• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位胃粘膜保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究

    2016-08-01 03:45:10鄢榮榜盧巧巧賀海波王心怡張永峰覃慧林汪鋆植
    關(guān)鍵詞:胃粘膜木瓜內(nèi)生

    鄢榮榜 盧巧巧 賀海波 王心怡 張永峰 覃慧林 汪鋆植

    (1. 三峽大學(xué) 生物與制藥學(xué)院, 湖北 宜昌 443002; 2. 湖北航天杜勒制藥有限公司, 湖北 宜昌 443100; 3. 三峽大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 湖北 宜昌 443002)

    ?

    木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位胃粘膜保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究

    鄢榮榜1,2盧巧巧3賀海波1王心怡3張永峰1覃慧林1汪鋆植1

    (1. 三峽大學(xué) 生物與制藥學(xué)院, 湖北 宜昌443002; 2. 湖北航天杜勒制藥有限公司, 湖北 宜昌443100; 3. 三峽大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 湖北 宜昌443002)

    摘要:研究了木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位胃粘膜保護(hù)作用及可能的機(jī)制.將昆明小鼠完全隨機(jī)分為空白組、模型組、木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位(50、100 mg/kg)及奧美拉唑(20 mg/kg)組,給藥組小鼠分別灌胃給予相應(yīng)藥物,每天1次,連續(xù)5 d,末次給藥1 h后,除空白組外,各組小鼠分別安10 ml/kg灌胃給予阿司匹林的乙醇溶液(15 mg阿司匹林溶解于10 ml 80%乙醇中),4 h后取胃,延胃大彎剖開,除去胃內(nèi)容物,觀察胃粘膜外觀形態(tài),并計(jì)算胃潰瘍發(fā)生率、胃潰瘍指數(shù)及胃潰瘍抑制率;刮取胃粘膜,勻漿后,取上清,用試劑盒檢測(cè)胃粘膜中H+/K+-ATPase、COX-2和PGE2活性;取胃粘膜組織,經(jīng)HE染色后進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察.木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位能明顯降低胃粘膜中H+/K+-ATPase、COX-2活性,升高PGE2活性,改善胃粘膜組織形態(tài),促進(jìn)潰瘍愈合(P<0.05或P<0.01).結(jié)果表明木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位對(duì)胃粘膜損傷有較好的保護(hù)作用,其作用機(jī)制與其抑制胃粘膜COX-2、H+/K+-ATPase活性和增強(qiáng)PGE2活性有關(guān),然而是木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位中的何種有效部位/成分起作用及確切的作用機(jī)制目前正在進(jìn)一步研究中.

    關(guān)鍵詞:木瓜內(nèi)生真菌;胃粘膜保護(hù)作用;H+/K+-ATPase;COX-2;PGE2

    木瓜Chaenomelesspeciosa(sweet)Nakaion為我國(guó)傳統(tǒng)的中藥,同時(shí)也是民間應(yīng)用廣泛的食材.具有平肝舒筋、和胃化濕之功效,主要用于風(fēng)濕痹痛、消化不良和胃腸炎等治療[1].我們前期研究發(fā)現(xiàn)其乙酸乙酯部位和木瓜三萜均具有較好的胃粘膜保護(hù)作用[2-4].本研究擬在此基礎(chǔ)上,從其內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物來(lái)研究其對(duì)胃粘膜的保護(hù)作用.

    1材料與儀器

    1.1木瓜內(nèi)生真菌

    木瓜內(nèi)生真菌分離自資丘木瓜的果皮部分,木瓜樣品采集于湖北省長(zhǎng)陽(yáng)縣榔坪鎮(zhèn).

    1.2培養(yǎng)基

    馬鈴薯固體培養(yǎng)基(PDA):200 g去皮馬鈴薯?yè)v碎后,煎煮30 min,過(guò)濾,取濾液分別加入20 g葡萄糖,20 g瓊脂,用蒸餾水定容至1 000 mL,然后在1.25×105Pa壓力下,滅菌20 min,即得.

    1.3動(dòng)物

    75只體重為18~22 g的雄性SPF級(jí)昆明小鼠(購(gòu)自三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心),動(dòng)物生產(chǎn)許可證:SCXK(鄂)2011-0012.每籠5只,分開飼養(yǎng),小鼠在動(dòng)物中心屏障系統(tǒng)適應(yīng)環(huán)境3天后開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn).

