勃氏甜龍竹活體竹汁成分及微生物的研究

楊瑞娟，王橋美，季愛(ài)兵，鄧杰文，嚴(yán) 亮

(1.普洱茶研究院，普洱 665000； 2.普洱滇潤(rùn)農(nóng)業(yè)科技有限公司，普洱 665000)

勃氏甜龍竹活體竹汁成分及微生物的研究

楊瑞娟1，王橋美1，季愛(ài)兵1，鄧杰文2，嚴(yán) 亮1

(1.普洱茶研究院，普洱 665000； 2.普洱滇潤(rùn)農(nóng)業(yè)科技有限公司，普洱 665000)

研究從勃氏甜龍竹中提取新鮮竹汁，檢測(cè)了其農(nóng)殘、礦物質(zhì)元素、氨基酸的含量；并對(duì)新鮮竹汁進(jìn)行過(guò)濾除菌，對(duì)比分析過(guò)濾前后竹汁中微生物的變化，研究其保質(zhì)期。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：勃氏甜龍竹農(nóng)殘未超標(biāo)，礦物質(zhì)元素和氨基酸含量豐富；從新鮮竹汁中分離得到36株菌株，均為細(xì)菌，主要屬于Acinetobacter,Arthrobacter,Bacterium,Cedecea,Enterobacter,Pantoea,Pseudomonas,Sphingomonas和Stenotrophomonas9個(gè)屬；從過(guò)濾膜表面分離得到37株菌株，種類(lèi)與新鮮竹汁中的主要微生物基本一致；過(guò)濾除菌后未檢測(cè)出微生物；從過(guò)濾后變質(zhì)的竹汁中分離得到21株菌株，屬于Acinetobacter,Bacillus和Brevibacterium3個(gè)屬；過(guò)濾法能除去竹汁中的主要微生物，可以延長(zhǎng)新鮮竹汁的保質(zhì)期。

活體竹汁；過(guò)濾除菌法；微生物

竹，屬禾本科，竹亞科，多年生常綠喬木狀植物，無(wú)規(guī)律的分布于亞熱帶、熱帶及溫帶地區(qū)[1]。全球竹類(lèi)植物約有70多屬1 200多種，在禾本科植物中種類(lèi)最多[2]。中國(guó)是竹之鄉(xiāng)，竹資源的種類(lèi)、產(chǎn)量、適應(yīng)性均是世界領(lǐng)先[3]，但竹資源的利用率和創(chuàng)造的價(jià)值很低[4]。甜龍竹(DendrocalamushamiltoniiNeesetArn.exMunro)，為禾本科竹亞科牡竹屬竹種，又叫甜筍竹(中國(guó)竹譜)、甜竹。勃氏甜龍竹為筍材兩用大型叢生竹，稈直立或有時(shí)外傾，高12～18 m，直徑10～18 cm；節(jié)間長(zhǎng)30～50 cm。其竹材通直，節(jié)平，堅(jiān)韌、彈性強(qiáng)，可供編織、家具，較大的徑材可加工成竹膠合板、竹裝飾板及竹漿造紙等，是極具開(kāi)發(fā)利用價(jià)值的優(yōu)良筍用竹。

竹汁含有人體必需氨基酸、維生素、微量元素、黃銅[5-8],具有很高的藥用和食用價(jià)值。竹汁中藥名竹瀝，早已作為藥物用于中醫(yī)臨床[9]。具有清熱解毒、鎮(zhèn)靜止咳、延緩衰老的功效[10]?；铙w竹汁澄清透明，竹香淡雅，爽口怡人，具有良好的天然性、營(yíng)養(yǎng)性和安全性，是生產(chǎn)竹汁飲料良好的原材料。但是，由于鮮竹汁的采集在戶外進(jìn)行[11]，竹汁受污染程度較重，加上竹汁本身存在許多微生物，極易導(dǎo)致竹汁飲料短時(shí)間內(nèi)即產(chǎn)生沉淀、混濁、失光等劣變現(xiàn)象，嚴(yán)重影響到產(chǎn)品質(zhì)量及商品價(jià)值[12]。

