苗藥烏糾治療大鼠瘡瘍模型活性部位研究

孟鐵宏　李春榮　王　恒

(黔南民族醫(yī)學高等專科學校公共課教學部化學教研室，貴州 都勻 558000)

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·論著·

苗藥烏糾治療大鼠瘡瘍模型活性部位研究

孟鐵宏李春榮王恒

(黔南民族醫(yī)學高等專科學校公共課教學部化學教研室，貴州 都勻 558000)

摘要目的確定苗藥烏糾治療瘡瘍活性成分所在部位。方法采用金黃色葡萄球菌感染大鼠制作瘡瘍模型，通過與空白組和模型組比較，觀察苗藥烏糾不同提取活性部位對大鼠瘡瘍模型體征、愈合情況、臟器指數(shù)及血清中溶菌酶的影響。結(jié)果苗藥烏糾不同提取活性部位組均能有效提高大鼠瘡瘍模型血清中的溶菌酶含量和胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)，增強大鼠瘡瘍模型的免疫功能，其中石油醚提取活性部位和正丁醇提取活性部位對溶菌酶提高最大，對大鼠瘡瘍模型治療效果最為顯著。結(jié)論苗藥烏糾治療瘡瘍活性成分主要集中在石油醚提取活性部位和正丁醇提取活性部位。

關(guān)鍵詞烏糾；活性部位；瘡瘍模型

文章編碼：1001-8131(2016)02-0101-03

苗藥烏糾，又名九倒生、鐵郎雞、地柏枝，為鐵角蕨科鐵角蕨屬植物變異鐵角蕨(Asplenium varians Wall.ex Hook. et Grev.) 的全草[1]，性涼，味微苦，具有活血消腫、止血生肌的作用，除治療刀傷、骨折、外傷出血外，對皮膚瘡瘍潰爛和燒燙傷等，均有很好的治療作用。

瘡瘍是指各種致病因素侵襲人體后引起的一切體表化膿感染性疾病的總稱，包括急性和慢性兩大類[2]，是中醫(yī)外科疾病中最常見的一大類病癥，能引起面部疔瘡走黃(西醫(yī)稱為敗血癥或膿毒敗血癥)和傷筋損骨的嚴重后果，具有發(fā)病迅速，部分病情較重等特點。目前瘍科傳統(tǒng)的藥物多由紅升丹、輕粉等藥物制成。由于這類藥物中所含汞，對人體的毒害早已被證實，為此，有必要尋找一種新的不含汞類藥物的替代藥用于治療瘡瘍。

目前鐵角蕨屬植物的化學成分和藥理研究[3]及苗藥烏糾止血活性部位研究已有相關(guān)報道[4]，但其抗瘡瘍活性部位及成分研究還未見報道，嚴重制約了烏糾的臨床應用，本文在對苗藥烏糾進行分段提取的基礎上，考察了烏糾的石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位和水提取部位對大鼠瘡瘍模型的影響，為進一步研究其治療瘡瘍活性成分、抗瘡瘍機制和研發(fā)治療瘡瘍臨床藥物提供指導。

1 資料與方法

1.1一般資料：動物SD大鼠50只，體重(250±20)g，雌雄各半，由重慶騰鑫比爾實驗動物銷售有限公司提供，動物批準號 SCXK(渝)2012-0008，所有大鼠自由攝食、飲水1周適應環(huán)境。藥材烏糾產(chǎn)地貴州黔南、黔東南苗族地區(qū)，經(jīng)貴陽中醫(yī)學院孫慶文教授鑒定為鐵角蕨科鐵角蕨屬植物變異鐵角蕨(Asplenium varians Wall.ex Hook.etGrev.)的全草。切成大約2 cm長度，曬干，粉碎，過20目篩備用。區(qū)分活性部位時稱取烏糾粉末1000 g置于10 L圓底燒瓶，用一定量的 60%乙醇在80℃下回流提取2.5 h后，真空抽濾，濾渣平行提取3次，合并抽濾液后，濾液經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，至無醇味，得到烏糾粗提取物。粗提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和乙酸乙酯進行萃取，回收有機溶劑，真空干燥(60 ℃)，制成干浸膏，分別得到石油醚提取活性部位浸膏、正丁醇提取活性部位浸膏、乙酸乙酯提取活性部位浸膏和水提取活性部位浸膏，稱量各提取活性部位質(zhì)量，計算提取率，臨用前，用芝麻油作溶劑，按生藥量稱取不同部位浸膏溶于100 mL芝麻油，配成溶液，待用。 菌株：金黃色葡萄球菌菌液，每1 mL含細菌5億個，由本校病理教研室提供。

