熱敏灸對(duì)人體免疫失衡影響的實(shí)驗(yàn)研究

蘇利強(qiáng)，吳麗珺，張 瑋

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004；2.河南教育學(xué)院，河南 鄭州 450014)

0 引言

正常人體免疫機(jī)能一般處于免疫穩(wěn)態(tài)，細(xì)胞免疫和體液免疫在機(jī)體免疫平衡中起重要作用，細(xì)胞免疫和體液免疫失衡可造成有機(jī)體免疫系統(tǒng)功能紊亂，導(dǎo)致免疫力下降、甚至疾病發(fā)生[1-2].針灸學(xué)技術(shù)作為我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)特有的臨床治療方法，對(duì)損傷治療和疲勞恢復(fù)具有獨(dú)特療效，足三里為三焦之氣所生處，為補(bǔ)益元?dú)狻⒄{(diào)和氣血，補(bǔ)虛強(qiáng)壯之要穴[3-4].針灸足三里可以“補(bǔ)益元?dú)?、調(diào)和氣血”，可扶正、祛邪，調(diào)節(jié)臟腑功能，減緩疲勞發(fā)生，調(diào)節(jié)免疫平衡[5].機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫通常處于平衡狀態(tài)，細(xì)胞免疫由Th1類細(xì)胞因子介導(dǎo)，IFN-γ對(duì)細(xì)胞免疫具有重要激活作用，體液免疫由Th2類細(xì)胞因子介導(dǎo)，IL-4對(duì)體液免疫中具有重要激活作用，IFN-γ和IL-4是免疫系統(tǒng)一對(duì)重要的相互調(diào)節(jié)因子，IFN-γ/IL-4保持一定的比值是有機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)揮正常功能的保證，大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)可導(dǎo)致IFN-γ/IL-4比例發(fā)生變化，使機(jī)細(xì)胞免疫機(jī)能相對(duì)下降，而體液免疫變化不明顯[6-7].在前期研究中，已證實(shí)了足三里穴位針刺在治療大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)所致Th1/Th2失衡過程中的顯著作用[8].近年來，陳日新等發(fā)現(xiàn)了一種新型的中醫(yī)療法——熱敏懸灸，全稱“腧穴熱敏化艾灸新療法”，簡稱“熱敏灸”，是把艾絨作為主要灸料，放置于腧穴或病變部位，然后點(diǎn)燃進(jìn)行燒灼和熏熨的一種治療方法[9].該療法2006年10月28日經(jīng)國家技術(shù)鑒定評(píng)選為原始創(chuàng)新技術(shù)，2015年《熱敏灸技術(shù)的創(chuàng)立及推廣應(yīng)用》獲國家科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)[10]，現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)認(rèn)為灸療實(shí)質(zhì)是一種溫?zé)岽碳さ慕Y(jié)果，通過刺激皮膚感受器，激發(fā)和調(diào)整神經(jīng)系統(tǒng)的機(jī)能，達(dá)到治病保健的目的，然而熱敏灸除了溫?zé)岽碳ね膺€有其藥性和紅外輻射的作用，當(dāng)然還有一些現(xiàn)代科技無法解釋的作用[13].鑒于此，本研究探討了足三里施熱敏灸對(duì)機(jī)體免疫失衡的效果及機(jī)制.

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

募集17名身體健康，沒有內(nèi)分泌疾病的男性受試者.簽署知情同意書，隨機(jī)分成2組.對(duì)照組8人，年齡為18.1±0.78；熱敏灸組9人，年齡為18.2±0.79.

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑盒及儀器

IFN-γ檢測(cè)試劑盒、IL-4檢測(cè)試劑盒、IL-12檢測(cè)試劑盒、IL-10檢測(cè)試劑盒、IL-12p40檢測(cè)試劑盒;跑臺(tái)、酶標(biāo)儀、熱掃描成像系統(tǒng)Ver6.0 For Windows、熱敏灸艾條等.

1.3 研究方法

1.3.1 免疫失衡模型建立 于2013年7月14日—7月20日對(duì)受試者進(jìn)行高強(qiáng)度的籃球集訓(xùn)，每天訓(xùn)練時(shí)間為15：00-17:30，主要內(nèi)容有技戰(zhàn)術(shù)訓(xùn)練、實(shí)戰(zhàn)性分組比賽、體能訓(xùn)練，時(shí)間分配各為1/3左右，具體內(nèi)容按照教練安排進(jìn)行.最后一天完成正常集訓(xùn)后再進(jìn)行一次遞增負(fù)荷跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，以受試者不能再堅(jiān)持預(yù)訂速度為結(jié)束標(biāo)準(zhǔn)，跑臺(tái)遞增運(yùn)動(dòng)負(fù)荷程序見表1，跑臺(tái)前準(zhǔn)備活動(dòng)4～5 min.

