丹參酮ⅡA對缺血性腦損傷大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制初探

趙　巖

?

丹參酮ⅡA對缺血性腦損傷大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制初探

趙巖

河南省南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校臨床醫(yī)學(xué)系(南陽 473000)

摘要：目的丹參酮ⅡA對缺血性腦損傷大鼠的保護(hù)作用及分子機(jī)制研究。方法在造成大鼠高脂血癥的基礎(chǔ)上，進(jìn)行兩側(cè)頸總動脈缺血造成腦細(xì)胞損傷，建立動物模型。術(shù)后分別使用丹參酮ⅡA 1ml/kg.d進(jìn)行干預(yù)治療一周，水迷宮試驗(yàn)測試大鼠的學(xué)習(xí)能力，檢測大鼠血清神經(jīng)元特異性烯醇酶(NSE)、氧化亞氮(NO)及內(nèi)皮素-1(ET-1)的含量。結(jié)果丹參酮能提高大鼠缺血性腦損傷大鼠的神經(jīng)功能水平，降低血清NSE及ET-1的含量，升高血清NO的含量。結(jié)論丹參酮ⅡA對缺血性腦損傷大鼠具有保護(hù)作用，其作用機(jī)理與降低ET-1的含量，升高NO有關(guān)，此作用有助于大腦缺血損傷的治療。

關(guān)鍵詞：丹參酮ⅡA；缺血性腦損傷；水迷宮試驗(yàn)；一氧化氮； 內(nèi)皮素-1

丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)是中醫(yī)臨床上最為常用的中藥之一, 丹參酮類是從傳統(tǒng)中藥丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)及其同屬植物中分離到的被證實(shí)是丹參的主要特征性成分和活性成分,包括隱丹參酮、丹參酮ⅡA、二氫丹參酮I等多種成分[1]。丹參酮類與丹酚酸類因具有活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛的功效應(yīng)用于臨床[2]。本研究旨在觀察丹參酮對缺血性腦損傷大鼠的保護(hù)作用，并對其機(jī)制進(jìn)行探討，為其在腦缺血疾病中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1藥物丹參酮ⅡA 注射液購自雅安三九藥業(yè)有限公司，批號：121011，每支2mL。

1.1.2試劑NSE、NO測定試劑盒和ET-1測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.1.3動物SD雄性大鼠(180～220 g)，二級動物，動物許可證號：SCXK(豫)2013-0002，購于鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心中心。

1.4儀器Thermo Multiskan 自動酶標(biāo)分析儀(芬蘭雷勃集團(tuán)，型號：Mk3)；，Morris水迷宮系統(tǒng)(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)。

1.2方法

1.2.1動物分組與處理[3]昆明系大鼠，隨機(jī)分為5組，每組12只。除正常對照組外，每組用高脂乳劑連續(xù)灌胃7天，每天1次，每次0.5ml。然后用10%水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，將其仰臥位固定于手術(shù)臺上，頸正中去毛，碘酒消毒后行頸正中切口，仔細(xì)分離雙側(cè)頸總動脈，用動脈夾阻斷血流使腦缺血30分鐘，最后用絲線結(jié)扎左側(cè)頸總動脈，縫合切口，局部消毒。術(shù)后小鼠放回籠中常規(guī)飼養(yǎng)。術(shù)后腹腔注射丹參酮ⅡA和等量生理鹽水，Ⅰ組為正常組，Ⅱ組為模型組，Ⅰ組和Ⅱ組不用任何藥物治療。Ⅲ組為生理鹽水組。Ⅳ組分別使用丹參酮ⅡA 1ml/kg.d進(jìn)行治療。