    1.4試劑

    阿司匹林腸溶片(中國(guó)北京拜耳醫(yī)藥保健有限公司);無(wú)水乙醇(國(guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司),H+/K+-ATPase試劑盒(南京建成生物制品研究所),COX-2 ELISA試劑盒(上海嵐派生物科技有限公司),PGE2 ELISA試劑盒(深圳達(dá)科為生物技術(shù)有限公司),其它試劑均為市售分析純.

    1.5儀器

    電子分析天平(上海天平儀器廠),Vortex-Genie 2型渦旋振蕩器(美國(guó)奧然科技有限公司),酶標(biāo)儀(瑞士Tecan公司),脫水機(jī)(德國(guó)Leica公司),切片機(jī)(奧地利Leica公司),圖像采集系統(tǒng)(德國(guó)Leica公司),倒置顯微鏡(日本Olympus公司).

    2方法

    2.1木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位的制備

    將采集的資丘木瓜依次用5%NaClO溶液和75%酒精表面消毒5 min后,取木瓜果皮接種于PDA培養(yǎng)基中,置于28℃恒溫箱中培養(yǎng).待菌絲長(zhǎng)出后,挑取尖端菌絲移至新的PDA培養(yǎng)基上,經(jīng)幾次純化后得到內(nèi)生真菌并轉(zhuǎn)接到試管斜面,進(jìn)行活化,然后選取活化的菌株,接種到含PDA的固體平板上,當(dāng)菌落生長(zhǎng)到Φ大約6 cm,接種至裝量為200 mL/500 mL的液體PDA培養(yǎng)基三角瓶中,置旋轉(zhuǎn)式搖床于28℃,120 rpm條件下,培養(yǎng)2~3 d,即得種子液,然后將PDA液體培養(yǎng)基分裝于500 mL三角瓶中,裝液量為200 mL,發(fā)酵200瓶,于121℃、1.25×105Pa下滅菌30 min,然后將種子液按5%的接種量接入已滅菌好的PDA液體培養(yǎng)基中,在溫度為28℃,轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分的搖床中培養(yǎng)20 d,發(fā)酵液用紗布過(guò)濾后,分為上清液和菌絲體.將菌絲體干燥、粉碎后,用95%乙醇回流提取3次,每次2 h,將提取液和發(fā)酵后的上清液合并,減壓濃縮得總浸膏,然后將其依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,取乙酸乙酯萃取液濃縮成浸膏,得到木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位.使用前用0.5%羧甲基纖維鈉溶液(0.5%CMC-Na)配成相應(yīng)濃度的混懸液,備用.

    2.2實(shí)驗(yàn)分組及胃潰瘍模型的建立

    將實(shí)驗(yàn)小鼠按每組15只完全隨機(jī)分為空白組、胃潰瘍模型組、木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位(50、100 mg/kg)和奧美拉唑(20 mg/kg)組,給藥組灌胃給予相應(yīng)的藥物,空白組和胃潰瘍模型組則給予0.5%CMC-Na溶液,每天1次,連續(xù)5 d,末次給藥1 h后,除空白組外,各組小鼠分別安10 mL/kg灌胃給予阿司匹林的乙醇溶液(15 mg阿司匹林溶解于10 mL 80%乙醇中),4 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn).

    2.3檢測(cè)指標(biāo)

    2.3.1潰瘍指數(shù)的測(cè)定

    小鼠均頸椎脫臼處死,取胃,肉眼觀察胃黏膜外觀形態(tài).按照我們已發(fā)表文章的方法[2]進(jìn)行潰瘍發(fā)生率、潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率的分析.

    2.3.2胃粘膜組織中H+/K+-ATPase、COX-2和PGE2活性測(cè)定

    完成胃粘膜損傷分析后,用載玻片刮取胃粘膜,稱量后,按1∶49加入0.9%氯化鈉溶液制成勻漿液,離心后,取上清液,按照試劑盒介紹的檢測(cè)方法測(cè)定H+/K+-ATPase、COX-2和PGE2活性.

    2.3.3胃粘膜組織形態(tài)學(xué)觀察

    取胃竇部分用多聚甲醛(4%)進(jìn)行固定后,用梯度乙醇脫水后,石蠟包埋,按片后4 μm進(jìn)行連續(xù)切片,然后進(jìn)行HE,在顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析.

