解郁散有效部位抗抑郁作用比較

王玉露，賀　　侃，賈　　銣，張淑玲，陳　　燕（.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350；.金陵藥業(yè)股份有限公司福州梅峰制藥廠，福建福州35000）

解郁散有效部位抗抑郁作用比較

王玉露1，賀侃2，賈銣1，張淑玲1，陳燕1
（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.金陵藥業(yè)股份有限公司福州梅峰制藥廠，福建福州350002）

目的探討解郁散乙酸乙酯和正丁醇有效部位的抗抑郁作用及其機(jī)制，為解郁散的進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。方法選擇80只昆明種小鼠隨機(jī)分為溶劑組、鹽酸丙咪嗪組、正丁醇提取物高、中、低劑量組，乙酸乙酯提取物高、中、低劑量組共8組，每組各10只。采用小鼠懸尾試驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)初步檢測(cè)正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物的抗抑郁效應(yīng)，再通過5-HTP誘導(dǎo)的小鼠甩頭試驗(yàn)和育亨賓毒性試驗(yàn)初步揭示其抗抑郁機(jī)制。結(jié)果小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間表明解郁散正丁醇低劑量組和乙酸乙酯高劑量組都有明顯抗抑郁作用；5-HTP誘導(dǎo)小鼠甩頭試驗(yàn)和育亨賓毒性試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者均能增加小鼠甩頭次數(shù)和增加育亨賓的致死率，其中正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物中、高劑量組能明顯增多小鼠甩頭次數(shù)；同時(shí)，乙酸乙酯提取物均可以增加育亨賓的致死率，而正丁醇提取物中劑量組無此作用。結(jié)論解郁散乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物都有抗抑郁作用，均增加了小鼠甩頭次數(shù)和育亨賓毒性，說明其作用機(jī)制可能與增加突觸間隙單胺遞質(zhì)有關(guān)。從量效關(guān)系來看：乙酸乙酯提取物的量效關(guān)系更好。

解郁散；抑郁癥；正丁醇提取物；乙酸乙酯提取物；抗抑郁

抑郁癥是一種慢性、反復(fù)發(fā)作的情感性精神疾病，其主要臨床表現(xiàn)為：情緒低落，消極待物，無助感，精力及注意力下降等。抑郁癥是目前世界上最易致殘的疾病之一［1］，因此，抑郁癥越來越受到藥理學(xué)、心理學(xué)及神經(jīng)精神藥理學(xué)專家的關(guān)注。

四逆散出自張仲景的《傷寒論》，主要成分包含柴胡、枳實(shí)、芍藥、炙甘草，具有調(diào)和肝脾，透邪解郁，疏肝理脾之功效，主治陽(yáng)郁厥逆證和肝脾氣郁證，臨床常用于治療慢性肝炎、膽囊炎、膽石癥、膽道蛔蟲癥、肋間神經(jīng)痛、胃潰瘍、胃炎等屬肝膽氣郁，肝胃不和者。本課題用方解郁散系引用著名中醫(yī)學(xué)家施奠邦教授經(jīng)驗(yàn)方，由四逆散加川合歡花組成。前期研究［2-4］首先驗(yàn)證了解郁散對(duì)郁癥大鼠模型的抗抑郁作用，為了進(jìn)一步確定其抗抑郁作用的有效部位，又提取其4個(gè)有效部位，通過小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)進(jìn)行抗抑郁作用篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中兩種提取物抗抑郁作用顯著，即乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物。為了研究其有效部位的抗抑郁作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)用兩種提取物對(duì)小鼠進(jìn)行了進(jìn)一步的抗抑郁研究，初步揭示其抗抑郁作用機(jī)制并比較其不同提取物的作用差異。

1材料與藥品

1.1動(dòng)物及分組昆明種雄性小鼠，體重（20±2）g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，批號(hào)：SCXK（滬）2007-0005。小鼠按體重應(yīng)用數(shù)字隨機(jī)表隨機(jī)分成8組，每組10只，室內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后開始正式實(shí)驗(yàn)，自由飲水進(jìn)食。