相對(duì)于麻竹、毛竹、雷竹等竹種，國(guó)內(nèi)對(duì)甜龍竹的研究較少，本文檢測(cè)了勃氏甜龍竹活體竹汁的成分，并結(jié)合傳統(tǒng)形態(tài)分類(lèi)鑒定方法與現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)勃氏甜龍竹竹汁平板培養(yǎng)過(guò)程中反復(fù)出現(xiàn)的微生物進(jìn)行分離和鑒定，得到了甜龍竹新鮮竹汁的內(nèi)含菌種庫(kù)，還通過(guò)過(guò)濾除菌法除菌，延長(zhǎng)了新鮮竹汁的保質(zhì)期，且分析了過(guò)濾處理后變質(zhì)的竹汁的菌種組成，為勃氏甜龍竹竹汁在食品、藥品、化妝品、保健品等產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，開(kāi)發(fā)前景十分廣闊，將帶來(lái)良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

本實(shí)驗(yàn)所用竹汁采自云南普洱滇潤(rùn)農(nóng)業(yè)科技有限公司大寨甜龍竹種植基地。

LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g·L-1、酵母提取物5 g·L-1、氯化鈉10 g·L-1、瓊脂18 g·L-1。

YEPD培養(yǎng)基：酵母粉10 g·L-1、蛋白胨20 g·L-1、葡萄糖20 g·L-1、瓊脂18 g·L-1。

察氏培養(yǎng)基：硝酸鈉3 g·L-1、磷酸氫二鉀1 g·L-1、硫酸鎂0.5 g·L-1氯化鉀0.5 g·L-1、硫酸亞鐵0.01 g·L-1、 蔗糖30 g·L-1、 瓊脂20 g·L-1。

MARS培養(yǎng)基:葡萄糖20 g·L-1、蛋白胨10 g·L-1、牛肉膏10 g·L-1、酵母膏5 g·L-1、檸檬酸氫二胺2 g·L-1、吐溫80 1 mL/L、乙酸鈉5 g·L-1、磷酸氫二鉀2 g·L-1、硫酸鎂0.58 g·L-1、硫酸錳0.25 g·L-1、瓊脂18 g·L-1。

1.2 儀器與設(shè)備

LDZX-50KB型立式壓力蒸汽滅菌鍋；DHP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱；相機(jī)；蘇凈安泰SW-CJ-2F型潔凈工作臺(tái)；376000 型漩渦震蕩儀；威泰克掌上離心機(jī);BS-30KA型電子天平； XS204型電子天平；9700型PCR儀；EM-308EB1型微波爐；dyy-6C型電泳儀；SYNGENE GBOX型凝膠成像系統(tǒng)；MDF-382E(N)超低溫冰箱；BCD-218SDA型冰箱；LGJ-1冷凍干燥機(jī)；HVLP14250表面濾膜，孔徑0.45 μm；GVWP14250濾膜，孔徑0.22 μm；07528-30蠕動(dòng)泵數(shù)顯驅(qū)動(dòng)器；YY3014236不銹鋼平板式過(guò)濾器。

1.3 方法

1.3.1 竹汁的活體取樣及處理 竹子活體取水技術(shù)[13]：用電鉆在竹子節(jié)部打一個(gè)穿透竹內(nèi)腔薄膜的洞，待竹汁流出一段時(shí)間后，用無(wú)菌細(xì)管一端插入竹子干內(nèi)部，另一端插入無(wú)菌瓶子中，收集從小孔流出的天然竹汁。

1.3.2 竹汁除菌處理 甜龍竹的活體活體取水技術(shù)在竹林中進(jìn)行，露天采集過(guò)程中竹汁中不可避免地帶有大量的微生物及雜質(zhì)，因此，首先要進(jìn)行除雜除菌處理，采集后的竹汁經(jīng)過(guò)濾除菌處理后保存食用。本實(shí)驗(yàn)采用過(guò)濾除菌法[14]，即先用滅菌過(guò)的紗布過(guò)濾除雜，再用微小孔徑的薄膜(0.45 μm和0.22 μm)通過(guò)物理阻留的方法以達(dá)到無(wú)菌的目的，本方法一般適用于血清、毒素、抗生素等不耐熱生物制品及空氣的除菌。

