血管病患者不同MTHFR基因型中血清葉酸、維生素B12和HCY結(jié)果比較不同基因型CC、CT、TT組間HCY、葉酸、維生素B12水平不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中CT、TT型的HCY明顯高于CC型(P<0.05)，TT型葉酸、維生素B12明顯低于CC型(P<0.05)。見表3,圖1。

指標(biāo)基因型CCCTTTF值P值HCY(μmol/L)9.89±1.0513.5±1.2124.0±8.3259.47<0.05葉酸(nmol/L)18.4±7.515.7±5.410.99±6.211.78<0.05維生素B12(pmol/L)356±85322±72267±8210.08<0.05

圖1老年心腦血管病患者M(jìn)THFR基因多態(tài)性與血清葉酸、B12、HCY水平的關(guān)系

3　討論

大量流行病學(xué)研究表明，年齡、性別、血脂異常、高血壓、吸煙、糖尿病、肥胖是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[3,4]。近二十年的研究表明，高HCY是心血管和腦血管事件導(dǎo)致的另一個(gè)重要因素[5]。

3.1HCY與葉酸、維生素B12的代謝關(guān)系HCY是一種含硫氨基酸，有研究證實(shí)，在體內(nèi)HCY水平的影響主要是葉酸、維生素B12水平及相關(guān)代謝酶的遺傳多態(tài)性的影響[6]。這項(xiàng)研究結(jié)果表明，HCY老年心腦血管疾病患者與血清葉酸和維生素B12水平呈負(fù)相關(guān)。同型半胱氨酸蛋氨酸合成酶的作用下，葉酸和維生素B12作為輔助因子，重新甲基化的發(fā)生，蛋氨酸重新合成，一旦人體缺乏葉酸，尤其是N-5-甲基四氫葉酸缺乏可導(dǎo)致蛋氨酸循環(huán)障礙，導(dǎo)致HCY水平升高。國家健康和營養(yǎng)調(diào)查結(jié)果顯示，對葉酸攝入量和腦卒中風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)，說明葉酸補(bǔ)充可預(yù)防腦血管病的發(fā)生[7]。辛岳等[8]證明應(yīng)用葉酸、維生素B12、急性腦梗死患者維生素B6治療，可以有效降低HCY濃度。雖然許多研究結(jié)果表明，高HCY血癥是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，維生素B12、B6缺乏可導(dǎo)致血HCY水平升高，同時(shí)，調(diào)查發(fā)現(xiàn)，血清HCY水平是腦卒中的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素[9]。

3.2MTHFR多態(tài)性與HCY的關(guān)系血漿HCY水平除了葉酸和維生素B12、B6的影響，也受到一些代謝酶的遺傳多態(tài)性的限制，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)C677T和蛋氨酸合酶A2756G 基因多態(tài)性是葉酸代謝最重要的調(diào)節(jié)酶。5,10亞甲基四氫葉酸為5-甲基四氫葉酸。5-甲基四氫葉酸是血清中葉酸的存在主要形式，是HCY的形式在甲基生成蛋氨酸的甲基供體。MTHFR是蛋氨酸代謝過程中的關(guān)鍵酶，MSR等在體內(nèi)是HCY代謝途徑關(guān)鍵酶。HCY代謝酶基因突變引起的缺陷的酶活性或降低血HCY水平[11,12]。這個(gè)基因突變，其中最常見的是C677T位點(diǎn)突變的堿基T，取代C引起編碼氨基酸由纈氨酸代替了丙氨酸，突變可以直接影響酶的活性和熱穩(wěn)定性，導(dǎo)致HCY的轉(zhuǎn)硫基甲基化和破壞，降低亞甲基四氫葉酸還原酶活性，導(dǎo)致血液中的代謝Hcy異常。

