SYSMEX XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀對(duì)有核紅細(xì)胞分析的應(yīng)用評(píng)價(jià)

王永志

(首都醫(yī)科大學(xué)全科醫(yī)學(xué)與繼續(xù)教育學(xué)院北京市延慶區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科　102100)

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·臨床研究·

SYSMEX XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀對(duì)有核紅細(xì)胞分析的應(yīng)用評(píng)價(jià)

王永志

(首都醫(yī)科大學(xué)全科醫(yī)學(xué)與繼續(xù)教育學(xué)院北京市延慶區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科102100)

摘要:目的探討Sysmex XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(簡(jiǎn)稱XN-2000)計(jì)數(shù)外周血有核紅細(xì)胞(NRBC)的方法學(xué)特性和臨床應(yīng)用價(jià)值。方法應(yīng)用XN-2000對(duì)116例外周血標(biāo)本進(jìn)行NRBC檢測(cè)，同時(shí)用顯微鏡(鏡檢法)對(duì)同一份外周血的NRBC百分率進(jìn)行計(jì)數(shù)。以鏡檢法為參考標(biāo)準(zhǔn)，比較不同方法的計(jì)數(shù)結(jié)果。結(jié)果XN-2000檢測(cè)NRBC的敏感性為98.78%，特異性為94.12%，假陽(yáng)性率為2.47%，假陰性率為3.03%，檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性好，低值變異系數(shù)(CV)為5.4%，中、高值CV均小于5%。與顯微鏡鏡檢法計(jì)數(shù)外周血中NRBC數(shù)量有極好的相關(guān)性(r=0.976)，且兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論XN-2000能快速、準(zhǔn)確、有效地自動(dòng)計(jì)數(shù)外周血NRBC。

關(guān)鍵詞:全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀；有核紅細(xì)胞；準(zhǔn)確性

有核紅細(xì)胞(NRBC)即幼稚紅細(xì)胞。健康成年人外周血中NRBC計(jì)數(shù)結(jié)果通常為陰性，在胎兒、新生兒或幼兒外周血中少量出現(xiàn)屬生理改變[1]。若成年人外周血中出現(xiàn)NRBC時(shí)，通常為病理狀態(tài)，常見(jiàn)于一些溶血性貧血、急性大量失血、嚴(yán)重的組織缺氧、急慢性白血病、惡性腫瘤、骨髓纖維化癥等多種疾病[2]。血液中的NRBC一般為晚幼紅細(xì)胞，但在某些血液系統(tǒng)疾病如急性紅血病(M6)、急性髓性白血病(AML)時(shí)也可出現(xiàn)中幼紅細(xì)胞或更幼稚的紅細(xì)胞[3]。因此，準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血液中NRBC，對(duì)某些疾病的診斷治療及預(yù)后觀察，具有重要臨床實(shí)踐意義[4]。長(zhǎng)期以來(lái)，顯微鏡下手工計(jì)數(shù)瑞士染色血涂片被認(rèn)為是計(jì)數(shù)NRBC的經(jīng)典方法，但其準(zhǔn)確度和精密度受計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量的限制和操作人員主觀因素的影響。目前，本院采用XN-2000全自動(dòng)模塊式血液體液一體機(jī)檢測(cè)NRBC，為了解XN-2000對(duì)外周血NRBC計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性及異常提示信息的可靠性，本研究將XN-2000檢測(cè)NRBC結(jié)果與人工顯微鏡鏡檢法進(jìn)行了比較和評(píng)價(jià)。

1資料與方法

1.1一般資料隨機(jī)選擇2014年1月至2015年10月本院血液科、腫瘤科、腎內(nèi)科及兒科等科室的住院患者116例，其中男74例，女42例，血液病患者59例，非血液病患者57例，年齡2～64歲，平均41.3歲。于清晨空腹采集上述患者靜脈血2 mL。

1.2儀器與試劑XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及其配套試劑和質(zhì)控品由日本Sysmex公司生產(chǎn)；乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)血液抗凝管，美國(guó)BD公司生產(chǎn)；瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液(BASO染液)，Olympus-BX43光學(xué)顯微鏡,國(guó)聯(lián)在線M99-M醫(yī)學(xué)圖像處理系統(tǒng)等。