1.3.3 竹汁理化性質(zhì)分析 (1)農(nóng)藥殘留量的測(cè)定：GB2763-2005《食品中最大農(nóng)藥殘留限量》。(2)礦物質(zhì)元素的測(cè)定：GB/T 5750.12-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法；GB/T8538-2008飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法。(3)游離氨基酸總量測(cè)定：GB/T8314-2013。

1.3.4 菌種分離培養(yǎng) (1)液體菌種分離培養(yǎng)。取1 mL竹汁裝入1.5 mL滅菌離心管中，用無(wú)菌水稀釋為10-1、10-3兩個(gè)梯度的菌懸液，涂布到LB培養(yǎng)基、YEPD培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基、MARS培養(yǎng)基上，置于37℃恒溫培養(yǎng)72 h后對(duì)菌種進(jìn)行拍照、計(jì)數(shù)、描述。挑取典型微生物單菌落進(jìn)行劃線純化培養(yǎng)，并進(jìn)行測(cè)序鑒定和菌種保存。(2)濾紙表面菌種分離培養(yǎng)。用滅菌的牙簽挑取過(guò)濾竹液后留在濾紙表面的殘留物，放入1.5 mL滅菌離心管中，用無(wú)菌水稀釋為10-1、10-3、10-5三個(gè)梯度的菌懸液，將菌懸液涂布到LB培養(yǎng)基、YEPD培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基、MARS培養(yǎng)基上，置于37℃恒溫培養(yǎng)72 h后對(duì)菌種進(jìn)行拍照、計(jì)數(shù)、描述。挑取典型微生物單菌落進(jìn)行劃線純化培養(yǎng)，并進(jìn)行測(cè)序鑒定和菌種保存。(3)平板計(jì)數(shù)：平板培養(yǎng)計(jì)數(shù)法[15]。

1.3.5 菌種的鑒定 將純化的真菌制成菌懸液[16]，真菌PCR體系(50 μL)如下：2×PCR buffer for KOD FX 25 μL 、2 mm dNTP mixture 10 μL、KOD FX(TOYOBO，日本)(1.0 U·μL-1)1 μL、上游引物(10 μmol·L-1)2 μL、下游引物(10 μmol·L-1)2 μL、菌懸液1.5 μL、水8.5 μL；PCR反應(yīng)條件：(1)預(yù)變性94℃ 5 min；(2)變性98℃ 10 s；(3)復(fù)性(退火)50℃ 30 s；(4)延伸68℃ 2 min，步驟(2)-(4)循環(huán)45次；(5)4℃保溫；上游引物NL1F：5′ GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG3′ 下游引物L(fēng)S2R：5′ ATTCCCAAACAACTCGACTC3′。

將純化的細(xì)菌制成菌懸液[17]，細(xì)菌PCR體系(50 μL)如下：10×Taq buffer 5 μL、2 mm dNTP mixture 5 μL、Taq酶(5.0 U·μL-1)1 μL、上游引物(10 μmol·L-1)2 μL、下游引物(10 μmol·L-1)2 μL、菌懸液2 μL、水33 μL；PCR反應(yīng)條件：(1)預(yù)變性94℃ 5 min；(2)變性96℃ 30 s；(3)復(fù)性(退火)52℃ 30 s;(4)延伸72℃ 50 s，步驟(2)-(4)循環(huán)35次；(5)72℃延伸10 min;(6)4℃保溫；上游引物R1492：5′ TACGGYTACCTTGTTACGACTT3′；下游引物F27：5′ AGAGTTTGATCMTGGCTCAG3′。

將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送至廣州華大基因測(cè)序。根據(jù)測(cè)序結(jié)果，用每個(gè)菌株的ITS1基因作為靶序列，在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中用在BLAST(BasicLocalAlignmenSearchTool)程序來(lái)搜索同源序列，挑選與靶系列最相近的參考菌株系列，查出相應(yīng)微生物，完成菌種鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 竹汁理化分析結(jié)果

