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      慢性乙型肝炎前C區(qū)G1896A基因變異對(duì)HBV復(fù)制及疾病嚴(yán)重程度的影響

      2016-07-28 01:33:23瞿衛(wèi)東胡晨波方敏朱君效
      肝臟 2016年5期
      關(guān)鍵詞:復(fù)制乙型肝炎病毒

      瞿衛(wèi)東 胡晨波 方敏 朱君效

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      慢性乙型肝炎前C區(qū)G1896A基因變異對(duì)HBV復(fù)制及疾病嚴(yán)重程度的影響

      瞿衛(wèi)東胡晨波方敏朱君效

      201399 上海市浦東新區(qū)南華醫(yī)院肝病科(胡晨波);浦東新區(qū)書(shū)院社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心(瞿衛(wèi)東、方敏);浦東新區(qū)航頭社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心(朱君效)

      【摘要】目的研究乙型肝炎病毒(HBV)前C區(qū)G1896A變異對(duì)乙型肝炎病毒復(fù)制及疾病嚴(yán)重程度的影響。方法選取43例慢性乙型肝炎及49例乙型肝炎肝硬化患者為研究對(duì)象。采用PCR技術(shù)檢測(cè)HBV前C區(qū)G1896A位點(diǎn)變異及乙型肝炎基因分型。同時(shí)檢測(cè)HBeAg、HBV DNA定量、肝功能血清生化指標(biāo)。結(jié)果(1)發(fā)生HBV前C區(qū)G1896A變異患者的年齡大于野生株感染者(P<0.01),發(fā)生肝硬化的可能性更大(P<0.01)。(2)隨著變異株感染率的增加,HBeAg陰性率較野生株組增加(P<0.01),基因C型較野生株組增加(P<0.05),HBV DNA水平降低差異意義(P>0.05)。結(jié)論HBV前C區(qū)G1896A變異與HBeAg的狀態(tài),HBV DNA的復(fù)制及疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。

      【關(guān)鍵詞】前C區(qū)G1896A;基因變異;乙型肝炎病毒;復(fù)制

      HBV感染是全球病毒性肝炎的主要原因之一。HBV是部分雙鏈DNA,全長(zhǎng)3.2 kb。HBV含4個(gè)部分重疊的開(kāi)放讀碼框(ORF),即前-S/S區(qū)、前-C/C區(qū)、P區(qū)和X區(qū)。前-S/S區(qū)編碼大(前-S1、前-S2及S)、中(前-S2及S)、小(S)3種包膜蛋白,前-C/C區(qū)編碼HBeAg及HBcAg,P區(qū)編碼聚合酶,X區(qū)編碼X蛋白。前C(Precore,PC)區(qū)G1896A位點(diǎn)變異和基本核心啟動(dòng)子(BCP)區(qū)A1762T/G1764A變異是HBeAg陰性的慢性乙型肝炎相關(guān)的兩種HBV變異的主要類(lèi)型。G1896A變異可使HBV PC區(qū)第28位密碼子由色氨酸變?yōu)榻K止密碼子,從而阻斷了HBeAg的產(chǎn)生,而HBV復(fù)制和HBcAg表達(dá)并不受此影響[1]。PC區(qū)變異與體內(nèi)病毒間歇性和持續(xù)性復(fù)制相關(guān)[2]。

      為此,本研究選取43例慢性乙型肝炎及49例乙型肝炎肝硬化患者進(jìn)行分析,探討HBV PC區(qū)G1896A變異對(duì)慢性乙型肝炎病毒復(fù)制及疾病嚴(yán)重程度的影響。

      資料和方法

      一、研究對(duì)象

      2013年1月至2015年6月上海市浦東新區(qū)南華醫(yī)院肝病科住院的HBsAg陽(yáng)性慢性乙型肝炎患者92例,男81例,女11例。慢性乙型肝炎及肝硬化的診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[3];且所有患者血清HBV DNA>103拷貝/mL。所有患者同時(shí)排除其他病毒感染及重疊其他病毒引起的肝炎,藥物性、酒精性、自身免疫性和代謝性肝病,伴有其他器官損害。清晨空腹抽血,分離血清,-40℃保存?zhèn)溆?,統(tǒng)一進(jìn)行檢測(cè)。