表1 遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)程序設(shè)定Tab. 1 Incremental Exercise program settings

1.3.2 干預(yù)方法 熱敏灸組受試者選擇舒適、充分暴露病位的體位.在下肢膝關(guān)節(jié)外下側(cè)足三里附近查找熱敏化腧穴，用點(diǎn)燃的“純艾條”在受試者下肢膝關(guān)節(jié)外下側(cè)足三里附近的壓痛點(diǎn)、皮下硬節(jié)等反應(yīng)物部位為中心10 cm為半徑的范圍內(nèi)，距離皮膚2～3 cm左右施行溫和灸.當(dāng)受試者感受到“艾熱”向皮膚深處灌注、向遠(yuǎn)處傳導(dǎo)或向周圍擴(kuò)散時(shí)，此點(diǎn)即為熱敏化腧穴.重復(fù)上述步驟，直至所有的熱敏化腧穴被探查出.熱敏灸的治療方法每次選取2個(gè)熱敏化腧穴上實(shí)施溫和灸，直至透熱現(xiàn)象消失為1次施灸劑量.每天訓(xùn)練結(jié)束后對(duì)熱敏灸組施灸20 min.對(duì)照組采用下肢推拿7 min，腰背部推拿8 min，上肢推拿5 min，均為受試者相互按摩推拿.

1.3.3 血液采集 在7月13日～集訓(xùn)前1 d(運(yùn)動(dòng)前)、7月20日～第7天訓(xùn)練后2 h內(nèi)(運(yùn)動(dòng)后2 h)、第7 d訓(xùn)練完成后休息3 d(7月23日，運(yùn)動(dòng)后3 d)取肘正中靜脈血4 mL，離心后取血漿，-20 ℃保存，待收集完樣本后測(cè)試.血清指標(biāo)采用ELISA方法，按照說明書進(jìn)行測(cè)試.

1.3.4 紅外熱成像 分別在集訓(xùn)前1 d(運(yùn)動(dòng)前)、第7 d訓(xùn)練后即刻、第7 d訓(xùn)練后熱敏灸實(shí)施第5 min、第7 d訓(xùn)練后熱敏灸實(shí)施第20 min進(jìn)行紅外熱成像圖形采集，圖形采集后采用熱掃描成像系統(tǒng)Ver6.0 For Windows對(duì)足三里穴位劃定區(qū)域，計(jì)算該區(qū)域的平均溫度，即為該受試者相應(yīng)時(shí)相的足三里區(qū)域的溫度.

1.3.5 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，差異性比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)，顯著性水平P<0.05.

2 結(jié)果

2.1 血清細(xì)胞因子含量變化情況

對(duì)照組運(yùn)動(dòng)后血清IFN-γ、IFN-γ/IL-4、IL-12含量在運(yùn)動(dòng)后2 h有所下降，但在3 d后已經(jīng)恢復(fù)，IL-4的含量各時(shí)相變化不大，在訓(xùn)練后血清IL-10含量較運(yùn)動(dòng)前有所提升，甚至在第3 d也沒有恢復(fù)到原水平，在訓(xùn)練后血清IL-12p40含量較運(yùn)動(dòng)前有所提升，甚至在第3 d繼續(xù)保持較高水平，運(yùn)動(dòng)一周高強(qiáng)度的訓(xùn)練可使機(jī)體免疫機(jī)能失衡.

熱敏灸組運(yùn)動(dòng)后血清IFN-γ、IFN-γ/IL-4、IL-12含量在運(yùn)動(dòng)后2 h有所下降，在3 d后已經(jīng)恢復(fù).熱敏灸組和對(duì)照組比較，在運(yùn)動(dòng)后3 d IFN-γ/IL-4的比值顯著高于對(duì)照組，顯示熱敏灸可以阻止細(xì)胞免疫的下降，對(duì)修正IFN-γ的下降有一定的效果，可改善Th1/Th2的失衡，見表2.

表2 熱敏灸組和對(duì)照組細(xì)胞因子變化比較Tab. 2 Comparison of cytokine in Heat-sensitive moxibustion group and control

*與對(duì)照組比較P<0.05.

