寡克隆條帶與腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測對神經(jīng)梅毒疾病的臨床診斷意義

程莎莎，許紹強(qiáng)，陳玲玲

(廣東三九腦科醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，廣州 510510)

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·臨床研究·

寡克隆條帶與腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測對神經(jīng)梅毒疾病的臨床診斷意義

程莎莎，許紹強(qiáng)，陳玲玲

(廣東三九腦科醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，廣州 510510)

摘要:目的探討腦脊液寡克隆條帶與腦脊液細(xì)胞學(xué)對神經(jīng)梅毒疾病的臨床診斷意義。方法收集34例神經(jīng)梅毒疾病患者血清及腦脊液，應(yīng)用等電聚焦電泳技術(shù)(IEF)檢測寡克隆條帶，同時利用玻片離心及瑞姬染色法進(jìn)行腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測，對其寡克隆陽性條帶檢出率及腦脊液細(xì)胞學(xué)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果34例神經(jīng)梅毒疾病患者中28例寡克隆條帶陽性，陽性率檢出率為82.4%(28/32),腦脊液細(xì)胞學(xué)呈淋巴細(xì)胞為主的反應(yīng)型(>70%)，伴少量激活淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞，偶見中性粒細(xì)胞。結(jié)論神經(jīng)梅毒疾病患者腦脊液寡克隆條帶檢測方法較靈敏，同時腦脊液細(xì)胞學(xué)具有特征性表現(xiàn)，兩者檢測方法能夠?yàn)榕R床診斷神經(jīng)梅毒疾病提供依據(jù)，具有一定的臨床價值。

關(guān)鍵詞:神經(jīng)梅毒;腦脊液寡克隆條帶;腦脊液細(xì)胞學(xué)

神經(jīng)梅毒是由蒼白密螺旋體侵犯神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)腦膜、大腦、血管或脊髓等損害的一組臨床綜合征?？砂l(fā)生于梅毒病程的各個階段，往往是因?yàn)樵缙诿范疚唇?jīng)徹底治療，常為晚期(Ⅲ期)梅毒全身性損害的重要表現(xiàn)[1]。它常常發(fā)生于初次感染之后10～20年慢性或未經(jīng)治療患者[2]，且25%～40%未經(jīng)治療神經(jīng)梅毒患者病情會不斷惡化[3]。隨著青霉素的使用，梅毒的發(fā)生率一度下降。而自20世紀(jì)70年代后發(fā)病率有呈上升趨勢，特別是隨著艾滋病和免疫力低下患者的增多，神經(jīng)梅毒患者逐漸增加。除了評估患者癥狀及體征，神經(jīng)梅毒的診斷方法包括：性病研究實(shí)驗(yàn)室測試(VDRL)、熒光密螺旋體抗體吸收實(shí)驗(yàn)(FTA-ABS)、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)、快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)以及影像學(xué)檢測。雖然VDRL是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但其檢測敏感性不夠，特別是對同時攜帶人類免疫缺陷病毒病毒患者會出現(xiàn)假陰性。目前，雖有相關(guān)文獻(xiàn)提到腦脊液寡克隆條帶(OCB)及腦脊液細(xì)胞學(xué)在神經(jīng)梅毒疾病方面存在一定特征[4-5]，但具體對神經(jīng)梅毒臨床診斷的意義卻未曾有關(guān)實(shí)驗(yàn)報道，因此本研究將對此展開具體研究。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2013年1月至2015年1月在本院治療的34例神經(jīng)梅毒患者，其中男26例,女8例,病程3～20年,中位病程11.5 年。所有患者符合美國1996年神經(jīng)梅毒診斷標(biāo):(1)有梅毒螺旋體引起的感染證據(jù)；(2)1項(xiàng)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)陽性，和腦脊液VDRL陽性；(3)可能的病例：任何階段的梅毒，腦脊液VDRL試驗(yàn)陰性，并具有下列2條:無其他已知原因引起的腦脊液蛋白和白細(xì)胞水平升高，無其他已知原因所致的符合神經(jīng)梅毒的臨床癥狀和體征；(4)確診病例：任何階段的梅毒，符合神經(jīng)梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2方法34例確診神經(jīng)梅毒患者在發(fā)病期間行腰椎穿刺術(shù)，留取腦脊液約2～3 mL，收集患者血清1 mL,進(jìn)行寡克隆電泳及細(xì)胞學(xué)檢測。

1.2.1腦脊液寡克隆電泳該檢測主要采用美國Helena公司生產(chǎn)的試劑盒。先將患者血清以300倍的預(yù)稀釋，血清及腦脊液各5 μL上樣，進(jìn)行等電聚焦電泳(IEF)45 min。電泳分離蛋白之后，進(jìn)行免疫印跡法轉(zhuǎn)膜30 min。之后用5%的脫脂牛奶封閉膜，輕搖30 min。蒸餾水洗膜3次后，加入1∶1 000的過氧化氫酶標(biāo)記羊抗人抗體IgG進(jìn)行抗體孵育30 min。接著蒸餾水洗膜3次，生理鹽水洗膜1次，5 min，最后蒸餾水洗3次。將25 mL稀釋后的醋酸鹽緩沖液倒入盒子中，加5 mL發(fā)光液和25 μL 30%過氧化氫，并立即搖勻。將膜放入此混合液中并輕輕搖勻盒子，染色時間約20 min。蒸餾水洗膜3次，然后將膜晾干后掃描。