    2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    3結(jié)果

    3.1木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位對(duì)小鼠胃潰瘍的影響

    由圖1可見,空白對(duì)照組小鼠胃粘膜呈現(xiàn)淡紅色,粘膜皺襞光滑,未見出血點(diǎn);模型組可見彌散性出血點(diǎn),腺胃部粘膜出現(xiàn)充血、水腫及糜爛點(diǎn);木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位組均可抑制潰瘍形成.經(jīng)胃潰瘍指數(shù)分析,木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位(50、100 mg/kg)均可顯著減少胃潰瘍指數(shù),而且隨著劑量的增加,其作用效果更為顯著;通過(guò)計(jì)算分析,木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位(50、100 mg/kg)對(duì)胃潰瘍抑制率分別為32.5%、50.3%、62.4%(見表1).實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位對(duì)乙醇和阿司匹林致小鼠胃潰瘍損傷具有較好的保護(hù)作用.

    表1 木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位對(duì)小鼠胃潰瘍的影響±s)

    與正常組比較#P<0.05,##P<0.01;與模型組比較*P<0.05,**P<0.01.

    3.2木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位對(duì)胃粘膜組織中H+/K+-ATPase、COX-2和PGE2活性的影響

    由表2可見,模型組胃粘膜組織中H+/K+-ATPase和COX-2活性顯著升高,PGE2活性明顯降低,與正常組比較具有顯著性差異(P<0.01);用木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位和奧美拉唑治療后,上述異常變化均得到了顯著改善(P<0.05,P<0.01).

    表2 木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位對(duì)胃粘膜組織中H+/K+-ATPase、COX-2和PGE2活性的影響

    與正常組比較#P<0.05,##P<0.01;與模型組比較*P<0.05,**P<0.01.

    3.3木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位對(duì)胃粘膜組織形態(tài)學(xué)的影響

    由圖2可見,胃粘膜組織經(jīng)HE染色后,光鏡下觀察可見,正常組胃粘膜層次清楚,上皮完整,腺體排列整齊,無(wú)充血、糜爛現(xiàn)象.模型組胃粘膜可見充血擴(kuò)張及糜爛性出血,上皮細(xì)胞脫落,腺體排列紊亂,并可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn).而木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位和奧美拉唑組胃粘膜未見明顯損傷,少見充血擴(kuò)張及炎性浸潤(rùn).

    A.正常組;B.模型組;C.木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位50mg/kg組;D.木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位100mg/kg組;E.奧美拉唑組圖2 木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位對(duì)小鼠胃粘膜組織形態(tài)學(xué)的影響

    4討論

    近20年來(lái),隨著許多非感染性疾病,如心腦血管疾病、機(jī)體衰老等人口的老齡化疾病被相繼證實(shí)與機(jī)體的炎癥反應(yīng)密切相關(guān).近年來(lái),學(xué)者們發(fā)現(xiàn)阿司匹林等非甾體抗炎藥(NSAIDs)可有效降低胃癌、結(jié)腸癌等消化道腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)和預(yù)防心腦血管疾病,使得NSAIDs成為了世界上應(yīng)用最多的藥品之一,在中國(guó)其用量?jī)H次于抗感染藥物[5].然而隨著其臨床應(yīng)用范圍的擴(kuò)大,NSAIDs相關(guān)性胃粘膜損傷的病例也越來(lái)越多.盡管臨床有鋁/鉍制劑、H2受體拮抗劑、胃泌素受體及質(zhì)子泵抑制劑可供選用,但往往由于存在療效不持久、停藥后容易復(fù)發(fā)、副反應(yīng)等缺點(diǎn),使其臨床應(yīng)用受到了極大限制[6-8].因此,尋找有效防治胃粘膜損傷的措施越來(lái)越引起人們的關(guān)注.木瓜是常用藥食同源藥材,在民間應(yīng)用極為廣泛.《本草綱目》記載該藥具有舒筋活絡(luò)、和胃化濕之功,可用于腰酸腿痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的治療.我們前期計(jì)算分析和實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),其三萜類成分及其中的齊墩果酸在抗炎的同時(shí),顯示出了較好的胃粘膜保護(hù)作用[2-4].根據(jù)以上觀點(diǎn),我們進(jìn)行了木瓜中內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位對(duì)胃粘膜損傷的保護(hù)作用研究.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位可顯著降低胃粘膜組織中H+/K+-ATPase、COX-2活性,升高PGE2活性,降低胃潰瘍發(fā)生率、胃潰瘍指數(shù),升高潰瘍抑制率,改善胃粘膜組織形態(tài)學(xué),表現(xiàn)出對(duì)小鼠胃黏膜損傷良好的保護(hù)作用.

