Th17細(xì)胞及白細(xì)胞介素17A、17F對特應(yīng)性皮炎患者病情的影響

任小麗，蘇湘川，石青青，胡雅玉，陳祥恩，陳?。ㄕ憬∨_州市立醫(yī)院，臺州318000）

Th17細(xì)胞及白細(xì)胞介素17A、17F對特應(yīng)性皮炎患者病情的影響

任小麗，蘇湘川，石青青，胡雅玉，陳祥恩，陳健
（浙江省臺州市立醫(yī)院，臺州318000）

目的研究不同嚴(yán)重程度特應(yīng)性皮炎患者Th17細(xì)胞及白細(xì)胞介素（IL）-17A、IL-17F的變化，探討其在特應(yīng)性皮炎發(fā)病中的作用。方法采用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同嚴(yán)重程度特應(yīng)性皮炎患者外周血Th17細(xì)胞的比例，采用ELISA測定培養(yǎng)上清液中IL-17A、IL-17F表達(dá)水平，以健康成人作為對照。結(jié)果輕度AD患者與正常人比較，外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平增高（P＜0.05）；中度AD患者與正常人比較，外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17A水平明顯增高（P＜0.01）；重度AD患者與正常對照組比較，IL-17F水平增高（P＜0.05）；中度AD患者與輕度AD患者比較，外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17A水平增高（P＜0.05）；重度AD患者與中度AD患者比較，外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17A水平增高（P＜0.05）。結(jié)論Th17細(xì)胞及IL-17A、IL-17F可能在AD的發(fā)生及發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

特應(yīng)性皮炎；Th17細(xì)胞；白細(xì)胞介素-17A；白細(xì)胞介素-17F

特應(yīng)性皮炎（Atopic dermatitis，AD）是一種慢性、復(fù)發(fā)性、瘙癢性皮膚病，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。本病發(fā)病原因復(fù)雜，可能與遺傳、感染、環(huán)境因素及免疫功能障礙有關(guān)。目前AD的發(fā)病具體機(jī)制尚不清楚，有研究發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞與AD的發(fā)病有關(guān)［1］，但不同嚴(yán)重程度的AD患者與Th17型細(xì)胞及其所分泌的細(xì)胞因子的相關(guān)性的報(bào)道少見。本研究對不同嚴(yán)重程度AD患者外周血Th17細(xì)胞比例及所分泌的細(xì)胞因子IL-17A、IL-17F的水平進(jìn)行研究，進(jìn)一步探討AD的發(fā)病、發(fā)展與Th17細(xì)胞之間的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料所選病例為2012年6月—2014 年10月就診于臺州市立醫(yī)院皮膚科門診AD患者98例，全部符合Williams特應(yīng)性皮炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。所有病例在入選前停用抗組胺藥1周以上，停用系統(tǒng)糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑或光療1個月以上。除外合并系統(tǒng)感染、免疫系統(tǒng)疾病、或肝、腎、造血系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病和精神疾病的患者。其中38例不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，予以剔除，剩余60例符合納入標(biāo)準(zhǔn)，作為試驗(yàn)組。病情嚴(yán)重程度按歐洲特應(yīng)性皮炎評分標(biāo)準(zhǔn)（SCORAD）進(jìn)行評分［3］，評分越高，病情越重，按分值從低到高分為3組，＜25分為輕度組，25～50分為中度組，＞50分為重度組。試驗(yàn)組患者中輕度21例，男13例，女8例，年齡2～19歲，平均（9.27±3.25）歲；中度20例，其中男12例，女8例，年齡3～21歲，平均（8.69±3.12）歲；重度19例，其中男12例，女7例，年齡1～20歲，平均（9.21±3.82）歲。正常對照組20例，均來自我院健康體檢中心和兒內(nèi)科門診，其中男11例，女9例，年齡1～22歲，平均年齡（10.31±4.02歲）。各組AD患者及健康對照組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2方法

1.2.1外周血單一核細(xì)胞（PMBC）的分離空腹采集各組受試對象外周靜脈血5 mL，EDTA抗凝，F(xiàn)icoll密度梯度離心法分離PBMC。

1.2.2外周血Th17細(xì)胞比例檢測CD4+IL-17+T細(xì)胞/CD4+T細(xì)胞：將PBMC在含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中調(diào)整至2×106細(xì)胞/mL，加入50 μg/L佛波酯、鈣離子載體和布雷菲德菌素A共刺激培養(yǎng)5 h（37℃，5%CO2）；細(xì)胞膜異硫氰酸熒光素（FITC）-CD4單克隆抗體標(biāo)記；透膜、固定后進(jìn)行藻紅蛋白（PE）-IL-17單克隆抗體胞內(nèi)染色。winMDI2.9軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2.3IL-17A和IL-17F的檢測將2 mL外周血1 500 r/min，離心5 min后，收集血清-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用酶?lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測血清IL-17A和IL-17F水平，IL-17A和IL-17F試劑盒均由上海藍(lán)基（BG）公司提供，操作步驟按照說明書進(jìn)行，檢測儀器為MK3-酶標(biāo)儀（芬蘭）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以±s表示，多組間比較方差齊者采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊者采用Tamhane檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

與正常人比較，輕度、中度AD患者外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17A水平均明顯增高（P＜0.01）；重度AD患者與正常對照組比較，IL-17F水平增高（P＜0.05）；中度AD患者與輕度AD患者比較，外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17A水平增高（P＜0.05）；重度AD患者與中度AD患者比較，外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17A水平增高（P＜0.05），見表1。