1.3NRBC計(jì)數(shù)方法

1.3.1XN-2000儀器法嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，在測(cè)定樣本前對(duì)儀器進(jìn)行日常清洗及維護(hù)，按要求進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控(質(zhì)控品XN CHECK，高值、中值、低值三水平)，結(jié)果均在控后，檢測(cè)EDTA-K2抗凝血標(biāo)本，并在4 h內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.3.2顯微鏡鏡檢法由經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的細(xì)胞形態(tài)室主管技師按全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程操作，用顯微鏡在瑞氏染色血涂片的體尾交界處分類(lèi)計(jì)數(shù)200個(gè)白細(xì)胞的同時(shí)記錄所見(jiàn)到的NRBC數(shù)量，計(jì)數(shù)結(jié)果以NRBC/100WBC表示。

2結(jié)果

2.1重復(fù)性試驗(yàn)為了解XN-2000計(jì)數(shù)NRBC的批內(nèi)重復(fù)性(精密度)，各取NRBC計(jì)數(shù)百分?jǐn)?shù)處于高中低值范圍內(nèi)的標(biāo)本1份，由專業(yè)人員在30 min內(nèi)計(jì)數(shù)5次，計(jì)算均值及變異系數(shù)，結(jié)果顯示XN-2000儀器重現(xiàn)性良好，低值NRBC%的CV值為5.1%，高值、中值NRBC%CV值均小于5%。見(jiàn)表1。

表1　XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)NRBC的重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.2穩(wěn)定性試驗(yàn)取NRBC計(jì)數(shù)百分?jǐn)?shù)處于高、中、低值范圍內(nèi)的標(biāo)本各1份，分別于室溫條件下放置1、2、4、6、8、12、24、48 h后測(cè)定NRBC，結(jié)果表明臨床標(biāo)本在48 h內(nèi)NRBC計(jì)數(shù)結(jié)果穩(wěn)定,其變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2　XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)NRBC的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.3XN-2000計(jì)數(shù)NRBC與顯微鏡鏡檢法結(jié)果比較以顯微鏡鏡檢法為參照標(biāo)準(zhǔn)，在116例受檢標(biāo)本中，經(jīng)XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)NRBC陽(yáng)性83例，其中2例手工鏡檢法為陰性；33例XN-2000計(jì)數(shù)陰性標(biāo)本中1例手工鏡檢法陽(yáng)性；XN-2000計(jì)數(shù)NRBC敏感性為98.78%(81/82)，特異性為94.12%(32/34)，假陽(yáng)性率2.47%(2/81)，假陰性率3.03%(1/33)。見(jiàn)表3。

表3　XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)NRBC與顯微鏡鏡檢法結(jié)果比較(n)

另對(duì)XN-2000儀器法和手工鏡檢法計(jì)數(shù)NRBC均為陽(yáng)性的81例結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，設(shè)XN-2000測(cè)定值為X，手工法測(cè)定值為Y，得回歸方程Y=0.963X-0.178，相關(guān)系數(shù)r=0.976。XN-2000與鏡檢結(jié)果進(jìn)行配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

NRBC在病理狀態(tài)下由于異常增生的細(xì)胞對(duì)骨髓的擠壓和充斥、骨髓-血液屏障功能異?；蛩柰庠煅仍蚴蛊涮崆搬尫诺酵庵苎?。由于其具有與淋巴細(xì)胞相似體積和結(jié)構(gòu)，并且不能被溶血素破壞，以往的儀器對(duì)于這類(lèi)細(xì)胞往往會(huì)誤計(jì)，如此不僅造成了病理性標(biāo)本的漏報(bào)，而且還引起白細(xì)胞假陽(yáng)性升高，常需要通過(guò)顯微鏡計(jì)數(shù)的方法加以校正[5]，但這種方法操作相對(duì)繁瑣，受血片推片和染色質(zhì)量、細(xì)胞分布差異和人為主觀因素等影響準(zhǔn)確度和精密度較低，還需要有經(jīng)驗(yàn)的計(jì)數(shù)人員，且操作不易標(biāo)準(zhǔn)化。近年來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和臨床的需要，全自動(dòng)血液分析儀越來(lái)越多地用于外周血中NRBC計(jì)數(shù)。