    現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)胃粘膜有著完善的防御體系,它由粘液-碳酸氫鹽-磷脂屏障、上皮細(xì)胞屏障和胃粘膜的微循環(huán)三級(jí)胃粘膜保護(hù)屏障組成.在該體系中,攻擊因子(H+、胃蛋白酶、H+/K+-ATPase、IL-6、IL-1β、TNF-α、COX-2)和防御因子(COX-1、TGF-β、PG、PGE2)維持著動(dòng)態(tài)平衡,當(dāng)攻擊因子強(qiáng)于防御因子是,胃粘膜表現(xiàn)為胃粘膜損傷[9-10].防治胃粘膜損傷的根本目的是恢復(fù)攻擊因子和防御因子間的動(dòng)態(tài)平衡,恢復(fù)胃粘膜防御屏障正常功能.在實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn),胃潰瘍模型小鼠用木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位治療后,胃粘膜組織中H+/K+- ATPase、COX-2活性明顯降低,PGE2活性顯著降低,且具有明顯劑量依賴性,該結(jié)果也與其改善胃粘膜組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致.

    綜上所述,木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位能降低胃粘膜組織中H+/K+- ATPase、COX-2活性,升高PGE2活性,降低胃潰瘍發(fā)生率、胃潰瘍指數(shù),提高胃潰瘍抑制率及改善胃粘膜組織形態(tài).其保護(hù)作用可能與抑制胃粘膜損傷攻擊因子H+/K+-ATPase、COX-2的活性及增強(qiáng)防御因子PGE2活性有關(guān),然而是木瓜內(nèi)生真菌乙酸乙酯萃取部位中的何種有效部位/成分起作用及確切的作用機(jī)制目前正在進(jìn)一步研究中.

    參考文獻(xiàn):

    [1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1997:349-350.

    [2]覃慧林,王愛玲,鄧為,等.木瓜乙酸乙酯部位對(duì)小鼠急性胃潰瘍的保護(hù)作用[J].中藥藥理與臨床,2015,31(2):45-49.

    [3]汪鋆植,閆喜明,田華詠,等.以土家醫(yī)三元論為指導(dǎo)的反選法在新藥研究中的應(yīng)用[J].中草藥,2015,46(15):2189-2192.

    [4]Wang J Z, Sun W J, Luo H J, et al. Protective Effect of Eburicoic Acid of the Chicken of the Woods Mushroom, Laetiporus Sulphureus (Higher Basidiomycetes), Against Gastric Ulcers in Mice[J]. Int J Med Mushrooms, 2015, 17 (7):619-626.

    [5]Crofford L J. Use of NSAIDs in Treating Patients with Arthritis[J]. Arthritis Res Ther, 2013, 15(3):S2.

    [6]Griffin M R. Epidemiology of Nonsteroidal Anti-inflammatory Drug-associated Gastrointestinal Injury[J]. Am J Med, 1998, 104 (3A):23S-29S.

    [7]Takeuchi K. Pathogenesis of NSAID-induced Gastric Damage: Importance of Cyclooxygenase Inhibition and Gastric Hypermotility[J]. World J Gastroenterol, 2012, 18 (18):2147-2160.

    [8]Davies N M, Smith G D, Windmeijer F, et al. COX-2 Selective Nonsteroidal Anti-inflammatory Drugs and Risk of Gastrointestinal Tract Complications and Myocardial Infarction:an Instrumental Variable Analysis[J]. Epidemiology, 2013, 24(3):352-362.

    [9]Tarnawski A S, Ahluwalia A, Jones M K. The Mechanisms of Gastric Mucosal Injury: Focus on Microvascular Endothelium as a Key Target[J]. Curr Med Chem, 2012,19 (1):4-15.

    [10] Tarnawski A S, Ahluwalia A. Molecular Mechanisms of Epithelial Regeneration and Neovascularization During Healing of Gastric and Esophageal Ulcers[J]. Curr Med Chem, 2012,19 (1):16-27.

