陳麗文,王艷平
(1.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院 a.林學(xué)系;b.財(cái)經(jīng)系,河南 信陽(yáng) 464000;2.信陽(yáng)師范學(xué)院 大別山農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用研究院,河南 信陽(yáng) 464000)
低溫能夠影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育和生理生態(tài)效應(yīng)[1].在低溫處理的過程中,植物的葉綠素含量、光合效率、抗氧化酶系統(tǒng)都能發(fā)生變化[2].因此判斷植物抗寒性的依據(jù)可以通過生理和光合指標(biāo)來(lái)表現(xiàn).油茶,常綠小喬木,原產(chǎn)中國(guó),主要集中在南方亞熱帶地區(qū),以高山和丘陵地帶為主[3].由于油茶的產(chǎn)量較低,1960年以來(lái),中國(guó)科研工作者開始了油茶的選育研究,并取得了一系列的研究成果,但是油茶對(duì)低溫的抵抗力的生理學(xué)研究較少.影響油茶生長(zhǎng)發(fā)育并且對(duì)于油茶的地理分布產(chǎn)生限制性作用的環(huán)境因子有很多,其中溫度是主要因素[4].實(shí)驗(yàn)證明,植物抗氧化能力與體內(nèi)的抗氧化物酶緊密聯(lián)系,油茶中過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)均屬于細(xì)胞膜保護(hù)酶, 在活性氧代謝中發(fā)揮重要作用, 具有一定的穩(wěn)定性,并且影響植物的抗逆性[5-8],而溫度又是影響酶活性的主要因素之一.因此本文以廣西油茶和湖南油茶為研究對(duì)象,通過研究低溫對(duì)這兩種油茶中最大光化學(xué)效率以及SOD、CAT、POD三種抗氧化物酶活性的影響,揭示低溫對(duì)兩種油茶的生理生態(tài)效應(yīng).
試驗(yàn)的材料為廣西油茶(Camelliaoleifera, Guangxi)和湖南油茶Camelliaoleifera, Hunan).
光照培養(yǎng)箱, LX-1332型照度計(jì)(日本三菱儀表),便攜式葉綠素?zé)晒鈨x (PEA,Hansatech,U.K.).
選取長(zhǎng)勢(shì)一致,大小相同的無(wú)病毒幼苗,保證水分營(yíng)養(yǎng)等適宜的生長(zhǎng)環(huán)境,在-10 ℃、0 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃的溫度梯度下處理兩種材料,人工氣候箱處理6 h,光照強(qiáng)度為20 000 Lx.以25 ℃為對(duì)照.培養(yǎng)15 d后,開始測(cè)定實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在不同溫度下葉綠素?zé)晒獾南嚓P(guān)參數(shù),儀器為超便攜式葉綠素?zé)晒鈨x,測(cè)定葉片的最大光化學(xué)效率(Fv/Fm).在室溫下測(cè)定,激發(fā)光強(qiáng)為最大光強(qiáng)的100%(約3000 μE/(m2·s)),葉片暗適應(yīng)時(shí)間不少于15 min,記錄時(shí)間為6 s.(Fv/Fm) 作為可變熒光與最大熒光之比.與此同時(shí)選取試驗(yàn)組和對(duì)照組中相同部位葉片,提取內(nèi)含物,用離心機(jī)離心后,測(cè)定三種抗氧化物酶即CAT、SOD、POD的酶活性[6].
試驗(yàn)數(shù)據(jù)在計(jì)算機(jī)中采用Excel進(jìn)行整理,并繪制圖表.
植物的最大光化學(xué)效率(Fv/Fm) 反映了植物的最大光學(xué)潛能.在溫度梯度下,廣西油茶對(duì)照組的最大光化學(xué)效率維持在0.8左右,湖南油茶對(duì)照組的最大光化學(xué)效率一般在0.75~0.8之間.由此可見溫度對(duì)兩種油茶的最大光化學(xué)效率(Fv/Fm) 的影響不明顯.經(jīng)過低溫處理后,兩種油茶的(Fv/Fm) 值逐漸下降,湖南油茶下降幅度相對(duì)要小,在-10 ℃時(shí)達(dá)到最低值0.55,廣西油茶下降幅度相對(duì)較大,在-10 ℃時(shí)達(dá)到最低值0.3,見圖1.
機(jī)體受活性氧毒害程度可以通過過氧化氫酶的活性來(lái)體現(xiàn).順著溫度梯度,過氧化氫酶的活性發(fā)生變化,其中湖南油茶和廣西油茶對(duì)照組均在10 ℃時(shí)酶活性最高.經(jīng)過低溫處理后,廣西油茶在20 ℃時(shí)酶活性最高,并且變化幅度相對(duì)較大,湖南油茶在15 ℃時(shí)酶活性最高,變化幅度相對(duì)較小,見圖2.
圖1 不同溫度下2種油茶的最大光化學(xué)效率 (Fv/Fm) 變化(對(duì)照:25 ℃) 圖2 不同溫度下2種油茶過氧化氫酶 CAT活性變化(對(duì)照:25 ℃) Fig. 1 The value of (Fv/Fm) change in Camel-lia oleiferaunder different temperature(control:25 ℃) Fig. 2 The changes of catalase activities in Camellia oleifera under different temperature(control:25 ℃)
超氧化物歧化酶SOD的活性可以評(píng)價(jià)機(jī)體受污染的程度.在溫度梯度下超氧化物歧化酶SOD活性隨溫度發(fā)生變化.其中廣西油茶和湖南油茶對(duì)照組在15 ℃時(shí)酶活性最高,分別為80 U和45 U.經(jīng)過低溫處理后,廣西油茶和湖南油茶中的超氧化物歧化酶活性發(fā)生變化,均在20 ℃酶活性最高,分別為110 U和80 U.并且廣西油茶酶活性變化幅度較大,在-10 ℃時(shí)酶活性為0,見圖3.
過氧化物酶可以判斷組織老化程度.在溫度梯度下過氧化物酶活性隨著溫度發(fā)生變化,其中廣西油茶和湖南油茶對(duì)照組均在15 ℃時(shí)酶活性最高分別為45 U和25 U.經(jīng)過低溫處理后2種油茶中過氧化物酶活性均發(fā)生變化,廣西油茶仍在15 ℃酶活性達(dá)到最高45 U,但是變化幅度較對(duì)照組更大,湖南油茶在10 ℃時(shí)酶活性最高,并且變化幅度相對(duì)對(duì)照組也更大,見圖4.
圖3 不同溫度下2種油茶中超氧化物 歧化酶SOD活性變化(對(duì)照:25 ℃) 圖4 不同溫度下2種油茶中過氧化物酶 POD的活性變化(對(duì)照:25 ℃) Fig. 3 The changes of superoxide dismutase activities in two Camellia oleifera under different temperature(control:25 ℃) Fig . 4 The change of peroxidase activities in two Camellia oleifera under different temperature(control:25 ℃)
溫度的變化對(duì)兩種油茶的最大光化學(xué)效率(Fv/Fm) 的影響不大,但是低溫處理后,2種油茶的(Fv/Fm) 值都呈下降趨勢(shì),其中湖南油茶的變化趨勢(shì)相對(duì)于廣西油茶更大,說明低溫能使兩種油茶的最大光化學(xué)效率下降,但是對(duì)湖南油茶的影響更大.本文僅以廣西油茶和湖南沒茶兩個(gè)品種為研究對(duì)象,研究了低溫對(duì)油茶中(Fv/Fm) 以及SOD、CAT、POD等3種抗氧化物酶活性的影響,從而提示低溫對(duì)這2種油茶的生理生態(tài)效應(yīng).