血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2聯(lián)合檢測對糖尿病腎病的診斷價值

董喜環(huán)

(河南省商丘市第一人民醫(yī)院分院檢驗科　476100)

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血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2聯(lián)合檢測對糖尿病腎病的診斷價值

董喜環(huán)

(河南省商丘市第一人民醫(yī)院分院檢驗科476100)

摘要:目的觀察中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白(NGAL)、胱抑素C(CysC)、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)及基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)聯(lián)合檢測診斷2型糖尿病腎病(T2DN)的價值。方法149例2型糖尿患者依據(jù)尿蛋白結(jié)果分成3組：正常蛋白尿組(NA組)，微量蛋白尿組(MA組)和臨床腎病組(CN組)。選取同期50例健康體檢者為對照組(NC組)。分析并比較各組血清NGAL、CysC、RBP、MMP-2水平。結(jié)果NA組、MA組和CN組血清中NGAL、CysC、RBP水平顯著高于NC組(P<0.05或P<0.01)，MMP-2水平顯著低于NC組(P<0.01)。NA組、MA組、CN組NGAL、CysC、RBP及MMP-2聯(lián)合檢測的陽性率分別為66.0%、85.7%、92.0%，均高于單項檢測的陽性率(P<0.05)。NGAL與CysC、RBP呈正相關(guān)(P<0.05)，與MMP-2呈負相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論DN患者中血清NGAL、CysC、RBP顯著升高，MMP-2顯著降低，聯(lián)合檢測可作為DN的早期監(jiān)控評估指標(biāo)。

關(guān)鍵詞:中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白；血清胱抑素 C；基質(zhì)金屬蛋白酶-2；視黃醇結(jié)合蛋白；糖尿病腎病

糖尿病腎病(DN)為2型糖尿病常見的慢性并發(fā)癥，主要表現(xiàn)為微血管循環(huán)障礙及微血管基底膜增厚，是終末期腎病發(fā)生的常見因素，嚴重影響患者的身心健康和生活質(zhì)量[1]。因此，DN的早期診斷具有一定的臨床意義。中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白(NGAL)為一種分泌性糖蛋白，屬于脂質(zhì)運載蛋白超家族成員之一，是在腎臟損傷的情況下通過腎小管上皮細胞所分泌而成，與慢性腎損傷的發(fā)生和進展存在一定的聯(lián)系[2]。胱抑素C(CysC)與早期腎小球濾過率功能變化有關(guān)，為評價腎損傷的理想的內(nèi)源性物質(zhì)[3]。視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)為一種小分子親脂載體蛋白，和腎近曲小管功能相關(guān)，是反映腎小管發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的有效指標(biāo)[4]?；|(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)為一種基質(zhì)金屬酶，與腎小球細胞外基質(zhì)降解有關(guān)，能反映DN的發(fā)生、發(fā)展及蛋白尿的產(chǎn)生[5]。本文通過分析血清NGAL、CysC、RBP、MMP-2水平，探討四者之間的相關(guān)性，為2型糖尿病腎病(T2DN)早期診斷提供參考。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2009～2015年在本院就診的149例T2DN患者作為研究對象，均符合1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有患者依據(jù)尿微量清蛋白排泄率(UAER)分成3組，其中正常蛋白尿組50例(NA組，UAER<30 mg/24 h)，男21例，女29例，年齡27～79歲，平均(53.2±8.2)歲；微量蛋白尿組49例(MA組，UAER介于30～300 mg/24 h)，男20例，女29例，年齡27～78歲，平均(51.5±7.9)歲；臨床腎病組50例(CN組，UAER>300 mg/24 h)，男23例，女27例，年齡28～80歲，平均(54.1±8.4)歲。選擇同期50例體檢健康者作為對照組(NC組)，其中男21例，女29例，年齡28～78歲，平均(52.5±7.8)歲，排除糖尿病及其他腎臟疾病史。各組成員在性別、年齡等一般資料方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法所有研究對象均于清晨采集空腹肘部靜脈血3 mL，靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min分離血清，并置于-20 ℃冰箱凍存?zhèn)溆?。采用日?600 型全自動生化分析儀(比色法)測定尿清蛋白水平。清蛋白檢測試劑盒(Beckman-Coulter公司)。采用膠乳增強免疫比濁法測定NGAL的水平，NGAL試劑盒由上海申科設(shè)備有限公司提供(批號20131102)。采用免疫比濁法測定CysC、RBP，CysC試劑盒由北京利德曼生化股份有限公司提供(批號304217D)，RBP試劑盒由寧波美康生物科技股份有限公司提供(批號20140712)。采用日本BIO-RAD (伯樂)公司Model 680型全自動酶標(biāo)儀(ELISA法)測定MMP-2水平，MMP-2試劑盒由南京建成生物研究所提供(批號20131209)。其中NGAL、CysC、RBP測定值高于其正常參考范圍為陽性，MMP-2低于正常值范圍為陽性，NGAL、CysC、RBP及MMP-2中1項陽性即為聯(lián)合檢測陽性。