2.1.1 竹汁農(nóng)殘檢測(cè)結(jié)果 農(nóng)殘指數(shù)：經(jīng)普洱市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測(cè)中心檢測(cè)，敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、六氯苯、甲拌磷、氧化樂(lè)果、α-六六六、五氯硝基苯、久效磷、γ-六六六(林丹)、異稻瘟凈、β-六六六、樂(lè)果、七氯、八氯二丙醚、百菌清、δ-六六六、甲基毒死蜱、艾氏劑、甲基對(duì)硫磷、三唑酮、毒死蜱、氟蟲(chóng)腈、馬拉硫磷、殺螟硫磷、對(duì)硫磷、三氯殺螨醇、倍硫磷、水胺硫磷、速克靈(腐霉利)、喹硫磷、α-硫丹、p,p′-DDE、噻嗪酮、狄氏劑、殺撲磷、異狄氏劑、o,p′-DDT、乙硫磷、p,p-DDD、β-硫丹、布洛芬(肟菌酯)、p,p′-DDT、克螨特-1、克螨特-2、聯(lián)苯菊酯、硫丹硫酸鹽、三唑磷、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯(三氟氯氰菊酯)、喹螨醚、苯硫磷、三氯殺螨砜、亞胺硫磷、氯菊酯-1、氯菊酯-2、噠螨靈、氟氯氰菊酯-1、氟氯氰菊酯-2、氟氯氰菊酯-3、氯氰菊酯-1、氯氰菊酯-2、氯氰菊酯-3、氟氰戊菊酯-1、氟氰戊菊酯-2、氟胺氰菊酯-1、氟胺氰菊酯-2、氰戊菊酯、順勢(shì)氰戊菊酯、溴氰菊酯、苯醚甲環(huán)唑等農(nóng)殘物在竹汁中均未檢出。

2.1.2 竹汁礦物質(zhì)元素檢測(cè)結(jié)果 根據(jù)GB/T 5750.12-2006 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法和GB/T 8538-2008飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)活體竹汁進(jìn)行檢驗(yàn)。

表1 竹汁中礦物質(zhì)元素組成

由表1可知，金屬元素含量較豐富，有人體必需元素Fe、Ca、Zn、Cu、Ni等，也有微量元素Ni、Cr、Se等； K、Ca、Mg 、CL-、SO42-、NO3-等礦物元素含量較高，Ba、Fe、Sr、Zn、Na、Cu、Al等次之，有毒元素As、Hg、Sb、Sn、Pb、Li、Ag含量不高，接近或小于國(guó)標(biāo)含量，符合GB/T 5750.12-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)和GB/T 8538-2008飲用天然礦泉水檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。由于礦物元素之間的拮抗作用，單一元素硒(Se)，可以拮抗體內(nèi)重金屬汞(Hg)、鉛(Pb)、鎘(Cd)、銀(Ag)、砷(As)，結(jié)合后再以“排毒機(jī)制”一起排出體外，以避免重金屬對(duì)人體的毒害。由于礦物元素之間的相乘(協(xié)同)作用，銅(Cu)可以促進(jìn)鐵(Fe)的運(yùn)送，加速紅血球的合成。這些微量元素可以調(diào)節(jié)人體酸堿值，既可作為營(yíng)養(yǎng)素，又在生物有機(jī)體中起催化、激活動(dòng)力的作用。

2.1.3 竹汁氨基酸檢測(cè)結(jié)果 由表2可知，竹汁中氨基酸種類(lèi)豐富，共檢測(cè)出10種氨基酸，氨基酸含量較豐富，含有人體必需氨基酸3種，含量分別為賴(lài)氨酸21 mg·L-1、蘇氨酸12 mg·L-1、纈氨酸3 mg·L-1。含有非必需氨基酸7種。谷氨酸和絲氨酸含量最多，分別為88 mg·L-1和26 mg·L-1，這兩種氨基酸分別是呈鮮味和呈甘味的特征氨基酸，豐富的谷氨酸和絲氨酸使竹汁有較好的口感。蘇氨酸和脯氨酸的含量分別為12 mg·L-1和4 mg·L-1，這兩種氨基酸未在單云[18]等研究中檢測(cè)出，這說(shuō)明不同地方的甜龍竹竹汁成分是有差別的。