1.2實驗方法

1.2.1造模及分組：取大鼠60只，10只作為空白組，其余50只大鼠制造瘡瘍模型，瘡瘍明星制作方法：在大鼠右側(cè)背部脫毛，2 d后腹腔注射10%水合氯醛(0.3 g/kg)麻醉大鼠，用刀片在脫毛部位劃一個十字切口(1 cm×1 cm)，深達皮下，然后在每個傷口內(nèi)注入1 mL金黃色葡萄球菌液，1次/d，連續(xù)3 d，至傷口周圍出現(xiàn)紅、腫、觸痛，可見膿性分泌物為止[5]。瘡瘍模型制作成功后，將50只瘡瘍模型大鼠隨機分為5組，每組10只，雌雄各半：即瘡瘍模型組，石油醚提取活性部位組、正丁醇提取活性部位組、乙酸乙酯提取活性部位組和水提取活性部位組。

1.2.2給藥方法：模型組和空白組用消毒藥棉吸附純香油0.3mL，敷在瘡瘍局部；其他各組按生藥量0.5 g/mL給藥0.3 mL。給藥后用紗布覆蓋膠布固定，使藥物與瘡瘍部位每天保持接觸時間6 h，6 h后用0.9%氯化鈉溶液洗凈藥物，給藥期間，所有大鼠均單籠飼養(yǎng)，以避免大鼠相互舔食藥物或啃噬傷口。連續(xù)給藥8 d，記錄從用藥起8 d內(nèi)，傷口每天的愈合情況。

1.3實驗指標：一般檢查主要包括日?；顒?、排泄物、平均食量、飲水量、行為現(xiàn)象。觀察局部感染情況、瘡面愈合情況和死亡情況。溶菌酶含量測定：連續(xù)給藥8 d，第9 d給藥后1 h，稱重后大鼠摘眼球取血，3000 r/min離心10 min，用試劑盒測定血清中溶菌酶的含量。大鼠瘡瘍模型胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)的檢測：取血后立即將大鼠斷頭處死，取胸腺及脾臟稱重，并分別計算其臟器指數(shù)。臟器指數(shù)計算公式如下：

2結(jié)果

2.1對大鼠瘡瘍模型的影響：整個實驗過程，空白組大鼠體毛光滑，飲食正常，反應敏捷，活動度好，體重增加明顯。除空白組外，其余各組大鼠瘡瘍模型形成過程中，各組均未見大鼠死亡，瘡瘍形成后，大鼠食欲和活動量明顯減少，精神萎靡不振，傷口紅、腫、熱，有觸痛感，創(chuàng)面出現(xiàn)清亮、稀薄的分泌物，甚至有少數(shù)大鼠出現(xiàn)便稀和背躬等現(xiàn)象。給藥過程中，模型對照組仍食量和運動量較少，多數(shù)大鼠聚集成團、分泌物變腥臭。給藥各組2 d后，石油醚活性部位組和正丁醇活性部位組大鼠活動量增加，瘡瘍部位紅腫現(xiàn)象和膿性分泌物有所緩解，4 d后，石油醚活性部位組和正丁醇活性部位組大鼠瘡瘍部位長出新肉芽，水提活性部位組活動量有所增加，8 d 后，除模型組外，其余各組大鼠活動量和食欲達到了基本正常，大鼠體質(zhì)量有所增加。石油醚活性部位組和正丁醇活性部位組瘡口皮膚紅腫消失，無分泌物，創(chuàng)面潔凈結(jié)痂。與模型組相比，石油醚提取活性部位組和正丁醇提取活性部位組促進金黃色葡萄球菌所致大鼠瘡瘍模型的愈合效果明顯。2.2對大鼠瘡瘍模型血清溶菌酶含量的影響：通過測定人體或動物體內(nèi)溶菌酶的含量變化情況，可以客觀反映苗藥烏糾不同活性部位對瘡瘍的治療情況。烏糾各活性部位對大鼠瘡瘍模型血清中溶菌酶含量的影響見表1。

組別溶菌酶(μg/mL)空白組30.90±3.44**模型組16.52±6.09石油醚活性部位組56.30±4.66**正丁醇活性部位組50.53±5.6**乙酸乙酯活性部位組39.59±4.15**水提取活性部位組48.72±8.12**