    [責(zé)任編輯周文凱]

    收稿日期:2016-01-04

    基金項(xiàng)目:湖北省民間藥物工程研究中心(2015ZY007);三峽大學(xué)生物與制藥學(xué)院預(yù)研基金(No. Hy1402)

    通信作者:賀海波(1972-),男,副教授,博士,主要從事土家族藥物的活性評(píng)價(jià)及開發(fā)研究.E-mail:hehaibo252219@163.com.

    DOI:10.13393/j.cnki.issn.1672-948X.2016.02.021

    中圖分類號(hào):R282.71

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    文章編號(hào):1672-948X(2016)02-0092-05

    Experimental Study of Protective Effect of Gastric Mucosa of Ethyl Acetate Part of Endophytic Fungi fromChaenomelesSpeciosa(sweet) Nakaion

    Yan Rongbang1,2Lu Qiaoqiao3He Haibo1Wang Xinyi3Zhang Yongfeng1Qin Huilin1Wang Junzhi1

    (1. College of Biology & Pharmacy, China Three Gorges Univ., Yichang 443000, China; 2. Hubei Aerospace Du Le Pharmaceutical Co., Ltd., Yichang 443100, China; 3. Medical College, China Three Gorges Univ., Yichang 443002, China)

    AbstractTo investigate the protective effect of gastric mucosa of ethyl acetate part of endophytic fungi from Chaenomeles speciosa (sweet) Nakaion on gastric ulcer injury in mice, and to explore its possible mechanism, the experimental mice were randomly divided into control, model, ethyl acetate part of endophytic fungi from Chaenomeles speciosa (sweet) Nakaion (50 and 100) and omeprazole groups (20mg/kg), 15 mice each group. The gastric ulcers injury were generated by administration of the mixture of ethanol and aspirin which was made up of 10ml 80% ethanol and 15mg aspirin at the 4 hour after drugs on 5th day. The ulcer index, ulcer inhibition rate, histopathological changes, the H+/K+-ATPase, COX-2 and PGE2 activities in gastric mucosa were assessed. The ethyl acetate part of endophytic fungi from Chaenomeles speciosa (sweet) Nakaion (50,100mg/kg) might remarkably decrease H+/K+-ATPase, COX-2 activities, and increase PGE2 in gastric mucosa, ameliorate ulcer index, ulcer inhibition rate, histomorphology (P<0.05 and P<0.01). The ethyl acetate part of endophytic fungi from Chaenomeles speciosa (sweet) Nakaion possess a good protective effect on gastric mucosa injury in mice, inhibiting the activities of H+/K+-ATPase, COX-2, and enhancing PGE2 activity might be one of its molecular mechanisms; but its chemical composition and detailed active mechanisms of toxicity are under studying.

    KeywordsEndophytic fungi from Chaenomeles speciosa (sweet) Nakaion;protective effect of gastric mucosa;H+/K+-ATPase;COX-2;PGE2

