正交試驗優(yōu)選清熱潤肺合劑提取工藝

徐　勇

?

正交試驗優(yōu)選清熱潤肺合劑提取工藝

徐勇

目的優(yōu)選我院制劑清熱潤肺合劑的提取工藝。方法以加水量、煎煮時間和提取次數(shù)為考察因素，黃芩苷含量及出膏率為試驗指標，采用正交試驗優(yōu)選清熱潤肺合劑提取工藝。結(jié)果清熱潤肺合劑最佳工藝為水煎2次，每次煎煮時間為1.5h。結(jié)論該研究為清熱潤肺合劑劑型改革和制劑工藝研究提供實驗依據(jù)。

正交試驗；清熱潤肺合劑；提取工藝；黃芩苷

清熱潤肺合劑[遼藥制字Z05050027]是我院研制，用于治療呼吸道感染的中藥制劑，由清熱潤肺煎劑改劑型而成，該制劑由生地黃、黃芩、牡丹皮、玄參、連翹、金銀花等10味中藥組成，具有清熱潤肺、止咳平喘之功。主要用于咳嗽、喘促、痰黏稠色黃，身熱，渴喜冷飲等癥[1]。臨床以湯劑的形式應(yīng)用多年，經(jīng)過長期的臨床觀察和研究，顯示出較好的臨床療效。為方便患者，我們將湯劑改為合劑，為保證制劑質(zhì)量及療效，用正交試驗對合劑的提取工藝進行優(yōu)選，以黃芩苷含量及出膏率為評價指標。

1　儀器與試藥

1.1儀器日本島津LC-10AD高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外-可見檢測器，Anastar工作站；AUW220D型島津分析天平。

1.2試劑黃芩苷(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：111810-201304)；中藥材均由河北祁奧中藥飲片有限公司提供，經(jīng)本溪市藥檢所鑒定，符合《中華人民共和國藥典》2010年版一部項下規(guī)定[2]。甲醇、磷酸為色譜純，水為純化水。其他化學試劑均為分析純。

1.3工藝設(shè)計根據(jù)處方中所含10味中藥材的成分分析[3]，均可用水提法提取有效成分，用正交試驗對提取工藝進行優(yōu)選。

1.3.1正交試驗設(shè)計考慮水提取工藝的主要影響因素，選擇加水量(A)、煎煮次數(shù)(B)、煎煮時間(C)為考察因素，按L9(34)正交試驗表進行試驗，以黃芩苷含量及出膏率為考察指標，因素與水平見表1。

表1　提取工藝的因素水平表

1.3.2樣品制備按處方比例稱取9份處方中各藥味，每份樣品按正交表安排的條件進行提取，合并提取液，備用。

1.4黃芩苷含量測定

1.4.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱為十八烷基鍵合硅膠為填充劑，色譜柱為DiamonsilC18(4.6mm×200mm)；流動相為甲醇-水-磷酸(45∶55∶0.2)；檢測波長為315mm；柱溫為室溫；理論塔板數(shù)按黃芩苷色譜峰計算，不低于3000；主峰與其他物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。

1.4.2對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品(60℃減壓干燥4h)適量，加甲醇溶解，制成每1mL含0.031mg的對照品溶液。

1.4.3標準曲線的制備精密量取黃芩苷對照品溶液3kμL，6μL，9μL，12μL，15μL，按上述色譜條件進樣測定峰面積，以黃芩苷峰面積積分值為縱坐標(y),進樣量(μg)為橫坐標(x),進行線性回歸，得同歸方程y=0.00000453x-0.0000152，Chi-Square：3.821。結(jié)果表明，黃芩苷在0.0928～0.4648μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。分析方法的系統(tǒng)適用性實驗結(jié)果及精密度、重現(xiàn)性、回收率結(jié)果均符合分析要求[1]。

1.5出膏率的測定精密量取提取液50ml，置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，置干燥器中冷卻1h，稱重，計算出膏率[出膏率=干膏重(g)/藥材總重(g)×100%]