1.2.2水迷宮試驗(yàn)[4]一周后，水迷宮試驗(yàn)測大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。測試程序包括定位航行和空間搜索兩個實(shí)驗(yàn)部分。①定位航行實(shí)驗(yàn)，將大鼠從標(biāo)記的4個入水點(diǎn)依次朝向池壁輕輕放入水中，記錄大鼠在90 s內(nèi)尋找到并爬上平臺所用時間，即逃避潛伏期。②空間探索實(shí)驗(yàn)：撤除平臺，將大鼠放入水池中，記錄大鼠在90 s內(nèi)穿越平臺所在區(qū)域的次數(shù)。

1.2.3取材及指標(biāo)測定2%戊巴比妥鈉按40 mg/kg體重腹腔注射麻醉后，心臟采血3ml,3000r/min離心10 min后取血清，進(jìn)行NSE、NO及ET-1檢測。

1.2.4數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，以單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2　結(jié)果

2.1水迷宮試驗(yàn)學(xué)習(xí)記憶能力的測試結(jié)果與正常對照組相比模型組大鼠逃避潛伏期延長，跨越平臺次數(shù)減少(P<0.05)。生理鹽水對照組與模型組相比無明顯差異(P>0.05)。而丹參酮ⅡA治療組與模型組及生理鹽水組相比逃避潛伏期縮短，跨越平臺次數(shù)增加，可明顯改善大鼠學(xué)習(xí)記憶能力(P<0.05)。見表1。

組別樣本數(shù)劑量(ml/kg)逃避潛伏期(s)跨越平臺次數(shù)(次)正常對照組1221.1±6.327.43±1.75模型組1243.77±0.841)4.23±0.521)生理鹽水對照組1239.98±3.262)4.63±1.572)丹參酮ⅡA12128.60±4.763)6.32±1.023)

注：1)與I組比P<0.05；2)與Ⅱ組比P>0.05；3)與Ⅱ組比P<0.05

2.2大鼠血清NSE、NO及ET-1的含量影響與正常對照組相比模型組大鼠血清NSE及ET-1的含量增加，NO降低(P<0.05)。生理鹽水對照組與模型組相比無明顯差異(P>0.05)。而丹參酮ⅡA治療組與模型組及生理鹽水組相比降低大鼠血清NSE及ET-1的含量，增加NO濃度(P<0.05)。見表2。

組別樣本數(shù)(只)劑量(ml/kg)NSE(ug/l)NO(umol/l)ET-1(ug/l)正常對照組126.36±3.2854.79±11.6841.96±7.5模型組1223.55±8.141)29.65±13.531)113.±10.81)生理鹽水組1226.32±2.142)28.39±9.892)106±22.822)丹參酮ⅡA12514.95±3.223)48.96±24.533)75±13.623)

注：1)與I組比P<0.05； B與Ⅱ組比P>0.05； C與Ⅱ組比P<0.05

3　討論

本研究通過分離雙側(cè)頸總動脈，用動脈夾阻斷血流使腦缺血30分鐘，然后用絲線結(jié)扎左側(cè)頸總動脈，建立了大鼠大腦缺血損傷模型。本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降，血清NSE含量均顯著高于對照組(P<0.05)，成功完成了大腦缺血的造模過程。NSE主要存在大腦神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，當(dāng)腦細(xì)胞損傷時，細(xì)胞內(nèi)的NSE直接釋放至腦脊液(CSF)中，使CSF中NSE濃度增高，并且NSE可通過損傷的血- 腦脊液屏障漏至血液中，因此血液中的NSE也相應(yīng)升高。故血清NSE含量的增高反映了大腦的損傷的情況[5]。

ET-l和NO均是血管內(nèi)皮細(xì)胞生成的血管活性物質(zhì)，其中，ET-1是縮血管因子，對維持血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)起重要作用，動物實(shí)驗(yàn)表明，局部ET含量的升高可使缺血區(qū)及周圍正常區(qū)側(cè)支血管產(chǎn)生強(qiáng)烈而持久的收縮，從而加重缺血性組織損傷，互為因果，惡性循環(huán)[6]。NO是擴(kuò)血管因子，也是機(jī)體內(nèi)重要的信使分子和效應(yīng)分子，參與細(xì)胞信息的傳遞、介導(dǎo)細(xì)胞免疫和炎癥毒性作用等體內(nèi)許多生理、病理過程[7]，二者相對平衡有利于維持腦組織正常灌注。

