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    早期針刺夾脊穴對(duì)MCAO大鼠腦紋狀體β-內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽水平的影響

    2016-08-03 06:29:03王春琛王麟鵬首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院北京100010
    上海針灸雜志 2016年5期
    關(guān)鍵詞:針刺療法內(nèi)啡肽夾脊

    王春琛,王麟鵬(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院,北京 100010)

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    ·動(dòng)物實(shí)驗(yàn)·

    早期針刺夾脊穴對(duì)MCAO大鼠腦紋狀體β-內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽水平的影響

    王春琛,王麟鵬
    (首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院,北京 100010)

    【摘要】目的觀察早期針刺夾脊穴對(duì)卒中后肢體痙攣大鼠腦紋狀體β-內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽水平的影響。方法將70只SD大鼠隨機(jī)分為A組(正常組)9只和B組(假手術(shù)組)10只,剩余大鼠制備卒中后肢體痙攣大鼠模型后隨機(jī)分為C組(模型組)、D組(針刺夾脊穴組)和E組(巴氯芬組)。D組采用針刺夾脊穴治療,E組采用巴氯芬片灌胃治療。治療7 d后,采用放射免疫方法檢測各組動(dòng)物腦紋狀體β-內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽水平。結(jié)果與A組和B組比較,C組、D組和E組β-內(nèi)啡肽水平均顯著升高(P<0.01);與C組比較,D組和E組β-內(nèi)啡肽水平均顯著升高(P<0.01,P<0.05);D組β-內(nèi)啡肽水平與E組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與A組和B組比較,C組、D組和E組內(nèi)強(qiáng)啡肽水平均均顯著升高(P<0.05,P<0.01);D組內(nèi)強(qiáng)啡肽水平和E組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論針刺夾脊穴能夠增加卒中后肢體痙攣大鼠腦紋狀體β-內(nèi)啡肽水平而不能改變腦紋狀體強(qiáng)啡肽水平,符合腦啡肽與痙攣關(guān)系,可改善動(dòng)物的痙攣狀態(tài)。

    【關(guān)鍵詞】針刺療法;穴,夾脊;痙攣;β-內(nèi)啡肽;強(qiáng)啡肽;中風(fēng)

    腦卒中已成為危害人類健康的最嚴(yán)重疾病之一,是全球第二大死因[1]。全世界每年有千萬人發(fā)生腦卒中,對(duì)近10年關(guān)于卒中的系統(tǒng)評(píng)價(jià)提示成人卒中后約1/3會(huì)發(fā)生痙攣[1-2],其中50%~83%的患者會(huì)有運(yùn)動(dòng)功能障礙,所遺留殘疾中痙攣狀態(tài)是卒中常見的并發(fā)癥之一,是上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損害后的常見并發(fā)癥[3]。卒中后肢體的痙攣狀態(tài)是妨礙其運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的最大障礙之一,隨著痙攣的疼痛及畸形導(dǎo)致患者失能的增加,畸形反過來又會(huì)加重痙攣,從而形成惡性循環(huán)。這種痙攣模式的存在,使得患者的日常生活受到嚴(yán)重限制,伴隨痙攣的卒中患者的醫(yī)療費(fèi)用是無痙攣出現(xiàn)患者的5倍[4]。研究表明,采用王氏夾脊穴早期針刺治療能有效預(yù)防腦卒中后偏癱痙攣狀態(tài)的發(fā)生,顯著提高患者的運(yùn)動(dòng)功能,療效明顯優(yōu)于常規(guī)取穴[5]。本研究通過觀察早期針刺夾脊穴對(duì)卒中后肢體痙攣大鼠腦紋狀體中β-內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽水平的影響,探討針刺治療改善腦卒中后肢體痙攣的可能機(jī)制,現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    健康Wisatar大鼠,雄性各半,體重為250~300 g,購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