2　結(jié)果

2.1正交實驗結(jié)果與分析根據(jù)經(jīng)驗知道，黃芩苷含量比出膏率更重要，因此，兩個指標的權(quán)重系數(shù)分別取為ω1=0.6和ω2=0.4。為使各指標單位統(tǒng)一，把試驗結(jié)果的每項指標中最好的指標定為60分和40分，綜合評分為100分。在統(tǒng)一標準下加權(quán)評分為：出膏率：y1=(y1÷32.12×100)×0.4；黃芩苷含量：y2=(y2÷6.98×100)×0.6；綜合評分：y= y1+y2。正交試驗結(jié)果見表2。

表2　正交實驗結(jié)果

2.2方差分析結(jié)果以綜合評分值為指標，對結(jié)果進行方差分析，列出方差分析表。方差分析表明，因素A為不明顯因素，可根據(jù)生產(chǎn)實際情況確定加水量；因素B、C對綜合指標有顯著性影響，最佳試驗組合應(yīng)為B3C3；但從生產(chǎn)實際出發(fā)考慮，B2與B3的試驗結(jié)果之間相差不大，煎煮3次能耗較大且易煎出更多雜質(zhì)，給后期分離帶來困難，所以選B2較為合適。因此，最佳工藝為水煎2次，每次煎煮時間為1.5h。見表3。

表3　方差分析表

注：F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00

2.3工藝驗證試驗按處方比例稱取各藥材，共3份，按優(yōu)選的最佳工藝分別進行提取，按“1.4”“1.5”項下方法測定提取液中黃芩苷含量和出膏率。該驗證試驗結(jié)果理想，表明優(yōu)選工藝合理、可行，可用于清熱潤肺合劑提取。結(jié)果見表4。

表4　驗證試驗結(jié)果

3　討論

中藥提取過程對于中藥質(zhì)量、療效有著舉足輕重的影響。眾所周知，中藥的療效是通過一系列相似結(jié)構(gòu)的化合物群(有效成分)的協(xié)同作用而體現(xiàn)的。要保證中藥產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定，療效可靠，就必須對中藥提取物的生產(chǎn)過程進行研究和標準化建設(shè)。

本工藝的篩選指標確定為3個。黃芩系方中君藥，黃芩苷是黃芩抗菌消炎的主要藥效物質(zhì)，且其結(jié)構(gòu)上存在較多共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，紫外吸收非常明顯，測定靈敏性更高。因此，選擇以黃芩苷含量作為提取工藝主要的評價指標進行綜合評價[4]。而干浸膏是藥物治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)，故也應(yīng)作為檢測指標[5]。本試驗以多指標控制和評價中藥制劑質(zhì)量，使試驗結(jié)果更科學、合理、全面。

[1]張冬梅.清熱潤肺合劑質(zhì)量標準的研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2009,36(9)：1559-1560.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京:化學工業(yè)出版社，2010:282.

[3]肖慶祥，江紀武.植物藥有效成分手冊[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1986:20.

[4]張璐,仇繼璽,劉瑞新. 柴芩合劑提取工藝研究[J].中醫(yī)學報,2014,19(191):540-542.

[5]彭凱麗,李新民,李元林,等.正交試驗優(yōu)選復(fù)方桑菊口服液中藥材的提取工藝[J].中國藥房,2014,25(3):243-245.

The Extraction Technology of Orthogonal Experiment Optimization of Qingre Runfei Mixture

XU Yong

(Department of Pharmacy, Benxi Hospital of TCM, Liaoning, Benxi 117000, China)

ObjectiveTo optimize the best extraction technology of Qingre Runfei mixture. MethodsThe orthogonal experiment method was employed to study the best extracted technique with the content of baicalin and extraction rate taken as indexes by water volume, decocting times and decocting time as factors. ResultsThe best optimal water extraction technology conditions for optimization were as follows: decocted in water twice for 1.5 hour each time. ConclusionThe research provided basis for the dosage form reform of Qingre Runfei mixture and optimization of extraction technology.

Orthogonal experiment; Qingre Runfei mixture; Extraction technology; Baicalin

遼寧省本溪市中醫(yī)院藥劑科(本溪 117000)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.03.022

1003-8914(2016)-03-0348-02

(本文校對：張葉2015-05-11)