2.2 熱敏灸足三里前后該區(qū)域不同時(shí)相溫度變化

運(yùn)動(dòng)后既要對(duì)受試者進(jìn)行熱敏灸干預(yù)，還要進(jìn)行紅外成像分析，為保證紅外成像采集圖像的質(zhì)量，對(duì)6名受試者進(jìn)行了相應(yīng)時(shí)相的紅外成像的采集，見圖1—圖4，結(jié)果見表3.

表3 熱敏灸前后足三里區(qū)域溫度變化比較Tab. 3 Compare of the temperature in Zusanli regionalbefore and after carrying out heat-sensitive moxibustion

*表示與訓(xùn)練前比較P<0.01，▲表示與訓(xùn)練后比較P<0.01.

圖1 運(yùn)動(dòng)前足三里區(qū)域熱成像圖

圖2 運(yùn)動(dòng)后即刻足三里區(qū)域熱成像圖

圖3 施熱敏灸5 min后足三里區(qū)域熱成像圖

圖4 施熱敏灸20 min后足三里區(qū)域熱成像圖

由表3可以看出，在訓(xùn)練后足三里區(qū)域溫度有所下降，但下降的溫度較少，訓(xùn)練前后比較沒有顯著性差異，當(dāng)實(shí)施熱敏灸5 min后,顯示足三里區(qū)域溫度有較大幅度的提高，平均可以提高4 ℃以上，與訓(xùn)練前和訓(xùn)練后比較均有顯著性提高，對(duì)于比較穩(wěn)定的皮膚溫度來說有較大的幅度的提高，而在實(shí)施熱敏灸20 min后穩(wěn)定依然維持較高的水平與運(yùn)動(dòng)前和運(yùn)動(dòng)后比較有顯著性差異，顯示熱敏灸可以將熱以輻射的形式傳遞給皮膚、肌肉，從而使足三里區(qū)域的溫度升高，使實(shí)施熱敏灸后在足三里區(qū)域出現(xiàn)較大范圍的熱區(qū)域，如圖1—圖4所示白色區(qū)域，顯示熱敏灸提高了足三里區(qū)域的溫度，溫度的提升主要是來自灸的熱量輻射到足三里區(qū)域，這對(duì)于機(jī)體來說是一個(gè)熱的刺激.

3 討論

3.1 運(yùn)動(dòng)與免疫失衡

超量負(fù)荷運(yùn)動(dòng)可使機(jī)體IFN-γ介導(dǎo)的細(xì)胞免疫機(jī)能相對(duì)下降[14-16]，促使Th0向Th1細(xì)胞分化，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)IL-12促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化，增加IFN-γ產(chǎn)生，參與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，在防御細(xì)胞內(nèi)病原菌的感染、腫瘤免疫和自身免疫疾病中發(fā)揮著重要的作用，而IL-4促進(jìn)Th2細(xì)胞的分化，產(chǎn)生IL-4、IL-5和IL-10等細(xì)胞因子，參與機(jī)體的體液免疫應(yīng)答，在防御細(xì)胞外病原菌、某些自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)性疾病中發(fā)揮著重要的作用.IL-12是由P40和P35這2個(gè)亞基組成的異二聚體的細(xì)胞因子-P70，IL-12p40在其中作為一受體拮抗劑而起作用，因此，P40基因啟動(dòng)子的活性及其調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)于IL-12表達(dá)的調(diào)節(jié)更有重要意義.IL-12p40可通過與IL-12p70競爭高親和力的IL-12受體而拮抗具有生物活性的IL-12p70的效應(yīng)，從而扮演了一個(gè)IL-12受體拮抗劑的角色[17-19].

本研究采用高強(qiáng)度訓(xùn)練使機(jī)體對(duì)該負(fù)荷產(chǎn)生了較大的刺激，疲勞出現(xiàn)，使機(jī)體對(duì)負(fù)荷沒有完全適應(yīng)，能量代謝、神經(jīng)機(jī)能、心肺機(jī)能、內(nèi)分泌等機(jī)能發(fā)生變化，而免疫機(jī)能也產(chǎn)生了較大的變化，受試者經(jīng)過一周高強(qiáng)度訓(xùn)練使體細(xì)胞免疫的IFN-γ含量較運(yùn)動(dòng)前有一定的下降，而體液免疫的IL-4含量變化不明顯，使IFN-γ/IL-4比值較運(yùn)動(dòng)前在均值方面有所下降，使Th1/Th2失衡.本研究中7天的集訓(xùn)可以使IL-12在不同時(shí)相發(fā)生變化，變化趨勢(shì)與細(xì)胞免疫因子IFN-γ一致，而IL-10變化趨勢(shì)IFN-γ相反.