    1.2模型制備

    采用Zea Longa線栓法復(fù)制大腦中動(dòng)脈缺血模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO)制造卒中后肢體痙攣大鼠模型,大鼠按35 mg/kg體重經(jīng)腹腔注射3%水合氯醛麻醉,仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上,備皮消毒后取頸部正中切口,暴露、分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)和頸外動(dòng)脈(ECA),用手術(shù)線結(jié)扎CCA近心端,顯微動(dòng)脈夾暫時(shí)夾閉CCA遠(yuǎn)心端和ECA近心端。在此段CCA上剪一切口,用0.24 mm的單股尼龍線緩慢插入,插進(jìn)之后放開動(dòng)脈夾,將線栓繼續(xù)進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA),直至遇到阻力為止。線栓進(jìn)入顱內(nèi)深度為距離CCA分叉處18~20 mm,此時(shí)插入的尼龍線正好封閉大腦中動(dòng)脈(middle cerebral artery,MCA)開口,阻斷MCA的血流。固定線栓,在切口遠(yuǎn)心端結(jié)扎CCA。清洗后,用青霉素敷于傷口預(yù)防感染,最后進(jìn)行分層縫合。

    1.3模型判定

    動(dòng)物蘇醒后采用Zea Longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。0分為無神經(jīng)功能損傷癥狀;1分為不能伸展對(duì)側(cè)前爪;2分為向外側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分為向?qū)?cè)傾倒;4分為不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失。選擇Zea Longa評(píng)分1~3分的動(dòng)物納入實(shí)驗(yàn)分組。

    1.4動(dòng)物分組及處理

    將70只SD大鼠隨機(jī)分為A組(正常組)9只和B組(假手術(shù)組)10只,剩余51只制備卒中后肢體痙攣大鼠模型。模型制備期間,術(shù)后48 h死亡19只,將32只成活的模型大鼠采用Zea Longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分,其中0分1只,1~3分29只,4分2只。再將Zea Longa評(píng)分為1~3分的大鼠隨機(jī)分為C組(模型組)9只、D組(針刺夾脊穴組)9只和E組(巴氯芬組)11只。

    D組造模后第2天采用針刺夾脊穴治療。取穴參照中國針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)制定的《動(dòng)物針灸穴位圖譜》和《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》,選取部分夾脊穴,①第2、10胸椎棘突下旁開3分,共4穴;②第6胸椎棘突下、第2腰椎棘突下旁開3分,共4穴。兩組穴位交替使用,各穴均行平補(bǔ)平瀉捻轉(zhuǎn)手法20 s。每日1次,連續(xù)治療7 d。

    E組以灌胃針管注入巴氯芬作為對(duì)照。在造模后第2天在胃管內(nèi)注入巴氯芬(按10 mg/kg計(jì)算)。每日1次,連續(xù)治療7 d。

    A組、B組和C組進(jìn)行與D組進(jìn)行相同時(shí)間、相同程度的捉抓刺激。

    1.5觀察指標(biāo)

    將各組實(shí)驗(yàn)大鼠快速暴露腦組織,取腦部紋狀體,將組織勻漿離心,取上清液后以放射免疫方法檢測紋狀體中β-內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽的含量。檢驗(yàn)試劑為I125標(biāo)記的β-內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽放免試劑盒(北京華英生物技術(shù)研究所)。

    1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    所以數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,方差齊,組間比較采用SNK分析法。

    2 結(jié)果

    2.1各組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分比較

    由表1可見,C組、D組和E組神經(jīng)功能評(píng)分與A組和B組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。D組和E組治療后神經(jīng)功能評(píng)分顯著下降,與C組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    表1 各組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分比較?。ā纒,分)

    表1 各組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分比較 (±s,分)

    注:與A組比較1)P<0.01;與B組比較2)P<0.01;與C組比較3)P<0.05

    組別 n 神經(jīng)功能評(píng)分A組 8 0.00±0.00 B組 8 0.00±0.00 C組 9 2.80±0.791)D組 9 2.10±0.981)2)3)E組 9 2.20±0.621)2)3)