表2 竹汁中氨基酸組成

表3 新鮮竹汁內(nèi)含微生物的組成

2.2 竹汁內(nèi)含微生物的組成

竹汁會(huì)因微生物的作用而逐漸變渾沉淀，色澤不斷加深，因此，采集后的竹汁應(yīng)及時(shí)投入處理進(jìn)行微生物的分離鑒定，時(shí)間間隔不應(yīng)超過(guò)4 h，否則風(fēng)味劣變進(jìn)而喪失其加工特性。

由表3可知，從新鮮竹汁中分離得到36株菌株，全部鑒定為細(xì)菌，分別屬于Acinetobacter,Arthrobacter,Bacterium,Cedecea,Enterobacter,Pantoea,Pseudomonas,Sphingomonas和Stenotrophomonas9個(gè)屬，其中Acinetobacter,Arthrobacter,Enterobacter,Sphingomonas和Stenotrophomonas5個(gè)屬的微生物種類(lèi)較多，Acinetobacter為不動(dòng)桿菌屬，廣泛分布于外界環(huán)境中，主要在水體和土壤中，易在潮濕環(huán)境中生存；Arthrobacter為節(jié)桿菌屬，革蘭氏陽(yáng)性，不生孢，不抗酸，好氧，化能異養(yǎng)菌，最適生長(zhǎng)溫度20～35℃，廣泛分布于環(huán)境，主要是土壤。Enterobacter為腸桿菌屬，廣泛分布于自然界，普遍存在于人和動(dòng)物中；Sphingomonas是一類(lèi)豐富的新型微生物資源，可用于芳香化合物的生物降解；Stenotrophomonas廣泛存在于水，土壤，動(dòng)物體內(nèi)。

2.3 過(guò)濾除菌法對(duì)竹汁微生物的影響

對(duì)于污染水平較高的水系統(tǒng)來(lái)說(shuō)，平皿法和薄膜過(guò)濾法的計(jì)數(shù)結(jié)果并無(wú)顯著性差異，且平皿法有費(fèi)用低，檢測(cè)方法簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)， 因此， 在微生物污染水平較高的水系統(tǒng)采用平皿法即可得到準(zhǔn)確數(shù)據(jù)[19]。

由表4可知，新鮮竹汁的微生物含量為1.0×104個(gè)·mL-1，經(jīng)過(guò)濾除菌法處理的竹汁未檢測(cè)出微生物。未過(guò)濾竹汁的微生物數(shù)量增加快，一周后無(wú)色澄清透明的竹汁常溫保存就呈淺黃色，渾濁狀態(tài)，三周后冷藏條件下的竹汁亦呈淺黃色，渾濁狀態(tài)，兩個(gè)月后常溫保存的竹汁中的微生物數(shù)量已無(wú)法計(jì)數(shù)；過(guò)濾處理過(guò)的竹汁四周后常溫保存條件下開(kāi)始滋長(zhǎng)微生物，兩個(gè)月后常溫與冷藏條件下均能檢測(cè)出微生物，常溫保存的竹汁變淺黃色并渾濁，而冷藏保存的竹汁還是無(wú)色澄清透明狀態(tài)。由此而知，竹汁的冷藏保存效果好，常溫保存效果差，過(guò)濾處理可以明顯延長(zhǎng)竹汁的保質(zhì)期，對(duì)保證竹汁飲料連續(xù)化生產(chǎn)十分重要。

表4 竹汁保存過(guò)程中微生物數(shù)量的變化

2.4 過(guò)濾膜表面微生物組成

竹汁是一個(gè)復(fù)雜的成份體，體系的組成及特性影響到沉淀產(chǎn)生的數(shù)量及速率。在弱酸性時(shí)由于帶正電荷的蛋白質(zhì)、帶負(fù)電荷的多酚類(lèi)物質(zhì)及多糖兩者之間以及多酚自身的聚合。往往導(dǎo)致竹汁在短時(shí)間內(nèi)即產(chǎn)生大量沉淀[20]，經(jīng)過(guò)紗布過(guò)濾除雜，再用0.45 μm和0.22 μm的兩層薄膜過(guò)濾，對(duì)膜表面的微生物分離鑒定結(jié)果如表5。