丹參酮ⅡA 屬于丹參酮類物質(zhì)，從丹參中提取獲得。大量研究表明丹參酮ⅡA 具有血管舒張，抗動脈硬化等作用[8]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腦缺血損傷時血清ET-l水平增高，NO含量降低，說明腦缺血損傷時存在血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。而丹參酮ⅡA可降低血清ET-l及NSE水平，升高NO含量，糾正血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙達(dá)到改善大鼠神經(jīng)功能水平。此作用有利于治療腦缺血時大腦損傷的發(fā)生與發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[1]Ho J H, Hong C Y. Salvianolic acids: small compounds with multiple mechanisms for cardiovascular protection[J]. J Biomed Sci,2011, 18(1)：1-5.

[2]龍權(quán)生，金建新，黃戈平，等.生脈合丹參注射液對新生兒缺氧缺血性心肌損害的臨床研究 [J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2005，12(3)： 165-167.

[3]劉莎莎，高維娟，錢濤，等.黃芪注射液腹腔注射腦缺血再灌注模型大鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表達(dá)[J].中國組織工程研究，2012，16(20)：47-50.

[4]袁電杰，張印發(fā)，姚春香.靈芝多糖對阿爾茨海默病模型大鼠海馬內(nèi)突觸及突觸素表達(dá)的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(3)：151.

[5]Van Munster BC, Korse CM, de Rooij SE,et al. Markers of cerebral damage during delirium in elderly patients with hip fracture[J].BMC Neurl, 2009, 9:21.

[6]成俊芬，駱永文，劉露，等.心肺復(fù)蘇中血漿內(nèi)皮素和超氧化物歧化酶水平的動態(tài)觀察與分析[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2003，8(3)：72-74.

[7]劉建國，王憲，陳明哲.一氧化氮和細(xì)胞因子之間的相互調(diào)節(jié)作用[J].生理科學(xué)進(jìn)展，2000，31(1)：61-64.

[8]Tang FT, Cao Y, Wang TQ, et al. Tanshinone IIA attenuates atherosclerosis in ApoE(-/-) mice through down-regulation of scavenger receptor expression[J]. Eur J Pharmacol, 2011, 650(1): 275-284.

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.10.024

文章編號：1003-8914(2016)-10-1400-03

收稿日期：(本文校對：劉言言2015-11-10)

Protective Effect and Mechanism of TanshinoneⅡA on Ischemic Brain Injury in Rats

ZHAO Yan

(Department of Clinical Medicine, Nanyang Medical College, Henan, Nanyang 473000, China)

Abstract：ObjectiveTo study the protective effect and molecular mechanism of tanshinoneⅡA on ischemic brain injury in rats. MethodOn the basis of the high fat blood disease in rats, the cerebral cell injury caused by ischemia of the common carotid artery was performed, and the animal model was established. 1ml/kg.d tanshinoneⅡA was used to treat one week after operation. Water maze test was to test the learning ability of rats,and the levels of neuron-specific enolase (NSE), nitrous oxide (NO) and endothelin -1 (ET-1) were detected. ResultThe tanshinoneⅡA can improve the neurological function of rats with ischemic brain injury, reduce the content of NSE and ET-1 in serum, and increase the content of NO in serum. ConclusionThe tanshinoneⅡA have the protective effect on ischemic brain injury in rats, and the mechanism is related to the decreasing of ET-1 content, and the increasing of NO, which is helpful to the treatment of cerebral ischemia injury.

Key words：TanshinoneⅡA; Ischemic brain injury; Water maze test; Nitric oxide; Endothelin-1