3.2 熱敏灸對(duì)免疫失衡的作用效果

學(xué)者通過熱敏灸“大椎”穴對(duì)哮喘大鼠血清IL-4、IFN-γ、免疫球蛋白E含量的研究發(fā)現(xiàn)，熱敏灸可以降低模型大鼠血清IL-4、IgE含量，以及提高IFN-γ/IL-4比值，從而校正提高Th1/Th2失衡，改善哮喘細(xì)胞免疫學(xué)機(jī)制，減輕炎癥反應(yīng)，研究結(jié)果顯示熱敏灸的療效優(yōu)于普通懸灸的對(duì)照組[20].在抑郁癥大鼠模型的研究中，采用熱敏灸治療抑郁癥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)熱敏灸可以使血清E2水平降低、皮質(zhì)酮水平增高，作者認(rèn)為熱敏灸可能通過調(diào)整體內(nèi)內(nèi)分泌激素水平而實(shí)現(xiàn)改善抑郁癥的效果[21].熱敏灸對(duì)失眠的研究中，學(xué)者采用失眠大鼠模型，觀察熱敏灸對(duì)血清促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)酮、甲狀腺素、生長激素和褪黑素水平的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清皮質(zhì)酮、甲狀腺素、生長激素和褪黑素含量均下降，而血清中促腎上腺皮質(zhì)激素含量有所升高.可見熱敏灸能緩解失眠大鼠癥狀，可能與調(diào)節(jié)體內(nèi)激素水平有關(guān)[22].熱敏灸對(duì)白癜風(fēng)的臨床療效研究中，發(fā)現(xiàn)熱敏灸治療局限性白癜風(fēng)具有很好的療效，可能通過促進(jìn)血液循環(huán)、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-10和TNF-α水平來實(shí)現(xiàn)改善免疫機(jī)能，從而治療局限性白癜風(fēng)[23].本研究采用大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致機(jī)體免疫機(jī)能變化，通過熱敏灸干預(yù)足三里，結(jié)果發(fā)現(xiàn)熱敏灸組在運(yùn)動(dòng)后3天IFN-γ/IL-4比值顯著顯著高于對(duì)照組，顯示熱敏灸具有矯正過度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的免疫失衡，從細(xì)胞因子數(shù)據(jù)可以看出，熱敏灸可以上調(diào)運(yùn)動(dòng)后的IFN-γ、IL-12p40的表達(dá)，降低IL-10的表達(dá)，從而改善機(jī)體細(xì)胞免疫機(jī)能.

3.3 熱敏灸對(duì)免疫失衡的作用機(jī)制

熱敏灸在實(shí)施過程中要不斷和患者或受試者交流，了解灸的位置、熱度是否合適，還要注意是否腧穴熱敏化等.在研究熱敏灸的機(jī)制的過程中對(duì)熱量的研究出現(xiàn)在紅外熱像儀的誕生，有學(xué)者對(duì)實(shí)施艾灸的穴位進(jìn)行溫度的測(cè)試發(fā)現(xiàn)艾灸不僅可以使灸的部位溫度升高，還可以使其遠(yuǎn)端相關(guān)部位出現(xiàn)熱效應(yīng)，在同樣的灸療法，同一部位實(shí)施艾灸，在施灸部位的溫度隨時(shí)間的變化而變化[24]，有些隨時(shí)間的延長溫度逐漸升高，有些是在短短的數(shù)分鐘就可以達(dá)到最大溫度，而隨時(shí)間的延長溫度不再增加，反而微微下降等，這些溫度隨時(shí)間的變化重復(fù)體現(xiàn)了個(gè)體差異和對(duì)施灸的敏感程度[25].熱敏灸可以使腧穴部位溫度升高，由于熱敏灸還會(huì)出現(xiàn)遠(yuǎn)端溫?zé)岈F(xiàn)象，因此，對(duì)遠(yuǎn)端的組織器官也有一定的作用,可以改善腧穴周圍及出現(xiàn)遠(yuǎn)端溫?zé)岬牟课坏难貉h(huán)，使氣血運(yùn)行得以通暢，改善組織的營養(yǎng)和氧氣供應(yīng)，從而改善病灶[26].有學(xué)者認(rèn)為艾灸對(duì)機(jī)體相關(guān)部位的這種升溫效應(yīng)是由其本身產(chǎn)生的紅外輻射與穴位共振共同作用所致，它們通過激發(fā)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，最終使異常機(jī)能得到恢復(fù).研究人員通過艾灸家兔“后三里”誘發(fā)胃經(jīng)的循經(jīng)高溫線，并對(duì)高溫線和經(jīng)線外組織分別進(jìn)行組織中乙酰膽堿酯酶、乳酸脫氫酶含量的測(cè)定，結(jié)果循經(jīng)高溫線組織中乙酰膽堿酯酶和乳酸脫氫酶活性較經(jīng)線外強(qiáng)，說明艾灸對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的溫?zé)嵝?yīng)可能與腎上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)減少、能量代謝旺盛、乙酰膽堿增加所引起的血管擴(kuò)張有關(guān)[27].