由表5可知，從過(guò)濾膜表面分離得到37株菌株，均為細(xì)菌，分別屬于Acinetobacter,Arthrobacter,Bacterium,Cedecea,Enterobacter,Pantoea,Pseudomonas,Sphingomonas和Stenotrophomonas9個(gè)屬，Acinetobacter,Arthrobacter,Enterobacter,Pseudomonas,Sphingomonas和Stenotrophomonas6個(gè)屬的微生物居多，其中Enterobacter易于培養(yǎng)，繁殖快(在適宜條件下每20～30min可增殖1代)，可以在人、動(dòng)物、植物體內(nèi)寄生或共生，也可在土壤或水中生存，通過(guò)過(guò)濾去除，可以明顯增加竹汁保質(zhì)期。

表5中的9個(gè)屬微生物跟表3完全吻合，說(shuō)明平板過(guò)濾器達(dá)到了過(guò)濾除菌的目的，但是表5與表3中菌株種類(lèi)與數(shù)量有微小差別，原因是竹汁中的優(yōu)勢(shì)菌群容易在過(guò)濾膜表面凝集，經(jīng)稀釋培養(yǎng)更容易存活，如Arthrobacterwoluwensisstrain和Stenotrophomonasnitritireducensstrain，而含量少的微生物是弱勢(shì)菌群，更不容里分離鑒定得到，如BacteriumsymbiontofBactroceracorrectastrain。

2.5 過(guò)濾后變質(zhì)竹汁的微生物組成

新鮮竹汁竹味淡雅，滋味柔和，經(jīng)過(guò)濾除菌后呈無(wú)色澄清透明狀態(tài)，封閉保存，待竹汁顏色泛黃渾濁有變質(zhì)傾向后，分析其內(nèi)含微生物，結(jié)果如表6。

由表6可知，從過(guò)濾后變質(zhì)竹汁中分離得到21株菌株，主要是Acinetobactercalcoaceticus,Acinetobacteroleivorans,Bacillusmuralis,Bacillussimplex,Bacillusthuringiensis和[Brevibacterium]frigoritolerans，分別屬于Acinetobacter,Bacillus和Brevibacterium3個(gè)屬，微生物組成比較簡(jiǎn)單。Acinetobactercalcoaceticus主要分布在水體和土壤中，易在潮濕環(huán)境中生存，粘附力極強(qiáng)，易在各類(lèi)醫(yī)用材料上粘附，可能成為貯菌源。Bacillusthuringiensis廣泛分布在土壤及腐敗的有機(jī)物中，是一種包括許多變種的產(chǎn)晶體芽孢桿菌，可做微生物源低毒殺蟲(chóng)劑。[Brevibacterium]frigoritolerans是在冷藏變質(zhì)竹水中分離得到，顧名思義，是一類(lèi)耐寒短桿菌，屬于放線菌目。經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌，之后封閉保存，在無(wú)外界污染的條件下，竹汁變質(zhì)后只是口感色澤等出現(xiàn)了細(xì)微變化，并沒(méi)有分離得到對(duì)人體危害極大的微生物種類(lèi)，這也正說(shuō)明過(guò)濾除菌法適用于竹汁等液體類(lèi)的生物制品。

表5 過(guò)濾膜表面微生物的組成

表6 過(guò)濾后變質(zhì)竹汁的微生物組成

3 結(jié)論與討論

甜龍竹活體竹汁農(nóng)殘未超標(biāo)，礦物質(zhì)元素和氨基酸含量豐富，具有良好的天然性、營(yíng)養(yǎng)性和安全性，是生產(chǎn)竹產(chǎn)品良好的原材料。由于鈣、鎂、鐵可以與竹汁中的草酸、蛋白質(zhì)、多酚類(lèi)物質(zhì)及多糖等結(jié)合導(dǎo)致竹汁的渾濁與沉淀[12]，竹汁品質(zhì)劣變的速度快，竹汁很容易產(chǎn)生褐變，本文從新鮮竹汁中分離得到36株菌株，微生物種類(lèi)和數(shù)量居多，這些微生物的存在更加劇了新鮮竹汁的變質(zhì)速度，通過(guò)過(guò)濾，從平板過(guò)濾器過(guò)濾膜表面分離得到的37株菌株，與新鮮竹汁中的主要微生物基本吻合，說(shuō)明平板過(guò)濾器達(dá)到了過(guò)濾除菌的目的。過(guò)濾除菌法可以減少竹汁