      二、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

      抽血前1 d禁食8 h后,次日晨空腹抽血。采用日本東芝120全自動(dòng)生物化學(xué)分析儀檢測(cè)肝功能生化指標(biāo)。PCR法檢測(cè)血清HBV DNA,采用美國(guó)Bio Rad公司的CF-X96型熒光定量PCR儀及中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司的HBV DNA熒光定量檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)范圍為102~108拷貝/mL。 HBV PC G1896A變異檢測(cè)采用PCR加膜雜交法檢測(cè),S1000基因擴(kuò)增儀,深圳亞能生物試劑。以上檢測(cè)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

      三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

      結(jié)果

      一、一般情況

      納入的92例患者(43例慢性乙型肝炎及49例乙型肝炎肝硬化)中男81例,女11例,平均年齡(31.27±11.9)歲;ALT (199.40±26.32) U/L;Alb(34.40±0.68) g/L;HA (35.92±40.36) ng/L。

      HBV PC區(qū)G1896A變異野生株和部分變異株、完全變異株性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。部分及完全變異株與野生株年齡比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。部分及完全變異株與野生株ALT比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。部分及完全變異株與野生株Alb比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。部分及完全變異株與野生株HA比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。見(jiàn)表1。

      二、HBV PC區(qū)G1896A變異野生株、部分變異株、完全變異株與HBeAg、HBV DNA、基因型的關(guān)系。

      野生株和部分變異株、完全變異株HBeAg陽(yáng)性率(90.90%,37.50%,5.26%)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。野生株和部分變異株、完全變異株基因C型比較(54.55%、84.38%、84.21%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。野生株和部分變異株、完全變異株HBV DNA≥6 lg拷貝/mL(68.18%、78.13%、60.53%),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

      表2 HBV PC區(qū)G1896A變異與HBeAg、

      三、HBV PC區(qū)G1896A變異野生株、部分變異株、完全變異株與肝臟疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系

      野生株和部分變異株、完全變異株慢性肝炎率(72.73%,46.88%,31.58%)、肝硬化率(27.27%、53.13%、68.42%)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。見(jiàn)表3。

      表3 HBV PC區(qū)G1896A變異野生株、部分變異株、完全變異株疾病程度比較[例(%)]

      討論

      HBV DNA復(fù)制通過(guò)核糖核酸(RNA)中間體逆轉(zhuǎn)錄,由于其逆轉(zhuǎn)錄缺乏校對(duì)功能,因此HBV DNA復(fù)制出現(xiàn)錯(cuò)誤的頻率較其他DNA病毒高得多。HBV發(fā)生自然變異最常見(jiàn)的是PC區(qū),其高頻率地發(fā)生及穩(wěn)定的表型提示這些變異可能會(huì)提高HBV復(fù)制或逃避宿主免疫反應(yīng)。目前發(fā)現(xiàn)G1896A變異是PC區(qū)最常見(jiàn),也是最重要的變異。

      HBV感染的自然史一般可人為劃分為4個(gè)期,即免疫耐受期、免疫清除期、非活動(dòng)或低(非)復(fù)制期及再活動(dòng)期。在HBV感染的中后期,患者針對(duì)HBV感染的免疫一定程度上增強(qiáng),伴隨著HBeAg的血清學(xué)轉(zhuǎn)換,HBV PC和BCP變異株替代野生株成為優(yōu)勢(shì)株[4]。Yan等[5]報(bào)道PC或BCP變異在HBeAg陽(yáng)性患者中為(125/192)65.1%,提示在HBV感染的不同階段,PC/BCP變異的程度不同。本研究顯示,隨著患者年齡增加,PC變異的程度逐漸增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