1.2藥品① 鹽酸丙咪嗪，規(guī)格50 mg/片，購(gòu)自上海勁馬生物科技有限公司，批號(hào)：0160-9602，實(shí)驗(yàn)前用5%吐溫溶液按30 mg·kg-1配成濃度1.5 mg· mL-1。②98%五羥色氨酸（5-HTP），購(gòu)自阿法埃莎公司，批號(hào)：F6695A，按150 mg·kg-1配制成濃度7.5 mg·mL-1。③ 99%育亨賓，購(gòu)自阿拉丁公司，批號(hào)：29107，按25 mg·kg-1配制成濃度1.25 mg·mL-1。④解郁散由枳實(shí)、柴胡、白芍、炙甘草、合歡花組成，所有藥材均購(gòu)自同春藥業(yè)股份有限公司中藥分公司，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室楊成梓副教授鑒定。枳實(shí)系蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L的干燥幼果；柴胡系傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根；白芍系毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根；甘草系豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根及根莖；炙甘草是用蜜烘制的甘草；合歡花系豆科植物合歡Albizia julibrissin Durazz.的干燥花序。

1.2.1解郁散各萃取部位的制備依照文獻(xiàn)［3］進(jìn)行制備。本實(shí)驗(yàn)采用正丁醇部位和乙酸乙酯部位進(jìn)行研究。

1.3實(shí)驗(yàn)材料懸尾裝置自制：竹竿上用泡沫板隔離成5個(gè)分區(qū)，區(qū)與區(qū)之間用泡沫板擋?。荒z帶；2 000 mL燒杯10個(gè)；秒表10個(gè)；電子天平（型號(hào)：ES-C-600，湘儀天平儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（型號(hào)：HH.S11-2，杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司）；滲漉桶。

2方法

2.1分組將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成8組：溶劑對(duì)照組；鹽酸丙咪嗪組；正丁醇提取物高、中、低劑量組（1.722 g/mL、0.861 g/mL、0.431 g/mL）；乙酸乙酯提取物高、中、低劑量組（3.81 g/mL、1.905 g/mL、0.953 g/mL），每組各10只。

2.2小鼠懸尾試驗(yàn) （tail suspension test，TST）參考文獻(xiàn)［5］，連續(xù)給藥7 d，末次給藥1 h后，在小鼠尾部1 cm用膠帶粘貼將小鼠懸掛于距離地面4～5 cm處，中間以不透明擋板隔離小鼠視線。懸尾時(shí)間6 min，秒表記錄后 4 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。

2.3小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)（forced swim test，F(xiàn)ST）

［6］，連續(xù)給藥7 d，末次給藥1 h后，把小鼠置于高19 cm、直徑12.5 cm的圓形燒杯中，保持水面高度15 cm，水溫25℃，中間以不透明擋板隔離小鼠視線，觀察6 min。秒表記錄后 4 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。

2.4小鼠5-HTP增強(qiáng)試驗(yàn)參考文獻(xiàn)［7］，連續(xù)給藥7 d，末次給藥1 h后，小鼠腹腔注射 5-HTP 150 mg·kg-1可引起甩頭行為。記錄每只動(dòng)物給予5-HTP 后 15 min內(nèi)的甩頭次數(shù)。

2.5育亨賓毒性試驗(yàn)參照文獻(xiàn)［8］并稍作修改，連續(xù)給藥7 d，于末次給藥1 h后各組動(dòng)物分別皮下注射育亨賓 25 mg·kg-1，觀察記錄各組小鼠在1、2、4、5和24 h的死亡率。陽(yáng)性對(duì)照丙咪嗪組（30 mg·kg-1）在注射育亨賓前 1 h單次給藥。

2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS 11.5軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料屬正態(tài)分布以±s表示，采用單因素方差分析。