產(chǎn)生沉淀的不穩(wěn)定因素，既可保證竹汁的澄清透明，又可保證竹汁色香味的穩(wěn)定性，還可以明顯延長(zhǎng)竹汁保質(zhì)期，對(duì)保證竹汁飲料連續(xù)化生產(chǎn)十分重要。竹汁保存過(guò)程中微生物數(shù)量的變化實(shí)驗(yàn)表明，竹汁的冷藏保存效果好，常溫保存效果差，建議采用冷藏保存。

從過(guò)濾后變質(zhì)竹汁中分離得到21株菌株，主要屬于Acinetobacter,Bacillus和Brevibacterium3個(gè)屬，微生物組成比較簡(jiǎn)單,與新鮮竹汁中的微生物不一致，說(shuō)明過(guò)濾除菌法除菌技術(shù)比較徹底。變質(zhì)竹汁中的微生物來(lái)源可能是：(1)存放竹汁的離心管滅菌不徹底，長(zhǎng)期存放有利于這些污染微生物的生長(zhǎng)。(2)竹汁是一個(gè)活的有機(jī)體，其內(nèi)含有多種活性酶，主要是多酚氧化酶及過(guò)氧化物酶，極易導(dǎo)致竹汁產(chǎn)生酶促褐變[21]，長(zhǎng)時(shí)間存放的竹汁內(nèi)環(huán)境發(fā)生變化，促進(jìn)了一些新的微生物的生長(zhǎng)，比如Bacillus和Brevibacterium。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)竹汁的研究十分活躍，多種以竹汁為基本原料制成的成品已在一些國(guó)家占有一席之地。在日本，用箬竹葉提取的竹汁治療包括癌癥在內(nèi)的多種疾病，并取得很好的效果，同時(shí)還用竹汁制成多種保健品。德國(guó)人更早是直接將竹汁添加到牛奶中飲用。我國(guó)竹資源豐富，具有制取竹汁的傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)，再加上竹子活體取水新技術(shù)的開(kāi)發(fā)應(yīng)用，竹產(chǎn)品的研究和開(kāi)發(fā)具有廣闊的前景和巨大的經(jīng)濟(jì)意義。

[1] G J Kapadia,H Tokuda.Anti-tumor promoting activity ofDryopterisphlorophenonederivatives[J].Cancer letters,1996,(2)：161-165.

[2] Li D,Wang Z,Zhu Z,et al.Flora of China[M].Beijing and St. Louis：Science Press and Missouri BotanicalGarden Press,2006.

[3] LIU M,QIAO G.Transcriptome Sequencing and De Novo Analysis for Ma Bamboo(Dendrocalamus latiflorus Munro) Using the Illumina Platform[J].PLoS ONE 7,2012,(10)：46766.

[4] 謝貽發(fā),謝貴水,姚慶群,等.國(guó)竹類(lèi)資源綜合利用現(xiàn)狀與前景[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2004,24(6)：46-52.

[5] 李平山,周甫生,李承先,等.鮮竹瀝的化學(xué)成分研究[J].中草藥,1984,15(4)：3-4.

[6] 喬章星,朱妙珍.竹瀝中氨基酸成分的研究[J].中國(guó)學(xué)雜志,1993,28(1)：18-19.

[7] 高吾名.竹瀝液中主要無(wú)機(jī)元素和氨基酸的測(cè)定[J].中成藥,2000,22(8)：553-554.

[8] 張佐玉,張喜.竹子在中醫(yī)藥和保健品開(kāi)發(fā)中的潛力[J].世界科學(xué)技術(shù)：中藥現(xiàn)代化,2000,2(3)：54-56.