    猜你喜歡
    胃粘膜木瓜內(nèi)生
    同叫“木瓜”,功效不同
    植物內(nèi)生菌在植物病害中的生物防治
    內(nèi)生微生物和其在作物管理中的潛在應(yīng)用
    “黨建+”激活鄉(xiāng)村發(fā)展內(nèi)生動(dòng)力
    胃粘膜下腫物的臨床特征和內(nèi)鏡治療效果評(píng)價(jià)
    木瓜老奶奶的云
    木瓜老奶奶的云
    授人以漁 激活脫貧內(nèi)生動(dòng)力
    植物幫之木瓜
    胃粘膜pH值測(cè)定對(duì)小兒重癥肺炎合并胃粘膜損傷的診斷價(jià)值
    欧美bdsm另类| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 三级经典国产精品| 国产69精品久久久久777片| 深爱激情五月婷婷| 亚洲国产精品一区三区| 国产精品一及| 国产黄色免费在线视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲美女视频黄频| 亚洲精品一二三| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久ye,这里只有精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 午夜免费观看性视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产成人freesex在线| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 中国三级夫妇交换| 亚洲国产精品一区三区| 2021少妇久久久久久久久久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产一级毛片在线| 精品酒店卫生间| 国产精品偷伦视频观看了| 免费av中文字幕在线| 亚洲av免费高清在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久鲁丝午夜福利片| av播播在线观看一区| 久久久精品94久久精品| 成人特级av手机在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 在线精品无人区一区二区三 | 如何舔出高潮| 免费少妇av软件| 欧美区成人在线视频| 国产精品av视频在线免费观看| 国产av国产精品国产| 亚洲成人一二三区av| 久久av网站| 男女边摸边吃奶| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲国产欧美在线一区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 只有这里有精品99| 黄色配什么色好看| 久久久久国产网址| 少妇 在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 51国产日韩欧美| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲高清免费不卡视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 成年免费大片在线观看| 97在线人人人人妻| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲久久久国产精品| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲av国产av综合av卡| 视频区图区小说| 18禁在线播放成人免费| 一级毛片我不卡| 99热全是精品| 另类亚洲欧美激情| 一区在线观看完整版| 午夜免费鲁丝| 国产精品久久久久久久久免| 国产熟女欧美一区二区| 国产亚洲91精品色在线| 久久精品国产亚洲网站| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日本色播在线视频| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品久久久久久久久免| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美变态另类bdsm刘玥| 91精品一卡2卡3卡4卡| 少妇 在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲av日韩在线播放| 麻豆乱淫一区二区| 国产高清有码在线观看视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲欧美日韩卡通动漫| av女优亚洲男人天堂| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成人综合一区亚洲| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 1000部很黄的大片| 国产一区二区在线观看日韩| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲精品成人av观看孕妇| 极品少妇高潮喷水抽搐| 色5月婷婷丁香| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 99久国产av精品国产电影| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 一级av片app| 大香蕉久久网| 国产成人免费观看mmmm| 久久国内精品自在自线图片| 18+在线观看网站| 亚洲精品视频女| xxx大片免费视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产男女内射视频| 99久久精品热视频| 亚洲色图av天堂| 欧美97在线视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产免费视频播放在线视频| 麻豆国产97在线/欧美| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日本黄大片高清| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美精品亚洲一区二区| 网址你懂的国产日韩在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 波野结衣二区三区在线| 麻豆国产97在线/欧美| 国产乱来视频区| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久久色成人| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 美女主播在线视频| 日韩欧美精品免费久久| kizo精华| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 简卡轻食公司| www.av在线官网国产| 久久久成人免费电影| 春色校园在线视频观看| 亚洲人成网站在线观看播放| www.色视频.com| 99久国产av精品国产电影| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲成人中文字幕在线播放| av卡一久久| tube8黄色片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产视频首页在线观看| 水蜜桃什么品种好| 欧美成人午夜免费资源| 极品少妇高潮喷水抽搐| 麻豆乱淫一区二区| 99久国产av精品国产电影| 一级二级三级毛片免费看| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产 一区精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 男女国产视频网站| 91精品伊人久久大香线蕉| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产伦理片在线播放av一区| 两个人的视频大全免费| av免费在线看不卡| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久精品国产亚洲av天美| 日本免费在线观看一区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 99热这里只有精品一区| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲综合精品二区| 99re6热这里在线精品视频| av免费在线看不卡| 如何舔出高潮| 欧美精品一区二区大全| 大片免费播放器 