1.2.2腦脊液細(xì)胞學(xué)所有患者均在無菌條件下行腰椎穿刺術(shù)，留取腦脊液2～3 mL,先觀察顏色、透明度，再進(jìn)行腦脊液一般項(xiàng)目檢查：腦脊液白細(xì)胞總數(shù)、pandy′s蛋白定性、蛋白定量、糖及氯化物檢測。標(biāo)本制片：將0.5 mL腦脊液滴加到黏附性玻片上，玻片離心機(jī)800 r/min離心后取出玻片晾干，進(jìn)行May-Grunwaid-Giemssa(MGG)染色。其具體方法：滴加MGG染色液A兩滴，B液4滴于用蠟筆圈出的標(biāo)本所在圈，用吸耳球吹勻，靜置10 min后，棄染液，蒸餾水清洗，待完全晾干后用中性封固劑封片。最后顯微鏡下對標(biāo)本進(jìn)行分類。

1.3OCB判斷標(biāo)準(zhǔn)出現(xiàn)以下情況之一為OCB陽性:(1)腦脊液中γ球蛋白區(qū)出現(xiàn)2個或2個以上不連續(xù)條帶而血清中不出現(xiàn)相應(yīng)條帶;(2)腦脊液與血清中均出現(xiàn)條帶,但腦脊液中條帶數(shù)多于血清中條帶數(shù)。

2結(jié)果

2.134例患者腦脊液OBC檢測結(jié)果34例神經(jīng)梅毒疾病患者中28例OBC陽性，陽性率檢出率為82.4%(28/32)。

2.234例患者腦脊液細(xì)胞學(xué)結(jié)果對患者腦脊液進(jìn)行玻片離心制片并染色，鏡下觀察到神經(jīng)梅毒疾病腦脊液呈淋巴細(xì)胞為主的反應(yīng)型，見圖1。

注：A為400倍油鏡；B為1 000倍油鏡。

圖1神經(jīng)梅毒患者腦脊液MGG染色鏡下細(xì)胞形態(tài)

在34例神經(jīng)梅毒患者主要發(fā)病期觀察腦脊液細(xì)胞學(xué)情況。患者腦脊液顏色、透明度分別為無色、透明占94.1%(31/34)，pandy,s蛋白定性結(jié)果為1+，占76.5%(26/34)，總細(xì)胞數(shù)在(4～912)/μL(平均110/μL)，白細(xì)胞(0～96)/μL(平均27/μL)，蛋白定量值0.45～1.87 g/L(平均1.00 g/L),葡萄糖為2.49～4.38 g/L(平均3.58 g/L),腦脊液細(xì)胞學(xué)分類呈以淋巴細(xì)胞為主反應(yīng)型(>70%)，伴少量激活淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞，偶見中性粒細(xì)胞。

3討論

OCB是指在病理情況下,電泳時于腦脊液γ球蛋白區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)2條以上不均勻的狹窄的不連續(xù)條帶,是腦脊液內(nèi)存在抗原的一種特異反應(yīng),腦脊液中OCB的出現(xiàn)往往高度提示有免疫球蛋白的鞘內(nèi)合成,提示機(jī)體存在免疫功能異常[5]。有國外學(xué)者報道，OCB對多發(fā)性硬化癥和中樞感染性疾病(包括神經(jīng)梅毒)檢測的陽性率比較接近。為此，本研究采用此法檢測梅毒神經(jīng)腦脊液中OCB。結(jié)果顯示,神經(jīng)梅毒患者的腦脊液中出現(xiàn)多條OBC(>4條)，且陽性率高，證實(shí)該檢測方法對神經(jīng)梅毒腦脊液的敏感性強(qiáng)。目前,對神經(jīng)梅毒出現(xiàn)陽性條帶的機(jī)制尚不明確，推測可能是因?qū)χ袠猩窠?jīng)系統(tǒng)內(nèi)部特殊抗原或者組織碎片的免疫反應(yīng)所致。

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,神梅毒患者腦脊液白細(xì)胞計(jì)數(shù)約為20/μL,數(shù)量不高，提示患者機(jī)體對神經(jīng)梅毒疾病免疫反應(yīng)不明顯。通過玻片離心方法，對收集得到的腦脊液細(xì)胞進(jìn)行分類，呈淋巴細(xì)胞為主的反應(yīng)型(>70%)，伴少量激活淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞，偶見中性粒細(xì)胞，與細(xì)菌性腦膜炎感染腦脊液細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)特征(以中性粒細(xì)胞為主)有明顯差異；結(jié)合腦脊液外觀無色透明，潘氏蛋白測定一般在+，總蛋白定量平均值為1.00 g/L,糖正常等結(jié)果，可以快速幫助臨床排除細(xì)菌性感染腦膜炎。

綜上所述，腦脊液OBC及腦脊液細(xì)胞學(xué)在神經(jīng)梅毒疾病方面有一定的特異性表現(xiàn)，能夠彌補(bǔ)其他診斷方法(VDRL)的假陰性不足，可以作為臨床診斷神經(jīng)梅毒疾病輔助手段，值得推廣運(yùn)用。

參考文獻(xiàn)

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.047

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)13-1857-02

(收稿日期：2016-02-09修回日期：2016-04-17)