上述研究表明MTHFR C677T 和 MTR A2756G基因位點(diǎn)突變?nèi)巳壕S持適宜的葉酸水平具有重要意義，在沒有強(qiáng)化葉酸的人群更為重要。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，老年心腦血管患者M(jìn)THFR677 TT基因型HCY水平比CC基因型高，因此HCY水平升高可能增加心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。已有研究表明心腦血管梗死患者的三種基因型的HCY水平均有顯著差異，其中CT、TT型HCY濃度明顯高于CC型[13]。還有研究得出結(jié)論即MTHFR基因C677T突變基因型與高HCY相關(guān)[14]。這均和我們的研究結(jié)果相一致。

3.3MTHFRC677T基因多態(tài)性與心腦血管疾病的關(guān)系我們的研究結(jié)果提示老年心腦血管患者中MTHFRC677T基因型TT型占43.3%，CT型占36.5%，T等位基因的頻率為79.8%，說明MTHFRC677T突變基因TT型，CT型對心腦血管疾病有一定的易感性。Li[15]對中國大陸人群MTHFR C677T基因多態(tài)性與心血管疾病的相關(guān)性進(jìn)行研究后認(rèn)為高HCY血癥及T等位基因均增加冠心病的患病風(fēng)險(xiǎn)。Sarecka-Hujar等[16]研究認(rèn)為TT基因型是波蘭人群早發(fā)冠心病的重要疾病相關(guān)因素。研究還表明，mtfrc677t基因多態(tài)性與腦卒中無相關(guān)性[17]，所以對MTHFR基因多態(tài)性與心血管和腦血管疾病的關(guān)系仍然存在爭議。

綜上所述，MTHFR C677T 基因多態(tài)性不僅可影響基線及補(bǔ)充葉酸后的血清葉酸水平，同時(shí)對不同給藥劑量和周期的葉酸的升高血清葉酸水平效果具有修飾作用。高HCY血癥是老年心腦血管病的一項(xiàng)危險(xiǎn)因素，C677T位點(diǎn)純和子突變(TT型)可使血漿HCY水平顯著升高，是引起高HCY血癥的原因之一，目前不管是從營養(yǎng)因素還是從遺傳因素考慮。補(bǔ)充葉酸、B族維生素降低HCY水平對防治老年心腦血管疾病是有益的，但MTHFR基因多態(tài)性與心腦血管病的相關(guān)性研究所出現(xiàn)的不同結(jié)果的原因，還需要進(jìn)一步從研究方法、人群選擇、入選和納入標(biāo)準(zhǔn)及樣本量等方面進(jìn)行統(tǒng)一，其研究結(jié)果才會更可靠。

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Correlation between gene polymorphism of MTHFR and serum folate, homocysteine and in elderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases

WANGAiling,ANCuiping,YANGWeiwei,etal.

Desect1mentofClinicalLaboratory,TheFirstHospitalofShijiazhuangCity,Shijiazhuang050011,China

ObjectiveTo investigate the correlation between gene polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) and serum folate and homocysteine (HCY) in elderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases.MethodsThe gene polymorphism of MTHFR and serum levels of folate, homocysteine and Vitamin B12 were detected in 104 elderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases,and the correlation between gene polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) and the serum levels of folate, homocysteine, Vitamin B12 was analyzed.ResultsThe proportion of MTHFRC667 gene wild type (CC type), heterozygosis mutant type (CT type) and homozygosis mutant type (TT type) was 20.19%, 36.5%, 43.3%, respectively.The proportion of CT/TT in case group was 38.5%,61.5%,respectively,which was significantly higher than that in control group.The levels of plasma HCY were negatively correlated to those of folate and Vitamin B12 (P<0.05). The levels of folate and Vitamin B12 in TT type were significantly lower than those in CC type (P<0.05),however,the plasma levels of HCY in TT type and CT type were significantly higher than those in CC type (P<0.05).ConclusionMTHFR gene polymorphism in eiderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases has a certain correlation with plasma HCY,moreover, which is negatively correlated to folate ,HCY and Vitamin B12.

cardio-cerebrovascular diseases; MTHFR gene polymorphism; folate; homocysteine

2016-02-28)

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.15.013

050011河北省石家莊市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科

R 54

A

1002-7386(2016)15-2286-03