    2.2各組大鼠紋狀體組織內(nèi)β-內(nèi)啡肽含量比較

    由表2可見,C組、D組和E組大鼠紋狀體組織內(nèi)β-內(nèi)啡肽含量與A組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.01)。D組和E組大鼠治療后紋狀體組織內(nèi)β-內(nèi)啡肽含量顯著升高,與C組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,P<0.05)。

    表2 大鼠紋狀體組織內(nèi)β-內(nèi)啡肽含量比較(±s,ng/mg)

    表2 大鼠紋狀體組織內(nèi)β-內(nèi)啡肽含量比較(±s,ng/mg)

    注:與A組比較1)P<0.01;與C組比較2)P<0.01,3)P<0.05

    組別 n β-內(nèi)啡肽A組 8 66.57±7.22 B組 8 61.88±14.44 C組 9 82.80±11.491)D組 9 99.95±11.941)2)E組 9 96.26±13.081)3)

    2.3各組大鼠紋狀體組織內(nèi)強(qiáng)啡肽含量比較

    由表3可見,C組、D組和E組大鼠紋狀體組織內(nèi)強(qiáng)啡肽含量與A組和B組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。

    表3 各組大鼠紋狀體組織內(nèi)強(qiáng)啡肽含量比較(±s,pg/mg)

    表3 各組大鼠紋狀體組織內(nèi)強(qiáng)啡肽含量比較(±s,pg/mg)

    注:與A組比較1)P<0.05;與B組比較2)P<0.01

    組別 n 強(qiáng)啡肽A組 8 34.06±5.12 B組 8 29.15±9.07 C組 9 41.40±12.201)2)D組 9 42.60±8.041)2)E組 9 36.75±7.701)2)

    3 討論

    夾脊穴又稱“華佗夾脊穴”“俠脊”“脊旁”“華佗穴”,位于督脈及膀胱經(jīng)之間,又位于胸部及腹氣街中,與督脈、太陽經(jīng)關(guān)系密切,又與五臟六腑、腦、髓、女子胞相聯(lián)系,具有背腧穴的特殊功用。夾脊穴位主治范圍較廣,其中上胸部穴位可治療心肺及上肢病證;下胸部穴位可治療胃腸部病證;腰部穴位可治療腰部、腹部及下肢病證?,F(xiàn)代研究認(rèn)為夾脊穴具有調(diào)節(jié)植物神經(jīng)的功能,故采用夾脊穴來治療一些與植物神經(jīng)功能相關(guān)的疾病。此外,夾脊穴參與脊神經(jīng)的調(diào)節(jié),通過解剖夾脊穴發(fā)現(xiàn)附近具有脊神經(jīng)后支伴行,在與對(duì)應(yīng)水平關(guān)系上,夾脊穴與脊神經(jīng)后支相平行的占半數(shù),其高于或低于夾脊穴水平的其神經(jīng)纖維亦覆蓋了相應(yīng)穴位區(qū)域,夾脊穴與其旁的交感神經(jīng)干相近,針刺夾脊穴可間接興奮交感神經(jīng)的低級(jí)中樞,可有效調(diào)節(jié)植物神經(jīng)功能紊亂引起的相關(guān)疾病,同時(shí)具有鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫及影響病理組織學(xué)等功用。