2結(jié)果

2.1各組血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2指標(biāo)比較糖尿病患者中NA組NGAL、CysC、RBP及MMP-2水平均顯著高于NC組(P<0.01)。MA組和CN組中4項指標(biāo)分別與NA組和NC組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。MA 組和CN組4項指標(biāo)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　　各組血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2水平比較

注：與NC組比較，aP<0.05,bP<0.01；與NA組比較，cP<0.05，dP<0.01；與MA組比較，eP<0.05。

2.2各組血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2陽性檢出率比較NA組聯(lián)合檢測陽性率明顯高于單項檢測血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2陽性率(χ2=11.594、15.705、18.007、39.286；P=0.001、0.000、0.000、0.000)；MA組聯(lián)合檢測陽性率明顯高于單項檢測血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2陽性率(χ2=6.666、8.287、6.666、11.921；P=0.01、0.004、0.01、0.001)；CN組聯(lián)合檢測陽性率明顯高于單項檢測血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2陽性率(χ2=4.421、5.980、11.481、13.550，P=0.036、0.014、0.001、0.000)。見表2。

表2　　各組血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2陽性檢出率比較[n(%)]

2.3相關(guān)性分析NGAL與CysC、RBP呈正相關(guān)(r=0.573、0.461，P<0.05)，與MMP-2呈負相關(guān)(r=-0.418，P<0.05)。

3討論

NGAL為一種脂質(zhì)運載蛋白，在人體中分布廣泛，尤其在中性粒細胞中水平較高，同時在腎臟、支氣管、胸腺等區(qū)域也有不同程度的表達。NGAL與機體的炎癥、免疫應(yīng)答等存在一定的聯(lián)系，其機制與介導(dǎo)鐵的轉(zhuǎn)運相關(guān)，NGAL可以預(yù)測早期腎損害程度[6]。有研究認為，NGAL一般在近端小管和遠側(cè)腎單位表達，并行使鐵轉(zhuǎn)運功能，協(xié)調(diào)腎間充質(zhì)細胞和腎小管上皮細胞生長和轉(zhuǎn)化，誘導(dǎo)腎臟損傷時腎小管上皮細胞的再生和成熟，改善腎功能[7]。因此，在腎臟多種疾病發(fā)生和進展過程中，機體血液中NGAL水平會發(fā)生明顯改變。本研究結(jié)果顯示，MA組和CN組患者的 NGAL水平明顯高于NC組和NA組，而NA組高于NC組，說明早期DN患者血中尚未出現(xiàn)尿清蛋白時，NGAL水平已經(jīng)呈現(xiàn)較高水平，并伴隨DN病情加重而升高。這與腎的損傷程度密切有關(guān)，在炎癥的影響下，中性粒細胞釋放大量的NGAL，同時誘導(dǎo)機體肝臟等過表達NGAL，而損傷的腎臟必然出現(xiàn)腎小球濾過率受到破壞，降低了對NGAL的清除，結(jié)果導(dǎo)致血清中NGAL水平升高。

CysC是一種非糖化小分子蛋白，在人體各種體液中穩(wěn)定分布，而且不同的年齡、性別、炎癥及病理變化對其濃度影響較小。CysC分子較小，能自由經(jīng)腎小球濾過，然后通過近曲小管進行重吸收并代謝，因此腎臟是清除CysC的主要器官。當(dāng)機體的腎小球產(chǎn)生輕微損傷時，血液中的CysC將會維持較高水平，并伴隨腎病的加重，CysC水平逐步升高。因此，CysC可以作為反映腎小球功能的有效內(nèi)源性指標(biāo)[8]。本研究結(jié)果顯示，CysC水平隨著DN病情的發(fā)展，各組CysC水平和陽性率逐步增高，而且該指標(biāo)在DN早期病變的NA組部分患者CysC升高。因此，采用CysC水平變化評價腎小球濾過率，敏感度較高，早期能有效指導(dǎo)臨床干預(yù)。