马上看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 久久99精品国语久久久| 一本久久精品| 色5月婷婷丁香| 免费大片18禁| 成人综合一区亚洲| 国产伦精品一区二区三区视频9| 日本欧美国产在线视频| 免费大片黄手机在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产精品一区www在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 大码成人一级视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 高清黄色对白视频在线免费看 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲av中文av极速乱| 永久网站在线| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 少妇 在线观看| 女性被躁到高潮视频| 一级黄片播放器| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 国产黄片美女视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产成人aa在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 一区二区av电影网| 少妇熟女欧美另类| 日本-黄色视频高清免费观看| 舔av片在线| 亚洲图色成人| 成人黄色视频免费在线看| 热99国产精品久久久久久7| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲av.av天堂| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 一级片'在线观看视频| 妹子高潮喷水视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 日日摸夜夜添夜夜爱| 美女中出高潮动态图| 国产一区二区在线观看日韩| 青春草国产在线视频| 伦理电影大哥的女人| 久久久成人免费电影| 久久午夜福利片| 青春草国产在线视频| videos熟女内射| 国产免费又黄又爽又色| 国产色爽女视频免费观看| 日日啪夜夜爽| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 色网站视频免费| 日韩av在线免费看完整版不卡| 一级片'在线观看视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 精品久久久噜噜| 亚洲av日韩在线播放| 爱豆传媒免费全集在线观看| 成年av动漫网址| 国产黄色免费在线视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 看十八女毛片水多多多| 一级毛片久久久久久久久女| 久久久欧美国产精品| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 嘟嘟电影网在线观看| av在线蜜桃| 日日摸夜夜添夜夜爱| 另类亚洲欧美激情| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 高清毛片免费看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产片特级美女逼逼视频| 岛国毛片在线播放| 舔av片在线| 国产成人精品一,二区| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 日韩大片免费观看网站| 亚洲不卡免费看| freevideosex欧美| 精品一区二区三区视频在线| 黄色日韩在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 国产人妻一区二区三区在| 免费av不卡在线播放| 亚洲国产欧美人成| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 免费观看在线日韩| 亚洲av中文av极速乱| 精品一区二区免费观看| 国产亚洲91精品色在线| 色视频在线一区二区三区| 午夜福利影视在线免费观看| 国产精品久久久久久精品古装| 内射极品少妇av片p| 美女主播在线视频| videossex国产| 一级爰片在线观看| 22中文网久久字幕| 校园人妻丝袜中文字幕| 赤兔流量卡办理| 丰满人妻一区二区三区视频av| 欧美丝袜亚洲另类| 午夜福利在线在线| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲av欧美aⅴ国产| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 网址你懂的国产日韩在线| 天堂8中文在线网| 亚洲第一av免费看| 五月玫瑰六月丁香| 在线观看一区二区三区激情| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲美女视频黄频| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲精品,欧美精品| 乱系列少妇在线播放| 日本-黄色视频高清免费观看| 美女内射精品一级片tv| 麻豆成人av视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日韩电影二区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 女性生殖器流出的白浆| 欧美zozozo另类| 国产精品不卡视频一区二区| av一本久久久久| 99热这里只有是精品50| 99久久中文字幕三级久久日本| 成年免费大片在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 最近最新中文字幕免费大全7| 大片免费播放器 马上看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 午夜日本视频在线| 免费观看无遮挡的男女| 精品亚洲成国产av| 日日啪夜夜撸| 毛片一级片免费看久久久久| 男女无遮挡免费网站观看| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 成年女人在线观看亚洲视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 欧美成人a在线观看| 日韩视频在线欧美| 成人国产麻豆网| 免费看av在线观看网站| 中文欧美无线码| 国产精品一二三区在线看| 亚洲av中文av极速乱| 国产美女午夜福利| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲精品亚洲一区二区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 这个男人来自地球电影免费观看 | 日本欧美国产在线视频| 我的老师免费观看完整版| 男人和女人高潮做爰伦理| 精品熟女少妇av免费看| 大香蕉97超碰在线| 国产免费一级a男人的天堂| 成人无遮挡网站| 日本黄色日本黄色录像| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产成人一区二区在线| 青青草视频在线视频观看| 国产毛片在线视频| 久久97久久精品| 欧美人与善性xxx| 久久人人爽人人爽人人片va| 超碰97精品在线观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 九色成人免费人妻av| 91精品国产九色| 免费观看在线日韩| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲精品456在线播放app| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 成人免费观看视频高清| 成人黄色视频免费在线看| 免费大片18禁| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲国产精品专区欧美| 国产亚洲精品久久久com| a级一级毛片免费在线观看| 最黄视频免费看| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲中文av在线| 国产精品人妻久久久影院| 免费看日本二区| 亚洲经典国产精华液单| 国产高清国产精品国产三级 | 深爱激情五月婷婷| 亚洲无线观看免费| 亚洲av福利一区| 亚洲av成人精品一区久久| 777米奇影视久久| 联通29元200g的流量卡| 国产视频首页在线观看| 