    一項(xiàng)系統(tǒng)評(píng)價(jià)[6]提示針刺對(duì)于治療卒中后痙攣是有效的。對(duì)卒中后局部不當(dāng)刺激可能會(huì)加重偏癱肢體痙攣狀態(tài),易導(dǎo)致痙攣模式形成,影響患者患肢功能的恢復(fù)。有學(xué)者提出“針灸良性預(yù)應(yīng)激假說”,認(rèn)為針灸預(yù)處理的作用機(jī)理可能與現(xiàn)代應(yīng)激學(xué)說密切相關(guān)[7],針刺預(yù)處理是指在機(jī)體無病或疾病尚未發(fā)生之前預(yù)先應(yīng)用針灸方法激發(fā)經(jīng)絡(luò)之氣以扶助正氣,提高機(jī)體抵御各種致病的能力,從而防止疾病發(fā)生,減輕其相關(guān)損害,是一種注重機(jī)體自我潛能激發(fā)與利用的治療方法。其理論淵源是后世根據(jù)《內(nèi)經(jīng)》中“治未病”的原則。由于脊髓上神經(jīng)通路未能起到適當(dāng)調(diào)節(jié),導(dǎo)致肌肉流變性質(zhì)改變、脊髓水平神經(jīng)旁路重建及脊髓反射亢進(jìn)[8]。臨床上患者患側(cè)肌體痙攣多見上肢屈肌肌群和下肢伸肌肌群,形成“Wernickce-Mann”體位。金澤等[9]將60例中風(fēng)偏癱患者隨機(jī)分為治療組30例和對(duì)照組30例,觀察發(fā)現(xiàn)治療組采用頸、腰部夾脊穴針刺法配合常規(guī)針刺法,對(duì)照組采用常規(guī)針刺法,治療組對(duì)痙攣狀態(tài)的改善優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。程金蓮等[5]運(yùn)用王氏夾脊穴進(jìn)行卒中早期干預(yù),結(jié)果顯示,在患者卒中早期肌張力未增高的情況下針刺夾脊穴可以有效預(yù)防卒中后期可能發(fā)生的肢體痙攣。急性腦卒中后機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài),組織缺血缺氧后代謝紊亂,上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元受損,對(duì)下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元抑制性減低,平衡狀態(tài)被打破。針灸作為一種刺激方法,通常以機(jī)械刺激、熱刺激、藥物刺激、電刺激、光刺激等物理化學(xué)方式,在機(jī)體特定的時(shí)期刺激人體相關(guān)腧穴,通過經(jīng)絡(luò)系統(tǒng)對(duì)多靶點(diǎn)和疾病過程的多環(huán)節(jié)產(chǎn)生調(diào)節(jié),達(dá)到激發(fā)經(jīng)絡(luò)之氣、協(xié)調(diào)陰陽、啟動(dòng)機(jī)體自身內(nèi)在整體調(diào)節(jié)能力的目的。

    肌張力通過脊髓反射活動(dòng)來維持,是由脊髓和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元共同作用的結(jié)果[10-13]。卒中后痙攣是上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損害、易化作用消失后引起脊髓水平的中樞反射抑制作用消失,致使低級(jí)中樞的原始反射功能亢進(jìn),造成運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元在反射過程中占優(yōu)勢(shì)而見的臨床病理現(xiàn)象[14]。阿片肽是免疫系統(tǒng)中重要調(diào)節(jié)因子,作用于幾乎所有的免疫活性細(xì)胞,釋放受應(yīng)激的影響,而應(yīng)激狀態(tài)影響免疫應(yīng)答反應(yīng),間接提示阿片肽可能是應(yīng)激引起免疫調(diào)節(jié)的介質(zhì),參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變。β-內(nèi)啡肽作為一種內(nèi)源性阿片肽,大量存在于腦內(nèi)垂體及少量存在于脊髓前角中,在參與神經(jīng)系統(tǒng)的病理生理過程中,作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有興奮迷走神經(jīng)張力并抑制交感神經(jīng)張力的作用,對(duì)膽堿能神經(jīng)及兒茶酚胺的釋放具有調(diào)控作用,可起到中樞性鎮(zhèn)靜作用,抑制上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷后脊髓活躍狀態(tài)。針刺可升高M(jìn)CAO大鼠脊髓內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽水平,調(diào)節(jié)阿片樣物質(zhì)分泌緩解肌張力,其效果等同于巴氯芬的藥物作用[15]。高頻電刺激能促進(jìn)脊髓強(qiáng)啡肽釋放,抑制脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的興奮性,起到緩解肌肉痙攣的作用[16]。脊髓繼發(fā)性損傷過程中,鈣離子持續(xù)性增高,導(dǎo)致細(xì)胞能量代謝障礙和胞膜通透性發(fā)生異常變化,神經(jīng)細(xì)胞毒性水腫;強(qiáng)啡肽在組織內(nèi)的劑量濃度和脊髓損傷的程度呈劑量依賴性,低濃度的強(qiáng)啡肽可抑制去極化的鈣離子內(nèi)流,高濃度的強(qiáng)啡肽可使細(xì)胞內(nèi)的鈣離子持續(xù)增高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,小劑量強(qiáng)啡肽引起鎮(zhèn)痛,此時(shí)大鼠疼痛甩尾潛伏期的升高是可恢復(fù)的;而大劑量強(qiáng)啡肽可引起麻痹,此時(shí)甩尾潛伏期的升高是不可逆的,提示高濃度的強(qiáng)啡肽的釋放可起到神經(jīng)麻痹作用,并不可逆的作用于神經(jīng)損害的病理過程中[17]。同時(shí),由阿片μ受體(μopioid receptor,MOR)介導(dǎo)的內(nèi)源性阿片樣物質(zhì)具有直接調(diào)節(jié)GABA能神經(jīng)元的作用[18-19]。強(qiáng)啡肽、β-內(nèi)啡肽等阿片樣物質(zhì)與GABA能神經(jīng)元形成密切接觸[20],提示內(nèi)源性阿片樣物質(zhì)的終末可能通過與阿片μ受體結(jié)合,調(diào)節(jié)GABA能神經(jīng)元的活動(dòng),從而達(dá)到緩解肌肉痙攣的作用。