RBP是產(chǎn)生于肝細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的小分子蛋白，其半衰期較短，主要分布于血清、腦脊液和尿液等體液中。通常RBP與視黃醇等結(jié)合形成復(fù)合物，協(xié)助轉(zhuǎn)運視黃醇。RBP與受體結(jié)合后，解離后的RBP主要通過腎小球濾出，并由腎小管重吸收和降解。當(dāng)機體腎臟受到損傷時，腎小球濾過功能受到破壞，血清RBP水平明顯升高[9]。因此，可以通過檢測血清RBP水平來評價腎臟功能。本研究中，DN組的RBP水平明顯高于NC組，并伴隨病情的加重，RBP水平也明顯升高。

MMP-2為腎臟中活性較強的基質(zhì)金屬酶，可以協(xié)調(diào)機基膜正常新陳代謝，其表達異常時，機體中的Ⅳ型膠原表達和降解平衡被打破，結(jié)果機體出現(xiàn)細胞外基質(zhì)的降解、腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化。研究顯示，MMP-2表達異常時，能誘導(dǎo)腎小球系膜細胞轉(zhuǎn)變?yōu)檠装Y表型并快速增殖，部分細胞外基質(zhì)出現(xiàn)沉積，導(dǎo)致機體腎小球硬化的發(fā)生。同時通過IV型膠原降解基底膜，破壞腎小球細胞與基質(zhì)間正常結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)并重塑腎小球細胞外基質(zhì)[10]。本研究中，DN各組的MMP-2水平明顯低于NC組，并且伴隨尿清蛋白水平的升高，MMP-2水平明顯下降，這與以往研究一致[10]，因此，MMP-2可以作為DN的診斷指標(biāo)。

本研究顯示，NGAL與CysC、RBP呈正相關(guān)，與MMP-2呈負相關(guān)，并伴隨DN病情的發(fā)展，NGAL、CysC、RBP及MMP-2水平發(fā)生明顯的變化。同時本研究還針對DN患者NGAL、CysC、RBP及MMP-2這4項指標(biāo)單獨檢測或聯(lián)合檢測對DN早期診斷的臨床價值進行了比較，結(jié)果顯示，NA組、MA組和CN組的四項指標(biāo)聯(lián)合檢測的陽性率分別為66.0%、85.7%、92.0%，與不同時期單項NGAL、CysC、RBP及MMP-2的陽性率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，這說明4項指標(biāo)聯(lián)合檢測敏感性明顯優(yōu)于NGAL、CysC、RBP及MMP-2單項檢測，且與腎臟的損害程度及DN的進展相平行，結(jié)合NGAL與CysC在早期DN患者的敏感性，采用聯(lián)合檢測血清中4項指標(biāo)，能明顯提高DN的早期診斷陽性率，提高診斷準(zhǔn)確性，為早期治療和預(yù)防提供參考。

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作者簡介：董喜環(huán)，女，副主任技師，主要從事臨床檢驗研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.026

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)14-1965-03

(收稿日期：2016-01-22修回日期：2016-03-24)

Diagnostic value of combined detection of serum NGAL,CysC,RBP and MMP-2 in diabetic nephropathy

DONGXihuan

(DepartmentofClinicalLaboratory，BranchHospitalofShangqiuMunicipalFirstPeople′sHospital,Shangqiu,Henan476100,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the value of the combined detection of NGAL,CysC,RBP and MMP-2 in the diagnosis of type 2 diabetic nephropathy (T2DN).MethodsA total of 149 cases of type 2 diabetes mellitus(T2DM) were divided into three groups according to the urine protein detection results:normal proteinuria group (NA group),micro proteinuria group (MA group) and clinical nephropathy group (CN group).Contemporaneous 50 individuals undergoing healthy physical examination were selected as the control group (NC group).The NGAL,CysC,RBP and MMP-2 levels were analyzed and compared among 4 groups.ResultsThe serum NGAL,CysC and RBP levels in the NA group,MA group and CN group were significantly higher than in the NC group (P<0.05 or P<0.01),while the MMP-2 level was significantly lower than that in the NC group (P<0.01).The positive rate of combined detection of NGAL,CysC,RBP and MMP-2 in the NA group,MA group and CN group were 66.0%,85.7% and 92% respectively,which were higher than those of single detection (P<0.05).NGAL was positively correlated with CysC and RBP (P= 0.05) and negatively correlated with MMP-2 (P<0.05).ConclusionThe serum levels of NGAL,CysC,RBP and MMP-2 in the DN patients are significantly increased,while the MMP-2 level is significantlt decreased.Their combined detection can be used as an early monitoring and evaluation index of DN.

Key words:NGAL;CysC;MMP-2;retinol binding protein;diabetic nephropathy