内射极品少妇av片p| av在线播放精品| 日韩国内少妇激情av| 2018国产大陆天天弄谢| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲美女视频黄频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 1000部很黄的大片| 在线免费十八禁| 男女啪啪激烈高潮av片| 麻豆乱淫一区二区| 日韩中字成人| 人妻少妇偷人精品九色| 婷婷色麻豆天堂久久| 性色av一级| 五月伊人婷婷丁香| 精品人妻一区二区三区麻豆| 黑人高潮一二区| 夜夜爽夜夜爽视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 麻豆成人av视频| 久久97久久精品| 欧美最新免费一区二区三区| 精品久久久精品久久久| 日本黄大片高清| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产精品国产三级专区第一集| 妹子高潮喷水视频| 国产精品福利在线免费观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 91久久精品电影网| av国产久精品久网站免费入址| 久久毛片免费看一区二区三区| 七月丁香在线播放| videos熟女内射| 国产成人精品久久久久久| 国产综合精华液| 少妇人妻精品综合一区二区| 赤兔流量卡办理| 99精国产麻豆久久婷婷| 色视频在线一区二区三区| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲久久久国产精品| 成人国产麻豆网| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲成人av在线免费| 综合色丁香网| 精品一区二区三卡| 哪个播放器可以免费观看大片| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲成人av在线免费| 观看美女的网站| 人人妻人人看人人澡| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品伦人一区二区| 亚洲精品视频女| 亚洲国产精品成人久久小说| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 三级国产精品片| 少妇丰满av| av在线老鸭窝| 亚洲国产欧美人成| 看免费成人av毛片| 午夜老司机福利剧场| 成人免费观看视频高清| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 在线观看av片永久免费下载| 妹子高潮喷水视频| 久久久久久久久大av| 在线观看免费视频网站a站| 欧美一区二区亚洲| 少妇高潮的动态图| 久久青草综合色| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲四区av| 男的添女的下面高潮视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 国产黄片美女视频| 简卡轻食公司| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产乱人偷精品视频| 久久久国产一区二区| 免费看不卡的av| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产精品久久久久久久电影| 一级黄片播放器| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产精品久久久久久精品古装| 日本午夜av视频| 久久久a久久爽久久v久久| 有码 亚洲区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲高清免费不卡视频| 国产乱人视频| 99热这里只有精品一区| 2018国产大陆天天弄谢| 久久鲁丝午夜福利片| 中文字幕精品免费在线观看视频 | av女优亚洲男人天堂| 亚洲欧美日韩无卡精品| 少妇精品久久久久久久| 亚洲精品国产成人久久av| 色综合色国产| 日韩亚洲欧美综合| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产爽快片一区二区三区| 国产成人精品婷婷| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 美女视频免费永久观看网站| 七月丁香在线播放| 久久亚洲国产成人精品v| av国产久精品久网站免费入址| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 七月丁香在线播放| 久久亚洲国产成人精品v| 久久午夜福利片| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日韩av免费高清视频| 日本黄色日本黄色录像| 色婷婷久久久亚洲欧美| av国产免费在线观看| 国产成人a区在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 国产av码专区亚洲av| 51国产日韩欧美| 草草在线视频免费看| 国产淫语在线视频| 黄色怎么调成土黄色| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 少妇人妻一区二区三区视频| 免费少妇av软件| 日本av手机在线免费观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 99热网站在线观看| 尾随美女入室| 99久久精品国产国产毛片| 黄片无遮挡物在线观看| 国产成人精品一,二区| 校园人妻丝袜中文字幕| 1000部很黄的大片| 亚洲精品国产av蜜桃| 一级a做视频免费观看| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 一级黄片播放器| 亚洲av.av天堂| 人妻一区二区av| av不卡在线播放| 观看av在线不卡| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 精品久久久噜噜| 久久97久久精品| 国产永久视频网站| 亚洲国产精品国产精品| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久人妻熟女aⅴ| 如何舔出高潮| 国产精品欧美亚洲77777| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲久久久国产精品| 精品一区二区三区视频在线| 精品国产三级普通话版| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲av中文av极速乱| 精品亚洲成国产av| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲av日韩在线播放| 国产爽快片一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产有黄有色有爽视频| 久热久热在线精品观看| 国国产精品蜜臀av免费| 插逼视频在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产在线视频一区二区| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产黄片美女视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 啦啦啦在线观看免费高清www| 看十八女毛片水多多多| 免费黄色在线免费观看| 97超视频在线观看视频| 黄色一级大片看看| 久久国内精品自在自线图片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久久欧美国产精品| 毛片女人毛片| 精品国产三级普通话版| 亚洲国产精品999| 美女内射精品一级片tv| 欧美精品一区二区大全| 国产精品久久久久久精品古装| 九色成人免费人妻av| 色网站视频免费| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日韩精品有码人妻一区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久韩国三级中文字幕| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲av不卡在线观看| 国产高清国产精品国产三级 | 干丝袜人妻中文字幕| 色哟哟·www| 亚洲国产高清在线一区二区三| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 一级a做视频免费观看|