    本研究結(jié)果顯示,針刺夾脊穴可增加腦紋狀體β-內(nèi)啡肽分泌水平,但不影響其強(qiáng)啡肽水平,提示針刺夾脊穴能有效調(diào)節(jié)腦梗死后腦中阿片樣物質(zhì)的分泌,從而達(dá)到緩解痙攣的目的。有關(guān)針刺對(duì)卒中后痙攣大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)阿片樣物質(zhì)的具體調(diào)節(jié)途徑和作用靶點(diǎn)則有待進(jìn)一步深入研究。

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    【中圖分類號(hào)】R2-03

    【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

    DOI:10.13460/j.issn.1005-0957.2016.05.0579

    文章編號(hào):1005-0957(2016)05-0579-04

    收稿日期2015-12-14

    基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81072859);北京市科技計(jì)劃研發(fā)攻關(guān)類重大課題(D09050703550902);北京市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(7102084)

    作者簡介:王春?。?982-),女,主治醫(yī)師

    通信作者:王麟鵬(1954-),男,主任醫(yī)師,Email:wlp5558@sina.com

    Effect of Early Acupuncture at Huatuo Jiajipoints on Striatal β-endorphin and Dynorphin Levels in MCAO Rats

    WANG Chun-chen,WANG Lin-peng.
    Capital Medical University Beijing Hospital of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100010,China

    [Abstract]ObjectiveTo investigate the effect of early acupuncture at Huatuo jiaji points on striatal β-endorphin and dynorphin levels in rats with post-stroke limb spasm.MethodsSeventy SD rats were randomized into group A(normal)of 9 rats and group B (sham operation)of 10 rats.After a model of post-stroke limb spasm was made in the remaining rats,they were randomized into groups C(model),D(acupuncture at Huatuo jiaji points)and E(baclofen).Group D received acupuncture at Huatuo jiaji points and group E,an oral gavage of baclofen tablets.After seven days of treatment,striatal β-endorphin and dynorphin levels were neasured by radioimmunoassay.Resultsβ-endorphin levels increased significantly in groups C,D and E compared with groups A and B (P<0.01)and also in groups D and E compared with group C(P<0.01,P<0.05).There was no statistically significant difference in β-endorphin levels between groups D AND E(P>0.05).Dynorphin levels increased significantly in groups C,D and E compared with groups A and B(P<0.05,P<0.01).There was no statistically significant difference in dynorphin levels between groups D and E(P>0.05).ConclusionsAcupuncture at Huatuo jiaji points can increase striatal β-endorphin levels but not change striatal dynorphin levels,which conforms to the relationship between enkephalin and spasm,and improve the animal's spasticity.

    [Key words]Acupuncture therapy;Points,Huatuo jiaji;Spasm;β-Endorphin;Dynorphin;Stroke

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