3　討論

表1　各組受試者外周血中Th17細(xì)胞比例及IL-17A、IL-17F水平比較?。╯）

表1　各組受試者外周血中Th17細(xì)胞比例及IL-17A、IL-17F水平比較?。╯）

注：與正常人對照比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與輕度AD患者比較△P＜0.05；與中度AD患者比較☆P＜0.05。

組別　nTh17細(xì)胞（%） IL-17A（pg/mL） IL-17F（pg/mL）健康對照組　20　1.31±0.33　10.23±1.85　4.65±0.38輕度AD組　21　2.15±0.45*　19.53±3.12*　5.25±0.85中度AD組　20　3.92±0.58**△　28.23±3.35**△　5.13±0.63重度AD組　19　5.22±0.74**△☆　41.17±6.37**△☆　7.89±0.81*

Th17細(xì)胞是近年發(fā)現(xiàn)不同于Th1、Th2的CD4+T細(xì)胞亞群，具有較強(qiáng)的促炎癥作用，與多種炎癥性疾病及自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。Th17細(xì)胞主要依靠分泌細(xì)胞因子發(fā)揮功能，主要分泌的細(xì)胞因子有IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-6、TNF-α等，其中最主要的效應(yīng)分子為IL-17A，其次有IL-17F、IL-22、IL-21。隨著對Th17細(xì)胞研究的深入，發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞除和系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬皮病、炎癥性腸病和銀屑病等自身免疫性疾病相關(guān)外，還與過敏性哮喘、AD等過敏性疾病關(guān)系密切［4］。沈斌等［5］研究顯示急性期AD患者外周血Th17細(xì)胞比例顯著升高，外周血中IL-17水平急性期高于正常對照組及慢性期。IL-17能激活角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生固有免疫防御，保護(hù)皮膚免受到病原菌入侵［6］。IL-17A 是IL-17細(xì)胞因子家族成員之一，是Th17細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能的主要效應(yīng)因子。IL-17A和IL-17F均主要由Th17細(xì)胞產(chǎn)生，通常同時表達(dá)［7］。IL-17F通過招募中性粒細(xì)胞并有效促進(jìn)多種細(xì)胞因子釋放，參與機(jī)體多種炎性疾病的發(fā)生、發(fā)展，不同于IL-17A，IL-17F誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的活性較低［8］。鄒明華等［9］研究顯示AD患者皮損及正常皮膚均有IL-17A mRNA的表達(dá)，但AD患者皮損中IL-17A mRNA的表達(dá)水平明顯高于正常皮膚組織，且其表達(dá)量與患者濕疹面積及嚴(yán)重程度指數(shù)（EASI）評分呈顯著的正相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)不同嚴(yán)重程度AD患者外周血Th17細(xì)胞及IL-17A與正常對照組比較，均有不同嚴(yán)重程度的增高，且隨著病情加重而增高更明顯，重度AD患者與輕中度患者比較，亦有所增高，重度AD患者外周血IL-17F水平與正常人比較同樣有所增高。因?yàn)锳D患者發(fā)病前可能出現(xiàn)免疫失衡，介導(dǎo)免疫損傷，通過Th17細(xì)胞及IL-17A、IL-17F表達(dá)增強(qiáng)，從而對AD的發(fā)生及病情發(fā)展中起著重要作用。目前AD的確切發(fā)病機(jī)制尚未闡明，因此從根本上控制本病仍難以實(shí)現(xiàn)。進(jìn)一步研究其發(fā)病機(jī)制，對于改善當(dāng)前的治療手段、開發(fā)新的治療方法非常必要［10］。目前國際上已開始研發(fā)多種生物制劑，例如作用于IL-17及其受體的靶向藥物，如IL-17R-Ig融合蛋白、IL-17抗體等，可嘗試用此類生物制劑改善AD患者的免疫狀態(tài)、緩解病情。

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Effects of Th17，IL-17A and IL-17F on Patient's Condition of Atopic Dermatitis

Ren Xiaoli，Su Xiangchuan，Shi Qingqing，Hu Yayu，Chen Xiang'en，Chen Jian
Taizhou Municipal Hospital in Zhejiang Province，Taizhou 318000，China

ObjectiveIn order to investigate the variations of Th17，IL-17A and IL-17F in peripheral blood of the patients with different severity atopic dermatitis（AD）and explore their significances.MethodsThe percentage of Th17 cells in peripheral blood of patients with AD were determined by flow cytometry，the levels of IL-17A，IL-17F were detected by ELISA，meanwhile，in healthy adults as controls.ResultsThe percentage of Th17 cells and the level of IL-17A were increased in patients with the mild AD in comparison with healthy controls（P＜0.05）.The percentage of Th17 cells and the level of IL-17A were significantly higher in patients with the moderate AD than those of healthy controls（P＜0.01）.The level of IL-17F significantly increased in patients with the severe AD in comparison with in healthy controls（P＜0.05）.The percentage of Th17 cells and the level of IL-17A were higher in patients with the moderate AD than the mild AD（P＜0.05）.The percentage of Th17 cells and the level of IL-17A were higher in patients with the severe AD in comparison with that the moderate AD（P＜0.05）. Conclusion The Th17 cell，IL-17A and IL-17Fmay play an important role in the onset，development of patients with AD.

Atopic dermatitis；T Helper Type 17 Cells；Interleukin-17A；Interleukin-17F

R

A

1672－0709（2016）03-0163－03

2015-02-05）