3結(jié)果

3.1各組小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間和懸尾不動(dòng)時(shí)間比較見表1。

表1　各組小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間和懸尾不動(dòng)時(shí)間比較（±s）min

表1　各組小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間和懸尾不動(dòng)時(shí)間比較（±s）min

注：與鹽酸丙咪嗪組比較，1）P＜0.05；與溶劑組比較，2）P＜0.05。

組別鹽酸丙咪嗪組溶劑組正丁醇低劑量組正丁醇中劑量組正丁醇高劑量組乙酸乙酯低劑量組乙酸乙酯中劑量組乙酸乙酯高劑量組動(dòng)物數(shù)/只10 10 10 10 10 10 10 10游泳不動(dòng)時(shí)間46.50±27.362）134.30±15.641）39.80±32.152）86.60±38.891）2）57.00±26.972）75.70±26.951）2）64.10±16.852）44.20±26.672）懸尾不動(dòng)時(shí)間67.80±23.682）126.50±21.421）83.40±18.772）109.40±22.551）123.70±25.891）117.40±33.311）111.20±24.291）84.90±22.702）

3.2解郁散有效部位對(duì)5-HP誘導(dǎo)小鼠甩頭行為影響見表2。

表2　解郁散正丁醇和乙酸乙酯提取物對(duì)5-HTP誘導(dǎo)小鼠甩頭行為的影響（±s）

表2　解郁散正丁醇和乙酸乙酯提取物對(duì)5-HTP誘導(dǎo)小鼠甩頭行為的影響（±s）

注：與鹽酸丙咪嗪組比較，1）P＜0.05；與溶劑組比較，2）P＜0.05。

組別鹽酸丙咪嗪組溶劑組正丁醇低劑量組正丁醇中劑量組正丁醇高劑量組乙酸乙酯低劑量組乙酸乙酯中劑量組乙酸乙酯高劑量組動(dòng)物數(shù)/只10 10 10 10 10 10 10 10甩頭次數(shù)/5min 28.70±5.922）13.40±2.80 16.40±3.131）29.30±6.852）25.70±5.562）19.50±4.221）2）25.40±5.872）24.40±5.022）

3.3解郁散有效部位對(duì)育亨賓毒性影響見表3。

4討論

4.1強(qiáng)迫游泳［9］和懸尾模型［5］試驗(yàn)主要是用于檢測(cè)藥物的抗抑郁活性，多用于一些抗抑郁藥物的初期篩選。在這些實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處于一個(gè)不能逃避的應(yīng)激環(huán)境，當(dāng)動(dòng)物處于絕望狀態(tài)時(shí)會(huì)放棄掙扎，表現(xiàn)出抑郁狀態(tài)，因此可以用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間來判斷其抑郁狀態(tài)，不動(dòng)時(shí)間越長(zhǎng)說明抑郁狀態(tài)越嚴(yán)重。解郁散正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物均能顯著縮短小鼠懸尾和小鼠強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間，表明這兩種提取物均具有顯著的抗抑郁作用。

表3　解郁散正丁醇和乙酸乙酯提取物對(duì)育亨賓毒性影響

在小鼠懸尾試驗(yàn)中乙酸乙酯提取物高劑量組和正丁醇提取物低劑量組與溶劑組相比明顯縮短了小鼠不動(dòng)時(shí)間，說明二者均有抗抑郁作用。從作用效果比較來看，乙酸乙酯提取物高劑量組和正丁醇提取物低劑量組對(duì)不動(dòng)時(shí)間的影響效果相近，從量效關(guān)系來看，乙酸乙酯的量效關(guān)系比正丁醇的量效關(guān)系更好。