在改善血液循環(huán)方面的研究中，通過觀測(cè)艾灸后皮膚導(dǎo)電、血氧飽和度和心率，發(fā)現(xiàn)艾灸后較艾灸前上述指標(biāo)均有顯著性改善，說明艾灸可改善機(jī)體血液循環(huán)，加快新陳代謝，使組織的氧利用率提高，加快物質(zhì)交換.此外，艾灸還可促進(jìn)機(jī)體交感神經(jīng)的興奮性，降低血液黏稠度，加快血流速度，增加微循環(huán)灌注量等，因而認(rèn)為艾灸時(shí)產(chǎn)生的升溫效應(yīng)可能與艾灸刺激機(jī)體交感神經(jīng)興奮、改善血液循環(huán)、增加組織局部新陳代謝有關(guān)[28].但目前為止，艾灸的紅外效應(yīng)研究還不是很多，所以今后還需要更多、更全面的相關(guān)研究來闡釋艾灸的紅外效應(yīng)機(jī)制.

結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)和本研究結(jié)果對(duì)熱敏灸提高機(jī)能的機(jī)制總結(jié)如圖5.

圖5 熱敏灸提高免疫機(jī)能的機(jī)制示意圖

在實(shí)施熱敏灸過程中一名受試者在實(shí)施到5 min時(shí)出現(xiàn)足三里區(qū)域輕微的刺痛感，持續(xù)時(shí)間約有5～8 min，顯示熱敏灸的敏感方式不僅是熱的刺激，還有其他形式的刺激，如穴位共振等現(xiàn)象，這些現(xiàn)象可以改善血液粘稠度，提高機(jī)體交感神經(jīng)興奮性、使腎上腺能神經(jīng)遞質(zhì)分泌減少、促進(jìn)乙酰膽堿分泌使血管擴(kuò)張、增加組織局部新陳代謝等，這些變化過程可以改善循環(huán)機(jī)能、促進(jìn)免疫機(jī)能的代謝、從神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)來調(diào)節(jié)免疫機(jī)能，從而使機(jī)體免疫在大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后處于免疫穩(wěn)態(tài)的狀態(tài).本研究只是從熱敏灸提高了施灸部位的溫度，使受試者出現(xiàn)熱敏感的方向探討了熱敏灸改善免疫機(jī)能的機(jī)制，尚有許多深入的機(jī)制未能體現(xiàn)，我們?cè)诮窈蟮难芯恐袝?huì)在熱敏灸對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)方面探討其機(jī)制.

4 結(jié)論

受試者經(jīng)過一周的大負(fù)荷集訓(xùn)，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生了較大的刺激，主要表現(xiàn)在受試者的細(xì)胞免疫機(jī)能相對(duì)下降，導(dǎo)致Th1/Th2失衡，經(jīng)過對(duì)足三里實(shí)施熱敏灸的干預(yù)，可以提高IFN-γ/IL-4，通過一定的途徑改善免疫失衡.結(jié)合以上數(shù)據(jù)可以認(rèn)為，熱敏化足三里穴位可以通過溫?zé)岽碳ず图t外輻射等方式刺激穴位，實(shí)現(xiàn)改善免疫機(jī)能的效果，從細(xì)胞因子方面看，熱敏灸可能通過調(diào)節(jié)IL-12及其抑制劑IL-10與IL-12p40的分泌，促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化過程，從而糾正過度疲勞所致的Th1/Th2失衡狀態(tài).