[9] 江蘇新醫(yī)學(xué)院,中醫(yī)大辭典(上冊(cè))[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1986,899.

[10] 周奇文.實(shí)用食品加工新技術(shù)(3)[M].北京：中國(guó)食品出版社,1988：98 -100.

[11] 潘思軼,李奇,王可興.竹汁貯藏保鮮方法及對(duì)竹汁質(zhì)量的影響[J].1996,17(8)：61-65.

[12] 潘思軼,王潔生,歐陽(yáng)麗琴.竹汁沉淀的探討[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1996,15(6)：598-602.

[13] 王貞良.一種采集天然竹汁的方法：中國(guó),91105126.0[p].1993-02-17.

[14] 陳曉宏.淺析過(guò)濾除菌法在食品工業(yè)中的應(yīng)用[J].科技創(chuàng)業(yè)家，2014,5(上)：232.

[15] 李基洪.清涼飲料生產(chǎn)技術(shù)[M].四川科學(xué)技術(shù)出版社,1994,380-383.

[16] 楊瑞娟,呂杰,嚴(yán)亮,等.普洱茶渥堆發(fā)酵中嗜熱真菌的分離和鑒定[J].茶葉科學(xué),2011,31(4)：371-378.

[17] 李晨晨,呂杰,楊瑞娟,等.普洱茶渥堆發(fā)酵過(guò)程中嗜熱細(xì)菌的分離和鑒定[J].北京化工大學(xué)學(xué)報(bào)( 自然科學(xué)版),2012,39(2)：74-78.

[18] 單云,杜萍,王鐵旦,等.云南版納甜龍竹活體竹汁凍干粉營(yíng)養(yǎng)成分分析[J].食品科學(xué),2013,34(2)：217-219.

[19] 李玨,洪利婭,王知堅(jiān),等. 制藥用水微生物限度檢查新方法的研究[J].藥物分析雜志，2014,34(2)：376-379.

[20] 杜朋.果蔬汁飲料工藝學(xué)[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社,1991.169-227.

[21] 潘思軼,王可興.竹汁飲料生產(chǎn)工藝[J].企業(yè)技術(shù)開(kāi)發(fā),1996,(7)：29-30.

Components and Microorganisms in Juice from LivingDendrocalamusbrandisii(Munro)Kurz

YANG Rui-juan1，WANG Qiao-mei1，JI Ai-bing1，DENG Jie-wen2，YAN Liang1

(1.Puer Tea Institute，Puer 665000，Yunnan，China；2.Dianrun Agriculture Technique Co.,LTD，Puer 665000，Yunnan，China)

Fresh bamboo juice was extracted from livingDendrocalamusbrandisii(Munro)Kurzfor analysis of pesticide residues，mineral elements，and amino acids. Microorganisms in the bamboo juice before and after filtration were compared to determine the shelf life. The experimental results showed that the pesticide content remained in the juice ofDendrocalamusbrandisii(Munro) Kurz was standards-compliant，and the juice was rich in mineral elements and amino acids. 36 bacterial strains were isolated from fresh bamboo juice， belonging to the genus ofAcinetobacter，Arthrobacter，Bacterium，Cedecea，Enterobacter,Pantoea，Pseudomonas，SphingomonasandStenotrophomonasrespectively. 37 bacterial strains were isolated from the surface of filter membrane，essentially the same as those in fresh bamboo juice，no microorganisms were isolated after filtration. 21 strains were isolated from metamorphic bamboo juice， belonging to the genus ofAcinetobacter,BacillusandBrevibacteriumrespectively. Filtration can remove the main microorganisms and extend the shelf life of fresh bamboo juice.

Bamboo juice；Sterilization by filtration；Microorganisms

2016-03-28

云南省普洱市科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2013kj93)

楊瑞娟(1985-)，女，山西長(zhǎng)治人，碩士，助理研究員，主要從事微生物與生化藥學(xué)研究。通信作者：嚴(yán)亮(1983-)，男，吉林長(zhǎng)春人，博士，副研究員，主要從事細(xì)胞生物學(xué)研究。E-mail：jacky_4680@163.com