4.2中醫(yī)藥對(duì)此有確切的效果［10］，實(shí)驗(yàn)證實(shí)四逆散及其加味都具有抗抑郁作用。有研究發(fā)現(xiàn)四逆散的有效成分有抗抑郁作用［11-12］。而謝忠禮研究的加味四逆散（四逆散加桂枝、石菖蒲）能平衡額葉單胺能神經(jīng)的功能狀態(tài)并影響紋狀體區(qū)單胺能神經(jīng)的功能狀態(tài)［13-14］，還可以使動(dòng)物的自發(fā)活動(dòng)和糖水消耗量增加［8，15］。另外，徐志偉研究的由柴胡、白芍、枳殼、枸杞子、梔子、熟地黃、石決明等組成的加味四逆散對(duì)慢性心理應(yīng)激損傷也有較好的調(diào)治作用［16］。由此可見，四逆散加味的抗抑郁作用已經(jīng)非常明確。合歡花可以舒郁、理氣、安神、活絡(luò)，用于心神不安、憂郁失眠，與四逆散合用，可顯著增強(qiáng)其抗抑郁作用，具有透邪解郁、疏肝理脾的功效。因此本試驗(yàn)在四逆散中加入了合歡花，并在前期試驗(yàn)中證實(shí)了其抗抑郁作用。該試驗(yàn)主要從藥物對(duì)單胺遞質(zhì)的影響探討其作用機(jī)制，并對(duì)比其不同提取物的作用特點(diǎn)。

4.3單胺學(xué)說是公認(rèn)的抑郁癥病因說之一，而且多數(shù)臨床使用的抗抑郁藥物的治療作用都是通過直接或間接增加突觸間隙中NE和5-HT而發(fā)揮作用［13，17］。本試驗(yàn)主要從藥物對(duì)單胺遞質(zhì)的影響來探討其抗抑郁作用機(jī)制。在5-HTP誘導(dǎo)小鼠甩頭試驗(yàn)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)解郁散正丁醇提取物中、高劑量組和乙酸乙酯提取物低、中、高劑量組都能明顯增多小鼠甩頭次數(shù)，說明兩種提取物都有增加突觸間隙5-HT的作用，劑量越高作用越強(qiáng)，其中乙酸乙酯提取物的作用要優(yōu)于正丁醇提取物。在育亨賓毒性試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)兩種提取物均能增強(qiáng)育亨賓的毒性，導(dǎo)致動(dòng)物死亡率增加。其中，正丁醇提取物各組比較以低劑量組作用最強(qiáng)；乙酸乙酯提取物高、中、低劑量均可以增強(qiáng)育亨賓的作用，且效果較正丁醇明顯，其中高劑量組作用最強(qiáng)，說明乙酸乙酯提取物有明顯的量效關(guān)系。

從藥效學(xué)的角度來看，藥物的效應(yīng)在一定范圍內(nèi)會(huì)隨藥物濃度的增加而增強(qiáng)，乙酸乙酯提取物在不同試驗(yàn)中均表現(xiàn)出高劑量作用更強(qiáng)，因此乙酸乙酯提取物有比較明顯的量效關(guān)系。而正丁醇提取物小劑量組明顯縮短了小鼠的游泳不動(dòng)時(shí)間和懸尾不動(dòng)時(shí)間，也增加了育亨賓的毒性作用，效果明顯優(yōu)于中、高劑量組，由此可推測(cè)出正丁醇提取物抗抑郁的量效也可能呈相反關(guān)系。

綜上所述，解郁散正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物均有抗抑郁作用，其抗抑郁機(jī)制可能與增加突出間隙單胺遞質(zhì)有關(guān)，其中，乙酸乙酯提取物表現(xiàn)出較好的量效關(guān)系。更深入的作用靶點(diǎn)和機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

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R285.5

A

1000-338X（2016）02-0029-03

2016-01-22

福建中醫(yī)藥大學(xué)校管課題（X2015026，X2014020）

王玉露（1975—），女，副教授，主要從事中藥神經(jīng)精神藥理學(xué)研究。

陳燕（1979—），講師，在讀博士。E-mail：dindoctcy@163. com