注：與瘡瘍模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

經(jīng)溶菌酶含量檢驗，通過與空白組比，溶菌酶含量明顯低于空白組大鼠的溶菌酶含量，表明實驗中模型組已經(jīng)出現(xiàn)顯著的瘡瘍病理損傷，病理變化顯著加重(P<0.01)，說明實驗造模成功；將各活性部位組溶菌酶含量與模型組比較，各活性部位組大鼠溶菌酶含量明顯高于模型組大鼠溶菌酶含量，說明烏糾各提取活性部位的浸膏均能有效增加大鼠溶菌酶的含量，提高大鼠抗菌、抗病毒和消腫等生理能力，對大鼠瘡瘍有明顯的治療和改善作用。其中石油醚活性部位組含菌酶含量增加最大，對瘡瘍的病理變化改善也最大；其改善效果情況為：石油醚活性部位組>正丁醇活性部位組>水提取活性部位組>乙酸乙酯活性部位組，說明烏糾各活性部位均可促使瘡瘍?nèi)笨诮M織修復閉合，減少炎細胞浸潤，具有很好的斂瘡生肌作用。

2.3對大鼠瘡瘍模型胸器指數(shù)的影響：脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的變化直接反映了機體免疫功能狀態(tài)。實驗各活性部位組、空白組和模型組大鼠瘡瘍模型臟器指數(shù)的影響見表2。

由表2可知，與模型組相比，乙醇提取活性部位組、正丁醇提取活性部位組、水提活性部位組和乙酸乙酯提取活性部位組均能增加大鼠瘡瘍模型的胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)，增強大鼠瘡瘍模型的免疫功能。

表2　對大鼠瘡瘍模型臟器指數(shù)的影響 ±s，n=10)

注：與瘡瘍模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

3討論

本文在對苗藥烏糾進行分段提取的基礎上，考查了苗藥烏糾石油醚取提取活性部位、乙酸乙酯提取活性部位、正丁醇提取活性部位和水提取活性部位對大鼠抗瘡瘍活性的實驗。結(jié)果表明，苗藥烏糾各提取活性部位均能有效提高大鼠瘡瘍模型血清中溶菌酶含量和影響大鼠模型的臟器指數(shù)，顯著改善瘡瘍病理變化，在對大鼠瘡瘍模型溶菌酶含量的影響方面：石油醚活性部位效果最優(yōu)，其次為正丁醇活性部位和水提取活性部位，乙酸乙酯活性部位溶菌酶含量和空白組相當；在對大鼠瘡瘍模型臟器指數(shù)的影響方面：各活性部位均能有效增加大鼠瘡瘍模型的臟器指數(shù)，增強大鼠的免疫力。結(jié)合大鼠瘡瘍模型治療恢復情況，烏糾中治療瘡瘍成分主要分布在石油醚活性部位和正丁醇活性部位。本實驗為苗藥烏糾治療瘡瘍提供了實驗依據(jù)。

參考文獻

[1]邱德文,杜江.中華本草·苗藥卷[M].貴陽:貴州科學技術(shù)出版社,2006.

[2]張粹昌.瘡瘍發(fā)病機制之探討[J].中國醫(yī)藥導報,2009,6(7):86.

[3]于永明.披針觀音座蓮和半邊鐵角蕨的化學成分及生物活性研究[D].中國醫(yī)學科學院博士學位論文, 2009:21-38.

[4]李春榮,孟鐵宏,王恒.苗藥烏糾不同提取部位的止血活性研究[J].中國民族民間醫(yī)藥,2015,24(6):1-2.[5]昌蘭芳.黃及瘡瘍膏治療大鼠瘡瘍模型的實驗研究[J].湖北中醫(yī)學院學報,2005,7(1):43.

基金項目：黔南民族醫(yī)學高等?？茖W?；?QNYZ201319)；黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校基金(QNYZ201510)；貴州省廳?？萍悸?lián)合基金(Gzwkj2012-2-018)

[中圖分類號]R932

[文獻標識碼]A學科分類代碼：31047

收稿日期：2015-08-21

Research on Active Part Form Miao Medicine Wet Jiub on Cure Rat Sore Model

Meng TiehongLi ChunrongWang Heng

(Qiannan Medical College for Nationalities, Duyun 558000,China)

AbstractObjectiveTo determine the active position of wet jiub on cure rat sore model.MethodsEstablishing sores ulcers rats model, compared with blank and model groups, to observe the effect of rats sore model, wound healing, viscera index and serum lysozyme in different active positon of wet jiub. ResultsThe different active position effectively improve the content of serum lysozyme, thymus index, spleen index, enhance the immune function of rats sore model, petroleum ether extract andn-butanol extract effect are remarkable to improve the serum lysozyme and cure the rats sore model. ConclusionThe activeingredients of cure sore mainly in petroleum ether extract and n-butanol extract from wet jiub.

Key wordsWet jiub；Active part；Sore model