XN-2000作為Sysmex公司最新一代熒光流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，在進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)無(wú)需更改測(cè)試通道和進(jìn)樣模式便可同時(shí)完成NRBC計(jì)數(shù)，結(jié)果以百分比和絕對(duì)值兩個(gè)參數(shù)報(bào)告，并通過(guò)散點(diǎn)圖直觀顯示NRBC的數(shù)量和分布狀況。同時(shí)還可通過(guò)NRBC計(jì)數(shù)結(jié)果對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行校正，從而得到正確的白細(xì)胞數(shù)目，為臨床對(duì)患者病情判斷提供準(zhǔn)確有力的依據(jù)。XN-2000計(jì)數(shù)NRBC的原理為： Lysercell WNR溶血?jiǎng)┲械谋砻婊钚猿煞秩芙饧t細(xì)胞的同時(shí)在白細(xì)胞的細(xì)胞膜上打通微孔導(dǎo)致胞質(zhì)滲出，使除嗜堿性粒細(xì)胞外的其他白細(xì)胞都以膜包核復(fù)合顆粒的形式存在，由于白細(xì)胞的形態(tài)、核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、胞質(zhì)顆粒等各不相同，利用前向和側(cè)向散射光可捕捉其形態(tài)結(jié)構(gòu)上的差異，根據(jù)這些特點(diǎn)可將嗜堿性粒細(xì)胞和其余的白細(xì)胞區(qū)分； Fluorocell WNR中的次甲基熒光染料對(duì)白細(xì)胞及NRBC的細(xì)胞核和胞質(zhì)顆粒進(jìn)行染色，NRBC無(wú)胞質(zhì)顆粒，核染色質(zhì)也比其他白細(xì)胞致密，在上述兩種試劑的作用下根據(jù)細(xì)胞形態(tài)的差異和熒光強(qiáng)度的不同，將NRBC和其他的白細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)[6]。

本研究結(jié)果顯示，Sysmex XN-2000計(jì)數(shù)NRBC在高、中、低值標(biāo)本都有較高的重復(fù)性。另外，為了避免在日常工作中由于標(biāo)本未能及時(shí)送檢對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成影響，本文進(jìn)行了NRBC標(biāo)本穩(wěn)定性研究，結(jié)果顯示標(biāo)本在48 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。且儀器測(cè)定結(jié)果與手工鏡檢法比較有很好的相關(guān)性(r=0.976)，兩種方法所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明XN-2000基本可以代替鏡檢法檢測(cè)外周血NRBC。XN-2000計(jì)數(shù)NRBC敏感性為98.78%，特異性為94.12%。在NRBC計(jì)數(shù)結(jié)果較低(0.1%～1.9%)時(shí)，XN-2000測(cè)定出現(xiàn)少數(shù)假陽(yáng)性結(jié)果(2.47%)，一方面原因有可能是儀器對(duì)細(xì)胞的辨別誤差。另一方面原因從計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目來(lái)看，手工鏡檢法只是記錄了分類(lèi)200個(gè)白細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)的NRBC數(shù)目，而儀器法則是計(jì)數(shù)吸入標(biāo)本中的所有血細(xì)胞的數(shù)目，其計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量大大高于手工法，所以發(fā)現(xiàn)幼紅細(xì)胞的概率相對(duì)高，且血細(xì)胞在涂片上分布不均、計(jì)數(shù)范圍的選擇和操作人員的主觀因素等都影響NRBC的檢出率[7-8]。至于少量假陰性結(jié)果(3.03%)，可能是手工分類(lèi)時(shí)對(duì)小淋巴細(xì)胞、大血小板等的誤判所致。

綜上所述，XN-2000檢測(cè)外周血NRBC準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，能同時(shí)提供絕對(duì)值和百分?jǐn)?shù)兩種參數(shù)并對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行校正，且檢測(cè)快速，操作簡(jiǎn)便，值得在臨床推廣。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.044

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)13-1852-02

(收稿日期：2016-03-11修回日期：2016-05-20)