      HBV PC區(qū)G1896A變異還可以對(duì)宿主的免疫產(chǎn)生影響。Moradzadeh M等[6]研究顯示,HBV PC區(qū)G1896A發(fā)生突變的患者的Toll樣受體2(TLR2)水平較野生株患者增高,由于TLR2是介導(dǎo)炎癥的重要因子,所以PC區(qū)G1896A發(fā)生突變的慢性乙型肝炎患者的ALT水平較野生株高。本研究顯示,HBV PC區(qū)G1896A變異野生株ALT高于部分變異株、完全變異株,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),分析原因肝硬化患者在部分(53.13%)及完全(68.42%)變異株組比野生株組(27.27%)明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而肝硬化患者由于存在功能的肝細(xì)胞明顯降低,故ALT升高不明顯。另外,部分及完全變異株組與野生株組Alb比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);部分及完全變異株組與野生株組HA比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。這均提示隨著HBV PC區(qū)G1896A變異的增加,患者肝臟疾病嚴(yán)重程度逐漸加重,發(fā)生肝硬化的風(fēng)險(xiǎn)增加。近期有文獻(xiàn)同樣認(rèn)為,結(jié)合log10PC、log10BCP、PC% 和BCP%的動(dòng)態(tài)變化可以評(píng)估肝臟疾病的進(jìn)展程度[7]。另外,Tong MJ等[8]研究表明,HBV PC、BCP變異可以顯著增加慢性乙型肝炎患者原發(fā)性肝癌的風(fēng)險(xiǎn)。

      表1 HBV PC區(qū)G1896A變異不同程度患者的臨床和實(shí)驗(yàn)室參數(shù)比較(±s)

      注:*P<0.05;**P<0.01

      目前關(guān)于HBV DNA和疾病進(jìn)展的最大數(shù)據(jù)來(lái)自于REVEAL研究,這是一項(xiàng)評(píng)估慢性乙型肝炎自然史的大樣本、前瞻性隊(duì)列研究。該研究表明血清HBV DNA水平是慢性乙型肝炎發(fā)生肝硬化或肝癌的重要、獨(dú)立危險(xiǎn)因素[9]。PC區(qū)終止密碼子變異G1896A導(dǎo)致前C蛋白表達(dá)障礙,減弱前C蛋白對(duì)HBV病毒復(fù)制的抑制,從而加強(qiáng)了pgRNA衣殼化,導(dǎo)致病毒復(fù)制增加[10]。本研究中部分及完全變異株組HBeAg陽(yáng)性率明顯降低(P<0.05),但HBV DNA較野生株組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)。

      根據(jù)乙型肝炎病毒基因組測(cè)序,以乙型肝炎病毒基因組至少有8%的差異,將HBV分為10個(gè)基因型(A~J)[11]。我國(guó)以B、C型為主。HBV 基因C型比基因B型與嚴(yán)重肝病、肝硬化和原發(fā)性肝癌更相關(guān),而基因D型發(fā)生相關(guān)的嚴(yán)重肝病或原發(fā)性肝癌比基因A型更相關(guān)[12]。這可能是因?yàn)镻C區(qū)G1896A變異在HBV基因D型變異頻率最高,在基因B,C和E型較高,但在基因A,F(xiàn)和H型幾乎不發(fā)生[13]。這種特定HBV基因型的限制與需要保持前基因組干-袢結(jié)構(gòu)中的衣殼信號(hào)相關(guān)。本研究表明,PC區(qū)G1896A發(fā)生突變的患者中基因C型較野生株組明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

      總之,HBV的PC區(qū)基因變異可能具有重要的臨床意義。這些變異株可能會(huì)增加肝硬化、肝癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn),影響HBV DNA復(fù)制的能力,并可能會(huì)導(dǎo)致在HBeAg消失后HBV DNA仍能持久復(fù)制。

      參考文獻(xiàn)

      [ 1 ]Choi JW, Ahn SH, Park JY, et al. Hepatitis B e antigen-negative mutations in the precore and core promoter regions in Korean patients. J Med Virol,2009, 81:594-601.

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      [ 3 ]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì),中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南(2010年版).中國(guó)病毒病雜志,2011,9-23.

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      [ 6 ]Moradzadeh M, Tayebi S, Poustchi H, et al. The Possible Role of TLR2 in Chronic Hepatitis B Patients with Precore Mutation. Adv Virol, 2013, 2013:780319.

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      (本文編輯:賴榮陶)

      基金項(xiàng)目:浦東新區(qū)衛(wèi)生系統(tǒng)優(yōu)秀青年醫(yī)學(xué)人才培養(yǎng)(PWRq2012-05);浦東新區(qū)衛(wèi)生系統(tǒng)重點(diǎn)全科團(tuán)隊(duì)建設(shè)資助(PWZq2013-03)

      通信作者:朱君效,Email: judymama@foxmail.com

      (收稿日期:2015-12-03)

      ·臨床與基礎(chǔ)研究·

      共同第一作者:胡晨波

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